CN105687582A - 一种防治老年性痴呆的中药组合物 - Google Patents
一种防治老年性痴呆的中药组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105687582A CN105687582A CN201610171656.9A CN201610171656A CN105687582A CN 105687582 A CN105687582 A CN 105687582A CN 201610171656 A CN201610171656 A CN 201610171656A CN 105687582 A CN105687582 A CN 105687582A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- alzheimer disease
- poria
- preventing
- flos chrysanthemi
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/74—Rubiaceae (Madder family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
- A61K36/076—Poria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
- A61K36/238—Saposhnikovia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
- A61K36/287—Chrysanthemum, e.g. daisy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/888—Araceae (Arum family), e.g. caladium, calla lily or skunk cabbage
- A61K36/8888—Pinellia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于医药技术领域,公开了一种防治老年性痴呆的中药组合物,它由钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参六味原料药制成;所述的原料药的重量份如下:钩藤2-5份、茯苓2-5份、半夏2-5份、菊花1-3份、防风1-3份、人参1-3份。本发明还公开了所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法、以及所述的防治老年性痴呆的中药组合物在制备防治老年性痴呆药物中的应用。发明人利用现代药理实验手段对治疗老年性痴呆具有一定疗效的古方钩藤散进行简方研究,药理学实验证明在相同浓度下,本发明的中药组合物能够改善H2O2、Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤作用,提高细胞存活比例,且对防治老年痴呆的药效明显优于古方。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及一种防治老年性痴呆的中药组合物。
背景技术
老年性痴呆(阿尔茨海默病,AD)是老年性退行性脑病,是一种持续性高级神经功能活动障碍,即在没有意识障碍的状态下,记忆、思维、分析判断、视空间辨认、情绪等方面的障碍。
老年性痴呆与年龄老化有密切关系。随着人口老龄化,老年性痴呆的发病率也随之增加。根据Rotterdarm研究结果,65-69岁老年人每年的发病率是1.4%,70-74岁者是3.9%,75-79岁者是16.7%,到85岁时增至45.4%。老年痴呆是继肿瘤、心脏病、毛血管病之后引起老年人死亡的第四大病因,它是一种严重的、退行性脑疾患。临床特征是进行性认知功能障碍,至疾病后期,患者生活不能自理及卧床不起,不能说话甚至连自己的近亲都不认识。
现代临床应用及实验研究均表明抑肝散能够预防和治疗老年性痴呆,但作用机理还不清楚。经查阅文献发现,AD的发病机制主要包括衰老与氧化应激、Aβ级联学说、神经细胞凋亡学说、胆碱能学说、免疫与炎症假说、基因遗传学说及有毒金属离子假说等。其中衰老与氧化应激、Aβ级联学说等学说占主要地位。
目前临床上老年性痴呆的治疗药物主要包括乙酰胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂,但这些药物仅仅能缓解痴呆症状,并且毒副作用明显。由于老年性痴呆发病机制复杂,涉及多种信号通路,单靶向的药物虽能在一定程度上改善或缓解患者的症状,但无法达到较好的治疗效果。中药复方制剂具有多成分、多靶点、多途径调节等特点,在治疗认知症这种慢性疾病方面具有显著优势,且药性较西药和缓,不良反应小,并能缓解某些西药治疗无效的症状。
钩藤散(CTS,GouTengSan,Choto-san)为中医古方,源于《本事方》,由钩藤、陈皮、麦冬、半夏、茯苓、人参、防风、菊花、生姜、甘草和石膏组成。方中钩藤熄风止痉,清热平肝,主治惊间抽搐,肝热头痛,肝阳上亢型高血压;菊花、防风清热熄风以助钩藤平肝之力;半夏、茯苓、陈皮、甘草、生姜化痰安神,降逆止呕;石膏、人参、麦冬清热养阴、益气生津。全方共奏平肝熄风、清热化痰、益气养阴、降逆止呕之功,故临床用于因痰热内扰,肝风内动而致头晕、中风、失眠、癫痫、麻木和惊风等症。
近年来,中日两国学者将其用于血管性痴呆(VaD)和中风后遗症治疗的研究多有报道。
发明内容
本发明的目的在于,利用现代药理实验手段,对治疗老年性痴呆具有一定疗效的古方钩藤散进行简方研究,在保证防治老年痴呆疗效的基础上,尽量减少用药种类,降低药品成本及价格,从而提供一种有效防治老年性痴呆的中药组合物。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种防治老年性痴呆的中药组合物,它由钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参六味原料药制成;所述的原料药的重量份如下:钩藤2-5份、茯苓2-5份、半夏2-5份、菊花1-3份、防风1-3份、人参1-3份。
优选的,所述的防治老年性痴呆的中药组合物由如下重量份的原料药制成:钩藤3份、茯苓3份、半夏3份、菊花2份、防风2份、人参2份。
优选的,所述的菊花为杭菊花,所述的人参为白参片。
本发明所述的防治老年性痴呆的中药组合物由以下制备方法制得的:将钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参分别粉碎,得到细粉;按照重量份称取细粉,混匀,得到中药混合物;向中药混合物中加入中药混合物重量5-7倍量的水,50-70℃加热超声提取1-3次,每次提取1-3小时,离心,取上清液,合并,浓缩干燥得到浸膏。
本发明的另一个目的是提供所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法,它包括以下步骤:
步骤(1)、将钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参分别粉碎,得到细粉;
步骤(2)、按照如下重量份称取步骤(1)所得的细粉:钩藤2-5份、茯苓2-5份、半夏2-5份、菊花1-3份、防风1-3份、人参1-3份,混匀,得到中药混合物;
步骤(3)、向步骤(2)所得中药混合物中加入中药混合物重量5-7倍量的水,50-70℃加热超声提取1-3次,每次提取1-3小时,离心,取上清液,合并,浓缩干燥得到浸膏。
优选的,步骤(1)中,将钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参分别粉碎后,过60目筛,得到细粉,备用。
优选的,步骤(2)中,按照如下重量份称取步骤(1)所得的细粉:钩藤3份、茯苓3份、半夏3份、菊花2份、防风2份、人参2份,混匀,得到中药混合物。
优选的,步骤(3)中,向步骤(2)所得中药混合物中加入中药混合物重量5-7倍量的水,60℃加热超声提取2次,每次提取1小时,4000r/min条件下离心30min,取上清液,合并,60℃水浴浓缩干燥得到浸膏。
本发明的另一个目的是提供所述的防治老年性痴呆的中药组合物在制备防治老年性痴呆药物中的应用。
本发明所述的应用,所述的防治老年性痴呆药物以本发明所述的防治老年性痴呆的中药组合物为原料,与药学上可接受的辅料混合,制备成药学上允许的任意一种剂型;所述的剂型包括但不限于丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、膜剂、脂质体、缓释剂。
常用药学上可接受的辅料可选用,崩解剂如:羟丙基淀粉、羟丙基纤维素、羧甲基淀粉纳、羧甲基纤维素钙、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素纳等;填充剂如:乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素、糊精、淀粉、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、环糊精、微粉纤维素等;润湿剂和粘合剂如:乙醇、预胶化淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素;润滑剂如:滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、微粉硅胶、氢化植物油、聚乙二醇4000和6000;润湿剂如:十二烷基硫酸钠、吐温80。
本发明的有益效果:
发明人利用现代药理实验手段,对治疗老年性痴呆具有一定疗效的古方钩藤散进行简方研究,药理学实验证明在相同浓度下,本发明的中药组合物能够改善H2O2、Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤,在一定浓度范围内能够有效抑制H2O2、Aβ25-35对PC12细胞的损伤,提高细胞存活比例,且浓度相同的精简方样品溶液对PC12细胞的保护作用明显优于古方样品溶液的作用。
本发明的中药组合物在保证防治老年痴呆疗效的基础上,尽量减少用药种类,降低药品成本及价格,同时,药物种类的减少也使得质量检测和控制相对容易。
附图说明
图1为不同浓度的H2O2溶液对PC12细胞的损伤作用;图1中,*表示相对于正常组P<0.05,***表示相对于正常组P<0.001。
图2为CTS和CTS-JF对H2O2诱导的PC12细胞毒性的改善作用;图2中,*表示相对于模型组P<0.05,**表示相对于正常组P<0.01,***表示相对于正常组P<0.001;#表示相对于相同浓度的CTS样品溶液P<0.05,###表示相对于相同浓度的CTS样品溶液P<0.001。
图3为不同浓度Aβ25-35的对PC12细胞的损伤作用;图3中,***表示相对于正常组P<0.001。
图4为CTS和CTS-JF对Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性的改善作用;图4中,**表示相对于正常组P<0.01,***表示相对于正常组P<0.001;#表示相对于相同浓度的CTS样品溶液P<0.05。
具体实施方式
通过下述实施例对本发明的技术方案进行进一步说明。
为叙述方便,本发明中将古方钩藤散简称为CTS;将本发明的技术方案钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参6味中药组成的中药组合物简称为CTS-JF。
实施例1
按照以下制备方法制备CTS,制备方法包括以下步骤:
步骤(1)、将钩藤、陈皮、麦冬、半夏、茯苓、人参、防风、菊花、生姜、甘草和石膏各味中药分别粉碎后,过60目筛,细粉备用;
步骤(2)、按照如下重量份称取步骤(1)所得的中药细粉:钩藤3份、陈皮3份、麦冬3份、半夏3份、茯苓3份、人参2份、防风2份、菊花2份、生姜1份、甘草1份、石膏5份,混匀,得到中药混合物;
步骤(3)、向步骤(2)所得中药混合物中加入总药材重量6倍量的水,60℃条件下加热超声提取2次,每次提取1小时,4000r/min离心30min,取上清液,合并,置于60℃水浴锅上浓缩干燥得到浸膏。
实施例2
按照以下制备方法制备CTS-JF,制备方法包括以下步骤:
步骤(1)、将钩藤、半夏、茯苓、菊花、防风和人参各味中药分别粉碎后,过60目筛,细粉备用;
步骤(1)、按照如下重量份称取步骤(1)所得的中药细粉:钩藤3份、半夏3份、茯苓3份、人参2份、防风2份、菊花2份,混匀,得到中药混合物;
步骤(3)、向步骤(2)所得中药混合物中加入总药材重量6倍量的水,60℃条件下加热超声提取2次,每次提取1小时,4000r/min离心30min,取上清液,合并,置于60℃水浴锅上浓缩干燥得到浸膏。
实施例3
考察不同浓度的H2O2对PC12细胞的损伤作用
1、实验细胞
PC12细胞购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,按照细胞培养步骤,以适当的细胞密度种于细胞培养瓶内,放置在温度恒定为37℃,CO2溶度为5%的孵箱内生长。
2、主要药物、试剂和仪器
双氧水:西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司
β淀粉样蛋白(Aβ25-35):西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司
FBS胎牛血清:美国英杰(Invitrogen)生命技术有限公司
DMEM高糖培养基:美国英杰(Invitrogen)生命技术有限公司
注射用青霉素钠:山东鲁抗医药股份有限公司
硫酸庆大霉素:南京金陵药业股份有限公司
MTT(四甲基偶氮唑盐):南京生兴生物技术有限公司
TLS-2000A型电子秤:常熟市双杰测试仪器厂
移液枪(各种规格):美国Thermo公司
XW-80A微型漩涡混合仪:上海沪西分析仪器厂
RT6000酶标仪:深圳雷杜生命科学股份有限公司
荧光显微镜BX43:日本奥林巴斯Olympus公司
TGL-16台式低温高速离心机:湖南湘仪实验室仪器开发有限公司
3、试剂配制
PBS缓冲液:Na2HPO4(2.88g)、KH2PO4(0.24g)、KCl(0.2g)、NaCl(8g)混合溶于1L双蒸水中,调定pH值为7.4,高压灭菌,4℃储存备用;
含有10%FBS的DMEM高糖培养基:取90mLDMEM高糖培养基与10mLFBS混合均匀;
含有1%FBS的DMEM高糖培养基:取99mLDMEM高糖培养基与1mLFBS混合均匀;
四甲基偶氮唑盐MTT母液(5mg/mL);精密称取100mgMTT溶解于20mL无菌PBS缓冲液中,超声溶解混匀,密理博0.22μM滤头过滤除菌,5mL/管分装,-20℃保存,三个月内可用;
细胞培养液:青霉素100U/mL和庆大霉素100U/mL,500mL含10%FBS的DMEM高糖培养基中加入5万个单位青霉素及5万个单位庆大霉素(青霉素G钠盐0.5g溶于1mLPBS中,取62.5μL和庆大霉素8万/2mL,取1.25mL至500mL含10%FBS的DMEM高糖培养基中),充分混匀,4℃储存备用;
4、H2O2的配制方法
取40μL质量分数为30%的H2O2母液至4mL含1%FBS的DMEM高糖培养基中,混匀,再从其中取40μL至新的4mL的含1%FBS的DMEM高糖培养基中得到1000μM的H2O2溶液,然后再稀释成浓度为300μM、200μM、150μM、100μM、75μM、50μM的H2O2溶液。
5、药理活性测试
5.1实验方法
5.1.1细胞培养和加H2O2
PC12细胞在湿度为95%并且含有5%CO2的37℃环境下进行培养,细胞培养液为添加青霉素(100U/mL),链霉素(100μg/mL)和含有10%FBS的DMEM高糖培养基。当培养瓶中的细胞长满后,细胞以3.0×104个/孔接种在96孔板。12h后,正常组换用含1%FBS的DMEM高糖培养基继续培养12h,其余各组加入不同浓度(300μM、200μM、150μM、100μM、75μM、50μM)的H2O2溶液再培养12h。
5.1.2细胞活力检测
细胞活力通过MTT比色法来进行定量检测。简言之,在药物作用结束后加入MTT溶液(终浓度0.5mg/mL),37℃下培养4小时。然后吸掉上清液,细胞内的甲瓒用100μLDMSO进行溶解。每孔的吸光度用1500酶标仪(ThermoFisherScientificCo.)在570nm波长下进行检测。细胞活力以相对正常组百分比的形式表示。
6、实验结果
通过考察不同浓度的H2O2溶液对PC12细胞的损伤作用,实验结果见图1,可见150μM时H2O2溶液对PC12细胞的损伤达到一半,因此我们选用150μM的H2O2进行下一步实验。
实施例4
CTS和CTS-JF对H2O2诱导的PC12细胞毒性的改善作用
1、实验细胞
同实施例3。
2、主要药物、试剂和仪器
同实施例3。
3、试剂配制
同实施例3。
4、H2O2配制方法:取40μL质量分数为30%双氧水母液至4ml的含1%FBS的DMEM高糖培养基中,混匀,再从其中取40μL至新的4ml的含1%FBS的DMEM高糖培养基中得到1000μM的H2O2溶液,然后再稀释成浓度为150μM的H2O2溶液。
5、样品溶液配制
CTS样品溶液配制:称取200mg的CTS浸膏,加入5mLDMSO,40℃超声20min,12000rpm/min离心5min,取上清液,以密理博0.22μM微孔滤膜过滤得滤液,配制得到浓度为20mg/mL的CTS母液,再依次稀释成800μg/mL、400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL的CTS样品溶液。
CTS-JF样品溶液配制:称取200mg的CTS-JF浸膏,加入5mLDMSO,40℃超声20min,12000rpm/min离心5min,取上清液,以密理博0.22μM微孔滤膜过滤得滤液,配制浓度为20mg/mL的CTS-JF母液,再依次稀释成800μg/mL、400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL的CTS-JF样品溶液。
6、药理活性测试
6.1实验方法
6.1.1细胞培养和给药
PC12细胞在湿度为95%并且含有5%CO2的37℃环境下进行培养,细胞培养液为添加青霉素(100U/mL),链霉素(100μg/mL)和含有10%FBS的DMEM高糖培养基。当培养瓶中的细胞长满后,细胞以3.0×104个/孔接种在96孔板。12h后,正常组细胞换用含有1%FBS的DMEM高糖培养基继续培养12h;模型组细胞加入H2O2溶液(终浓度为150μM)再培养12h;处理组各组用不同浓度的样品溶液预孵育0.5h,然后加入H2O2溶液(终浓度为150μM)再培养12h。
6.1.2细胞活力检测
同实施例3。
7、实验结果
考察不同浓度的CTS和CTS-JF样品对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用,实验结果见表1及图2,表明,与正常组的细胞活力相比较,经150μMH2O2孵育12h后,PC12细胞活力下降52%,给予浓度为25-100μg/ml的CTS和CTS-JF样品均未能抑制H2O2对PC12细胞的损伤,800μg/ml时反而显示出毒性。但给予浓度为200μg/ml和400μg/ml的CTS和CTS-JF样品时,可以有效地抑制H2O2诱导的细胞活力的下降,细胞生存活力明显升高。且浓度相同的CTS-JF样品溶液和CTS样品溶液相比,CTS-JF样品溶液对PC12细胞的保护作用明显优于CTS样品溶液的作用。
表1CTS和CTS-JF对H2O2诱导的PC12细胞毒性的改善作用
注:与模型组比较,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
实施例5
考察不同浓度的Aβ25-35对PC12细胞的损伤作用
1、实验细胞
同实施例3。
2、主要药物、试剂和仪器
同实施例3。
3、试剂配制
同实施例3。
4、Aβ25-35溶液配制方法
采用去离子水配制得到1mM的Aβ25-35母液,37℃下孵育七天来诱导聚合。在聚合后,溶液保存在-20℃,直到使用。用含有1%FBS的DMEM高糖培养基稀释成浓度为30μM、20μM、15μM、10μM、7.5μM的Aβ25-35溶液。
5、药理活性测试
5.1实验方法
5.1.1细胞培养和加Aβ25-35
PC12细胞在湿度为95%并且含有5%CO2的37℃环境下进行培养,细胞培养液为添加青霉素(100U/mL),链霉素(100μg/mL)和含有10%FBS的DMEM高糖培养基。当培养瓶中的细胞长满后,细胞以2.0×104个/孔接种在96孔板。12h后,正常组换用含有1%FBS的DMEM高糖培养基继续培养24h,其余各组加入不同浓度(30μM、20μM、15μM、10μM、7.5μM)的Aβ25-35溶液再培养24h。
5.1.2细胞活力检测
同实施例3。
6、实验结果
考察不同浓度的Aβ25-35溶液对PC12细胞的损伤作用,实验结果(见图3)表明:浓度为15μM时Aβ25-35对PC12细胞的损伤达到一半,因此我们选用15μM的Aβ25-35溶液进行下一步实验。
实施例6
考察CTS和CTS-JF对Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性的改善作用
1、实验细胞
同实施例3。
2、主要药物、试剂和仪器
同实施例3。
3、试剂配制
同实施例3。
Aβ25-35配制方法:采用去离子水配制得到1mM的Aβ25-35母液,37℃下孵育七天来诱导聚合。在聚合后,溶液保存在-20℃,直到使用。用含有1%FBS的DMEM高糖培养基稀释成浓度为15μM的Aβ25-35溶液。
4、样品溶液配制
CTS样品溶液配制:称取200mg的CTS浸膏,加入5mLDMSO,40℃超声20min,12000rpm/min离心5min,取上清液,以密理博0.22μM微孔滤膜过滤得滤液,配制浓度为20mg/mL的CTS母液,再依次稀释成400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL的CTS样品溶液。
CTS-JF样品溶液配制:称取200mg的CTS-JF浸膏,加入5mLDMSO,40℃超声20min,12000rpm/min离心5min,取上清液,以密理博0.22μM微孔滤膜过滤得滤液,配制浓度为20mg/mL的CTS-JF母液,再依次稀释成400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL的CTS-JF样品溶液。
5、药理活性测试
5.1.1细胞培养和给药
PC12细胞在湿度为95%并且含有5%CO2的37℃环境下进行培养,细胞培养液为添加青霉素(100U/mL),链霉素(100μg/mL)和含有10%FBS的DMEM高糖培养基。当培养瓶中的细胞长满后,细胞以2.0×104个/孔接种在96孔板。12h后,正常组细胞换用含有1%FBS的DMEM高糖培养基继续培养24h;模型组细胞加入Aβ25-35溶液(终浓度为15μM)再培养24h;处理组各组用不同浓度的样品溶液预孵育0.5h,然后加入Aβ25-35溶液(终浓度为15μM)再培养24h。
5.1.2细胞活力检测
同实施例3。
6、实验结果
考察不同浓度的CTS样品溶液和CTS-JF样品溶液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用,实验结果(见表2及图4)表明,与正常细胞活力相比较,经15μMAβ25-35溶液孵育12h后,PC12细胞活力下降52%,给予浓度为12.5-50μg/mL的CTS和CTS-JF均未能抑制Aβ25-35对PC12细胞的损伤,400μg/mL时反而显示出毒性。但给予浓度为100μg/mL和200μg/mL的CTS样品溶液和CTS-JF样品溶液时,可以有效地抑制Aβ25-35诱导的细胞活力的下降,细胞生存活力明显升高。且浓度相同的CTS-JF样品溶液和CTS样品溶液相比,浓度为100μg/mL时CTS-JF样品溶液对PC12细胞的保护作用优于CTS样品溶液的作用,浓度为200μg/mL时CTS-JF样品溶液对PC12细胞的保护作用明显优于CTS样品溶液的作用。
表2CTS和CTS-JF对Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性的改善作用
注:与模型组比较,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001
通过上述实验比较证实:由11味中药材组成的古方钩藤散在防治老年痴呆病症方面可以简为6味。因为精简方CTS-JF不仅对老年痴呆有防治效果,而且明显优于原方CTS。
由于精简方CTS-JF比原方CTS的用药减少了一般,所以成本也大大降低。同时,药物种类的减少也使得质量检测和控制相对容易。
Claims (9)
1.一种防治老年痴呆的中药组合物,其特征在于:它由钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参六味原料药制成;所述的原料药的重量份如下:钩藤2-5份、茯苓2-5份、半夏2-5份、菊花1-3份、防风1-3份、人参1-3份。
2.根据权利要求1所述的防治老年性痴呆的中药组合物,其特征在于:它由如下重量份的原料药制成:钩藤3份、茯苓3份、半夏3份、菊花2份、防风2份、人参2份。
3.权利要求1所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法,其特征在于:它包括以下步骤:
步骤(1)、将钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参分别粉碎,得到细粉;
步骤(2)、按照如下重量份称取步骤(1)所得的细粉:钩藤2-5份、茯苓2-5份、半夏2-5份、菊花1-3份、防风1-3份、人参1-3份,混匀,得到中药混合物;
步骤(3)、向步骤(2)所得中药混合物中加入中药混合物重量5-7倍量的水,50-70℃加热超声提取1-3次,每次提取1-3小时,离心,取上清液,合并,浓缩干燥得到浸膏。
4.根据权利要求3所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,将钩藤、茯苓、半夏、菊花、防风、人参分别粉碎后,过60目筛,得到细粉。
5.根据权利要求3所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,按照如下重量份称取步骤(1)所得的细粉:钩藤3份、茯苓3份、半夏3份、菊花2份、防风2份、人参2份,混匀,得到中药混合物。
6.根据权利要求3所述的防治老年性痴呆的中药组合物的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,向步骤(2)所得中药混合物中加入中药混合物重量5-7倍量的水,60℃加热超声提取2次,每次提取1小时,4000r/min条件下离心30min,取上清液,合并,60℃水浴浓缩干燥得到浸膏。
7.权利要求1所述的防治老年性痴呆的中药组合物在制备防治老年性痴呆药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于:所述的防治老年性痴呆药物以权利要求1所述的防治老年性痴呆的中药组合物为原料,与药学上可接受的辅料混合,制备成药学上允许的任意一种剂型。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于:所述的剂型包括但不限于丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、膜剂、脂质体、缓释剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610171656.9A CN105687582A (zh) | 2016-03-23 | 2016-03-23 | 一种防治老年性痴呆的中药组合物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610171656.9A CN105687582A (zh) | 2016-03-23 | 2016-03-23 | 一种防治老年性痴呆的中药组合物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105687582A true CN105687582A (zh) | 2016-06-22 |
Family
ID=56232657
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610171656.9A Pending CN105687582A (zh) | 2016-03-23 | 2016-03-23 | 一种防治老年性痴呆的中药组合物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105687582A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116492445A (zh) * | 2023-06-13 | 2023-07-28 | 肇庆学院 | 一种预防阿尔兹海默病的中药软胶囊及其制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000012102A1 (en) * | 1998-08-31 | 2000-03-09 | Proteotech, Inc. | Blended compositions for treatment of alzheimer's disease and other amyloidoses |
CN1254564A (zh) * | 1998-11-23 | 2000-05-31 | 曾淑纯 | 防治老年痴呆口服液 |
CN102078507A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-06-01 | 江苏省中医药研究院 | 一种含钩藤具有抗衰老作用的组合物 |
CN104338004A (zh) * | 2013-08-07 | 2015-02-11 | 李杏娇 | 理气定神散 |
-
2016
- 2016-03-23 CN CN201610171656.9A patent/CN105687582A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000012102A1 (en) * | 1998-08-31 | 2000-03-09 | Proteotech, Inc. | Blended compositions for treatment of alzheimer's disease and other amyloidoses |
CN1254564A (zh) * | 1998-11-23 | 2000-05-31 | 曾淑纯 | 防治老年痴呆口服液 |
CN102078507A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-06-01 | 江苏省中医药研究院 | 一种含钩藤具有抗衰老作用的组合物 |
CN104338004A (zh) * | 2013-08-07 | 2015-02-11 | 李杏娇 | 理气定神散 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
张暋 等: "《实用中医老年病学》", 30 April 2000, 人民军医出版社 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116492445A (zh) * | 2023-06-13 | 2023-07-28 | 肇庆学院 | 一种预防阿尔兹海默病的中药软胶囊及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5057987B2 (ja) | 薬草組成物phy906及びその化学療法における使用 | |
CN101357136B (zh) | 用于防治脑缺血损伤相关疾病的中药有效成分的组合物 | |
Gao et al. | Antidepressants effects of Rhodiola capsule combined with sertraline for major depressive disorder: A randomized double-blind placebo-controlled clinical trial | |
WO2016107579A1 (zh) | 黄酮醇作为脑靶向增效剂的制备和应用 | |
CN106727501A (zh) | 白果内酯作为增效剂在制备防治脑神经损伤性疾病药物的应用 | |
Anushiravani et al. | Comparing effectiveness of a combined herbal drug based on Echium amoenum with Citalopram in the treatment of Major Depressive Disorder | |
Xiong et al. | Traditional Chinese medicine suppresses left ventricular hypertrophy by targeting extracellular signal-regulated kinases signaling pathway in spontaneously hypertensive rats | |
Li et al. | Current progress on neuroprotection induced by Artemisia, Ginseng, Astragalus, and Ginkgo traditional Chinese medicines for the therapy of Alzheimer’s disease | |
Parkash et al. | Screening of methanol extract and ethyl acetate fraction of Abies webbiana Lindl. for neuropharmacological activities | |
Klimova et al. | Alzheimer's disease and Chinese medicine as a useful alternative intervention tool: a mini-review | |
Jia et al. | Progress of research into the pharmacological effect and clinical application of the traditional Chinese medicine Rehmanniae Radix | |
AKHOUNDZADEH et al. | Petal and stigma of Crocus sativus L. in the treatment of depression: a pilot double-blind randomized trial | |
CN105687582A (zh) | 一种防治老年性痴呆的中药组合物 | |
CN103550281A (zh) | 一种预防和治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其制剂 | |
CN102357134A (zh) | 用于预防和治疗阿尔茨海默病及脑血栓的药物及其制备方法 | |
CN101904894B (zh) | 独一味总苷在制备药物中的用途 | |
Du et al. | Therapeutic potential of natural compounds from herbs and nutraceuticals in spinal cord injury: Regulation of the mTOR signaling pathway | |
CN101249246B (zh) | 一种治疗脑梗死后抑郁的中成药制剂 | |
CN1293910C (zh) | 一种复方天麻素注射制剂及其制备和应用 | |
Oben et al. | Phellodendron and Citrus extracts benefit cardiovascular health in osteoarthritis patients: a double-blind, placebo-controlled pilot study | |
Wu et al. | Cerebrospinal fluid pharmacology: an improved pharmacology approach for chinese herbal medicine research | |
Yin et al. | Room-temperature super-extraction system (RTSES) optimizes the anxiolytic-and antidepressant-like behavioural effects of traditional Xiao-Yao-San in mice | |
CN101450063A (zh) | 治疗忧郁症的口服药物 | |
Kang et al. | Effect of Atractylodes macrocephala extract on chronic heart failure in rats | |
CN101947263B (zh) | 一种治疗神经衰弱及失眠的药物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160622 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
RA01 | Restoration of patent right |
Former decision: deemed withdrawal of patent application after publication Former decision publication date: 20200501 |
|
RA01 | Restoration of patent right | ||
DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Feng Feng Document name: Notice of approval of right to request |
|
DD01 | Delivery of document by public notice | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160622 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |