CN105652014A - 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法 - Google Patents

一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105652014A
CN105652014A CN201511013596.XA CN201511013596A CN105652014A CN 105652014 A CN105652014 A CN 105652014A CN 201511013596 A CN201511013596 A CN 201511013596A CN 105652014 A CN105652014 A CN 105652014A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gel
damping fluid
igg
detergent
polyspecific
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201511013596.XA
Other languages
English (en)
Inventor
何流
张艳
徐寅生
路金泉
余涛
李亚
尹培培
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HEFEI TIANYI INSTITUTE OF BIOLOGICAL TECHNOLOGY
Original Assignee
HEFEI TIANYI INSTITUTE OF BIOLOGICAL TECHNOLOGY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HEFEI TIANYI INSTITUTE OF BIOLOGICAL TECHNOLOGY filed Critical HEFEI TIANYI INSTITUTE OF BIOLOGICAL TECHNOLOGY
Priority to CN201511013596.XA priority Critical patent/CN105652014A/zh
Publication of CN105652014A publication Critical patent/CN105652014A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，所述制备方法包含制备葡聚糖凝胶颗粒；制备各凝胶洗涤缓冲液；各抗体的选择；凝胶洗涤；分装等步骤，形成直接抗人球蛋白检测卡。通过本方法制备的直接抗人球蛋白检测卡具有灵敏度高、特异型好，稳定性强、保质期长、检测项目齐全等优势。

Description

一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法
技术领域
本发明涉及输血医学领域，尤其涉及一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法。
背景技术
直接抗人球蛋白试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体及补体致敏，又称Coombs试验。直接抗人球蛋白试验是诊断新生儿溶血病（HDN）、免疫性溶血性贫血（AIHA）、免疫溶血性输血反应、药物导致的免疫性溶血性贫血的重要依据。
微柱凝胶免疫检测技术是20世纪90年代产生的一种免疫检测技术，其基本原理是利用分子筛技术，离心技术和特异性免疫反应技术原理，把血型血清学技术与凝胶分子筛技术有机结合起来，可灵敏地检测出可能存在的微弱血型抗原抗体反应，被认为是血型血清学检验的里程碑。
目前国内外已有一些厂家生产直接抗人球蛋白检测卡，但是存在以下一些不足：一是采用单一型号的葡聚糖凝胶或聚丙烯葡聚糖凝胶，使得灵敏度与特异性无法兼顾；二是采用生理盐水或抗体缓冲液溶胀凝胶，使得凝胶无法充分完全溶胀，以及破坏反应体系的离子强度；三是对添加不同抗体的凝胶，凝胶洗涤缓冲液完全一致，无法有效保护抗体稳定性；四是检测项目不全，有些是没有包含多特异性抗人球蛋白试剂，不能完全检测红细胞的被致敏情况；有些是没有包含红细胞的自身对照，无法排除红细胞因其他非免疫因素造成的自身凝集对结果的干扰。
发明内容
为克服上述不足，本发明提供一种灵敏度高、特异型好，稳定性强、保质期长、检测项目齐全的直接抗人球蛋白检测卡的制备方法。
为达到上述目的，本发明通过以下技术方案进行解决，包括以下步骤：
一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，所述制备方法包含以下步骤：
步骤一、制备葡聚糖凝胶颗粒：
选用至少两种交联葡聚糖凝胶进行混合，然后加入纯化水进行充分悬浮溶胀，再用纯化水洗涤去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的葡聚糖凝胶颗粒；
步骤二、制备各凝胶洗涤缓冲液：
（1）制备多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白10-15g/L、蔗糖15-20g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
（2）制备抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐（EDTA二钾盐）4-8g/L、牛血清白蛋白5-10g/L、蔗糖20-22g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
（3）制备抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖18-26g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
（4）制备空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠1.75g-2.07g/L、磷酸氢二钠0.185-0.219g/L、磷酸二氢钠0.203-0.24g/L、甘氨酸18-21g/L；并调节pH值为6.6-6.8；
步骤三、各抗体的选择：
多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；
抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8；
抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；
步骤四、凝胶洗涤：
取等量的葡聚糖凝胶颗粒分别用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液、抗IgG凝胶洗涤缓冲液、抗C3d凝胶洗涤缓冲液和空白凝胶洗涤缓冲液进行洗涤至少三次，再加入相对应的多特异性抗人球蛋白试剂、抗IgG试剂、抗C3d试剂和空白凝胶洗涤缓冲液进行混合，多特异性抗人球蛋白凝胶、抗IgG凝胶、抗C3d凝胶和空白凝胶；
步骤五、分装：
按照每管24-32微升的量，将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和第C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。
优选的，所述步骤一中至少两种交联葡聚糖凝胶为交联葡聚糖凝胶G-25、交联葡聚糖凝胶G-50、交联葡聚糖凝胶G-75和交联葡聚糖凝胶G-100中两种或两种以上组合。
优选的，所述步骤一中交联葡聚糖凝胶混合物和纯化水的体积比为1:2-1:3。
优选的，所述步骤一中悬浮溶胀的时间为48-72小时。
优选的，所述步骤四中各抗体试剂及空白凝胶洗涤缓冲液与洗涤后凝胶的体积比为1:2-1:3。
本发明的优点是：
1、本发明采用不同大小、不同筛分范围的交联葡聚糖凝胶进行混合，有效避免了单一交联葡聚糖凝胶的特异性与灵敏度不能兼顾的特点，可实现在保证特异性的同时，仍拥有很高的灵敏度；
2、本发明采用纯化水作为交联葡聚糖凝胶的溶胀溶液，可以使凝胶颗粒完全充分溶胀；
3、本发明用各抗体稀释液洗涤葡聚糖凝胶颗粒，从而不会破坏抗体的保护液成分，能更有效的保证抗体的稳定性；并保证了缓冲液体系的纯粹性，不受其他离子的影响，有效保证了体系的离子强度，具有保质期长的特点。
4、本发明检测项目齐全，可对红细胞的被致敏情况和致敏种类进行更细致的区分，且还可排除红细胞因其他非免疫因素造成的自身凝集对结果的干扰。
具体实施方式
下面对本发明做进一步说明，主要包括三个实施例。
实施例一：
一种直接抗人球蛋白检测卡，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，其通过以下方法制备而成：
步骤一、葡聚糖凝胶的溶胀：
选用交联葡聚糖凝胶G-25、交联葡聚糖凝胶G-50和交联葡聚糖凝胶G-75按照质量比1：2：1进行混合得葡聚糖凝胶混合物，然后按照葡聚糖凝胶混合物和纯化水的质量体积比为1：3加入纯化水，进行悬浮溶胀48小时后；再用纯化水对其洗涤三次，去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的凝葡聚糖胶颗粒；
步骤二、制备各凝胶洗涤缓冲液：
多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白10g/L、蔗糖15g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐（EDTA二钾盐）4g/L、牛血清白蛋白5g/L、蔗糖20g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白20g/L、蔗糖18g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠1.75g/L、磷酸氢二钠0.185g/L、磷酸二氢钠0.203g/L、甘氨酸18g/L；并调节pH值为6.6-6.8；
步骤三、各抗体的选择：
多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；
抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8；
抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；
步骤四、凝胶洗涤：
将步骤一中溶胀的葡聚糖凝胶颗粒均分为八等份，其中一份用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用多特异性抗人球蛋白试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：2进行混合均匀，得到多特异性抗人球蛋白凝胶；
第二份用等量的抗IgG凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗IgG试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：2比例混合均匀，得到抗IgG凝胶；
第三份用等量的抗C3d凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗C3d试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：2比例混合均匀，得到抗C3d凝胶；
第四份用等量空白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用空白凝胶洗涤缓冲液与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：2比例混合均匀，得到空白凝胶；
步骤五、分装：
按照每管24微升的量，将步骤四中配制的各凝胶分别依次加入到空白检测卡中的八个微柱中，其中将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和第C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。
实施例二：
一种直接抗人球蛋白检测卡，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，其通过以下方法制备而成：
步骤一、葡聚糖凝胶的溶胀：
选用交联葡聚糖凝胶G-75和交联葡聚糖凝胶G-100按照质量比1：1进行混合得葡聚糖凝胶混合物，然后按照葡聚糖凝胶混合物和纯化水的质量体积比为1：2加入纯化水，进行悬浮溶胀60小时后；再用纯化水对其洗涤三次，去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的凝葡聚糖胶颗粒；
步骤二、制备各凝胶洗涤缓冲液：
多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白12g/L、蔗糖18g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐（EDTA二钾盐）6g/L、牛血清白蛋白8g/L、蔗糖21g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白22g/L、蔗糖23g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠2.0g/L、磷酸氢二钠0.20g/L、磷酸二氢钠0.21g/L、甘氨酸20g/L；并调节pH值为6.6-6.8；
步骤三、各抗体的选择：
多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；
抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8；
抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；
步骤四、凝胶洗涤：
将步骤一中溶胀的葡聚糖凝胶颗粒均分为八等份，其中一份用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用多特异性抗人球蛋白试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3进行混合均匀，得到多特异性抗人球蛋白凝胶；
第二份用等量的抗IgG凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗IgG试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到抗IgG凝胶；
第三份用等量的抗C3d凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗C3d试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到抗C3d凝胶；
第四份用等量空白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用空白凝胶洗涤缓冲液与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到空白凝胶；
步骤五、分装：
按照每管28微升的量，将步骤四中配制的各凝胶分别依次加入到空白检测卡中的八个微柱凝胶管中，其中将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和第C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。
实施例三：
一种直接抗人球蛋白检测卡，所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，其通过以下方法制备而成：
步骤一、葡聚糖凝胶的溶胀：
选用交联葡聚糖凝胶G-25、交联葡聚糖凝胶G-50、交联葡聚糖凝胶G-75和交联葡聚糖凝胶G-100按照质量比1：1：1：1进行混合得葡聚糖凝胶混合物，然后按照葡聚糖凝胶混合物和纯化水的质量体积比为1：2加入纯化水，进行悬浮溶胀72小时后；再用纯化水对其洗涤三次，去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的凝葡聚糖胶颗粒；
步骤二、制备各凝胶洗涤缓冲液：
多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白15g/L、蔗糖20g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有乙二胺四乙酸二钾盐（EDTA二钾盐）8g/L、牛血清白蛋白10g/L、蔗糖22g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，其中含有牛血清白蛋白25g/L、蔗糖26g/L，稀释液的pH值为6.6-6.8；
空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠2.07g/L、磷酸氢二钠0.219g/L、磷酸二氢钠0.24g/L、甘氨酸21g/L；并调节pH值为6.6-6.8；
步骤三、各抗体的选择：
多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；
抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8；
抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；
步骤四、凝胶洗涤：
将步骤一中溶胀的葡聚糖凝胶颗粒均分为八等份，其中一份用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用多特异性抗人球蛋白试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3进行混合均匀，得到多特异性抗人球蛋白凝胶；
第二份用等量的抗IgG凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗IgG试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到抗IgG凝胶；
第三份用等量的抗C3d凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用抗C3d试剂与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到抗C3d凝胶；
第四份用等量空白凝胶洗涤缓冲液洗涤三次，再用空白凝胶洗涤缓冲液与洗涤后的葡聚糖凝胶颗粒按照体积比1：3比例混合均匀，得到空白凝胶；
步骤五、分装：
按照每管32微升的量，将步骤四中配制的各凝胶分别依次加入到空白检测卡中的八个微柱凝胶管中，其中将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。
尽管上文对本发明的具体实施方式给予了详细描述和说明，但是应该指明的是，我们可以依据本发明的构想对上述实施方式进行各种等效改变和修改，其所产生的功能作用仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法，其特征在于：所述检测卡上具有Coombs1、Coombs2、IgG1、IgG2、C3d1、C3d2、K1、K2八个微柱凝胶管，所述Coombs1和Coombs2微柱凝胶管中分别有两管装有等量的多特异性抗人球蛋白凝胶，所述IgG1和IgG2微柱凝胶管装有等量的抗IgG凝胶、所述C3d1和C3d2微柱凝胶管装有等量的抗C3d凝胶，所述K1和K2柱凝胶管装有等量的空白凝胶，所述制备方法包含以下步骤：
步骤一、制备葡聚糖凝胶颗粒：
选用至少两种交联葡聚糖凝胶进行混合，然后加入纯化水进行充分的悬浮溶胀，再用纯化水洗涤去除破碎颗粒，得到大小均匀、呈完整球形的葡聚糖凝胶颗粒；
步骤二、制备各种凝胶洗涤缓冲液：
（1）制备多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为10-15g/L的牛血清白蛋白和15-20g/L的蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6-6.8；
（2）制备抗IgG凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为4-8g/L的乙二胺四乙酸二钾盐、5-10g/L的牛血清白蛋白和20-22g/L蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6-6.8；
（3）制备抗C3d凝胶洗涤缓冲液：以生理盐水为基液，在基液中添加浓度为20-25g/L的牛血清白蛋白和18-26g/L的蔗糖，并调节稀释液的pH值为6.6-6.8；
（4）制备空白凝胶洗涤缓冲液：以纯化水为溶剂，缓冲液中含有氯化钠1.75g-2.07g/L、磷酸氢二钠0.185-0.219g/L、磷酸二氢钠0.203-0.24g/L、甘氨酸18-21g/L；并调节pH值为6.6-6.8；
步骤三、各抗体的选择：
多特异性抗人球蛋白试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8，与C3d致敏的红细胞效价≥8；
抗IgG试剂选取与IgG抗D致敏的红细胞效价≥64，与IgG抗Fya致敏的红细胞效价≥8；
抗C3d试剂选取与C3d致敏的红细胞效价≥8；
步骤四、凝胶洗涤：
取等量的葡聚糖凝胶颗粒分别用等量的多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液、抗IgG凝胶洗涤缓冲液、抗C3d凝胶洗涤缓冲液和空白凝胶洗涤缓冲液进行洗涤至少三次，再加入相对应的多特异性抗人球蛋白试剂、抗IgG试剂、抗C3d试剂和空白凝胶洗涤缓冲液进行混合，多特异性抗人球蛋白凝胶、抗IgG凝胶、抗C3d凝胶和空白凝胶；
（5）分装：
按照每管24-32微升的量，将多特异性抗人球凝胶加到Coombs1和C3d1管中，将抗IgG凝胶加到Coombs2和第C3d2管中，将抗C3d凝胶加到IgG1和K1管中，将空白凝胶加到IgG2和K2管中，形成直接抗人球蛋白检测卡。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤一中至少两种交联葡聚糖凝胶为交联葡聚糖凝胶G-25、交联葡聚糖凝胶G-50、交联葡聚糖凝胶G-75和交联葡聚糖凝胶G-100中两种或两种以上组合。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤一中交联葡聚糖凝胶混合物和纯化水的体积比为1:2-1:3。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤一中悬浮溶胀的时间为48-72小时。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤四中各抗体试剂及空白凝胶洗涤缓冲液与洗涤后凝胶的体积比为1:2-1:3；多特异性抗人球蛋白凝胶洗涤缓冲液、抗IgG凝胶洗涤缓冲液、抗C3d凝胶洗涤缓冲液和空白凝胶洗涤缓冲液。
CN201511013596.XA 2015-12-31 2015-12-31 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法 Pending CN105652014A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511013596.XA CN105652014A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511013596.XA CN105652014A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105652014A true CN105652014A (zh) 2016-06-08

Family

ID=56477254

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201511013596.XA Pending CN105652014A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105652014A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109142759A (zh) * 2018-08-31 2019-01-04 江苏力博医药生物技术股份有限公司 一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法
CN114671944A (zh) * 2022-04-29 2022-06-28 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种人绒毛膜促性腺激素纯化方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4124778A1 (de) * 1991-07-26 1993-01-28 Univ Schiller Jena Verfahren und anordnung zur analyse von agglutinationsreaktionen
JP2007327835A (ja) * 2006-06-07 2007-12-20 Olympus Corp マイクロ反応容器
CN101718785A (zh) * 2009-11-25 2010-06-02 江阴力博医药生物技术有限公司 直接抗人球蛋白试剂卡的制备方法
CN102692510A (zh) * 2012-06-07 2012-09-26 北京金豪制药股份有限公司 广谱抗人球蛋白试剂检测卡及其制备
CN103675298A (zh) * 2013-12-13 2014-03-26 江苏中济万泰生物医药有限公司 免疫性溶血性贫血检测试剂盒及其检测方法
CN104569444A (zh) * 2014-12-22 2015-04-29 合肥天一生物技术研究所 一种ABO正反定型及RhD血型检测卡

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4124778A1 (de) * 1991-07-26 1993-01-28 Univ Schiller Jena Verfahren und anordnung zur analyse von agglutinationsreaktionen
JP2007327835A (ja) * 2006-06-07 2007-12-20 Olympus Corp マイクロ反応容器
CN101718785A (zh) * 2009-11-25 2010-06-02 江阴力博医药生物技术有限公司 直接抗人球蛋白试剂卡的制备方法
CN102692510A (zh) * 2012-06-07 2012-09-26 北京金豪制药股份有限公司 广谱抗人球蛋白试剂检测卡及其制备
CN103675298A (zh) * 2013-12-13 2014-03-26 江苏中济万泰生物医药有限公司 免疫性溶血性贫血检测试剂盒及其检测方法
CN104569444A (zh) * 2014-12-22 2015-04-29 合肥天一生物技术研究所 一种ABO正反定型及RhD血型检测卡

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109142759A (zh) * 2018-08-31 2019-01-04 江苏力博医药生物技术股份有限公司 一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法
CN109142759B (zh) * 2018-08-31 2021-08-06 江苏力博医药生物技术股份有限公司 一种高质量血型检测卡用微柱凝胶的制备方法
CN114671944A (zh) * 2022-04-29 2022-06-28 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种人绒毛膜促性腺激素纯化方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104569444B (zh) 一种ABO正反定型及RhD血型检测卡
AU2008258509B2 (en) Detection of antigens carried by erythrocytes and of anti-erythrocyte antibodies
DE2943648C2 (de) Spezifische Bindungs-Untersuchungsmethode zur Bestimmung einer Vielzahl von verschiedenen Liganden in einer einzigen Flüssigkeitsprobe
CA1200482A (en) Double antibody conjugate
CN104569443B (zh) 一种Rh血型检测卡
EP0174195A1 (en) Diagnostic test methods
AU652637B2 (en) Assay of specific antibody
CN105203752A (zh) 一种磁性血小板吸附颗粒及其制备方法
US20190265240A1 (en) Combination treponemal and non-treponemal syphilis test
CN102507961B (zh) 新生儿ABO/Rh血型鉴定试剂卡及其制备方法
CN113252914B (zh) 一种用于Rh系统分型检测卡的抗体稀释液及检测卡
CN105652014A (zh) 一种直接抗人球蛋白检测卡的制备方法
Moore et al. A mouse monoclonal antibody with anti‐A,(B) specificity which agglutinates Ax cells
CN105606829A (zh) 一种新生儿血型鉴定卡
CN101603962B (zh) 一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒
CN110672862B (zh) 一种血型检测卡及其制备方法
CN108828240A (zh) ABO正反定型和RhD血型定型检测卡
Wenz et al. Polyethylene glycol improves the indirect antiglobulin test
US3828103A (en) Indirect hemagglutination test with simultaneous absorption of heterologous antibodies
DE3872999T2 (de) Verknuepfung von verbindungen mit polymeren teilchen unter verwendung von carbamoyloniumvebindungen.
JPS59218958A (ja) 不規則抗体の検出用試薬
CN105628940A (zh) 一种abo亚型血型检测卡
US5238814A (en) IgG antigen-antibody complex for quick Rh blood typing
Santos et al. Acetal-functionalized polymer particles useful for immunoassays. III: Preparation of latex-protein complexes and their applications
CN104569413A (zh) 一种血小板抗体检测的免疫纳米磁珠酶联免疫检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160608

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication