CN105646639A - 一种蒿甲醚的药物组合物及其抗氧化作用 - Google Patents

一种蒿甲醚的药物组合物及其抗氧化作用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蒿甲醚的药物组合物及其抗氧化作用，本发明提供的蒿甲醚的药物组合物中含有蒿甲醚和一种从太子参的干燥块根中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，蒿甲醚和该天然产物单独作用时，抗氧化作用一般；二者联合作用时，抗氧化作用显著提高，可以开发成抗氧化药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。

Description

一种蒿甲醚的药物组合物及其抗氧化作用
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及蒿甲醚的新用途，具体涉及一种蒿甲醚的药物组合物及其抗氧化作用。
背景技术
蒿甲醚为一高效、速效的疟原虫红细胞内期杀灭剂。用于抗氯喹恶性疟及凶险型疟疾的治疗，显效迅速，近期疗效好。
蒿甲醚除对红细胞内期无性生殖体有强大的杀灭作用，尚能促使血吸虫成虫肝移和被杀死，且对不同发育阶段的血吸虫童虫亦有效，以虫龄1周的童虫对药物最敏感，对雌虫作用较雄虫明显，即期疗效良好。适用于各型疟疾，但主要用于抗氯喹恶性疟治疗和凶险型恶性疟的急救。蒿甲醚对恶性疟(包括抗氯喹恶性疟及凶险型疟)的疗效较佳，效果确切，显效迅速，近期疗效可达100％。用药后2日内多数病例血中原虫转阴并退烧。复燃率8％。较青蒿素低。与伯氨喹合用可进一步降低复燃率。
临床还试用于急性上呼吸道感染的高热病人，进行对症处理，取得较好疗效。退热效应一般在肌注后半小时左右即开始出现，体温呈梯形逐渐下降，4～6小时左右再逐渐回升，无体温骤降的现象，退热作用稳定。蒿甲醚肌注后病人出汗少，不致引起老人、儿童、虚弱病人发生虚脱等不良反应。
丙二醛(MDA)是脂质过氧化(脂褐素)LPO代谢物，其含量高低可反映体内自由基的反应程度，脂质过氧化物产物的堆积可以引起细胞代谢及功能障碍甚至死亡，故丙二醛(MDA)的含量常可间接反映出机体受自由基攻击程度。超氧化物歧化酶(SOD)对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基(O2-·)，保护细胞免受损伤。
迄今为止，尚未见蒿甲醚的药物组合物与抗氧化的相关性报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蒿甲醚的药物组合物，该药物组合物中含有蒿甲醚和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，蒿甲醚和该天然产物可以协同发生抗氧化作用，用于制备抗氧化的药物。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
一种蒿甲醚的药物组合物，包括蒿甲醚、如上所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体。
如上所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将太子参的干燥块根粉碎，用70％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用5％乙醇洗脱12个柱体积，再用65％乙醇洗脱10个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩得65％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中65％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为30:1、25:1和20:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集15～18个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
如上所述的化合物(Ⅰ)在制备抗氧化的药物中的应用。
如上所述的蒿甲醚的药物组合物在制备抗氧化的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的蒿甲醚的药物组合物中含有蒿甲醚和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，蒿甲醚和该天然产物单独作用时，抗氧化作用一般；二者联合作用时，抗氧化作用显著提高，可以开发成抗氧化的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
分离方法：(a)将太子参的干燥块根(2kg)粉碎，用70％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用5％乙醇洗脱12个柱体积，再用65％乙醇洗脱10个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩得65％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中65％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1(12个柱体积)、50:1(9个柱体积)、25:1(10个柱体积)和15:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为30:1(5个柱体积)、25:1(8个柱体积)和20:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集15～18个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(265mg，HPLC归一化纯度大于98％)。
结构确证：淡黄色粉末，HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z457.3677，结合核磁特征可得分子式为C30H48O3，不饱和度为7。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-1a(2.07，m)，H-1b(2.13，m)，H-2a(2.24，m)，H-2b(2.38，ddd，J＝13.6，4.3，1.9Hz)，H-4(2.29，m)，H-6a(1.81，m)，H-6b(1.88，m)，H-7a(1.47，m)，H-7b(1.49，m)，H-8(1.55，m)，H-10(1.65，m)，H-11a(1.22，m)，H-11b(2.07，m)，H-12a(1.39，m)，H-12b(1.52，m)，H-16a(1.61，d，J＝13.8Hz)，H-16b(1.93，d，J＝13.8Hz)，H-18(1.83，m)，H-19a(1.63，m)，H-19b(1.86，m)，H-21a(1.18，m)，H-21b(1.39，m)，H-22a(1.28，m)，H-22b(1.56，m)，H-23(0.92，d，J＝6.8Hz)，H-24(0.83，s)，H-25a(3.91，d，J＝11.5Hz)，H-25b(3.99，d，J＝11.5Hz)，H-26(1.07，s)，H-27(1.17，s)，H-28(0.88，s)，H-29(1.09，s)，H-30(1.16，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppmCDCl3，125MHz)：24.8(CH2，1-C)，42.6(CH2，2-C)，212.5(C，3-C)，58.4(CH，4-C)，42.3(C，5-C)，41.4(CH2，6-C)，18.3(CH2，7-C)，53.4(CH，8-C)，41.9(C，9-C)，60.8(CH，10-C)，30.4(CH2，11-C)，31.7(CH2，12-C)，42.7(C，13-C)，57.6(C，14-C)，213.2(C，15-C)，54.2(CH2，16-C)，33.4(C，17-C)，41.9(CH，18-C)，37.0(CH2，19-C)，30.6(C，20-C)，34.7(CH2，21-C)，36.4(CH2，22-C)，7.3(CH3，23-C)，14.6(CH3，24-C)，62.7(CH2，25-C)，20.8(CH3，26-C)，18.1(CH3，27-C)，33.5(CH3，28-C)，28.8(CH3，29-C)，25.3(CH3，30-C)。红外波谱中的3427cm-1与1735cm-1吸收带表明结构中存在羟基与羰基。13CNMR、DEPT和HSQC谱中显示有30个碳信号，包括七个甲基，十一个亚甲基(一个连氧碳)，四个次甲基，以及八个季碳(两个羰基碳)，以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为五环结构。1H-NMR谱结合HSQC谱显示七个甲基质子信号δH0.92(3H，d，J＝6.8Hz)、0.83(3H，s)、1.07(3H，s)、1.17(3H，s)、0.88(3H，s)、1.09(3H，s)、1.16(3H，s)，十一组亚甲基质子信号δH2.07(1H，m)与2.13(1H，m)、2.24(1H，m)与2.38(1H，ddd，J＝13.6，4.3，1.9Hz)、1.81(1H，m)与1.88(1H，m)、1.47(1H，m)与1.49(1H，m)、1.22(1H，m)与2.07(1H，m)、1.39(1H，m)与1.52(1H，m)、1.61(1H，d，J＝13.8Hz)与1.93(1H，d，J＝13.8Hz)、1.63(1H，m)与1.86(1H，m)、1.78(1H，d，J＝13.1Hz)与2.62(1H，d，J＝13.1Hz)、1.18(1H，m)与1.39(1H，m)、1.28(1H，m)与1.56(1H，m)，四个次甲基质子信号δH2.26(1H，m)、1.55(1H，m)、1.62(1H，m)、1.83(1H，m)；由以上NMR数据可知该化合物为木栓烷型三萜类，并且结构中存在两个酮基以及一个羟甲基片段。HMBC谱中，H2-25与C-8和C-10的相关性表明羟甲基连接在C-9位，而H2-16与C-15以及H3-23与C-3相关信号以及它们的碳化学位移数据可以确定C-3和C-15为酮基碳。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
化学结构式和碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
1、材料与方法
1.1动物
试验动物采用清洁级昆明种小鼠，昆明小鼠体重25～30g。由中科院上海实验动物中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2002-0010。
1.2试剂与样品
蒿甲醚购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。D-半乳糖购自上海恒信化学试剂有限公司；SOD、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。蒿甲醚、化合物(Ⅰ)及其组合物先用少量DMSO超声溶解，再用蒸馏水溶解稀释灌胃。
1.3小鼠分组及模型制备
测定清洁级昆明种小鼠60只，按体重随机分为5组，即正常对照组、模型对照组、蒿甲醚组、化合物(Ⅰ)组、蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组，每组12只；除正常对照外，其余各组每只皮下注射D-半乳糖，注射量为1.0g/kgB.W.，每天1次，连续6周；造模同时，蒿甲醚组与化合物(Ⅰ)组分别灌服蒿甲醚与、化合物(Ⅰ)；蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组灌服蒿甲醚与化合物(Ⅰ)的组合物。灌服剂量为：对照组给蒸馏水，蒿甲醚与、化合物(Ⅰ)剂量为60.0mg/kgB.W.的蒿甲醚或化合物(Ⅰ)(用蒸馏水为溶煤)，蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组剂量为30.0mg/kgB.W.蒿甲醚+30.0mg/kgB.W.化合物(Ⅰ)(用蒸馏水为溶煤)。
1.4红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量测定
试验结束后，内眦静脉采血，测定红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
1.5肝脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量测定
试验结束后，取肝脏。测定肝脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。
1.6统计学分析
全部数据采用SPSS/PC(11.5)软件包在微机上进行统计处理。
2、实验结果
2.1对D-半乳糖模型小鼠血液和肝脏MDA含量的影响
模型对照组MDA含量高于空白对照组(P<0.05)，说明造模成功。与模型对照组比较，蒿甲醚组、化合物(Ⅰ)组小鼠实验后肝脏MDA含量明显降低，差异均有统计学意义(P﹤0.05)；与模型对照组比较，蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组对肝脏MDA含量明显降低(P<0.01)。与模型对照组比较，蒿甲醚组、化合物(Ⅰ)组小鼠实验后红细胞MDA含量明显降低(P＜0.05)；与模型对照组比较，蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组小鼠实验后红细胞MDA含量明显降低(P＜0.01)，结果见表1。
2.2对D-半乳糖模型小鼠血液和肝脏SOD含量的影响
模型对照组SOD含量低于空白对照组(P＜0.05)，说明造模成功。与模型对照组比较，蒿甲醚与化合物(Ⅰ)组合物组小鼠实验后红细胞与肝脏SOD含量明显增高，差异有统计学意义(P＜0.01)；与模型对照组比较，蒿甲醚组、化合物(Ⅰ)组血液和肝脏SOD含量明显升高(P＜0.05)，结果见表2。
表1对D-半乳糖模型小鼠血液和肝脏MDA含量的影响
表2对D-半乳糖模型小鼠血液和肝脏SOD含量的影响
上述结果表明，蒿甲醚和本发明提供的化合物(Ⅰ)单独作用时，抗氧化作用一般；蒿甲醚和本发明提供的化合物(Ⅰ)联合作用时，抗氧化作用显著提高，二者存在协同作用，可以开发成抗氧化的药物。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (6)

1.一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
2.一种蒿甲醚的药物组合物，其特征在于：包括蒿甲醚、如权利要求1所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体。
3.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：(a)将太子参的干燥块根粉碎，用70％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用5％乙醇洗脱12个柱体积，再用65％乙醇洗脱10个柱体积，收集65％洗脱液，减压浓缩得65％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中65％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为30:1、25:1和20:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集15～18个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
4.根据权利要求3所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
5.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)在制备抗氧化的药物中的应用。
6.权利要求2所述的蒿甲醚的药物组合物在制备抗氧化的药物中的应用。
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