CN105640930A - 铁代谢改善剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种使接受了血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者的生物体内的铁代谢得到改善的铁代谢改善剂，提供一种铁代谢改善剂，其特征在于，作为电解质不含乙酸和/或乙酸盐而含有柠檬酸和/或柠檬酸盐，进而将其他电解质、葡萄糖单独或者多种组合来含有，提供一种铁代谢改善剂，其是透析液和/或透析用补充液的形式。另外，提供通过使用该透析液和/或透析用补充液而使生物体内的铁代谢得到改善的方法，以及含有对于慢性肾衰竭患者进行的血液透析和血液过滤透析的血液净化方法。

Description

铁代谢改善剂

本申请是申请号为200780045678.X、申请日为2007年12月10日、发明名称为“铁代谢改善剂”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及改善生物体内铁代谢的铁代谢改善剂，特别涉及使接受了血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者的生物体内铁代谢得到改善的铁代谢改善剂。

进而，本发明涉及通过对于接受血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者给予该铁代谢改善剂而改善生物体内的铁代谢的方法，特别涉及通过使用含有该铁代谢改善剂的透析液和/或透析用补充液而使生物体内的铁代谢得到改善的方法。

进而本发明还涉及血液净化方法，该方法包含对于慢性肾衰竭患者，使用含有该铁代谢改善剂的透析液进行血液净化的血液透析和血液过滤透析，进而涉及血液净化方法，该方法包含对于慢性肾衰竭患者，使用含有该铁代谢改善剂的透析用补充液进行血液净化的血液过滤透析和血液过滤。

背景技术

接受了以血液透析为代表的血液净化疗法的慢性肾衰竭患者由于多种并发症而使其QOL(生存质量)降低或住院、死亡的危险率增高，作为其因子，存在有慢性炎症状态、营养障碍、动脉硬化、再者是促红细胞生成素(EPO)抵抗性肾性贫血，通过它们相互作用，而使预后恶化，这是普遍知道的事实。

与这些病况有关的一元机理还没有搞清，猜想其一个原因是伴随肾衰竭的铁代谢异常，即铁在各种脏器·组织中的蓄积以及由以催化铁的芬顿反应为介导的氧化应力(酸化ストレス)的增幅所导致的细胞障碍。

接受了血液净化疗法的慢性肾衰竭患者所发生的肾性贫血是由于伴随肾功能降低而在肾组织内产生的促红细胞生成素相对生成不足，从而骨髓中的红细胞生成减少的状态，作为对于其的治疗，可以使用人基因重组型促红细胞生成素(rHuEPO)制剂，另外最近，对于透析疗法引入前的保存期肾衰竭患者，也使用rHuEPO制剂。

但是，即使给予rHuEPO制剂，也散见由于对于EPO的造血反应性降低而不能使贫血得到改善的EPO抵抗性肾性贫血。其原因多是因为骨髓中的铁缺乏，而对于慢性肾衰竭，由rHuEPO治疗导致造血亢进，由此铁的需要增加的缘故。但是，已知有下述的状态，即，尽管由血清铁蛋白浓度可以判断储存了足够的铁，但进而通过给予铁，也缺乏改善贫血的功能性铁。

本发明人们搞清了透析患者的铁代谢异常的存在和其一部分机制(非专利文献1)。即，血液透析患者的血清铁与健常人相比是低的值，但血清铁蛋白浓度是有统计学意义的高值。另外这些患者的多核白细胞内铁浓度升高至健常人的3倍左右，同时铁蛋白浓度也升高至约1.5倍。

进而，即使仅对于血清铁蛋白浓度低的患者进行研究，仍然有同样的细胞内铁浓度的升高。

即，对于透析患者，与血清铁蛋白浓度无关，多核白细胞内的铁浓度升高。

在细胞内铁代谢中有铁输送蛋白参与。对于铁输送蛋白，在细胞水平，特别是对于十二指肠或网状内皮系细胞可以得到许多新的发现。作为向细胞内摄入铁的蛋白，除了摄入与3价铁(Fe³⁺)结合的转铁蛋白的转铁蛋白受体(TfR)以外，还已知有输送2价铁(Fe²⁺)的二价金属离子转运体1(DMT1)，另外作为向细胞外汲出铁的蛋白，已知有膜铁转运蛋白(フ工ロポ一チッ)1(FP1)。

本发明人们另外对于多核白细胞的细胞内铁浓度的升高与铁输送蛋白的关联性进行阐明(非专利文献1)。即，确认TfR与铁向多核白细胞细胞内的摄入有关，FP1与铁的汲出有关。另外，可知在血液透析患者的多核白细胞中，与健康正常人相比，在mRNA水平和蛋白水平作为铁摄入蛋白的TfR表达增加，作为铁汲出蛋白的FP1表达降低。

以上暗示了对于血液透析患者，由于这些铁输送蛋白的调节异常，即“铁的包裹”，导致多核白细胞内的铁过剩蓄积。

在全身的细胞中都发现有铁输送蛋白，因此在透析患者的多核白细胞中确认的同样的表达变化即使在网状内皮系中也有发生的可能性。

生物体中最重要的铁代谢是在老化的红细胞网状内皮系中贪食、从血红蛋白将铁取出并在骨髓中用于造血而使铁再利用的所谓再生体系。通过该体系，一天有约20～25mg的铁得到再利用。当在肝脏或脾脏的网状内皮系和骨髓巨噬细胞中产生“铁的包裹”时，铁代谢的再生体系丧失，虽然血清铁蛋白值为高值，但陷入铁不足的功能性铁缺乏的状态。

另一方面，对于多数慢性肾衰竭患者，认为其作为炎症反应急性期指标之一的C-反应性蛋白质(CRP)为高值，处于慢性炎症状态。一直以来，对于伴随慢性炎症性疾患的慢性病贫血，报道了其机理为在脾脏和肝脏的巨噬细胞中蓄积了铁，以及由于网状内皮系中“铁的包裹”而导致再利用障碍(非专利文献2)。

另外，EPO抵抗性肾性贫血的一部分也表现与慢性炎症状态关联(非专利文献3)。

最近，报道了慢性病贫血的病况与炎症性细胞因子的关联性(非专利文献4)，因此作为透析患者的铁输送蛋白调节障碍的原因物质，炎症性细胞因子受到人们的瞩目。

本发明人们使用来源于人单核细胞的培养细胞，研究了这些炎症性细胞因子给铁输送蛋白所带来的影响(非专利文献5)。其结果认为，在mRNA水平和蛋白水平上有TfR、DMT1的表达增加和FP1的表达抑制。另外，即使使铁处于前负荷的状态，利用细胞因子刺激也有同样的变化。即，在网状内皮系中，细胞因子与细胞内铁浓度无关，暗示引起了铁输送蛋白调节障碍。

在现有的市售透析剂中，为了稳定化而含有少量(8～12mEq/L)的乙酸，也暗示了该乙酸有可能通过刺激单核细胞而助长高细胞因子血症。另一方面，在作为柠檬酸转换酶的乌头酸酶中，其活性中心存在铁-硫配位化合物，当细胞内铁浓度低时，铁-硫配位化合物分解，酶活性降低。另外，报道了细胞质中存在的作为铁代谢控制蛋白的IRP(铁调节蛋白，ironregulatoryprotein)的内IRP1在缺乏铁的情况下，与在铁输送蛋白的mRNA中存在的IRE(铁应答型元件，ironresponsiveelement)结合，产生TfR和DMT1的mRNA的分解障碍和FP1的mRNA的翻译引发障碍(非专利文献6)。已知IRP1在细胞内铁浓度高时具有乌头酸酶活性，因此柠檬酸通过乌头酸酶活性的升高而减弱IRP1-IRE的结合，有纠正铁输送蛋白异常的可能性。

综上所述，源于透析患者呈现的高细胞因子血症，在网状内皮系细胞中引起与多核白细胞同样的铁输送蛋白调节障碍，由网状内皮系中“铁的包裹”导致的铁利用障害成为EPO抵抗性肾性贫血的主要原因，进而，在影响患者预后的各种并发症的发病、发展中扮演着中心性的角色。

因此，依据以上各点，对于接受了血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者，通过防止高细胞因子血症或者纠正铁输送蛋白的调节异常，网状内皮系的“铁的包裹”可以得到解放，随之血清铁浓度升高，铁的利用性增加，因而由此可以改善EPO抵抗性肾性贫血，回避并发症发生的风险，并有助于患者的QOL提高或预后的改善。

但是，现状是没有公开在接受了血液净化疗法的慢性肾衰竭患者中产生的铁代谢异常的改善，即改善铁向细胞内的过剩摄入和释放抑制的具体手段，或转移在网状内皮系中蓄积的铁以在造血体系中利用的解决方法。另外，现状是作为对于呈现EPO抵抗性贫血的慢性肾衰竭患者的治疗手段，利用服用铁剂的EPO制剂疗法的辅助疗法是有效的，但除了依赖于专业医师的经验以外，没有特别的方法。

【非专利文献1】OtakiY，等：Am.J.KidneyDis.：43，1030-1039(2004)

【非专利文献2】AliM，等：Lancet：20，652-655(1982)

【非专利文献3】BaranyP：Nephrol.Dial.Tranplant.：16，224-227(2001)

【非专利文献4】LudwiczekS，等：Blood.：101，4148-4154(2003)

【非专利文献5】NanamiM，等：ArteriosclerThromb.Vasc.Biol.：25，2495-2501(2005)

【非专利文献6】HentzeMW等：Cell：117，285-297(2004)

发明内容

本发明鉴于上述现状，以提供铁代谢改善剂为课题，所述铁代谢改善剂特别是使接受血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者的生物体内的铁代谢得到改善。

另外本发明的课题在于提供一种改善生物体内的铁代谢的方法，该方法通过对于接受血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者给予本发明的铁代谢改善剂而改善生物体内的铁代谢，特别是通过使用含有该铁代谢改善剂的透析液和/或透析用补充液而使生物体内的铁代谢得到改善。

进而，本发明的课题在于提供一种血液净化方法，该方法包含对于慢性肾衰竭患者，使用含有该铁代谢改善剂的透析液进行血液净化的血液透析和血液过滤透析，进而提供一种血液净化方法，该方法包含对于慢性肾衰竭患者，使用含有该铁代谢改善剂的透析用补充液进行血液净化的血液过滤透析和血液过滤。

对于解决上述课题的本发明，其方案包括以下的构成。

(1)铁代谢改善剂，其特征在于，含有柠檬酸和/或柠檬酸盐；

(2)如上述(1)所述的铁代谢改善剂，其特征在于，作为电解质含有柠檬酸和/或柠檬酸盐；

(3)如上述(1)或(2)所述的铁代谢改善剂，其特征在于，作为电解质不含有乙酸和/或乙酸盐、而含有柠檬酸和/或柠檬酸盐；

(4)如上述(1)、(2)或(3)所述的铁代谢改善剂，其特征在于，含有柠檬酸和/或柠檬酸盐作为电解质，进而将其他电解质、葡萄糖单独或多种组合来含有。

更具体地，本发明是

(5)如上述(1)～(4)中任一项所述的铁代谢改善剂，其是透析液的形式；

(6)如上述(1)～(4)中任一项所述的铁代谢改善剂，其是透析用补充液的形式。

另外，本发明的其他方案有

(7)改善生物体内的铁代谢的方法，其特征在于，对于接受血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者，给予如上述(1)～(4)中任一项所述的铁代谢改善剂；

更具体地，

(8)改善生物体内的铁代谢的方法，其特征在于，对于接受血液透析、血液过滤和血液过滤透析等血液净化疗法的慢性肾衰竭患者，使用含有如上述(5)或(6)所述的铁代谢改善剂的透析液和/或透析用补充液。

进而，本发明另外的其他方案是

(9)包括血液透析和血液过滤透析的血液净化方法，其特征在于，对于慢性肾衰竭患者，使用含有如上述(5)所述的铁代谢改善剂的透析液来进行血液净化；

(10)包括血液过滤透析和血液过滤的血液净化方法，其特征在于，对于慢性肾衰竭患者，使用含有如上述(6)所述的铁代谢改善剂的透析用补充液来进行血液净化。

本发明提供的铁代谢改善剂是包含含有柠檬酸和/或柠檬酸盐、特别含有柠檬酸和/或柠檬酸盐作为电解质的铁代谢改善剂，利用所述铁代谢改善剂，对于接受血液净化疗法的慢性肾衰竭患者，具有使由肾衰竭导致降低的铁利用性提高的效果。

另外，本发明的铁代谢改善剂使形成铁再利用的铁代谢的再生体系恢复，其结果是可以防止高细胞因子血症，同时纠正生物体内的铁输送蛋白的调节异常。

因此，利用本发明的铁代谢改善剂，可以改善慢性肾衰竭患者的EPO抵抗性肾性贫血，回避并发症发生的风险，有助于患者的QOL提高或预后的改善，从这些方面考虑，是特别优选的。

具体实施方式

本发明提供的铁代谢改善剂如上所述，是包含含有柠檬酸和/或柠檬酸盐、特别含有柠檬酸和/或柠檬酸盐作为电解质的铁代谢改善剂。

更具体地，是一种铁代谢改善剂，其特征在于，作为电解质不含有乙酸和/或乙酸盐、而含有柠檬酸和/或柠檬酸盐，进而将其他电解质、葡萄糖单独或多种组合来含有。

因此，本发明的铁代谢改善剂优选以透析液的形式或者透析用补充液的形式来给予。这种透析液或者透析用补充液，优选是含有碳酸氢离子的碳酸氢钠作为碱化剂的碳酸氢透析液或者透析用补充液。

从上述观点考虑，本发明提供的铁代谢改善剂对于透析液，优选制成含有电解质成分、pH调节剂和/或葡萄糖的所谓“A剂”的形式，在实际给予时，利用稀释水稀释，或者优选与包含碳酸氢离子的碳酸氢钠的所谓“B剂”一起稀释来使用。另外，对于透析用补充液，优选制成含有电解质成分、pH调节剂和/或葡萄糖的所谓“B液”的形式，在实际给予时，与包含电解质成分、pH调节剂和碳酸氢钠的所谓“A液”混合使用。

在本发明的铁代谢改善剂中含有的其他电解质成分除了柠檬酸和/或柠檬酸钠等的柠檬酸盐以外，其他还可以列举例如氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、乳酸钾、乳酸钙等。特别优选的电解质成分有氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁和柠檬酸钠。

除此以外进而含有葡萄糖，在作为透析液和/或透析补充液调制时，含有形成适当pH的pH调节剂。

作为这种pH调节剂，可以列举柠檬酸、乳酸、盐酸、苹果酸、抗坏血酸、酒石酸、氢氧化钠等，特别优选柠檬酸、盐酸。

因此，对于本发明提供的铁代谢改善剂中上述各成分的配合量，在稀释、混合成适当的浓度时，碳酸氢透析液或者碳酸氢补充液优选为下述的浓度。

当含有钙离子来作为在本发明提供的铁代谢改善剂中含有的电解质成分时，由柠檬酸和/或柠檬酸盐、例如柠檬酸钠而生成不溶性化合物，但通过利用柠檬酸将pH调低，可以防止不溶性化合物的生成。

进而通过使用柠檬酸，还可以发挥沉淀抑制效果。即，当将在所谓的透析液用“A剂”和透析用补充液用“B液”中含有的电解质成分，与在所谓的透析液用“B剂”和透析用补充液用“A液”中含有的碳酸氢离子的碳酸氢钠混合时，与碳酸氢离子钙和镁离子进行反应而生成作为不溶性化合物的碳酸金属盐，因此在使用时，作为稀释、混合后的人工肾脏用透析液来调制，此时，利用柠檬酸的沉淀生成抑制效果，有长期保持稳定性的优点。

在本发明的铁代谢改善剂中，柠檬酸和/或柠檬酸盐的使用量优选是作为制剂将pH调节为2.2～2.9左右的量，通常作为柠檬酸离子，只要含有调节成上述0.02～5mEq/L的量即可。

另外，在现有的所谓透析液用“A剂”和透析用补充液用“B液”中含有乙酸，相对于此，对于本发明的铁代谢改善剂，特征在于完全不含有乙酸。因此，在作为含有本发明的铁代谢改善剂的透析液和/或透析用补充液进行调制时，仅使用碳酸氢钠作为碱化剂，从而可以说是更为生理性的处方。

本发明提供的铁代谢改善剂可以利用在其中含有的柠檬酸和/或柠檬酸盐的功能，通过乌头酸酶活性的升高而减弱IRP1-IRE的结合，纠正铁输送蛋白的调节异常。另外，本发明的铁代谢改善剂通过在其中完全不含有乙酸，防止透析患者的高细胞因子血症，纠正铁输送蛋白的调节异常。其结果是可以解放网状内皮系中的“铁的包裹”，随之血清铁浓度升高，铁代谢异常得到改善，铁利用性提高，由此对于EPO抵抗性肾性贫血的改善作出很大的贡献。

在这一点上，本发明的铁代谢改善剂可以说具有极其特异的作用。

本发明的铁代谢改善剂除了透析液的形式或者透析用补充液的形式以外，还可以与医药上允许的载体、赋形剂、稀释剂等一起混合，而以液剂、酏剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、透皮吸收型制剂、悬浮剂·乳剂、栓剂、散剂、酒精剂、片剂、糖浆剂、注射剂、贴剂、柠檬水剂(リモナ一ゼ剂)等的形式给予。或者也能以使用了适当赋形剂的经口摄取(摄食)的形式来给予，这种形式可以列举例如粉末、颗粒、片、液体(饮料、胶状饮料等)、糖等。

实施例

以下通过具体的试验例和实施例来说明本发明，但本发明不限定于此。

实施例1：透析制剂对于肾衰竭狗的铁代谢的作用

使用肾衰竭狗，实际进行透析，研究此时对于铁代谢的作用。

[试验方法]

对于绝食约18小时的雄性比格犬，通过桡侧皮静脉内给予戊巴比妥钠(30mg/kg)进行麻醉后，从正中线剖腹，完全结扎两侧的尿管。

手术后第2天进行透析实验。作为导入麻醉，从桡侧皮静脉内给予戊巴比妥钠(30mg/kg)，即使在透析中也可以为了维持麻醉而使用输液泵从静脉内持续地给予戊巴比妥钠。

在大腿动静脉中插入固定充满加入肝素的生理盐水(10单位/mL)的8Fr导管，制作血液出入口(ブラッドァクセス)。为了管理呼吸，进行气管插管，给动物装配人工呼吸器。

血液透析使用单独用血液透析过滤装置DBG-01(日机装(株)制)进行。透析膜和血液回路分别使用PS-0.6UW和小儿用血液回路。

作为试验组，使用包含下表1所述处方的本发明的透析液和市售透析液[AK-ソリタ(注册商标)·DL]，分别各自实验3例。

血液透析在下述条件下进行，即，血液流量为100mL/min，透析液流量为300mL/min，不进行除水，透析时间为4小时。

为了防止血液凝固，在透析开始前将100单位/kg体重的肝素从静脉内给予，以后以每1小时50单位/kg体重的量从静脉内追加给予。

血液在两侧尿管结扎手术前、透析开始前、透析开始2和4小时后采取。采取的血液在冷却下离心分离，除了测定血清中的铁和不饱和铁结合能(UIBC)以外，还测定血浆中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、柠檬酸和乙酸。

总铁结合能(TIBC)由血清铁+UIBC算出。

透析结束后，从血液出入口部位用生理盐水进行脱血、灌流后，解剖动物，从脾脏采取组织。对于采取的组织，进行铁蓝染色，通过图像解析而将铁染色的比例作为％求得。进而，进行组织中铁蛋白的免疫组织染色，用肉眼进行组织观察。对于组织研究，将本发明透析液和市售透析液的试验组2组与没有经过处置的正常组(3例)和未实施透析的肾衰竭组(3例)进行比较。

【表1】

[试验结果和考察]

柠檬酸浓度、血清铁浓度、UIBC、TIBC的结果分别示于图1～4。

另外，透析开始2小时后的乙酸浓度的结果示于下表2。

两侧尿管结扎后第2天，透析前的肾衰竭狗的血浆中Cre和BUN浓度显著升高，可以确认引起肾衰竭。

由肾衰竭导致升高的血浆中Cre和BUN浓度通过本发明的透析液组和市售的透析液组任一者的透析而迅速降低。在本发明的透析液组中，以与透析前值相同程度的值推移，但对于市售的透析液组，通过透析，血浆中柠檬酸浓度降低(图1)。当进行组间比较时，在透析2和4小时后，本发明的透析液组与市售的透析液组相比，是有统计学意义的高值。对于发明的透析液组，血浆中乙酸浓度在透析中没有检测到，但对于市售的透析液组，血浆中乙酸浓度通过透析而有统计学意义的升高(p＜0.05，表2)。

对于铁，由肾衰竭导致降低的血清铁在利用本发明的透析液进行的透析中，相对于透析前值有统计学意义地升高(图2)。另一方面，在利用市售的透析液进行的透析中，没有发现有统计学意义的变化。在二元配置分散分析中，不仅根据透析时间，即使根据透析液的种类，铁值也有统计学意义的差异(从透析前至4小时后：时间，F(2，12)＝4.46，p＜0.05；透析液，F(1，12)＝9.71，p＜0.01；时间×透析液，F(2，12)＝1.09，p＞0.05)。

UIBC通过透析，相对于本发明的透析液组和市售的透析液组任一者的透析前值有统计学意义地降低，在二元配置分散分析中，对于透析时间和透析液的种类，UIBC值有统计学意义的差异(从透析前至4小时后：时间，F(2，12)＝9.91，p＜0.01；透析液，F(1，12)＝7.82，p＜0.05；时间×透析液，F(2，12)＝0.53，p＞0.05，图3)。

另外，TIBC通过透析几乎没有发现变化，另外也没有透析液间的有统计学意义的差异(图4)，因此UIBC的变化反映在血清铁的变化中。

对于脾脏组织的铁染色，肾衰竭组与没有经过处置的组相比，铁染色的比例升高，由透析导致升高的铁染色的比例降低，本发明的透析液与市售的透析液相比，铁染色的程度弱(图5)。进行统计解析后，发现在本发明的透析液组与市售的透析液组之间脾脏的铁染色％有统计学意义的差异(p＜0.05)。

对于脾脏组织的铁蛋白染色，利用本发明透析液进行的透析，与市售透析液相比，铁蛋白染色的程度减弱，染色的细胞数也少。

这些组织研究的结果暗示产生了在肾衰竭状态下铁向脏器内的包裹，和由透析行为本身导致的铁的包裹的解放，对于脾脏中铁的包裹的解放，本发明的透析液与市售的透析液相比表现得更强。

由以上可知，通过使用了本发明透析液的透析，有可能表现出由肾衰竭导致降低的铁利用性的增加效果。

【表2】

给予组	血浆中乙酸浓度(mg/dL)
		本发明的透析液组	0.0±0.0
市售的透析液组	4.3±0.2

实施例2：通过对于两肾摘出大鼠给予柠檬酸而产生的铁代谢改善 效果的研究

使用肾脏全部摘出的大鼠，对于给予柠檬酸时铁代谢的作用进行研究。

[试验方法]

使用8周龄的雄性CD(SD)大鼠(体重约300g)，利用下表3的试验组进行试验。将大鼠通过腹腔内给予戊巴比妥钠(50mg/kg)进行麻醉后，从大鼠背中侧摘出全部肾脏(表3的第1组没有经过处置)，实施中心静脉导管(CVC)留置手术。

在手术实施约24小时后，利用CVC采血1mL，对于表3的第2组和第3组，在其之后立即通过CVC分别将生理盐水或者4.5w/v％的柠檬酸钠液以各0.25mL/小时的给予速度持续给予4小时，给予结束后立即通过CVC采血1mL。

采取的血液在冷却下离心分离，测定血浆中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、铁和柠檬酸。

【表3】

组别	试验组	给予溶液	动物数
				1	没有经过处置的组	-	3
2	两肾摘出+生理盐水	生理盐水	6
				3	两肾摘出+4.5％Cit	4.5w/v％柠檬酸钠液	6

[试验结果和考察]

柠檬酸浓度和铁浓度的结果分别示于图6和7。

两肾摘出约24小时后的大鼠的血浆中Cre和BUN浓度显著升高，可以确认引起肾衰竭。

血浆中的柠檬酸在第1组中为5.27±1.23mg/dL，但在两肾摘出的第2组中升高至16.38±9.49mg/dL，第3组中升高至17.11±18.64mg/dL(图6)。第3组中血浆柠檬酸浓度在给予前后的差异为21.08±13.18mg/dL，可以确认由于给予柠檬酸而导致血浆中柠檬酸浓度升高。另一方面，对于第2组，该差异为-0.92±2.20mg/dL，略微有些降低。

血浆中的铁在第1组中为112±14μg/dL，但在第2组中由于肾衰竭状态而明显降低为61±17μg/dL(图7)，在本模型中，推测产生铁代谢异常。在第3组的柠檬酸给予组中，给予前后的血浆中铁浓度的差与第2组(△5±17μg/dL)相比表现为高的值(14～18μg/dL)(图7)，暗示了由于给予柠檬酸而导致铁的包裹改善，由此有血浆中铁浓度升高的可能性。

实施例3：通过对于两肾摘出大鼠在透析时给予柠檬酸而产生的铁 代谢改善效果的研究

使用肾脏全部摘出后第2天的大鼠，研究在透析实施中给予柠檬酸时给铁代谢带来的作用。

[试验方法]

使用雄性CD(SD)大鼠，通过下表4的试验组进行试验。将大鼠通过腹腔内给予戊巴比妥钠(50mg/kg)进行麻醉后，由大鼠背中侧摘出全部肾脏。

手术实施2天后，将大鼠通过腹腔内给予戊巴比妥钠(50mg/kg)进行麻醉后，在左大腿动脉和左大腿静脉留置导管，制作血液出入口，同时为了给予柠檬酸以及采血用而实施中心静脉导管(CVC)留置手术。利用CVC进行1mL的采血后，使用市售的透析液(AK-ソリタ·DL)在麻醉下进行4小时的透析，对于表4的第2组和第3组，在透析中通过CVC分别将生理盐水或者4.5w/v％的柠檬酸钠液以各1.0mL/小时的给予速度持续给予，透析结束后立即通过CVC采血1mL。

采取的血液在冷却下进行离心分离，测定血浆中的肌酸酐(Cre)、尿素氮(BUN)、铁和柠檬酸。

【表4】

组别	试验组	给予溶液	动物数
				1	两肾摘出	-	3
2	两肾摘出+透析+生理盐水	生理盐水	2
				3	两肾摘出+透析+4.5％Cit	4.5w/v％柠檬酸钠液	2

[试验结果和考察]

柠檬酸浓度和铁浓度的结果分别示于图8和9。

两肾摘出后第2天透析前的大鼠血浆中的Cre和BUN浓度显著升高，可以确认引起了肾衰竭。由肾衰竭导致升高的血浆中的Cre和BUN浓度通过透析迅速降低。

血浆中的柠檬酸由于两肾摘出而在第1组中为5.33mg/dL，但在第2组中升高至19.87mg/dL，另一方面在第3组中为5.33mg/dL，与第1组没有差异(图8)。对于在透析实施中给予柠檬酸的第3组，血浆柠檬酸浓度在给予前后的差异由于给予柠檬酸而升高，为26.49mg/dL。另一方面，对于在透析实施中给予生理盐水的第2组，该差异降低，为-13.05mg/dL。

血浆中的铁由于两肾摘出而在第1组中为59μg/dL，在第2组中为113μg/dL，另外在第3组中为83μg/dL，虽然有波动，但由于肾衰竭状态而降低(图9)。对于在透析实施中给予柠檬酸的第3组，给予前后的血浆中铁浓度的差异与第2组(△19.5μg/dL)相比表现为约高4倍的值(81μg/dL)(图9)，暗示由于给予柠檬酸而导致铁的包裹改善，由此有使血浆中铁浓度升高的可能性。

制剂例：

(1)透析液

A剂(10L中的成分/分量)

B剂(12.6L中的成分/分量)

碳酸氢钠1,030.0g

(2)透析用补充液

A液(1,010mL中的成分/分量)

氯化钠12.34g

氯化钾0.30g

碳酸氢钠5.94g

B液(1,010mL中的成分/分量)

产业可利用性

如以上所述，本发明对于接受了血液净化疗法的慢性肾衰竭患者，使用包括不含乙酸和/或乙酸盐而含有柠檬酸和/或柠檬酸盐的铁代谢改善剂，可防止高细胞因子血症，或者纠正铁输送蛋白的调节异常，解放网状内皮系中的“铁的包裹”，与之相伴升高血清铁浓度并增加铁的利用性，其结果是可以改善EPO抵抗性肾性贫血，回避并发症发生的风险，随之有助于患者QOL的提高或预后的改善，从这一点考虑，其医疗上的效果很大。

附图简单说明

【图1】表示实施例1的血浆中柠檬酸浓度的结果。

【图2】表示实施例1的血清中铁浓度的结果。

【图3】表示实施例1的UIBC的结果。

【图4】表示实施例1的TIBC的结果。

【图5】表示实施例1的脾脏组织的铁染色的结果。

【图6】表示实施例2的血浆中柠檬酸浓度的结果。

【图7】表示实施例2的血浆中铁浓度的结果。

【图8】表示实施例3的血浆中柠檬酸浓度的结果。

【图9】表示实施例3的血浆中铁浓度的结果。

Claims (5)

1.柠檬酸和/或柠檬酸盐用于制备针对慢性肾衰竭患者中的促红细胞生成素抵抗性贫血患者的铁代谢改善剂的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，铁代谢改善剂含有柠檬酸和/或柠檬酸盐作为电解质。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，铁代谢改善剂中，作为电解质不含乙酸和/或乙酸盐、而含有柠檬酸和/或柠檬酸盐。

4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，铁代谢改善剂含有柠檬酸和/或柠檬酸盐作为电解质，进而单独含有或多种组合含有其他电解质、葡萄糖。

5.如权利要求1～4中任一项所述的用途，其特征在于，铁代谢改善剂是透析剂的形式。