CN105628820A - 一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，该方法包括使用离子色谱仪对不同浓度的硫酸根离子对照品溶液与该对照品溶液的电导检测响应值建立标准曲线；检测供试品溶液电导检测响应值，根据公式w%=T*V/m*100%，计算低分子肝素中硫酸根离子含量；其中，T：供试品溶液中硫酸根离子的浓度；V：供试品溶液定容后的体积；m：供试品溶液中的样品的质量。本发明结合各药典方法，提供了一个适用于低分子肝素中游离硫酸根离子的快速检测方法，本发明检测快速，为节约生产周期；可以检测不同产品，节省成本。

Description

一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法

技术领域

本发明属于，尤其涉及一种生物医药领域，尤其涉及一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法。

背景技术

肝素类药物是抗凝血类药物的首选，具有抗凝血、抗血栓、降血脂作用，70多年的使用过程中人们发现其生物利用度低、副作用大，为解决其缺陷，发明了新型抗凝血药物——低分子肝素（LowMolecularWeightHeparin）。常见的低分子肝素有依诺肝素钠、达肝素钠、那曲肝素钙、汀肝素钠等。

低分子量肝素是未分级肝素中具有较低分子量的组分或片段，具有与未分级肝素相同的母体结构，这类药物具有链短、结合部位少、生物利用度高、半衰期长、个体差异和不确定因素少、稳定的剂量反应、无需进行血药浓度检测和对血小板的作用小等优点。用于预防和治疗深静脉血栓形成，用于冠心病的治疗等，显著降低大出血危机。

LMWH是一种经硫酸化修饰的多糖，硫酸化修饰有利于活性发挥。由于生产工艺硫酸化修饰过程和产品贮藏过程中可能会有硫酸根脱落而影响活性，因此，需要对产品中游离硫酸根含量进行检测。目前EP那曲肝素钙、USP依诺肝素钠注射液以及CP依诺肝素钠（注射液）标准中收载了游离硫酸根含量检测方法，各个药典检测方法各不相同。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，旨在解决生产工艺硫酸化修饰过程和产品贮藏过程中会有硫酸根脱落而影响活性的问题。

本发明是这样实现的，一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，该方法包括：

步骤一，使用离子色谱仪对不同浓度的硫酸根离子对照品溶液与该对照品溶液的电导检测响应值建立标准曲线；

步骤二，检测供试品溶液电导检测响应值，根据公式w%=T*V/m*100%，计算低分子肝素中硫酸根离子含量；

其中，T：供试品溶液中硫酸根离子的浓度；V：供试品溶液定容后的体积；m：供试品溶液中的样品的质量。

进一步，所述步骤一中不同浓度的硫酸根离子对照品溶液配制方法：该方法包括：

配制3.0mmol/L的碳酸钠试液，该试液使用前过滤超声脱气；

配制含3μg/ml硫酸根离子和5μg/ml草酸根离子的系统适应性混合溶液，所述硫酸根与草酸根分离度≥1.0；

使用浓度为1000ug/ml硫酸根离子溶液分别用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释制成浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液。

进一步，所述步骤一中离子色谱仪建立标准曲线方法为：

使用浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液，根据对照品溶液的电导检测响应值与硫酸根离子对照品溶液浓度建立标准曲线。

进一步，所述步骤一和步骤二中的电导检测响应值通过电导检测器进行检测。

进一步，所述步骤二中供试品溶液配制方法为：

用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释浓度1000ug/ml的硫酸根离子溶液制成供试品溶液

进一步，所述离子色谱仪检测条件：流速：1.0ml/min，进样量：20μl，运行时间：15min，柱温：30℃。

本发明提供的低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法积极效果：相比操作步骤冗长费时，需用多种化学试剂，灵敏度低而且有干扰的经典容量法、重量法和光度法等。本发明提供的离子色谱法检测游离硫酸根离子，样品只需用淋洗液溶解即可进样，无需前处理；根据不同浓度硫酸根离子的电导响应值建立标准曲线，进样检测。该发明只需根据电导检测器的响应值即可得知样品中的游离硫酸根离子含量，无需繁琐的后续处理，且样品检测时间短，可以连续检测不同品种中的游离硫酸根离子含量，操作方便简单、检测灵敏度高。

附图说明

图1为本发明实施例提供的低分子肝素中游离硫酸根离子的快速检测方法流程图。

图2为本发明实施例提供的系统适应性谱图。

图3为本发明实施例提供的标准品溶液响应值与硫酸根离子标准品溶液浓度建立标准曲线。

图4为本发明实施例提供的供试品溶液（依诺肝素钠）的硫酸根离子含量谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。

如图1：一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，该方法包括：

S101：使用离子色谱仪对不同浓度的硫酸根离子对照品溶液与该对照品溶液的电导检测响应值建立标准曲线；

S102：检测供试品溶液电导检测响应值，根据公式w%=T*V/m*100%，计算低分子肝素中硫酸根离子含量；

其中，T：供试品溶液中硫酸根离子的浓度；V：供试品溶液定容后的体积；m：供试品溶液中的样品的质量。

所述S101中不同浓度的硫酸根离子对照品溶液配制方法：该方法包括：

配制3.0mmol/L的碳酸钠试液，该试液使用前过滤超声脱气；

配制含3μg/ml硫酸根离子和5μg/ml草酸根离子的系统适应性混合溶液，所述硫酸根与草酸根分离度≥1.0；

使用浓度为1000ug/ml硫酸根离子溶液分别用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释制成浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液。

所述S101中离子色谱仪建立标准曲线方法为：

使用浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液，根据对照品溶液的电导检测响应值与硫酸根离子对照品溶液浓度建立标准曲线。

所述S101和S102中的电导检测响应值通过电导检测器进行检测。

所述S102中供试品溶液配制方法为：

用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释浓度1000ug/ml的硫酸根离子溶液制成供试品溶液。

所述离子色谱仪检测条件：流速：1.0ml/min，进样量：20μl，运行时间：15min，柱温：30℃。

如图2：硫酸根与草酸根的分离度为2.7以上，系统适应性混合溶液能快速、准确的检测出样品中的游离硫酸根离子含量。

如图3：使用离子色谱仪对不同浓度的硫酸根离子对照品溶液与该对照品溶液的电导检测响应值建立标准曲线；离子色谱法灵敏度高、选择性好、检测快速；同时，结合各药典方法，适用于低分子肝素中游离硫酸根离子的快速检测，可以同时检测不同种类的低分子肝素产品，节省检测时间。

如图4：供试品溶液（依诺肝素钠）的硫酸根离子含量谱图；离子色谱法检测硫酸根离子，该方法依诺肝素钠样品前处理简单，操作方便简单，无需繁琐的预处理及柱后处理，灵敏度高、选择性好、可以快速、准确的检测出样品中的游离硫酸根离子含量。

下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步的说明。

1、仪器：DIONEXICS-3000离子色谱仪、电导检测器、ASRS3004-mm抑制器、自动进样器、十万分之一电子天平、超纯水机。

2、试剂：硫酸根离子溶液（1000ug/ml）、色谱纯无水碳酸钠、色谱纯草酸钠。

3、试液配制：

3.0mmol/L碳酸钠试液溶液。

系统适应性溶液：含3μg/ml硫酸根离子和5μg/ml草酸根离子的混合溶液。

标准品溶液：使用硫酸根离子溶液（1000ug/ml），分别用流动相稀释制成浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液。

供试品溶液：用稀释样品制成浓度为0.4mg/ml的供试品溶液。

4、色谱条件：

色谱柱：DionexIonPacTMAG11RFICTM4×50mm保护柱和DionexIonPacTMAS11RFICTM4×250mm分析柱。

流速：1ml/min；进样量：20μl；运行时间：15min；柱温：30℃；电导检测器。

5、进样：

对照品溶液依次进样后供试品进样。

根据标准品溶液响应值与硫酸根离子标准品溶液浓度建立标准曲线。根据公式w%=T*V/m*100%，计算出依诺肝素钠中硫酸根离子含量。其中，T：供试品溶液中硫酸根离子的浓度（μg/ml）；V：供试品溶液定容后的体积（ml）；m：供试品溶液中的样品的质量（mg）。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，其特征在于，该低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法包括：

使用离子色谱仪对不同浓度的硫酸根离子对照品溶液与该对照品溶液的电导检测响应值建立标准曲线；

检测供试品溶液电导检测响应值，根据公式w%=T*V/m*100%，计算低分子肝素中硫酸根离子含量；

其中，T：供试品溶液中硫酸根离子的浓度；V：供试品溶液定容后的体积；m：供试品溶液中的样品的质量。

2.如权利要求1所述的低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，其特征在于，所述不同浓度的硫酸根离子对照品溶液配制方法包括：

配制3.0mmol/L的碳酸钠试液，该试液使用前过滤超声脱气；

配制含3μg/ml硫酸根离子和5μg/ml草酸根离子的系统适应性混合溶液，所述硫酸根与草酸根分离度≥1.0；

使用浓度为1000ug/ml硫酸根离子溶液分别用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释制成浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液。

3.如权利要求1所述的低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，其特征在于，所述离子色谱仪建立标准曲线方法为：

使用浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、4.0μg/ml、5.0μg/ml的硫酸根离子对照品溶液，根据对照品溶液的电导检测响应值与硫酸根离子对照品溶液浓度建立标准曲线。

4.如权利要求1所述的低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，其特征在于，所述电导检测响应值通过电导检测器进行检测。

5.如权利要求1所述的低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法，其特征在于，所述供试品溶液配制方法为：

用3.0mmol/L的碳酸钠试液稀释浓度1000ug/ml的硫酸根离子溶液制成供试品溶液。