CN101620210A - 一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法 - Google Patents

一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。本发明用高效液相色谱检测处理后的样品溶液，通过配制梯度标准溶液、制作标准曲线并建立回归方程以计算所测多糖样品中的硫含量。本发明方法中所测多糖溶液与流动相混合液的相溶性很好、标准曲线线性范围较宽，克服了以往测定硫含量过程中操作繁琐，杂质干扰严重，精确性、灵敏度不理想，线性范围较窄等缺点；本发明方法检测结果准确可靠，简化检测步骤而节省了测定时间，测定费用低，易于推广实施。

Description

一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法
技术领域
本发明涉及一种测定硫含量的方法，具体涉及一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。
背景技术
多糖硫酸酯(polysaccharide sulfate)是多糖大分子链中单糖分子上的某些羟基被硫酸根所取代而形成的一种化学结构复杂、生物活性多样、构效关系鲜明的多糖衍生物，它包括从动、植物中提取的各种硫酸多糖、肝素、天然中性多糖的硫酸衍生物及人工合成、半合成的各种硫酸多糖如硫酸葡聚糖、硫酸戊聚糖、硫酸木聚糖、硫酸香菇多糖、岩藻依聚糖、卡拉胶硫酸软骨素等。多糖硫酸酯具有广泛的生物学性质，包括抗病毒、抗肿瘤、抗艾滋病、增强免疫系统功能和抗凝活性等，因而受到极大关注。取代度的高低直接影响多糖的活性，羟基的硫酸酯化，不仅增加了多糖的溶解性，更重要的是改变了多糖的构象，因此，多糖硫酸酯中硫酸根含量的测定是多糖硫酸酯构效关系研究的一个重要方面。
现有的测定样品中硫含量的方法有：离子色谱法(IC)、硫酸钡浊度法、元素分析法、X射线荧光(XRF)法、电感耦合等离子体-原子发射光谱法(ICP-AES)、原子吸收光谱法(AAS)和电化学分析法等。中国专利CN 1811400A于2006年8月2日公开了一种“示波极谱法测定馏分油中元素硫含量”的方法，在样品中加入三苯基磷使之与元素硫生成三苯基磷硫化物，根据所测溶液产生的极谱波峰电流值与其元素硫含量的相关性进行测定，此方法只适用于所针对的样品，应用范围窄。文献“离子色谱法测定高山红景天多糖硫酸酯中硫酸根含量的研究”(《分子科学学报》，2000，9，16(3))于2000年在《分子科学学报》16卷第3期报道了利用离子色谱法测定高山红景天多糖硫酸酯中硫酸根含量的方法，样品需灰化处理，该方法存在线性范围较窄(1～20mg/L)、重复性差等缺点。文献“盐酸水解-硫酸钡重量法测定硫酸酯化多糖硫酸基含量方法考察”(《食品科学》2002，(23)5，107～111)于2002年在《食品科学》23卷第5期报道了盐酸水解-硫酸钡重量法测定硫酸酯化多糖硫酸基含量方法，该方法操作烦琐、杂质干扰严重，由于水解时间、加入明胶-氯化钡溶液等保温时间的不同而使测定结果精确度和灵敏度都不理想，人们期望有一种能够快速、准确地测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、准确地测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。
为解决上述技术问题，本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线并建立回归方程：
取一定质量的Na2SO4定容于容量瓶中制备硫酸根(SO4 2-)浓度为100mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱(HPLC)检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标(Y)、硫酸根梯度标准溶液浓度为横坐标(X)绘制标准曲线并建立回归方程；
(2)样品的处理：
称取待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为1～4mol/L的盐酸，其中所述干物质样品与盐酸的比例为，重量∶体积＝1mg∶1～2ml，在100℃下氮气保护水解4～6小时，然后在40～60℃、0.06～0.08MPa下减压浓缩蒸干得到干物质A；
(3)样品硫含量的测定：
将干物质A用超纯水溶解定容，使其硫酸根浓度在0.05～10mg/ml范围内，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，将峰面积平均值代入步骤(1)中所建立的回归方程算出定容后样品溶液的硫酸根浓度(mg/ml)，根据所定容样品溶液中硫酸根的质量和所用多糖硫酸酯干物质样品的质量算出该干物质样品的硫酸根含量，最后由硫在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量(质量百分比)。
高效液相色谱参数：
色谱柱：Sephadex G-10柱；
洗脱剂：超纯水；
洗脱速率：1ml/min；
柱温：30℃；
检测器：示差折光检测器，检测器温度35℃；
进样量：20ul；
标准曲线的线性范围：0.05～10mg/ml；
检出限：0.01mg/ml。
表1为实施例1～3的标准曲线数据，图1～3分别为实施例1～3中以梯度硫酸根标准溶液浓度(X)对峰面积(Y)绘制的标准曲线。在实施例1～3中所建立的对应的回归方程，其相关系数R2值均接近于1，说明其对应的回归方程都具有极显著的线性相关关系。
表1实施例1～3中各梯度硫酸根标准溶液所对应的HPLC检测峰面积的平均值及各实施例中所建立回归方程的R2值
  硫酸根含量(mg/ml)   实施例1峰面积平均值   实施例2峰面积平均值   实施例3峰面积平均值
  0.05   0.1731   0.1642   0.1686
  0.1   0.2781   0.2751   0.2663
  0.5   1.2066   1.2061   1.2026
  1   2.1152   2.1004   2.1182
  5   11.6987   11.7032   11.6899
  10   22.0366   21.9035   22.0085
  R2   0.9991   0.9989   0.9991
表2给出了针对同样的多糖硫酸酯干物质样品，本发明实施例测定的硫含量与元素分析仪测定的硫含量及硫酸钡浊度法测定的硫含量的数据比较；此处硫酸钡浊度法测定的结果由于受杂质的干扰而使测定结果有所偏差，元素分析仪测定是在其他测试机构测定的，该测定是目前精确度较高的测定方法。本发明实施例的测定结果与元素分析仪测定的结果基本一致，说明本发明的测定结果是准确、可靠的。
表2对于同样的多糖硫酸酯干物质样品，本发明实施例的HPLC测定与元素分析仪测定及硫酸钡浊度法测定的硫含量(％)数据比较
  实施例样品   HPLC测定样品的硫含量(％)   元素分析仪测定样品的硫含量(％)   硫酸钡浊度法测定样品的硫含量(％)
  实施例1样品 6.57 6.70 5.53
  实施例2样品 13.70 13.42 14.89
  实施例3样品 17.80 17.21 16.08
本发明的有益效果是：在本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法中，多糖溶液与流动相混合液的相溶性很好、标准曲线线性范围较宽，克服了以往测定硫含量过程中操作烦琐，杂质干扰严重，精确性、灵敏度不理想，线性范围较窄等缺点；本发明方法检测结果准确可靠，重复性好，大大简化了检测步骤，不包括样品水解预处理的时间，样品一次测定的时间仅为15分钟左右，节省了测定时间，测定费用低，易于推广实施。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为根据实施例1中数据制作的标准曲线；
图2为根据实施例2中数据制作的标准曲线；
图3为根据实施例3中数据制作的标准曲线；
图4为实施例3的测试样品溶液的高效液相色谱图，其中横坐标为保留时间(min)，纵坐标为响应值(MV)。
具体实施方式
下面的实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
本发明的目的是提供一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法。在实际测定中，每测同一批样品要求重新制作标准曲线。
实施例1
本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线并建立回归方程：
称取14.80g Na2SO4定容于100ml容量瓶中制备硫酸根(SO4 2-)浓度为100mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标(Y)、硫酸根梯度标准溶液浓度为横坐标(X)绘制标准曲线(图1)并建立回归方程Y＝2.2175X+0.0979，R2＝0.9991；
(2)样品的处理：
准确称取2mg待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为2mol/L盐酸4ml，在100℃下氮气保护水解6小时，然后在60℃，0.06MPa下减压浓缩蒸馏得到干物质A；
(3)样品硫含量的测定：
将干物质A用超纯水溶解定容至2ml，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，将峰面积平均值0.5347代入步骤(1)中所建立的回归方程(Y＝2.2175X+0.0979)算出定容后样品溶液的硫酸根浓度0.1970mg/ml，根据所定容样品的体积2ml和所用多糖硫酸酯干物质样品的质量2mg算出该干物质样品的硫酸根含量19.70％，最后由硫在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量6.57％。
实施例2
本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线并建立回归方程：
称取14.80g Na2SO4定容于100ml容量瓶中制备硫酸根(SO4 2-)浓度为100mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标(Y)、硫酸根梯度标准溶液为横坐标(X)浓度绘制标准曲线(图2)并建立回归方程Y＝2.2063X+0.1028，R2＝0.9989；
(2)样品的处理：
准确称取2mg待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为1mol/L盐酸2ml，在100℃下氮气保护水解4小时，然后在40℃、0.08MPa下减压浓缩蒸馏得到干物质A；
(3)样品硫含量的测定：
将干物质A用超纯水溶解定容至1ml，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，将峰面积平均值(Y)1.9166代入步骤(1)中所建立的回归方程(Y＝2.2063X+0.1028)算出所定容样品溶液的硫酸根浓度(X)为0.8221mg/ml，根据所定容样品溶液体积1ml和所用多糖硫酸酯干物质样品的质量2mg算出该干物质样品的硫酸根含量为41.11％，最后由硫在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量13.70％。
实施例3
本发明一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法，包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线并建立回归方程：
称取14.80g Na2SO4定容于100ml容量瓶中制备硫酸根(SO4 2-)浓度为100mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标(Y)、硫酸根梯度标准溶液浓度为横坐标(X)绘制标准曲线(图3)并建立回归方程Y＝2.2153X+0.0949，R2＝0.9991；
(2)样品的处理：
准确称取2mg待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为4mol/L盐酸3ml，在100℃下氮气保护水解5小时，然后在50℃，0.07MPa下减压浓缩蒸馏得到干物质A；
(3)样品硫含量的测定：
将干物质A用超纯水溶解定容至1ml，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测(液相色谱图如图4)，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，将峰面积平均值2.4876代入步骤(1)中所建立的回归方程(Y＝2.2153X+0.0949)算出定容后样品溶液的硫酸根浓度1.0801mg/ml，再根据所定容样品溶液体积1ml和所用多糖硫酸酯干物质样品的质量2mg算出该干物质样品的硫酸根含量54.01％，最后由硫在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量17.80％。

Claims (1)

1、一种快速测定多糖硫酸酯中硫含量的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)绘制标准曲线并建立回归方程：
取一定质量的Na2SO4定容于容量瓶中制备硫酸根浓度为100mg/ml的母液，然后，依次稀释成0.05、0.1、0.5、1、5、10mg/ml的硫酸根梯度标准溶液。取此梯度标准溶液分别注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，以峰面积平均值为纵坐标、硫酸根梯度标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线并建立回归方程；
(2)样品的处理：
称取待测多糖硫酸酯干物质样品，加入浓度为1～4mol/L的盐酸，其中所述干物质样品与盐酸的比例为，重量∶体积＝1mg∶1～2ml，在100℃下氮气保护水解4～6小时，然后在40～60℃、0.06～0.08MPa下减压浓缩蒸干得到干物质A；
(3)样品硫含量的测定：
将干物质A用超纯水溶解定容，使其硫酸根浓度在0.05～10mg/ml范围内，取所定容的样品溶液注入高效液相色谱检测，每次进样量为20ul，每个样品测定三次，将峰面积平均值代入步骤(1)中所建立的回归方程算出定容后样品溶液的硫酸根浓度，根据所定容样品溶液中硫酸根的质量和所用多糖硫酸酯干物质样品的质量算出该干物质样品的硫酸根含量，最后由硫在硫酸根中的质量百分比(33.33％)算出该干物质样品的硫含量。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103592382A (zh) * 2013-10-29 2014-02-19 中国海洋大学 一种检测及确定虫草多糖中共价连接的硫酸根的方法
CN105628820A (zh) * 2016-01-08 2016-06-01 东营天东制药有限公司 一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法
CN108802083A (zh) * 2018-05-06 2018-11-13 聊城煤武新材料科技有限公司 一种测定三苯基膦中硫、氯含量的方法
CN113720956A (zh) * 2021-09-08 2021-11-30 广州国标检验检测有限公司 一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101493442A (zh) * 2009-02-23 2009-07-29 西北师范大学 一种快速测定硒多糖中硒含量的方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103592382A (zh) * 2013-10-29 2014-02-19 中国海洋大学 一种检测及确定虫草多糖中共价连接的硫酸根的方法
CN105628820A (zh) * 2016-01-08 2016-06-01 东营天东制药有限公司 一种低分子肝素生产过程中游离硫酸根离子快速检测方法
CN108802083A (zh) * 2018-05-06 2018-11-13 聊城煤武新材料科技有限公司 一种测定三苯基膦中硫、氯含量的方法
CN108802083B (zh) * 2018-05-06 2021-07-02 聊城鲁西多元醇新材料科技有限公司 一种测定三苯基膦中硫、氯含量的方法
CN113720956A (zh) * 2021-09-08 2021-11-30 广州国标检验检测有限公司 一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法
CN113720956B (zh) * 2021-09-08 2022-03-29 广州国标检验检测有限公司 一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法

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