CN105603023B - 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法 - Google Patents

一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105603023B
CN105603023B CN201610110628.6A CN201610110628A CN105603023B CN 105603023 B CN105603023 B CN 105603023B CN 201610110628 A CN201610110628 A CN 201610110628A CN 105603023 B CN105603023 B CN 105603023B
Authority
CN
China
Prior art keywords
enteromorpha
oligosaccharide
sialylated
volume
powder
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610110628.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105603023A (zh
Inventor
赵超
吴一晶
刘斌
李秋哲
杨成凤
陈玉青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NIANQINGBAO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN201610110628.6A priority Critical patent/CN105603023B/zh
Publication of CN105603023A publication Critical patent/CN105603023A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105603023B publication Critical patent/CN105603023B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。浒苔干燥后超微粉碎，利用乙醇回流提取工艺，得到干燥脱脂的浒苔粉末，经微波辅助提取、脱蛋白及去除多糖和色素后获得浒苔寡糖，再将唾液酸转移酶加入到含有浒苔寡糖的反应体系中，进行糖基化反应，制备得到所述的唾液酸化浒苔寡糖，该寡糖能显著提高肠道益生菌数量，可用于制备改善肠道菌群的药品或保健品。

Description

一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法
技术领域
本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖及其制备方法。
背景技术
人类肠道中存在巨量不同类型的细菌，肠道内菌群的稳定对于保持人类机体健康是必不可少的。益生菌是通过改善肠道微生物平衡从而对宿主施加有益影响的作用，包括抑制病原菌的生长，繁殖改善肠道菌群结构，增强机体免疫功能，以及降低胆固醇和改善血脂等。大多数益生菌来自双歧杆菌属和乳杆菌属，益生菌数量的减少可引起整个肠道菌群失调和肠道微生态失衡，从而导致许多代谢性疾病的发生。
唾液酸化寡糖能促进益生菌在肠道上皮定殖、增殖，具有显著抑制病原菌黏附、维持婴儿肠道菌群平衡、参加机体免疫等功能。唾液酸化寡糖的合成以核苷糖为糖基供体，乳糖或乙酰乳糖为受体，在唾液酸转移酶的催化条件下完成。唾液酸糖基转移酶以胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸为底物将唾液酸残基转移至新的糖基受体上形成唾液酸糖苷化合物。浒苔是重要的经济海藻，在降低胆固醇、降血糖、提高人体免疫力以及抗衰老等方面都有潜在的应用价值。目前，在唾液酸化浒苔寡糖与促进肠道益生菌的研究方面未见到相关专利和报道，本发明制备的唾液酸化浒苔寡糖对肠道益生菌增殖有明显促进作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法。工艺路线简单，是一种制备功能性寡糖的有效方法，极大提升了绿藻浒苔资源的经济附加值。经验证，该唾液酸化浒苔寡糖对肠道益生菌嗜酸乳杆菌和双歧杆菌增殖有明显增殖作用。本发明糖基化浒苔寡糖可应用于益生菌制剂药物或保健品的制备，所要解决的技术问题是提供一种效果好且利用度高的改善肠道菌群的寡糖。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
（1）将浒苔干燥后超微粉碎过80-100目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入60-80%乙醇回流提取1-2 h，干粉重量与乙醇体积比（g/mL）为1:20-30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；
（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比（g/mL）为1:20-25，60-70℃萃取温度下450-600 W微波辅助提取2-3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的3-8%，真空冷冻干燥后粉碎；
（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量与蒸馏水体积比为（g/mL）1:10-20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次；
（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比（g/mL）1:30-50去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中60-80 r/min振荡1-2h，6000-8000rpm离心20-30 min，收集上清液；
（5）将步骤（4）得到的上清液旋蒸浓缩至原体积的3-8%，按体积比1:3-4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4-10℃条件下静置24 h，6000-8000rpm离心20-30 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；
（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:5-10溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在37-40℃及转速为60-80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/10-1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；
（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量与体积比（mg/mL）1:0.5-1.0溶解于蒸馏水中，将商品化唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1:3-5，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸浓度比（mM）1:1.0-1.5，MgCl2终浓度为15-20 mM，pH6.5-8.0，置于35-40℃温度，80-100rmp摇床条件下反应24-36h。
（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，6000-8000rpm离心20-30 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品。
（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分。
（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。
所述的唾液酸化浒苔寡糖在制备改善肠道菌群的药品或保健品上的应用。
本发明的优点在于：本发明以制备的浒苔寡糖为原料，利用唾液酸转移酶生物反应制备出具有促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖，尚未见到唾液酸化浒苔寡糖促进肠道益生菌增殖的报道。本发明有效合理的综合利用浒苔资源，提高其商品价值与经济附加值，对提升海洋资源效益具有重要的现实意义。
附图说明
图1 唾液酸化寡糖对嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus增殖影响。
图2 唾液酸化寡糖对婴儿双歧杆菌Bifidobacterium infantis增殖影响。
具体实施方式
实施例1
（1）将浒苔干燥后超微粉碎过80目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入60%乙醇回流提取1h，干粉重量与乙醇体积比为1:20，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；
（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比为1:20，60℃萃取温度下450W微波辅助提取2 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的3%，真空冷冻干燥后粉碎；
（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量与蒸馏水体积比为1:10，进行搅拌复溶，用Sevag法除蛋白5次；
（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比1:30去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中60 r/min振荡1 h，6000rpm离心20 min，收集上清液；
（5）将步骤（4）得到的上清液旋蒸浓缩至原体积的3%，按体积比1:3加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4℃条件下静置24 h，6000rpm离心20min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；
（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:5溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在37℃及转速为60 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/10；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；
（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量与体积比1:0.5溶解于蒸馏水中，将唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1:3，，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸质量浓度比1:1.0，MgCl2终浓度为15mM，pH6.5-8.0，置于35℃温度，80rmp摇床条件下反应24h；
（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，6000rpm离心20 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品；
（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分；
（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。
实施例2
（1）将浒苔干燥后超微粉碎过100目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入80%乙醇回流提取2 h，干粉重量与乙醇体积比为1: 30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；
（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比为1: 25， 70℃萃取温度下600 W微波辅助提取3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的8%，真空冷冻干燥后粉碎；
（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量与蒸馏水体积比为1: 20，进行搅拌复溶，用三氟三氯乙烷法除蛋白7次；
（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比1:50去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中70 r/min振荡1.5h，7000rpm离心25 min，收集上清液；
（5）将步骤（4）得到的提上清液旋蒸浓缩至原体积的8%，按体积比1: 4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入10℃条件下静置24 h， 8000rpm离心30 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；
（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:10溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在40℃及转速为80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；
（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量与体积比1:1.0溶解于蒸馏水中，将唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1:4，，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸质量浓度比1: 1.5，MgCl2质量终浓度为20 mM，pH8.0，置于40℃温度， 100rmp摇床条件下反应36h；
（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，8000rpm离心30 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品；
（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分；
（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。
实施例3
（1）将浒苔干燥后超微粉碎过90目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入70%乙醇回流提取1.5h，干粉重量与乙醇体积比为1:25，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；
（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量与蒸馏水体积比为1:23，65℃萃取温度下500 W微波辅助提取3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的5%，真空冷冻干燥后粉碎；
（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量与蒸馏水体积比为1:15，进行搅拌复溶，用三氯乙酸法除蛋白8次；
（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量与洗脱液按重量体积比1:40去除色素， 将活性炭与洗脱液于摇床中80 r/min振荡2h，8000rpm离心30 min，收集上清液；
（5）将步骤（4）得到的上清液旋蒸浓缩至原体积的5%，按体积比1:3加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入6℃条件下静置24 h，7000rpm离心25 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；
（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:7溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在38℃及转速为70 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；
（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量与体积比1:0.7溶解于蒸馏水中，将唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1: 5，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸-â-N-乙酰神经氨酸质量浓度比1:1.2，MgCl2质量终浓度为17 mM，pH7.5，置于40℃温度，90rmp摇床条件下反应30h；
（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，7000rpm离心25 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品；
（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分；
（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。
实验例一：唾液酸化寡糖对益生菌嗜酸乳杆菌增殖试验
将嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus接种至商品化MRS培养基中（MRS培养基配方：蛋白胨10 g/L，牛肉膏10 g/L，酵母膏5 g/L，柠檬酸氢二铵2 g/L，葡萄糖20 g/L，吐温-80 1 mL/L，乙酸钠5 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.25 g/L，pH6.4±0.2），同时唾液酸化寡糖替换葡萄糖作为受试样品组，置于厌氧培养箱37℃培养84h，每隔12h测定培养液OD600值以监测乳酸杆菌增殖情况。由图1可见，唾液酸化寡糖能显著提高肠道益生菌乳酸杆菌数量。
实验例二：唾液酸化寡糖对益生菌双歧杆菌增殖试验
将婴儿双歧杆菌Bifidobacterium infantis接种至商品化BBL培养基中（BBL培养基配方：蛋白胨15g/L，酵母膏粉2g/L，葡萄糖20g/L，可溶性淀粉0.5g/L，氯化钠5g/L，半胱氨酸0.5g/L，吐温-80 1mL/L，肝粉0.3g/L，琼脂15g/L，pH 6.8±0.2），同时唾液酸化寡糖替换葡萄糖作为受试样品组，置于厌氧培养箱37℃培养84 h，每隔12 h测定培养液OD600值以监测双歧杆菌增殖情况。由图2可见，唾液酸化寡糖能显著提高肠道益生菌双歧杆菌数量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (1)

1.唾液酸化浒苔寡糖在制备改善肠道菌群的药品或保健品上的应用，所述唾液酸化浒苔寡糖的制备方法，包括如下步骤：
（1）将浒苔干燥后超微粉碎过80-100目筛得干粉末，向浒苔干粉末中加入体积浓度60-80%乙醇回流提取1-2 h，干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20-30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干，粉碎得到干燥脱脂的浒苔粉末；
（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量g与蒸馏水mL体积比为1:20-25，60-70℃萃取温度下450-600 W微波辅助提取2-3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2-3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，抽滤，滤液减压浓缩至原体积的3-8%，真空冷冻干燥后粉碎；
（3）向步骤（2）所得粉末中加入蒸馏水，其中粉末质量g与蒸馏水mL体积比为1:10-20，进行搅拌复溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5-8次；
（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD-826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液进一步经过非极性吸附剂活性炭，活性炭使用量g与洗脱液mL按重量体积比1:30-50去除色素，将活性炭与洗脱液于摇床中60-80 r/min振荡1-2h，6000-8000rpm离心20-30 min，收集上清液；
（5）将步骤（4）得到的提上清液旋蒸浓缩至原体积的3-8%，按体积比1:3-4加入质量浓度为95%的乙醇，搅拌后放入4-10℃条件下静置24 h，6000-8000rpm离心20-30 min，取上清液减压浓缩、冷冻干燥得浒苔寡糖的固体粉末；
（6）将步骤（5）中浒苔寡糖，按干粉重量mg与蒸馏水mL体积比为1:5-10溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液，在37-40℃及转速为60-80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/10-1/5；浓缩液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到未唾液酸化浒苔寡糖精制品；
（7）步骤（6）得到的浒苔寡糖精制品按质量mg与体积mL比1:0.5-1.0溶解于蒸馏水中，将唾液酸转移酶加入到反应体系中进行生物反应，唾液酸转移酶用量mg与反应体系按质量与体积mL比1:3-5，反应体系中浒苔寡糖与胞苷一磷酸--N-乙酰神经氨酸质量浓度比1:1.0-1.5，MgCl2质量终浓度为15-20 mM，pH6.5-8.0，置于35-40℃温度，80-100rmp摇床条件下反应24-36h；
（8）将步骤（7）反应体系按体积比1:1添加体积浓度95%乙醇，终止反应并沉淀蛋白，6000-8000rpm离心20-30 min去除沉淀，收集上清浓缩，真空冷冻干燥后得到唾液酸化浒苔功能性寡糖粗品；
（9）将步骤（8）所得粗品溶解后过Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝胶，蒸馏水洗脱，经3,5-二硝基水杨酸法测定收集寡糖组分；
（10）将步骤（9）中收集的浒苔寡糖组分溶液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到唾液酸化浒苔寡糖。
CN201610110628.6A 2016-02-29 2016-02-29 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法 Active CN105603023B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610110628.6A CN105603023B (zh) 2016-02-29 2016-02-29 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610110628.6A CN105603023B (zh) 2016-02-29 2016-02-29 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105603023A CN105603023A (zh) 2016-05-25
CN105603023B true CN105603023B (zh) 2019-09-20

Family

ID=55983364

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610110628.6A Active CN105603023B (zh) 2016-02-29 2016-02-29 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105603023B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108440681A (zh) * 2018-05-15 2018-08-24 中国海洋大学 一种绿藻硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL2007931C2 (en) * 2011-12-07 2013-06-10 Friesland Brands Bv Methods for providing sialylated oligosaccharides and products obtainable thereby.
CN103951761B (zh) * 2014-05-13 2016-04-13 浙江工商大学 酶法降解浒苔多糖的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105603023A (zh) 2016-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2019200499A1 (zh) 一种保持菌种活性的益生菌微胶囊及其制备方法
KR101346504B1 (ko) 에쿠올 함유 대두 배축 발효물 및 그의 제조 방법
CN102670917B (zh) 一种复合酵素及其制备方法
CN106244511A (zh) 一种益生菌的高密度培养方法及其应用
KR101370386B1 (ko) 유익균을 이용한 발효홍삼의 제조방법
CN107048360A (zh) 制备具有调理胃肠道润肠通便功能的植物酵素的发酵组合物及制法
CN104940644A (zh) 一种铁皮石斛的乳酸菌发酵方法及其发酵产物和应用
CN107080258A (zh) 制备具有调理人体经络补气补血功能的植物酵素的发酵组合物及制法
CN105695537B (zh) 一种降血糖及调节肠道菌群的糖基化浒苔寡糖制备方法
CN106806396A (zh) 含有增进了体内吸收率的活性人参皂苷的发酵人参或发酵黑红参提取物制造方法
CN113662996A (zh) 具有减肥作用的益生菌组合物及其制备方法
CN109232762A (zh) 一种坛紫菜多糖及其制备方法与益生活性应用
CN105999210A (zh) 一种灵芝活性乳酸菌制剂及制备方法
CN105603023B (zh) 一种促进肠道益生菌增殖的唾液酸化浒苔寡糖制备方法
CN105998222A (zh) 益生菌发酵生附子的组合物及其制备方法和应用
CN109527099A (zh) 一种枸杞复合益生菌羊奶片及其制备方法
CN105962375A (zh) 一种猴头菇活性乳酸菌制剂及其制备方法
CN108967536A (zh) 牛大力酸奶及其制备方法
KR20160126591A (ko) 인삼류 발효 추출물의 제조방법, 이의 방법으로 제조된 인삼류 발효 추출물 및 이를 포함하는 건강기능식품
CN106983146A (zh) 制备具有调理和增强人体排毒养颜功效的植物酵素的发酵组合物及制法
CN110251530A (zh) 一种落叶松阿拉伯半乳聚糖组合物的制备方法及其临床应用
CN114271505B (zh) 一种促进鼠李糖乳杆菌增殖的添加剂、制备方法及应用
KR102296397B1 (ko) 꽃송이버섯 발효 젤리의 제조방법 및 이로부터 제조되는 꽃송이버섯 발효 젤리
CN109007841A (zh) 一种发酵巴戟天益生菌粉及其制备方法
CN114916678A (zh) 一种具有益生元作用的复合植物多糖及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20200515

Address after: 712000 Ping'an Road, Qindu High-tech Industrial Development Zone, Xianyang City, Shaanxi Province

Patentee after: NIANQINGBAO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: Cangshan District of Fuzhou City, Fujian Province, on the 350002 Road No. 15

Patentee before: FUJIAN AGRICULTURE AND FORESTRY University

TR01 Transfer of patent right