CN105594698A

CN105594698A - 一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法

Info

Publication number: CN105594698A
Application number: CN201510951085.6A
Authority: CN
Inventors: 胡艳晖
Original assignee: Foshan Yanhui Biotechnology Co Ltd
Current assignee: GUANGXI YUNGENERATION BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2015-12-19
Filing date: 2015-12-19
Publication date: 2016-05-25
Anticipated expiration: 2035-12-19
Also published as: CN105594698B

Abstract

本发明涉及生物农药与微生物肥料技术领域，具体公开的是一种含有芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌的可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂的原料由下列重量组份组成：侧孢芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：硅藻土20-30份；润湿剂：十二烷基硫酸钠1-4份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，肌苷0.1-0.5份；紫外保护剂：海藻糖0.5-2份，抗坏血酸0.2-1份；干燥保护剂：脱脂奶粉1-4份，蔗糖0.2-1份。本发明制备的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂施入大田后芽孢萌发速度快，萌发率高，可明显提高其肥效与对植物病害的防治效果，减少芽孢的用量，降低了生产成本。

Description

一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法

技术领域

本发明涉及生物农药与微生物肥料技术领域，具体涉及一种含芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法。

背景技术

我国每年使用大量的化学农药制剂，极易造成农药残留超标，生物富集，不仅污染生态环境，还影响人类的健康。而生物农药副作用小，对人无害，是一种具有广阔前景的绿色农药，日益成为全球农药发展的一种趋势。

芽孢杆菌是目前生物农药与微生物肥料中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病菌生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前景。

侧孢芽孢杆菌可促进植物根部有益菌大量生长，抑制病原菌繁殖，促进植物根系生长，增强根系吸收能力，并能活化土壤养分，从而提高作物产量，改善品质，是一种极为有效的微生物农药与微生物肥料。侧孢芽孢杆菌次生代谢产物具有生物学功能多样性，种类丰富，能产生具有很高活性的酶类、激素、细菌素、多肽抗生素等，尤其能产生多种对特定病原菌具有活性的抗生素，其研究备受关注。

侧孢芽孢杆菌（Bacilluslaterosporus）产生的抗菌活性物质主要有细胞壁降解酶类(如几丁质酶和葡聚糖酶)、细菌素类、抗生素类(包括脂肽类抗生素和多肽类抗生素)等抗菌物质。黎定军等对侧孢芽孢杆菌2-Q-9研究时发现其分泌的抑菌物质对青枯病菌有强烈的抑制作用，并进一步对该抑菌物质的性质进行了研究。Shoji等从侧孢芽孢杆菌340-19的发酵液中分离得到一种新型的抗菌素，被称为芽孢菌胺，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有不同的抑制作用。李伟杰等进行了侧孢芽孢杆菌X10固体菌剂的田间应用效果试验，结果表明，固体菌剂对番茄青枯病有很好的防治效果，同时还能够促进番茄植株生长和产量增加。此外，杜春梅等开展了对侧孢芽孢杆菌BL-21的研究，发现该菌发酵液对黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxys-porum)、甜瓜枯萎病菌(F．oxysporum)、水稻恶苗病菌(F．moniliforme)、小麦赤霉病菌(F．gra-minearum)等多种植物病原真菌具有抗菌活性。通过Sephadex层析和CM--SepharoseFastFlow离子交换层析从发酵液中分离得到4种抗菌物质，初步推测可能为蛋白类或抗菌肽，或者是含有肽键结构的抗菌物质。张楹分离的一种侧孢芽孢杆菌YMF3·00003产生的胞外酶对两种危害严重的土传病原真菌—尖孢镰刀菌(Fusari-umoxysporum)和立枯丝核菌(Ｒhizoctoniasolani)菌丝的生长具有强烈的抑制作用。Barsby等在巴布亚新几内亚分离到一株侧孢芽孢杆菌，其产生的一种十肽抗生素能明显抑制白色念珠菌的生长。赵秋敏等分离到一株产几丁质酶的侧孢芽孢杆菌，对小麦赤霉病菌(Fusariumgra-minearum)、棉花立枯病菌(Ｒhizoctoniasolani)、苹果轮纹病菌(Botryospuaeriaberengeriana)等8株病原真菌有明显的抑制效果。赵秋敏等分离到一株产几丁质酶的侧孢芽孢杆菌，对淡色库蚊二龄幼虫有明显的致死作用，且与Bt杀虫剂混合使用时对Bt杀虫剂有明显的增效作用。Orlova等报道一株侧孢芽孢杆菌形成的一种胞内晶体对幼蚊有毒杀作用。麻林涛等在专利号2011102604337中公开了一种侧孢芽孢杆菌，保藏号为CGMCCNo.5090及利用该细菌制备的微生物菌种剂、微生物肥料以及它们的制备方法。张新雄等在专利号2013102411333中公开了一种高密度固体发酵生产侧孢芽孢杆菌活菌的方法，发酵有效活菌数可达到500亿/克，产品杂菌率低于5%，芽孢率高达90%以上，能大大降低企业的生产成本。

侧孢芽孢杆菌还能提高作物抗逆性，达到增产增收的效果。张新雄等，研发了侧孢芽孢杆菌土壤接种剂，大田试验结果显示其主要功能为：(1)改良土壤，使土壤肥力、微生物活性及种群结构得到明显改善；(2)促进农作物生长，使农作物根系发达，植株增高，茎秆增粗，叶片增多增厚，叶色浓绿，生长稳健；(3)增强农作物抗病能力，农作物施用土壤接种剂后，均表现出抗病能力增强，被喻为“植物癌症”的烟草花叶病、棉花枯萎病、棉花黄萎病，在施用接种剂后，发病率明显降低，大田病毒接种试验表明，烟草花叶病发病率降低60%～70%；(4)增强农作物抗寒能力和抗旱抗涝能力；(5)有效改善农产品品质；(6)提高农作物产量，土壤接种剂在不同地域、不同作物上应用，作物产量明显提高：蔬菜增产12%～30%，水果增产20%左右，水稻增产10%～15%，烟草增产7.5%～19.8%，鲜茶叶产量增加26.8%，蚕桑产量增加20.8%。

植物病害生防侧孢芽孢杆菌的研究开发应用目前已取得了不少成就，但其发展过程中仍存在不少问题。首先，侧孢芽孢杆菌的产业化应用尚不成熟，在农业方面一些相应的生物农药没有得到大范围的应用，这主要是由科技的不均衡性和理论转化为实际的考察期较长造成。其次，侧孢芽孢杆菌自身也有需要克服的问题，我们生产的侧孢芽孢杆菌主要以芽孢数量的多少来衡量，但经过我们试验发现有芽孢杆菌产品超过50%的芽孢施入地中由于没有及时萌发而失去其效果。如王倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎病时，前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶腋接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制备可湿性粉剂的灌根与叶腋效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌发困难而使防效下降。

芽孢杆菌在自然界中分布广泛，当外部条件适合生长时，芽孢会由休眠状态经过一系列复杂生理生化反应成长为营养体并恢复新陈代谢作用，这个过程称为萌发(germination)。自然界中芽孢萌发受外源营养物质的影响，这类营养物质被称之为“萌发剂”，通常营养诱导芽孢萌发包括氨基酸、糖类和嘌吟核苷的单一作用，也包括它们的协同作用(例如：AGFK；A：L一天冬酞胺；G：葡萄糖；F：果糖；K：钾离子)。当营养物质接触到芽孢时，芽孢内部会发生一系列变化，（1）、芽孢核内部H^十和Zn²⁺释放出来，致使芽孢核内部pH由弱酸性上升至弱碱性；(2)、芽孢核内部Ca²⁺--DPA的大量释放；(3)、芽孢核水合，内部Ca²⁺--DPA被水所替代，芽孢的耐热性下降；(4)、芽孢皮层的芽孢肤聚糖层水解，芽孢核膨胀；(5)、芽孢核进一步水合，芽孢核内部蛋白质流动性增强，酶活性加强，合成ATP；(6)、降解SASP蛋白，以释放芽孢DNA，进而引导芽孢生长过程中RNA、蛋白质、DNA的合成。

芽孢和促进萌发的芽孢萌发剂在液体中混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽孢衣和皮层到达芽孢内膜的表面，与位于芽孢内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽孢进入萌发状态，接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。

在现阶段，还没有公开报道有关侧孢芽孢杆菌的芽孢萌发剂的文献，也未有在侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂中加入芽孢萌发剂的研究的报道。

另外，由于不同的芽孢杆菌与湿润剂，分散剂等助剂的相容性，载体对各类芽孢杆菌吸附性各不相同，将现有的芽孢杆菌可湿性粉剂的配方或制备工艺无法用于制备含有芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂；可湿性粉剂中有效菌的吸附量，存活率，对有害菌的防治效果及可湿性粉剂量的稳定性差异较大，其整个可湿性粉剂的制备方法必须全盘考虑各载体吸附能力，对侧孢芽孢杆菌的干燥过程中保护作用，湿润剂，分散剂对可湿性粉剂的悬浮率，湿润时间的影响，并且对芽孢萌发剂进行全面的筛选才能够得到湿润时间短，悬浮率高，芽孢保存时间久，使用后芽孢能快速萌发的，防效好的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂。

发明内容

针对上述现有技术的不足，提供一种含有芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法，芽孢萌发剂能使侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂融入水后，侧孢芽孢能快速萌发，并大大提高侧孢芽孢的萌发率，其制备的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量为不低于100亿CFU/克，悬浮率不低于85%，润湿时间不高于85S，细度粉碎过400目筛，水分含量不高于5%，制备方法稳定。

为了达到上述目的，一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂下列重量分组成：侧孢芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：硅藻土20-30份；润湿剂：十二烷基硫酸钠1-4份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，肌苷0.1-0.5份；紫外保护剂：海藻糖0.5-2份，抗坏血酸0.2-1份；干燥保护剂：脱脂奶粉1-4份，蔗糖0.2-1份。

一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，由以下几步骤组成：

一、侧孢芽孢杆菌发酵液的制备

取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至茄子瓶中LB固体培养基上，涂满整个茄子瓶，在培养箱中37℃培养24小时，将1L无菌水将茄子瓶中的菌苔洗下，将洗下的侧孢芽孢杆菌接种于装有130L侧孢芽孢杆菌液体培养基的200L种子发酵罐，初始pH值为7.5，温度为37℃，通风1:0.8，开搅拌，转速为200r/min；从菌种接种后18h时，菌体生长处于指数生长中期，转入2000L的发酵罐的发酵培养基中，以70%的罐装量，pH值为7.5，温度为37℃，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.8，其后通气量为1：1；开搅拌，转速为160r/min；培养温度前24小时为37℃，其后，每2小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过85亿CFU/ml，即可结束发酵，作为侧孢芽孢杆菌发酵液；

其中，所述LB培养基：蛋白胨10g，酵母膏5g，氯化钠10g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；

其中，所述侧孢芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米粉18g/L，酵母膏15g/L，鱼粉5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.2g/L，磷酸二氢钾2g/L，磷酸氢二钾1g/L，碳酸钙2g/L，pH7.2；

其中，所述的发酵培养基：葡萄糖5g/L，玉米粉25g/L，豆粕粉30g/L，酵母膏10g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，碳酸钙5g/L，pH7.2；

各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

二、将侧孢芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：硅藻土20-30份；紫外保护剂：海藻糖0.5-2份，抗坏血酸0.2-1份；干燥保护剂：脱脂奶粉1-4份，蔗糖0.2-1；混匀后喷雾干燥，得到侧孢芽孢杆菌粉剂；

三、将润湿剂：十二烷基硫酸钠1-4份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，肌苷0.1-0.5份；混匀得到侧孢芽孢杆菌的助剂；

四、将步骤二与步骤三所得到的侧孢芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉碎过400目筛，检测其芽孢含量不低于100亿cfu/g，悬浮率不低于85%，润湿时间不高于85s，水分含量低于5%，真空包装，即为侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂。

其中，所述侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂最佳的重量份组成为：侧孢芽孢杆菌发酵液60份；填料：硅藻土25份；润湿剂：十二烷基硫酸钠2份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.6份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.3份，肌苷0.3份；紫外保护剂：海藻糖1.5份，抗坏血酸0.8份；干燥保护剂：脱脂奶粉3份，蔗糖0.8。

自然界中芽孢萌发受外源营养物质的影响，这类营养物质被称之为“萌发剂”，通常情况下，芽孢和促进萌发的芽孢萌发剂混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽孢衣和皮层到达芽孢内膜的表面，与位于芽孢内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽孢进入萌发状态，接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。本发明可湿性粉剂中含有芽孢萌发剂：L-丙氨酸，肌苷，是从苷氨酸，L-丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，蛋氨酸，胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，赖氨酸，精氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，组氨酸，脯氨酸，肌苷，2，6吡啶二羧钙，果糖中进行单因素试验，及两两组合性试验得到的具有明显诱导侧孢芽孢萌发的萌发剂。经过试验，本发明的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂与水进行润湿混合均匀，芽孢萌发剂与芽孢充分接触后，从而促使其快速萌发，经过试验，30分钟后，芽孢萌发率已经达到75%以上，而未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢在4小时后，其芽孢萌发率只达到了50%左右。

本发明人通过对载体（如膨润土，滑石粉，高岭土，硅藻土，白炭黑，磷矿粉，轻质碳酸钙）、助剂（润湿剂和分散剂）（聚乙烯醇，聚乙二醇，CMC-Na，吐温-60，十二烷基苯磺酸钠，T型木质素，十二烷基硫酸钠，茶皂素，MorwetEFW，MorwetD425，My100，D110，阿拉伯权胶，2-萘磺酸甲醛聚合物钠盐，辛基酚聚氧乙烯醚，二异辛基琥珀酸酯磺酸钠，甲基纤维素，木质素磺酸钠）填料（硅藻土，高岭土，膨润土，白炭黑，轻质碳酸钙，滑石粉）、紫外线保护剂（抗坏血酸，糊精，十二烷基苯磺酸钠，刚果红，羧甲基纤维素，卵磷脂），干燥保护剂（脱脂奶粉，蔗糖，谷氨酸钠，麦芽糖，甘露糖，甲基纤维素等）进行筛选，其每种助剂对侧孢芽孢杆菌的芽孢存活，悬浮性，湿润性进行试验，最后通过多轮单因素与正交试验确定侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的配方。通过验证，本发明的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂在20-25℃下保存一年，其芽孢存活率还可达到85亿CFU/克。

本发明的可湿性粉剂采有真空包装，减少芽孢与空气的接触，降低了其萌发的机率。

本发明的可湿性粉剂的水分含量低于5%，低水分含量的可湿性粉剂中即使含有芽孢萌发剂（肌苷与L-丙氨酸），对其贮存过程中的芽孢活性也没有明显的影响，没有减少其在贮存过程中的芽孢。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

这是国内首次有针对性的将侧孢芽孢杆菌的芽孢萌发剂加入侧孢芽孢杆菌可湿剂进行工业化生产，大大提升了芽孢萌发速率与萌发率，解决了因为芽孢萌发慢，萌发率低而导致的防治效果差，效果不稳定的问题，减少了芽孢用量，降低生产成本。

具体实施方式

本发明实质性特点可从下述实施例中得以体现，但这些实施例仅作为说明，而不是对本发明进行限制。

实施例1

一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量分组成：侧孢芽孢杆菌发酵液60份；填料：硅藻土25份；润湿剂：十二烷基硫酸钠2份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.6份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.3份，肌苷0.3份；紫外保护剂：海藻糖1.5份，抗坏血酸0.8份；干燥保护剂：脱脂奶粉3份，蔗糖0.8。

该侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，由以下几步骤组成：

一、侧孢芽孢杆菌发酵液的制备

取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至茄子瓶中LB固体培养基上，涂满整个茄子瓶，在培养箱中37℃培养24小时，将1L无菌水将茄子瓶中的菌苔洗下，将洗下的侧孢芽孢杆菌接种于装有130L侧孢芽孢杆菌液体培养基的200L种子发酵罐，初始pH值为7.5，温度为37℃，通风1:0.8，开搅拌，转速为200r/min；从菌种接种后18h时，菌体生长处于指数生长中期，转入2000L的发酵罐的发酵培养基中，以70%的罐装量，pH值为7.5，温度为37℃，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.8，其后通气量为1：1；开搅拌，转速为160r/min；培养温度前24小时为37℃，其后，每2小时将温度提高1℃，培养34小时，检测其芽孢含量为90亿CFU/ml，即结束发酵，作为侧孢芽孢杆菌发酵液；

各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

二、将侧孢芽孢杆菌发酵液60份；填料：硅藻土25份；紫外保护剂：海藻糖1.5份，抗坏血酸0.8份；干燥保护剂：脱脂奶粉3份，蔗糖0.8；混匀后喷雾干燥，得到侧孢芽孢杆菌粉剂；

三、将润湿剂：十二烷基硫酸钠2份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.6份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.3份，肌苷0.3份；混匀得到侧孢芽孢杆菌的助剂；

四、将步骤二与步骤三所得到的侧孢芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉碎过400目筛，检测其芽孢含量为102亿cfu/g，悬浮率为88%，润湿时间为79s，水分含量为4.5%，真空包装，即为侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂。

实施例2

利用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂在烤烟中作为微生物肥料与农药的效果

1．试验地点：湖南省隆回县滩头镇狮子村某农户种植地

2．试验方法：烤烟品种：中烟99-10-1，共设3个处理，4次重复。试验面积24亩，外设保护行。

试验组：加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂+80%常规烤烟专用基肥(N-P2O5-K2O=10-10-25)即32公斤烤烟专用肥；侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的亩用量为0.4公斤：烤烟移栽苗时，用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂800倍液灌根与沾根各一次；缓苗后20天用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂1000倍液灌第二次，然后连续每隔20天喷施第三次和第四次(每次亩用量为100克侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂)。

对照组1：未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂+80%常规烤烟专用基肥(N-P2O5-K2O=10-10-25)即32公斤烤烟专用肥；未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的亩用量为0.4公斤：烤烟移栽苗时，用未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂800倍液灌根与沾根各一次；缓苗后20天用未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂1000倍液灌第二次，然后连续每隔20天喷施第三次和第四次（所有操作同试验组）。

对照组2(CK)：常规烤烟专用基肥，烤烟专用基肥的用量为40公斤/亩，施肥方法为底施，与试验组同时用清水灌根，沾根与叶喷。

3．试验结果：

由于狮子村的土地已经连续两年都种植烤烟，尽管每年也种一季晚稻，但其花叶病发病率较高且，试验组施用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂后，株高、茎围、节距、有效叶数、最大叶面积均大于对照组，如表1说明减少20%的复合肥的情况，试验组侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂可以有效改善烟株的农艺性状，促进烟株健壮生长，利用同样的未加芽孢萌发剂侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的效果则较空白对照组效果有一定的改善，但明显与试验组侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的效果有明显差距。如表2所示施用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的花叶病发病率很低，且发病程度显著降低，而对照组1与对照组2则有明显的花叶病，青枯病与黑胫病，使用链霉素与50%敌克松可湿性粉剂后也明显存在病害。

表1侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂对烟草株高、茎围、节距、有效叶数、最大叶面积的影响

表2施用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂对大田烟草对黑胫病与花叶病的防治效果

施用侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂后烟草提早成熟、提高品质，很大程度上提高烟叶的产量、均价、产值、上中等烟比例。从表3可以分析得出，试验组烟叶产量、产值、均价分别比对照组2（清水空白组）高出72.2公斤/亩、1365.8元/亩、1.36元/公斤。减去增加的成本440元（其中人工400元），可净增925.8元/亩。而相对于对照组1即施用未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的，则亩增产1264.7元。而施用未加芽孢萌发剂的侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的对照组1与清水空白对照组2的效果相差不大，没有体现出明显的增产优势。

表3侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂对烟草产量产值增收效果

处理	产量（公斤/亩）	产值（元/亩）	均价（元/公斤）
				对照组2（CK）	197.3	2730.6	13.84
对照组1	201.4	2831.7	14.06
				试验组	269.5	4096.4	15.2

Claims

1.一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量份组成：侧孢芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：硅藻土20-30份；润湿剂：十二烷基硫酸钠1-4份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，肌苷0.1-0.5份；紫外保护剂：海藻糖0.5-2份，抗坏血酸0.2-1份；干燥保护剂：脱脂奶粉1-4份，蔗糖0.2-1份。

2.根据权利要求1所述的一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，由以下几步骤组成：

一、侧孢芽孢杆菌发酵液的制备

取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至茄子瓶中LB固体培养基上，涂满整个茄子瓶，在培养箱中37℃培养24小时，将1L无菌水将茄子瓶中的菌苔洗下，将洗下的侧孢芽孢杆菌接种于装有130L侧孢芽孢杆菌液体培养基的200L种子发酵罐，初始pH值为7.5，温度为37℃，通风1:0.8，开搅拌，转速为200r/min；从菌种接种后18h时，菌体生长处于指数生长中期，转入2000L的发酵罐的发酵培养基中，以70%的罐装量，pH值为7.5，温度为37℃，开搅拌，转速为160r/min，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.8，其后通气量为1：1；培养温度前24小时为37℃，其后，每2小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过85亿CFU/ml，即可结束发酵，作为侧孢芽孢杆菌发酵液；

各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；

3.根据权利要求1所述的一种侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述侧孢芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量份组成：侧孢芽孢杆菌发酵液60份；填料：硅藻土25份；润湿剂：十二烷基硫酸钠2份；分散剂：羧甲基纤维素钠0.6份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.3份，肌苷0.3份；紫外保护剂：海藻糖1.5份，抗坏血酸0.8份；干燥保护剂：脱脂奶粉3份，蔗糖0.8。