CN111733109A - 具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备及应用，方法包含如下步骤：S1：侧孢芽孢杆菌菌株活化：取革兰氏阳性菌为本次侧孢芽孢杆菌的菌种，将侧孢芽孢杆菌在无菌条件下接种于斜面培养基上进行活化培养，得到活化菌株，使用无菌水清洗斜面，得到种子液；本发明的一种具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂，是由侧孢芽孢杆菌培养发酵制得，该菌为革兰氏阳性菌，其芽孢为椭圆形，侧生、中生或近中生，孢囊膨大，游离芽孢一边比另一边厚，呈现独木舟形，通过该菌发酵制得菌剂，对农作物具有明显的促生作用，且是一种绿色、无害、无污染的生物菌剂。其促生效果可使得农作物产量增产≥29％。
Description
技术领域
本发明涉及生物防治技术领域，具体为具有促生功能的侧孢芽孢 杆菌菌剂制备及应用。
背景技术
近几年来，由于土壤流失、土地沙漠化和轮作时间长，以及 绿色可持续发展的理念持续升温，退耕还林的要求日益扩大，可用 农耕用地面积下降，土壤耕作层被侵蚀、破坏，使土地肥力日趋衰 竭，使原非沙质荒漠的地区，出现了以风沙活动、沙丘起伏为主要标志的类似沙漠景观的环境退化过程，导致农作物产量有所下降， 以及作物品质下降。
针对这一现状，目前大多数，农业生产者，采用化学激素刺 激农作物生长，化学激素的使用，能够加速农作物的生长，但其化 学成分不仅会破坏农作物中的营养成分，造成作物污染，污染土壤， 食用后更甚者能够导致人体出现隐形问题。
基于此，本发明设计具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备及应 用，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备 及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，所述方法包含如下 步骤：
S1：取革兰氏阳性菌为本次侧孢芽孢杆菌的菌种，侧孢芽孢杆 菌菌株活化：将侧孢芽孢杆菌在无菌条件下接种于斜面培养基上进行 活化培养，得到活化菌株，使用无菌水清洗斜面，得到所述种子液；
S2：种子液扩增培养：将步骤S1制得的种子液接种于所述扩 增培养液中，在30℃-35℃下通风振荡培养24-32小时，从而得到扩 增培养液；
S3：发酵培养：将步骤S2获得的扩增培养液按20％-25％的体积 百分比接种于发酵罐中，进行发酵，发酵培养总时间为96小时，期 间一直通入空气，通入空气的通风比为2：1，当发酵至其中侧孢芽 孢杆菌的活孢子数≥20亿/ml时，停止发酵。
优选地，所述步骤S1中，斜面培养基的组成为：蛋白胨1.5％， 酵母浸膏1.0％、黄豆粉1.0％、牛肉膏2％、氯化钠1.0％、葡萄糖1.5％， 余量为水，pH值为7.1。
优选地，所述步骤S2中，扩增培养液的成分质量百分比为：蔗 糖1.5％、琼脂1.0％、蛋白胨3％、酵母浸膏1.5％、硫酸铵1.0％、磷 酸钠1.5％、牛肉膏1.5％和硝酸钠2％。
优选地，所述步骤S3中，液体发酵培养基的成分质量百分比为： 酵母浸膏1。0％、蛋白胨2.0％、麦芽糖2.5％、葡萄糖1.5％、硫酸锰 0.5％、氯化钠1.5％、黄豆粉3.5％、硼酸1.0％、硝酸钾1.0％，余量 为水。
优选地，所述步骤S2中振荡培养的频率为2/T每秒-4/T每秒。
优选地，所述步骤S3中发酵罐中空余空间与发酵液比例为1:3.5。
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在黄瓜增产试验中的应用，其 特征在于，所述黄瓜品种为华北水黄瓜。
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在白菜增产试验中的应用，其 特征在于，所述白菜品种为山东胶州大白菜。
说明书附图说明
图1为本发明具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法的流 程图。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
由于本发明菌剂是由侧孢芽孢杆菌培养发酵制得，该菌为革兰氏 阳性菌，其芽孢为椭圆形，侧生、中生或近中生，孢囊膨大，游离芽 孢一边比另一边厚，呈现独木舟形，其具有以下作用：1、促进植物 根系生长，增强根系吸收能力，从而提高作物产量；2、抑制植物体内外病原菌繁殖，减轻病虫害，降低农药残留；3、改良疏松土壤， 解决土壤板结现象，从而活化土壤，提高肥料利用率；4、增强植物 新陈代谢，促进光合作用和强化叶片保护膜，抵抗病原菌；5、增强 光合作用，提高化肥利用率，降低硝酸盐含量；6、固化若干重金属， 降低植物体内重金属含量，其促生效果可使得农作物产量增产≥29％， 本发明菌剂更加注重其促生功能，以此来解决耕地减少，带来的农作 物的产量不足，并提高作物品质。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方 案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部 分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普 通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例， 都属于本发明保护的范围。
实施例1
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所 述方法包含如下步骤：
S1：侧孢芽孢杆菌菌株活化：取革兰氏阳性菌为本次侧孢芽孢 杆菌的菌种，将侧孢芽孢杆菌在无菌条件下接种于斜面培养基上进行 活化培养，得到活化菌株，使用无菌水清洗斜面，得到所述种子液， 斜面培养基的组成为：蛋白胨1.5％，酵母浸膏1.0％、黄豆粉1.0％、 牛肉膏2％、氯化钠1.0％、葡萄糖1.5％，余量为水，pH值为7.1；
S2：种子液扩增培养：将步骤S1制得的种子液接种于所述扩 增培养液中，在30℃-35℃下通风振荡培养24-32小时，振荡培养的 频率为2/T每秒-4/T每秒，从而得到扩增培养液，扩增培养液的成分 质量百分比为：蔗糖1.5％、琼脂1.0％、蛋白胨3％、酵母浸膏1.5％、硫酸铵1.0％、磷酸钠1.5％、牛肉膏1.5％和硝酸钠2％；
S3：发酵培养：将步骤S2获得的扩增培养液按20％-25％的体积 百分比接种于发酵罐中，发酵罐中空余空间与发酵液比例为1:3.5， 进行发酵，发酵培养总时间为96小时，期间一直通入空气，通入空 气的通风比为2：1，当发酵至其中侧孢芽孢杆菌的活孢子数≥20亿 /ml时，停止发酵，液体发酵培养基的成分质量百分比为：酵母浸膏 1。0％、蛋白胨2.0％、麦芽糖2.5％、葡萄糖1.5％、硫酸锰0.5％、 氯化钠1.5％、黄豆粉3.5％、硼酸1.0％、硝酸钾1.0％，余量为水。
实施例2
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在黄瓜增产试验中的应用
1、试验名称：黄瓜增产试验
2、试验准备：设置10个小组，3个小组为一个处理组，第10 小组采用清水处理为对照组，每个小组面积相同15㎡，采用相同的 土壤，移栽50株黄瓜秧苗。
3、试验处理：第一个处理组使用本发明菌剂的100倍稀释液， 进行喷洒；第二个处理组使用市售化学的促生制剂；第三个处理组使 用不同的市售的化学的促生制剂作为对照。各组除了喷施的使用试剂 不同，期间采用田间管理、农艺都相同。
试验结果见表一：
表一 一种具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂对黄瓜促生的 试验结果
从表一可以看出，本发明菌剂对黄瓜具有显著的促生作用，其促 生效果可使黄瓜产量增产≥29％。
实施例3
具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在白菜增产试验中的应用
1、试验名称：白菜增产试验
2、试验准备：设置3个试验组，每亩种植5000棵，且所种植白菜品 种相同，土壤品质相同；
3、试验处理：第一个实验组使用本发明菌剂的100倍稀释液，进行 喷洒；第二个处理组使用市售化学的促生制剂；第三个试验组为对照 组。各组除了喷施的使用试剂不同，期间采用田间管理、农艺都相同。
试验结果见下表：
表二 对白菜的株高、冠幅的调查
表三 对白菜的单株重量及亩产量的调查
表四 与普通黄瓜增产肥料的数据对比
表五 与普通白菜增产肥料的数据对比
通过表二、表三的试验结果表明，本发明的菌剂对于白菜具有明 显的促生作用，通过表二的株高和冠幅的增长幅度，可以看出本发明 菌剂也能够可以以及单株重量和亩产量的明显提高，可以看出本发明 对白菜作物的促生作用，通过表四和表五可知，本案中，使用的添加 剂对产量的影响要远比普通肥料的产量影响效果要高。
分类命名：“侧孢芽孢杆菌”“Bacillus laterosporus”；该菌剂保藏 于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”；保藏号： CGMCC No.19891；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号； 保藏日期：2020年5月29日。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体 示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材 料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中， 对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且， 描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施 例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实 施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实 施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说 明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和 实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。 本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (8)
1.具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：
S1：侧孢芽孢杆菌菌株活化：取革兰氏阳性菌为本次侧孢芽孢杆菌的菌种，将侧孢芽孢杆菌在无菌条件下接种于斜面培养基上进行活化培养，得到活化菌株，使用无菌水清洗斜面，得到所述种子液；
S2：种子液扩增培养：将步骤S1制得的种子液接种于所述扩增培养液中，在30℃-35℃下通风振荡培养24-32小时，从而得到扩增培养液；
S3：发酵培养：将步骤S2获得的扩增培养液按20％-25％的体积百分比接种于发酵罐中，进行发酵，发酵培养总时间为96小时，期间一直通入空气，通入空气的通风比为2：1，当发酵至其中侧孢芽孢杆菌的活孢子数≥20亿/ml时，停止发酵。
2.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，斜面培养基的组成为：蛋白胨1.5％，酵母浸膏1.0％、黄豆粉1.0％、牛肉膏2％、氯化钠1.0％、葡萄糖1.5％，余量为水，pH值为7.1。
3.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，扩增培养液的成分质量百分比为：蔗糖1.5％、琼脂1.0％、蛋白胨3％、酵母浸膏1.5％、硫酸铵1.0％、磷酸钠1.5％、牛肉膏1.5％和硝酸钠2％。
4.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，液体发酵培养基的成分质量百分比为：酵母浸膏1。0％、蛋白胨2.0％、麦芽糖2.5％、葡萄糖1.5％、硫酸锰0.5％、氯化钠1.5％、黄豆粉3.5％、硼酸1.0％、硝酸钾1.0％，余量为水。
5.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤S2中振荡培养的频率为2/T每秒-4/T每秒。
6.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂制备方法，其特征在于，所述步骤S3中发酵罐中空余空间与发酵液比例为1:3.5。
7.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在黄瓜增产试验中的应用，其特征在于，所述黄瓜品种为华北水黄瓜。
8.根据权利要求1所述的具有促生功能的侧孢芽孢杆菌菌剂在白菜增产试验中的应用，其特征在于，所述白菜品种为山东胶州大白菜。
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