CN110551656A - 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用 - Google Patents

一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110551656A
CN110551656A CN201910854981.9A CN201910854981A CN110551656A CN 110551656 A CN110551656 A CN 110551656A CN 201910854981 A CN201910854981 A CN 201910854981A CN 110551656 A CN110551656 A CN 110551656A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus
strain
culture medium
soil
saline
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910854981.9A
Other languages
English (en)
Inventor
杨国平
张琇
王华笑
刘环
王静
李敏
杨晨希
刘雅琴
李壮
胡子轩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
North Minzu University
Original Assignee
North Minzu University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by North Minzu University filed Critical North Minzu University
Priority to CN201910854981.9A priority Critical patent/CN110551656A/zh
Publication of CN110551656A publication Critical patent/CN110551656A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/11—Bacillus megaterium

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明属于微生物菌剂技术领域，公开了一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用，保藏号为CCTCC M 2018430；菌种活化：将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上进行活化培养，得到芽孢杆菌的活化种子；菌种种子液制备：将活化后得芽孢杆菌，接入NA液体培养基进行复壮培养。本发明的芽孢杆菌，具有可刺激作物生长、调节土壤酸碱度、促进土壤形成团粒结构、抑制土壤病原菌的生长和改善土壤微生态环境；通过施加Bacillus megaterium strain YM11，可改善玉米根际生态微环境，改善根际营养元素组成，改变玉米根际微生态环境，增加土壤微生物多样性；改善土壤理化性质，增加盐碱地玉米产量。

Description

一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物菌剂技术领域，尤其涉及一种芽孢杆菌菌株及其制备方 法和应用。
背景技术
目前，最接近的现有技术：盐碱土是盐土和碱土以及各种盐化、碱化土壤 的统称，据教科文及国际粮农组织的不完全统计，全世界的盐碱地面积约占近 7.6％的陆地面积，每年给世界的粮食生产造成严重的损失，并严重影响到地区 的生态平衡，在我国，次生盐渍化农田占耕地总面积的10％，由于耕作与管理 不当我国次级盐碱化程度不断加深。我国盐碱化土壤主要分布在华北、东北、 西北等农业大区以及长江以北沿海地区。盐碱地面积大，程度高已成为限制我 国农业发展的主要因素，据专家预测，到2020年，我国的粮食作物増长水平比 现有必须水平提高1.5倍上才能适应社会需求，而我国目前耕地的面积和质量面 对挑战压力巨大，土壤盐碱化是当前农业生产的重要胁迫因素之一，盐碱土改 良利用长期以来是一个长期的、复杂的系统工程，是现代农林业所关注的重大 问题，也是全球退化土地治理领域的热点问题之一。
盐碱土作为中国重要的土地资源和农业资源，其开垦利用是增加土地资源 的储备，保障粮食安全的有效措施，目前盐碱地改良措施多集中于传统技术如： 使用酸碱中和原理来改善盐碱土理化性质，但容易造成土壤结构改变，引入过 多离子；利用淋洗等物理改良方法易将土壤原有营养成分淋洗随水流排除。
综上所述，现有技术存在的问题是：目前盐碱地改良措施容易造成土壤结 构改变，引入过多离子；容易将土壤原有营养成分淋洗随水流排除。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种芽孢杆菌菌株及其制备方法 和应用。
本发明是这样实现的，一种芽孢杆菌菌株，所述芽孢杆菌菌株保藏号为 CCTCC M2018430。
本发明的另一目的在于提供一种所述芽孢杆菌菌株的制备方法，所述芽孢 杆菌菌株的制备方法包括以下步骤：
第一步，将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上培养，得到芽孢杆菌 的活化种子；
第二步，将芽孢杆菌活化，取活化后的芽孢杆菌单菌落划线于培养基上， 之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌株转入培养 基中培养，即得到菌种种子液；
第三步，将培养好的芽孢杆菌种子液接入发酵培养基中，制得芽孢杆菌的 菌悬液，将菌悬液离心后收集上清液，再将上清液过滤并除菌即得到芽孢杆菌 高密度发酵液；
第四步，将芽孢杆菌培养在NA固体培养基或NA液体培养基上，能保持高 稳定性状，菌种经NA固体培养基或NA液体培养基传代8代以上稳定性状， NA固体培养基或NA液体培养基原料由牛肉浸膏、酵母粉、轻质碳酸钙、蛋白 胨、葡萄糖、琼脂、氯化钠和蒸馏水组成；NA固体培养基或NA液体培养基的 pH值7.2±0.1，并在0.1MPa气压下灭菌30min后接种该菌种，并在33℃±1℃温 度下培养22-26h。
进一步，所述第三步，将培养好的芽孢杆菌种子液以3％-8％的接种量接入 发酵培养基中，培养条件为通气量0.7-2.3vvm，转速300-500rpm，温度30-36℃， 培养时间48-60h。
进一步，所述第四步每1000mL蒸馏水对应5g牛肉浸膏、5g酵母粉、3g 轻质碳酸钙、10g蛋白胨、12g葡萄糖、15g琼脂和4g氯化钠。
本发明的另一目的在于提供一种所述芽孢杆菌菌株在提高玉米抗盐碱能力 中的作用。
进一步，所述盐碱地为中度盐碱地中度盐碱地(盐分0.3％-0.6％，pH8.5-9.5)。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明的Bacillus megaterium strainYM11是一种根际促生菌，可提高作物抗逆性，提高作物产量，另外，可产生有 机酸、生长素和抗生素等物质、可刺激作物生长、调节土壤酸碱度、促进土壤 形成团粒结构、抑制土壤病原菌的生长和改善土壤微生态环境，YM11菌株本身 最大耐盐性为11％，pH最大耐受性为11.3，从而可以更加稳定的生存于盐碱环 境中，并且通过实验验证表明，YM11菌株可稳定的定殖于作物根际从而发挥作 用。
本发明采用微生物与玉米互作，在不改变原有土壤理化性质的前提下通过 微生物作用提高玉米耐盐碱能力，提高作物产量，增加土壤有机质含量。
附图说明
图1是本发明实施例提供的芽孢杆菌菌株的制备方法流程图。
图2是本发明实施例提供的实验1实物对比图一。
图3是本发明实施例提供的实验1实物对比图二。
图4是本发明实施例提供的实验2对比示意图；
图中：(a)对照图；(b)本发明效果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例， 对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以 解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种芽孢杆菌及其制备方法和应 用，下面结合附图对本发明作详细的描述。
本发明实施例提供的芽孢杆菌菌株(Bacillus megaterium strainYM11)，菌 株号为YM11，其保藏于位于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2018430。
如图1所示，本发明实施例提供的芽孢杆菌菌株的制备方法包括以下步骤：
S101：菌种活化：将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上培养，得到 芽孢杆菌的活化种子；
S102：菌种种子液制备：将芽孢杆菌活化，取活化后的芽孢杆菌单菌落划 线于培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化 的菌株转入培养基中培养，即得到菌种种子液；
S103：发酵液制备：将培养好的芽孢杆菌种子液以3％-8％的接种量接入发 酵培养基中，培养条件为通气量0.7-2.3vvm，转速300-500rpm，温度30-36℃， 培养时间48-60h，制得芽孢杆菌的菌悬液，将菌悬液离心后收集上清液，再将 上清液过滤并除菌即得到芽孢杆菌高密度发酵液；
S104：菌种培养：将芽孢杆菌培养在NA固体培养基或NA液体培养基上， 能保持高稳定性状，菌种经NA固体培养基或NA液体培养基传代8代以上稳定 性状，NA固体培养基或NA液体培养基原料由牛肉浸膏、酵母粉、轻质碳酸钙、 蛋白胨、葡萄糖、琼脂、氯化钠和蒸馏水组成，其中，每1000mL蒸馏水对应 5g牛肉浸膏、5g酵母粉、3g轻质碳酸钙、10g蛋白胨、12g葡萄糖、15g琼脂 和4g氯化钠，NA固体培养基或NA液体培养基的pH值7.2±0.1，并在0.1MPa气压下灭菌30min后接种该菌种，并在33℃±1℃温度下培养22-26h。
盐碱地为轻度盐碱地、中度盐碱地或重度盐碱地中的一种。
一种盐碱地中的芽孢杆菌，含有Bacillus megaterium strainYM11。
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。
实施例1：
本发明实施例的Bacillus megaterium strain，菌株号为YM11，其保藏于位于 武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2018430，Bacillus megateriumstrainYM11是一种芽孢杆菌，具有提高玉米耐盐碱能力，另外，可 产生有机酸、生长素和抗生素等物质、可刺激作物生长、调节土壤酸碱度、促 进土壤形成团粒结构、抑制土壤病原菌的生长和改善土壤微生态环境，YM11 菌株本身最大耐盐性为11％，pH最大耐受性为11.3，从而可以更加稳定的生存 于盐碱环境中，并且通过实验验证表明，YM11菌株可稳定的定殖于作物根际从 而发挥作用。
本发明实施例的Bacillus megaterium strain的制备方法包括以下步骤：
A、菌种活化：将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上培养，得到芽孢 杆菌的活化种子；
B、菌种种子液制备：将芽孢杆菌活化，取活化后的芽孢杆菌单菌落划线于 培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌 株转入培养基中培养，即得到菌种种子液；
C、发酵液制备：将培养好的芽孢杆菌种子液以3％的接种量接入发酵培养 基中，培养条件为通气量0.7vvm，转速300rpm，温度30℃，培养时间48h，制 得芽孢杆菌的菌悬液，将菌悬液离心后收集上清液，再将上清液过滤并除菌即 得到芽孢杆菌高密度发酵液；
D、菌种培养：将芽孢杆菌培养在NA固体培养基上，能保持高稳定性状， 菌种经NA固体培养基传代8代以上性状稳定，NA固体培养基原料由牛肉浸膏、 酵母粉、轻质碳酸钙、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、氯化钠和蒸馏水组成，其中， 每1000mL蒸馏水对应5g牛肉浸膏、5g酵母粉、3g轻质碳酸钙、10g蛋白胨、 12g葡萄糖、15g琼脂和4g氯化钠，NA固体培养基的pH值7.1，并在0.1MPa 气压下灭菌30min后接种该菌种，并在32℃温度下培养26h。
Bacillus megaterium strainYM11在盐碱地中的应用，且应用方法为：通过拌种，将菌稳定附着于植物种皮表面，通过实验验证，发芽率得以提升，同时作 物干重、鲜重、植株整体形态等都有明显提升。
盐碱地为中度盐碱地。
本发明的盐碱地中的芽孢杆菌，含有Bacillus megaterium strainYM11。
在利用水培实验通过设置不同盐浓度的植物营养液培养玉米植株，以及试 验在盐胁迫条件下加入YM11菌株对盐胁迫下玉米生长的影响，结果表明，在 盐浓度为75mmol/L，pH值为9.0时，接种YM11菌株的玉米幼苗株高增加 15.18％、根长增加28.80％，植株干重增加27.01％。
实施例2：
本发明的Bacillus megaterium strain的制备方法包括以下步骤：
A、菌种活化：将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上培养，得到芽孢 杆菌的活化种子；
B、菌种种子液制备：将芽孢杆菌活化，取活化后的芽孢杆菌单菌落划线于 培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌 株转入培养基中培养，即得到菌种种子液；
C、发酵液制备：将培养好的芽孢杆菌种子液以8％的接种量接入发酵培养 基中，培养条件为通气量2.3vvm，转速500rpm，温度36℃，培养时间60h，制 得芽孢杆菌的菌悬液，将菌悬液离心后收集上清液，再将上清液过滤并除菌即 得到芽孢杆菌高密度发酵液；
D、菌种培养：将芽孢杆菌培养在NA液体培养基上，能保持高稳定性状， 菌种经NA液体培养基传代8代以上性状稳定，NA液体培养基原料由牛肉浸膏、 酵母粉、轻质碳酸钙、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、氯化钠和蒸馏水组成，其中， 每1000mL蒸馏水对应5g牛肉浸膏、5g酵母粉、3g轻质碳酸钙、10g蛋白胨、 12g葡萄糖、15g琼脂和4g氯化钠，NA液体培养基的pH值7.3，并在0.1MPa 气压下灭菌30min后接种该菌种，并在34℃温度下培养22h。
Bacillus megaterium strainYM11在盐碱地中的应用，且应用方法为：通过拌种，将菌稳定附着于植物种皮表面，通过实验验证，发芽率得以提升，同时作 物干重、鲜重、植株整体形态等都有明显提升。
盐碱地为重度盐碱地。
本发明的盐碱地中的芽孢杆菌，含有Bacillus megaterium strainYM11。
在盐碱土盆栽试验中接种YM11菌株的玉米株高比未接种的玉米增加 43.6％，植株干重增加34.2％。
YM11促进玉米耐盐碱机理：根系作为最先感知盐碱胁迫的器官，其结构完 整性与生存环境直接影响地上部分茎叶的生理形态，盐碱胁迫条件下菌株YM11 与玉米互作改善植物根际微环境，增加根际土壤微生物多样性，调节根际营养 结构增加土壤有机质含量，缓解盐碱胁迫对根的损伤，通过增加玉米根系抗氧 化物质含量对玉米根系应对逆境能力提高，通过实验证明，当加入菌株YM11 后与盐碱胁迫不加菌对比，根尖细胞线粒体，液泡，质壁分离，细胞核形态、 胞间连丝等均发生改变，细胞完整性明显增加。通过实验测定，根系抗氧化物 质如：抗氧化物歧化酶，过氧化氢酶，总抗氧化物酶等抗氧化酶活性显著提高(p<0.05)，并且氧化物质如：H2O2等氧化性物质含量显著降低，同时脯氨酸， 蛋白质等提高植物抗逆性的物质含量均有不同程度提高。
菌株YM11属于芽孢杆菌，在受到严重威胁自身生长的环境条件下可产生 芽孢应对不良环境，当环境得到改善又可以迅速产生菌体发挥作用，实验验证 表明菌株YM11应对盐碱能力分别为盐分11％，pH11.0，超强的应对盐碱能力 使菌体能稳定发挥作用，通过定殖实验验证表明，菌株YM11可稳定定殖与盐 碱土环境中，时间长稳定性好是其发挥作用的关键。
下面结合实验对本发明的技术效果作详细的描述。
实验1
1、实验方法：
玉米幼苗在不同盐浓度下生长情况。
2、种子萌发：
选取约200粒饱满无损伤的玉米种子置于500mL于60℃温水中浸泡到水温 自然降至室温为止，取出玉米种子，用75％酒精浸泡5s去除种子表面张力,再 0.1％HgCl表面消毒40s，再用无菌水冲洗4-7次。置于0.8％水琼脂培养皿内， 于25℃黑暗条件下培养2-3d，萌发备用。
3、盐胁迫实验：
a、CK0处理：无盐胁迫，即正常条件下的玉米对照；
b、实验组：盐胁迫，即不同浓度盐胁迫条件下的玉米生长为实验组；
每个处理设置3个重复(培养瓶)，每个重复种植4株玉米苗。所有处理均 放置于光照培养箱(25℃，16h光照与18℃，8h黑暗)中培养，光照强度2000Lx。 培养14d至玉米幼苗生长明显区别后统计玉米的根长、根数、根鲜重、根干重 等生长指标。
4、盐胁迫条件下微生物对提高玉米幼苗耐盐性能的情况。
将催芽后的玉米幼苗种植于含有不同盐浓度的植物营养液培养瓶中，取 YM11菌株接种于玉米幼苗根系，培养14d后观察玉米幼苗生长差异。
a、CK0处理：无盐胁迫、不接种试验菌株即正常生长状况下玉米幼苗为空 白对照组；
b、CK1处理：有盐胁迫、不接种试验菌株；
c、试验组：梯度盐胁迫、分别接种试验菌株，接种浓度为1×108cfu/ml， 接种量为20ul/瓶。
每个处理设置3个重复，所有处理均放置于光照培养箱光照强度 15000Lux(25℃，16h光照与18℃，8h黑暗)中培养。待长到14d,植株有明显 差异后统计玉米幼苗的株高、根长、茎粗等指标。
5、盐渍土土培条件下YM11菌株对玉米植株生长的影响。
取田间盐渍土，测定盐浓度为0.75％，将玉米种子种植于盐渍土中并添加 YM11菌株，接种浓度为1×108cfu/ml，接种量为1mL/盆为实验组，以无盐育 苗土(盐分0.01％)为空白对照记为CK0，以盐渍土不加菌组为对照组记为CK1。 每隔30d记录玉米植株生长情况。
6、YM11菌株在玉米根系下定殖实验。
将催芽后的玉米幼苗种植于含有盐浓度为75mmol/L的植物营养液培养瓶 中，取YM11菌株接种于玉米幼苗根系，观察菌YM11在玉米根系定植能力。
a、实验组：将催芽后的玉米苗进入浓度为1×108cfu/ml的菌悬液中10min 后于种植于盐浓度为75mmol/L无菌植物营养液中，统计12d营养液中菌数变；
b、CK处理组：将YM11菌株接入到盐浓度为75mmol/L的无菌植物营养 液中，设置为对照组。
统计10d试验组玉米根系上菌数、混合液中菌数；对照组营养液中菌数 (×106CFU)。
对于菌株YM11的研究中发现该菌属于环境友好型菌株，不影响益生菌的 数量，但可以降低病原菌的数量，实验验证，该菌不仅可提高玉米应对盐碱胁 迫的能力对其他植物如小麦，萝卜、白菜、空心菜等等C3、C4类植物均有作用， 主要特点为作用范围广。
使用时，Bacillus megaterium strainYM11是一种根际促生菌(PGPR，可产 生有机酸、生长素和抗生素等物质、可刺激作物生长、调节土壤酸碱度、促进 土壤形成团粒结构、抑制土壤病原菌的生长和改善土壤微生态环境，YM11菌株 本身最大耐盐性为11％，pH最大耐受性为11.3，从而可以更加稳定的生存于盐 碱环境中，并且通过实验验证表明，YM11菌株可稳定的定殖于作物根际从而发 挥作用。
表1实验数据统计
实验2
为了验证苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂在盐碱土壤上的应用效果， 我们在水稻上施用苍白气生芽孢杆菌，对水稻出苗率、产量和收益进行了分析。 现将田间试验结果报告如下：
1材料与方法
1.1试验地点与土壤
试验地位于宁夏儿银川贺兰县常信乡四十里店村“稻渔空间乡村生态观光 园”。供试田为中低产田，常年稻往年最高产量为550kg/亩左右，土壤为灌淤土。 试验前取土样分析结果如下：土壤有机质含量13.4g/kg，pH值8.22，盐度0.68 g/kg，全氮0.78mg/kg，碱解氮67.3mg/kg，有效磷15.9mg/kg，速效钾96mg/kg。
1.2供试作物
供试水稻品种为水稻，“隆优619”。
1.2供试肥料
供试的苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂产品为黑褐色粉剂，产品含有 效活菌数≥2亿个/g
1.3试验设计
本试验采用大区对比法，设三个大区，处理1区为20亩，处理2区为20 亩，对照区面积为40亩，地力水平基本同等条件，试验地周围设保护行。
处理1(常规施肥)：控释肥48％(31-13-4)40公斤/亩。
处理2(常规施肥+碱抗菌剂)：抗盐碱菌剂3公斤/亩+控释肥48％(31-13-4) 40公斤/亩。
处理3(基质处理)：抗盐碱菌剂灭活后基质3公斤/亩+控释肥48％(31-13-4) 40公斤/亩。
1.4试验实施
2018年5月17日用菌剂拌种，19日机械播种15.5公斤/亩后引黄河水灌溉。 其它农事措施一致。播种前种子处理：抗盐碱菌剂+60％吡虫啉+包来顺+黄泥拌 种；播种后上水前，使用仲丁灵150毫升/亩进行封闭除草药剂，目的是封闭未 出土杂草，促分蘖，防后期倒伏；7月中下旬防治稻瘟病2次，有轻微稻瘟病、 纹枯病发生。整个发充期灌水12次，水层管理的原则是两保两控。于9月29 日收割脱粒。
2结果与分析
2.1对水稻出苗率的影响
通过试验调查，处理1的出苗率为81％，处理2的出苗率为92％，处理3 的出苗率为84％；
2.2对水稻生物学性状的影响
结果表明(表2)，早稻施用了苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种处 理的平均亩产量，与常规施肥处理、基质处理比较均有提高。说明早稻施用苍 白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种对轻中度盐碱地水稻的亩产量影响。
表1不同施肥处理水稻产量对照(kg/亩)
施用苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种处理产量最高，比常规施肥 增产91.1公斤/亩，增产幅度为17.37％，差异达到显著水平；和基质处理相比较 增产66.72公斤/亩，增产幅度为12.16％，差异达到显著水平。
2.5不同施肥处理经济效益分析
表3不同施肥处理的效益对比表
注明：按稻谷价格2.7元/公斤，控释肥按2元/公斤算。
苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种的处理，种植收益比常规施肥多 216元/亩，比基质处理多181元/亩。
3分析
3.1施用苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种的水稻比常规施肥增产 40.28公斤/亩，增产幅度为7.89％，差异达到显著水平；和基质处理相比较增产 27.45公斤/亩，增产幅度为5.25％，差异达到显著水平。
3.2施用苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种的处理，种植收益比常规 施肥多78.76元/亩，比基质处理多74.11元/亩。
施用苍白气生芽孢杆菌微生物土壤修复剂拌种能得到增产增收，值得大力 推广。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明 的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种芽孢杆菌菌株，其特征在于，所述芽孢杆菌菌株保藏号为CCTCC M2018430。
2.一种如权利要求1所述芽孢杆菌菌株的制备方法，其特征在于，所述芽孢杆菌菌株的制备方法包括以下步骤：
第一步，将低温保存的芽孢杆菌在NA固体培养基上培养，得到芽孢杆菌的活化种子；
第二步，将芽孢杆菌活化，取活化后的芽孢杆菌单菌落划线于培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌株转入培养基中培养，即得到菌种种子液；
第三步，将培养好的芽孢杆菌种子液接入发酵培养基中，制得芽孢杆菌的菌悬液，将菌悬液离心后收集上清液，再将上清液过滤并除菌即得到芽孢杆菌高密度发酵液；
第四步，将芽孢杆菌培养在NA固体培养基或NA液体培养基上，能保持高稳定性状，菌种经NA固体培养基或NA液体培养基传代8代以上稳定性状，NA固体培养基或NA液体培养基原料由牛肉浸膏、酵母粉、轻质碳酸钙、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、氯化钠和蒸馏水组成；NA固体培养基或NA液体培养基的pH值7.2±0.1，并在0.1MPa气压下灭菌30min后接种该菌种，并在33℃±1℃温度下培养22-26h。
3.如权利要求2所述的芽孢杆菌菌株的制备方法，其特征在于，所述第三步，将培养好的芽孢杆菌种子液以3％-8％的接种量接入发酵培养基中，培养条件为通气量0.7-2.3vvm，转速300-500rpm，温度30-36℃，培养时间48-60h。
4.如权利要求2所述的芽孢杆菌菌株的制备方法，其特征在于，所述第四步每1000mL蒸馏水对应5g牛肉浸膏、5g酵母粉、3g轻质碳酸钙、10g蛋白胨、12g葡萄糖、15g琼脂和4g氯化钠。
5.一种如权利要求1所述芽孢杆菌菌株在提高玉米抗盐碱能力中的作用。
CN201910854981.9A 2019-09-10 2019-09-10 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用 Pending CN110551656A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910854981.9A CN110551656A (zh) 2019-09-10 2019-09-10 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910854981.9A CN110551656A (zh) 2019-09-10 2019-09-10 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110551656A true CN110551656A (zh) 2019-12-10

Family

ID=68739754

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910854981.9A Pending CN110551656A (zh) 2019-09-10 2019-09-10 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110551656A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109554312A (zh) * 2018-12-19 2019-04-02 江苏沿江地区农业科学研究所 一种耐盐菌qm、包含该耐盐菌qm的林木育苗基质及制备方法
CN111172070A (zh) * 2020-01-10 2020-05-19 青岛农业大学 一种种子生物刺激素sb-mgw9的制备及应用方法
CN112280703A (zh) * 2020-08-27 2021-01-29 中国农业科学院烟草研究所 一种嗜酸性pgpr菌株的筛选、鉴定及其生防活性方法
CN117821286A (zh) * 2023-11-22 2024-04-05 甘肃农业大学 一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102786934A (zh) * 2012-08-22 2012-11-21 王金玲 一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法
CN109486707A (zh) * 2018-11-23 2019-03-19 北京林业大学 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN109897806A (zh) * 2019-04-15 2019-06-18 南京农业大学 一株促进作物耐盐碱生长的巨大芽孢杆菌及盐碱地专用微生物肥料和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102786934A (zh) * 2012-08-22 2012-11-21 王金玲 一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法
CN109486707A (zh) * 2018-11-23 2019-03-19 北京林业大学 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN109897806A (zh) * 2019-04-15 2019-06-18 南京农业大学 一株促进作物耐盐碱生长的巨大芽孢杆菌及盐碱地专用微生物肥料和应用

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109554312A (zh) * 2018-12-19 2019-04-02 江苏沿江地区农业科学研究所 一种耐盐菌qm、包含该耐盐菌qm的林木育苗基质及制备方法
CN111172070A (zh) * 2020-01-10 2020-05-19 青岛农业大学 一种种子生物刺激素sb-mgw9的制备及应用方法
CN111172070B (zh) * 2020-01-10 2022-07-29 青岛农业大学 一种种子生物刺激素sb-mgw9的制备及应用方法
CN112280703A (zh) * 2020-08-27 2021-01-29 中国农业科学院烟草研究所 一种嗜酸性pgpr菌株的筛选、鉴定及其生防活性方法
CN117821286A (zh) * 2023-11-22 2024-04-05 甘肃农业大学 一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法
CN117821286B (zh) * 2023-11-22 2024-06-11 甘肃农业大学 一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109971680B (zh) 一种具有抗病促生长功能的复合微生物菌剂的制备及应用
CN110551656A (zh) 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用
CN109852565B (zh) 一种盐碱地复合改良剂及其施用方法
CN110616171B (zh) 一株耐盐碱太平洋芽孢杆菌及其活菌制剂与应用
CN109810924B (zh) 一种重度盐碱地改良方法
CN110577916B (zh) 一种防治作物根结线虫的复合菌剂及其制备方法
CN107094568B (zh) 一种轻度盐碱地蓝莓种植方法
CN105601360A (zh) 微生物生态改良盐碱地的方法
CN111690578B (zh) 一株耐盐碱暹罗芽孢杆菌及其活菌制剂的生产方法与应用
CN113416675A (zh) 一种耐盐碱的根际促生菌及其应用
CN115340968B (zh) 微刺假单胞菌的新用途及其方法、微刺假单胞菌21 4.1 9.2-14及其产品
CN110684683A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌、菌剂和应用
CN109055274B (zh) 一株锦鸡儿根瘤菌及其发酵培养方法与应用
CN112063543B (zh) 一种产脲酶细菌及其在制备用于防治烟草根结线虫病的菌剂中的应用
CN111484953A (zh) 一种促生解磷的芽孢杆菌及其应用
CN111763631B (zh) 一种蚯蚓腾黄单胞菌及其应用
CN109161511B (zh) 一种诱导番茄抗南方根结线虫的不动杆菌及应用
CN113897316A (zh) 地衣芽孢杆菌BLc06及其制备的功能型瓜果育苗生物基质和应用
CN117821286B (zh) 一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法
CN104195082B (zh) 一种游动微菌及其菌剂和制备与应用
CN104774769B (zh) 一种采用强化堆肥微生物菌剂改善低温草皮生产性能的方法
CN117106668B (zh) 一株耐盐碱促生天津假单胞菌p522及其应用
LU501250B1 (en) Saline land improver for wheat cultivation
CN108841759B (zh) 一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂和生物有机肥
CN104798819A (zh) 一种采用强化耐低温微生物菌剂提高草坪草抗低温能力的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191210

RJ01 Rejection of invention patent application after publication