CN117821286A - 一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法,所述的微生物复合菌剂包括:耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU‑00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU‑00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU‑00668的菌株培养液。该微生物复合菌剂制备方法包括菌株筛选、制备菌株培养液以及制备制备微生物复合菌剂。本发明提供的微生物复合菌剂因含有耐盐的固氮、解磷、分泌植物激素和抑菌等能力的菌株,因而具有耐盐、促生、改土和抑病作用,可以提升土壤肥力,提高土壤活性,改善土壤结构和促进植物生长,操作便捷,效益高,可拌种、滴灌,也可直接喷施。

Description

一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物菌肥技术领域,具体涉及一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法。
背景技术
土壤盐渍化指易溶性盐分在土壤表层积累的现象或过程,世界范围内约20%的耕地受到盐渍化的影响,且呈现逐年增加趋势,预计21世纪中期盐碱土面积将占可耕作土壤面积的50%以上。中国盐渍土壤面积大、分布广,同时还有大面积的潜在盐渍化土壤,而作物在盐渍化土壤上生长会表现出不良状态,比如抑制生长、破坏光合作用、从而使植物细胞膜受到伤害、营养失衡等,严重时可能会造成作物绝产等。“18亿亩耕地红线要守住,5亿亩盐碱地也要充分开发利用。”基于此目的,结合当前土壤盐渍化问题,需要积极挖掘有潜力的盐碱地以扩充耕地面积。
近年来,在对植物抗逆性研究过程中发现,生物措施是近些年来迅速发展的最具生态和经济效益且切实可行的盐渍土改良技术。植物根际促生菌(Plant GrowthPromoting Rhizobacteria,PGPR)是指能够在植物根际大量定殖并能促进植物生长的微生物。PGPR作为战略性微生物资源,利用其制作的微生物菌剂目前已得到广泛应用,对于种植业发展、土地改良具有重大意义。菌剂中的微生物能在土壤中繁殖,从而改善土壤养分状况、提高土壤酶活性、增加微生物多样性,为作物生长提供一个良好的生活环境。施用微生物菌剂具有良好的生态效益,能有效增强植物抗逆性,改善盐碱土生态环境,促进土壤脱盐、抑制返盐,减轻高盐浓度的毒性并改善植物生长,同时修复退化的盐渍土。可见,微生物菌剂必将在我国农业绿色发展中发挥越来越重要的作用,是开发并修复盐碱地、提高农业生态系统生产力的可持续方法。
因此,针对我国当前土壤盐渍化的现状,研究开发用于盐碱地改良的微生物复合菌剂具有重要意义。
发明内容
本发明提供一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂及其制备方法,通过添加有益微生物,改善根际微生态环境,减轻盐碱胁迫对植物造成的损伤,促进植物生长。
本发明提供的技术方案如下:
一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,所述的微生物复合菌剂包括:耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的菌株培养液。
进一步地,所述耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231824;所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231823;所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231825。
进一步地,所述的微生物复合菌剂在缓解植物所受盐胁迫损伤、改善盐碱地土壤中的应用。
同时,本发明还提供一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,用于制备上述的微生物复合菌剂,包括如下步骤:
步骤(1)菌株选择:筛选具有溶磷、固氮、解钾、分泌植物激素、拮抗病原菌功效的耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668;
步骤(2)制备菌株培养液:将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668进行液体培养,分别得到单一菌株培养液;
步骤(3)制备微生物复合菌剂:将不同所述单一菌株培养液按照一定配比混合,接种至高密度混合发酵专用培养基中,进行培养得到所述微生物复合菌剂。
进一步地,步骤(1)中,筛选所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668采用平板对峙法,确定菌株间无拮抗作用。
进一步地,步骤(2)中,所述单一菌株培养液的制备方法具体为:挑取所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单菌落分别接种于装有100mL LB液体培养基的250mL三角瓶中,于28℃、210r/min摇床培养48h,使得所述液体菌剂活菌浓度大于108cfu/mL,用无菌水调节单一菌株培养液OD600值为1.0。
进一步地,步骤(3)中,将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单一菌株培养液以体积比2:4:1的比例混合,以接种量为5%~10%,接种至高密度混合发酵专用培养基中,于30℃、210r/min条件下培养48h后,得到所述微生物复合菌剂,所述微生物复合菌剂中的有效活菌数均≥109cfu/mL。
进一步地,所述高密度混合发酵专用培养基中包括以下组分:甘油1.0%-1.5%、蛋白胨0.8%-1.0%、酵母浸粉0.4%-0.6%、碳酸钙0.4%-0.6%,磷酸二氢钾0.2%-0.3%,其余为水,配制培养基用水需满足pH值为6.5-7.5。
进一步地,步骤(3)中,制备得到的所述微生物复合菌剂的应用方法为:拌种、滴灌或直接喷施,使用量为5.0kg-6.0kg/亩。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明提供的微生物复合菌剂包括耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668,该微生物复合菌剂具有固氮、溶磷、分泌植物激素等促生能力,不会引起植物病害,具有良好的生态适应性,同时对土壤结构具有改善作用,而且使用安全,经济效益高,不会对生态环境造成威胁。利用本发明制备的微生物复合菌剂能够提高植物产量,提高土壤有机质含量及土壤酶活性,改善土壤质量及根际微生态环境,减轻盐碱胁迫对植物造成的损伤。
附图说明
图1为本发明实施例中用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法的流程示意图。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,下面所描述的实施例是本申请的一部分实施例,而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本申请实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此,以下结合附图提供的本申请实施例的详细描述旨在仅仅表示本申请的选定实施例,并非限制本申请要求保护的范围。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例,都属于本申请保护的范围。
本发明提供一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,该微生物复合菌剂包括:耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的菌株培养液。
可选的,耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667,于2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231824。
莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660,于2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231823。
产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668,于2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231825。
图1示出了一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,用于制备上述的微生物复合菌剂,包括如下步骤:
步骤(1)、菌株选择:筛选具有溶磷、固氮、解钾、分泌植物激素、拮抗病原菌功效的耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668。
步骤(2)、制备菌株培养液:将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonassynxantha)GAU-00668进行液体培养,分别得到单一菌株培养液。
步骤(3)、制备微生物复合菌剂:将不同单一菌株培养液按照一定配比混合,接种至高密度混合发酵专用培养基中,进行培养得到微生物复合菌剂。
可选的,步骤(1)中,筛选枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668采用平板对峙法,确定菌株间无拮抗作用。
可选的,步骤(2)中,单一菌株培养液的制备方法具体为:挑取枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单菌落分别接种于装有100mL LB液体培养基的250mL三角瓶中,于28℃、210r/min摇床培养48h,使得液体菌剂活菌浓度大于108cfu/mL,用无菌水调节单一菌株培养液OD600值为1.0。
可选的,步骤(3)中,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单一菌株培养液以体积比2:4:1的比例混合,以接种量为5%~10%,接种至高密度混合发酵专用培养基中,于30℃、210r/min条件下培养48h后,得到微生物复合菌剂,微生物复合菌剂中的有效活菌数均≥109cfu/mL。
可选的,高密度混合发酵专用培养基中包括以下组分:甘油1.0%-1.5%、蛋白胨0.8%-1.0%、酵母浸粉0.4%-0.6%、碳酸钙0.4%-0.6%,磷酸二氢钾0.2%-0.3%,其余为水,配制培养基用水需满足pH值为6.5-7.5。
可选的,步骤(3)中,制备得到的微生物复合菌剂的应用方法为:拌种、滴灌或直接喷施,使用量为5.0kg-6.0kg/亩。
实施例1
本实施例提供一种盐碱地改良微生物复合菌剂的制备方法,该方法包括以下步骤:
步骤(1):选取具有溶磷、固氮、分泌植物激素等功效的优良溶磷能力的耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668通过划线法接种于LB固体培养基,放置于28℃培养箱中培养2d。
步骤(2):制备单一菌株培养液,挑选单菌落接种于装有100mL LB液体培养基的250mL三角瓶中,于28℃、210r/min摇床培养48h,使得液体菌剂活菌浓度大于108cfu/mL,用无菌水调节单一菌株培养液OD600值为1.0,分别得到上述菌株的单一菌株培养液。
步骤(3):制备微生物复合接种剂,将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonassynxantha)GAU-00668的单一菌株培养液以体积比2:4:1的比例混合,控制接种量为5%~10%,接种至高密度混合发酵专用培养基中,于30℃、210r/min条件下培养48h后,得到用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,培养获得的微生物复合菌剂中的有效活菌数均≥109cfu/mL。
需要说明的是,本发明通过平板对峙法证明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668相互之间无拮抗作用,可混合作为微生物复合菌剂。
该微生物复合菌剂结合了3株耐盐植物根际促生菌的优点,同时具有固氮、溶磷、分泌植物激素的作用,可直接喷洒施用。该微生物复合菌剂具有良好的生态适应性,同时对土壤结构具有改善作用,而且使用安全,经济效益高,不会对生态环境造成威胁。
实施例2
本实施例提供一种上述微生物复合菌剂的应用,具体实验如下:
选用颗粒饱满且大小一致的苜蓿种子,用1%的次氯酸钠消毒10min后,无菌水清洗3次,种植于装有200g花土的塑料花盆中(规格:外径11.5cm×内径8.5cm×高12.0cm),每杯种植苜蓿6株。出苗后,将不同浓度的NaCl溶液(0、0.4%、0.8%、1.2%)40mL浇入塑料花盆内,3d后再浇一次,待溶液完全吸收后,以高密度发酵培养基为对照组(CK)生产的上述微生物复合菌剂为处理,以相同接种量灌根,每盆8mL,每个处理4次重复。
在植株生长60d后全部收获,测定幼苗的株高、根长、地上生物量、地下生物量及叶绿素含量。在此期间,每两天浇50mL蒸馏水,可根据干湿度适当调节。具体实验结果见表1:
表1:盐碱地改良微生物复合菌剂的使用效果
由上表可见,施用本发明实施例1的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,在无盐胁迫环境下,接种菌剂后,苜蓿株高、根长、地上生物量、地下生物量、叶绿素含量有效提高22.87%、8.65%、24.64%、22.73%、57.14%;在0.4%盐胁迫环境下,接种菌剂后,苜蓿株高、根长、地上生物量、地下生物量、叶绿素含量有效提高11.42%、15.94%、23.64%、31.58%、74.78%;在0.8%盐胁迫环境下,接种菌剂后,苜蓿株高、根长、地上生物量、地下生物量、叶绿素含量有效提高17.30%、27.04%、42.50%、6.25%、58.14%;在1.2%盐胁迫环境下,接种菌剂后,苜蓿株高、根长、地上生物量、地下生物量、叶绿素含量有效提高17.32%、63.66%、15.00%、14.29%、63.48%。由结果可知,本发明提供的微生物复合菌剂可以有效促进苜蓿株高、根长,提高苜蓿地上地下生物量及叶绿素含量,菌剂有效适应盐胁迫环境,缓解植物所受盐胁迫损伤,同时有效促进植物生长。
实施例3
本发明提供的一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的应用,具体实验如下:
选用颗粒饱满且大小一致的燕麦种子,用2%的次氯酸钠消毒2min后,无菌水清洗4~5次,在23℃环境下催芽,种植于装有500g无菌石英砂的塑料花盆中(规格:外径9.0cm×内径5.5cm×高15.0cm),每杯种植4株。试验共设置四个处理,将浓度为100mmol/L的NaCl溶液40mL浇入花盆内,3d后再浇一次,待溶液完全吸收后,以高密度发酵培养基为对照组(CK)生产的微生物复合菌剂为处理,以相同接种量灌根,每盆10mL,每个处理4次重复。
在植株生长30d后全部收获,测定幼苗的株高、根系活力、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢(H2O2)含量、过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)。在此期间,每两天浇30mL蒸馏水,每七天浇全量Hoagland营养液30mL,可根据干湿度适当调节。具体实验结果见表2:
表2:盐碱地改良微生物复合菌剂的使用效果
由表2可见,施用本发明实施例1的制备的微生物复合菌剂,在无盐胁迫环境下,接种菌剂后,燕麦的株高、根系活力均有所提高,而丙二醛含量、过氧化氢酶及超氧化物歧化酶显著降低;而在盐胁迫条件下,接种菌剂后,燕麦的株高、根系活力较未接种菌剂处理显著提高,植物的MDA含量、H2O2含量和SOD活性较未接种菌剂处理降低19.30%、30.92%、24.24%,CAT活性较未接种菌剂处理提高了59.37%;由结果可知,本发明的微生物复合菌剂可以有效促进燕麦株高、根系活力,缓解了植物的渗透胁迫及离子毒害,盐胁迫下,接种微生物复合菌剂,降低了丙二醛含量、过氧化氢含量及超氧化物歧化酶活性,通过调节抗氧化酶及抗氧化系统,缓解了盐胁迫下对植物造成的氧化损伤。
实施例4
本发明提供的一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的应用,具体如下:
试验应用于的盐碱地(含盐总量为1.12g/kg,pH为7.7),采用田间随机区组设计,播种方式撒播,小区面积3m×5m,种子用量22.5kg·hm-2,垄宽30cm,行距25cm。施用菌肥时,确定液体菌肥最佳用量为7.5kg·hm-2,全量化肥用量为磷酸二铵(N+P2O5+K2O≥40%)375kg·hm-2,设置4个处理(T1:全量微生物复合菌剂、T2:全量化肥、T3:75%化肥+微生物复合菌剂、T4:50%化肥+微生物复合菌剂),一不施肥处理为对照组(CK)。种子播深1~2cm,实验过程中均不喷洒农药,常规田间管理。得出如下(表3)测试结果,对本发明进一步详细分析。
表3:盐碱地改良微生物复合菌剂的使用效果
实验处理 株高(cm) 干草产量(kg/hm2) 粗蛋白(%) 粗脂肪(%)
T1 48.70±0.77 3958.65±42.58 17.35±0.35 2.49±0.04
T2 58.17±1.49 3888.45±42.09 17.71±0.40 3.16±0.08
T3 58.11±2.02 4079.60±35.88 24.26±0.33 2.20±0.40
T4 48.67±0.74 3811.58±69.43 22.74±0.21 2.06±0.03
CK 43.28±1.08 3781.35±59.89 21.27±0.73 2.88±0.12
由上表可见,施用本发明实施例1的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,施用菌剂后,紫花苜蓿株高由高至低依次为处理T2>T3>T1>T4>CK,各处理与CK相比苜蓿株高增加了12.45%~34.40%;在75%化肥+微生物复合菌剂的组合处理下,苜蓿的干草产量均为最高,较CK提高了7.9%,同时提高苜蓿的粗蛋白含量14.06%;试验发现,施用菌剂,有效降低了苜蓿的粗脂肪含量,50%化肥+微生物复合菌剂组合处理下,苜蓿粗脂肪含量较CK降低了23.61%。由结果可知,本发明提供的微生物复合菌剂可以有效促进苜蓿株高、草产量及粗蛋白含量,降低了粗脂肪含量,本发明菌剂有效适应盐胁迫环境,缓解植物所受盐胁迫损伤,提高植物产量及利用效率,有效促进植物生长。
以上所述,仅为本申请的最优具体实施方式,但本申请的保护范围并不局限于此,任何在本申请揭露的技术范围内的变化或替换,都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此,本申请的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (9)

1.一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂,其特征在于,所述的微生物复合菌剂包括:耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660和产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的菌株培养液。
2.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂,其特征在于:
所述耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231824;所述莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis)GAU-00660,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231823;所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668,2023年保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M20231825。
3.根据权利要求1或2所述的微生物复合菌剂在缓解植物所受盐胁迫损伤、改善盐碱地土壤中的应用。
4.一种用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,用于制备如权利要求1-3任一项所述的微生物复合菌剂,其特征在于,包括如下步骤:
步骤(1)菌株选择:筛选具有溶磷、固氮、解钾、分泌植物激素、拮抗病原菌功效的耐盐促生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、莫海威芽孢杆菌(Bacillusmojavensis) GAU-00660以及产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668;
步骤(2)制备菌株培养液:将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonassynxantha)GAU-00668进行液体培养,分别得到单一菌株培养液;
步骤(3)制备微生物复合菌剂:将不同所述单一菌株培养液按照一定配比混合,接种至高密度混合发酵专用培养基中,进行培养得到所述微生物复合菌剂。
5.根据权利要求4所述的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
步骤(1)中,筛选所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668采用平板对峙法,确定菌株间无拮抗作用。
6.根据权利要求5所述的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
步骤(2)中,所述单一菌株培养液的制备方法具体为:挑取所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单菌落分别接种于装有100mL LB液体培养基的250 mL三角瓶中,于28℃、210 r/min摇床培养48 h,使得所述液体菌剂活菌浓度大于108 cfu/mL,用无菌水调节单一菌株培养液OD600值为1.0。
7.根据权利要求6所述的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
步骤(3)中,将所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GAU-00667、所述莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)GAU-00660以及所述产黄假单胞菌(Pseudomonas synxantha)GAU-00668的单一菌株培养液以体积比2:4:1的比例混合,以接种量为5%~10%,接种至高密度混合发酵专用培养基中,于30℃、210 r/min条件下培养48 h后,得到所述微生物复合菌剂,所述微生物复合菌剂中的有效活菌数均≥109 cfu/mL。
8.根据权利要求7所述的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述高密度混合发酵专用培养基中包括以下组分:甘油1.0%-1.5%、蛋白胨0.8%-1.0%、酵母浸粉0.4%-0.6%、碳酸钙0.4%-0.6%,磷酸二氢钾0.2%-0.3%,其余为水,配制培养基用水需满足pH值为6.5-7.5。
9.根据权利要求5-8任一项所述的用于盐碱地改良的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
步骤(3)中,制备得到的所述微生物复合菌剂的应用方法为:拌种、滴灌或直接喷施,使用量为5.0 kg-6.0 kg/亩。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104212734A (zh) * 2013-05-30 2014-12-17 北京世纪阿姆斯生物技术股份有限公司 一种耐盐复合菌剂及其制备方法
CN107709275A (zh) * 2015-06-02 2018-02-16 科氏农艺服务有限责任公司 微生物菌剂组合物及其在农业中的用途
CN109182219A (zh) * 2018-10-19 2019-01-11 青海大学 一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用
CN110551656A (zh) * 2019-09-10 2019-12-10 北方民族大学 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用
CN115287212A (zh) * 2022-04-14 2022-11-04 国家林业和草原局竹子研究开发中心 一株耐盐促生菌acp81及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104212734A (zh) * 2013-05-30 2014-12-17 北京世纪阿姆斯生物技术股份有限公司 一种耐盐复合菌剂及其制备方法
CN107709275A (zh) * 2015-06-02 2018-02-16 科氏农艺服务有限责任公司 微生物菌剂组合物及其在农业中的用途
CN109182219A (zh) * 2018-10-19 2019-01-11 青海大学 一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用
CN110551656A (zh) * 2019-09-10 2019-12-10 北方民族大学 一种芽孢杆菌菌株及其制备方法和应用
CN115287212A (zh) * 2022-04-14 2022-11-04 国家林业和草原局竹子研究开发中心 一株耐盐促生菌acp81及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YINCUI ZHANG等: ""Plant Growth–Promoting Rhizobacteria Enhance Salt Tolerance in Oat by Upregulating the Antioxidant System and Promoting Root Growth"", 《JOURNAL OF PLANT GROWTH REGULATION)》, 12 October 2022 (2022-10-12), pages 3568 *
张银翠: ""莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)对燕麦盐胁迫的缓解效应及机理研究"", 《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》, 15 December 2023 (2023-12-15), pages 047 - 44 *
张银翠等: ""耐盐促生菌筛选鉴定及对盐胁迫燕麦生长的影响"", 《草地学报》, 31 December 2021 (2021-12-31), pages 2645 - 2652 *
杨晓蕾等: ""5 株植物根际促生菌功能特性及培养条件"", 《草业科学》, 31 December 2022 (2022-12-31), pages 30 - 38 *

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