CN105586395A - 一种人体对日常饮食反应的检测试剂盒和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了人体对日常饮食反应的基因检测试剂盒，该试剂盒包括盒体及盒体内单独存放的试剂，试剂包括：（1）针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（2）PCR扩增试剂（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂。本发明通过PCR引物的设计使多个PCR扩增反应可在同一台PCR仪上同步进行，对受测者的相关基因进行检测，并实现检测的高效性、特异性，分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础，从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案，评估相应健康风险，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测，具体涉及人体对日常饮食反应的基因检测试剂盒。
背景技术
营养是保证人体健康长寿的物质基础，人体器官的功能和组织的正常代谢依赖着必需的营养，而这些营养物质又通过合理膳食而获得。1997年修改制定的《中国居民膳食指南》，提出了合理膳食的8条要求，即1，食物要多样，以谷类为主；2，多吃蔬菜、水果和薯类；3，常吃奶类、豆类及其制品；4，经常吃适量鱼、禽、蛋、瘦肉，少吃肥肉和荤油；5，食量与体力活动要平衡，保持适宜体重；6，吃清淡少盐的膳食；7，如饮酒应限量；8，吃清洁卫生、不变质的食物。大面积的营养学调查表明，我国居民有不少方面都未能达到这一合理饮食的要求。这将是新世纪营养水平改观的基本要求。对于不同从事健身运动的人群来说，营养需要还有它们各自的特点，要通过更高水准的饮食改善来满足他们各自的需要。
然而，即使人们注重营养平衡，由于对自身体质状况的不了解，会导致不科学饮食的发生，不仅不能促进健康，反而会危害到健康。人体作为一个复杂的有机体，对外来饮食中的营养成分会产生不同的反应，不同的代谢能力，甚至会因为体内基因缺陷，对特定的成分无法消化。在这种情况下，如果我们还报以传统的饮食观念，无疑将会加重健康风险。因此，了解自身基因，明确对营养成分的反应，是健康饮食的科学基础。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种日常饮食反应基因检测试剂盒，该试剂盒对受测者的相关基因进行检测，分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础，从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案，评估相应健康风险，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。且PCR扩增反应在同一台PCR仪上同步进行并具备检测的高效性、特异性。
一种日常饮食反应基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，存放的试剂包括：
（1）针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（以下引物序列方向均为5’端至3’端）：
针对SNPRS671的引物组：
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组：
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组：
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组：
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组：
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组：
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组：
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组：
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组：
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组：
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
（2）PCR扩增试剂；
（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
本发明提供的日常饮食反应基因检测试剂盒的有益效果是：通过PCR引物的设计使多个PCR扩增反应在同一台PCR仪上同步进行，对受测者的相关基因进行检测，并实现检测的高效性、特异性，分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础，从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案，评估相应健康风险，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。附图说明
图1是反应产物琼脂糖凝胶电泳图。
具体实施方式
日常饮食反应基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，存放的试剂包括：
（1）针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（以下引物序列方向均为5’端至3’端）：
针对SNPRS671的引物组：
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组：
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组：
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组：
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组：
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组：
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组：
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组：
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组：
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组：
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
（2）PCR扩增试剂；
（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
下面将结合实施例对本发明提供的方法予以进一步的说明。
本实施例对测试者采用日常饮食反应基因检测试剂盒同时检测10个基因的SNP多态位点，并根据基因分型结果，分析得到不同营养元素对身体影响的基因基础，从而为受测者获得一个合适的饮食管理方案，评估相应健康风险，采取相应的策略避免对其无效甚至是有害的方法。同时可以辅助专业教练员对运动员的饮食管理。
使用到的日常饮食反应基因检测试剂盒内试剂由以下组成：
（1）针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（以下引物序列方向均为5’端至3’端）：
针对SNPRS671的引物组：
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组：
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组：
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组：
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组：
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组：
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组：
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组：
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组：
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组：
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
（2）PCR扩增试剂：10×PCR缓冲液，该PCR缓冲液为100mMTris-HClpH8.3，500mMKCl，15mMMgCl2；dNTPs混合物，该dNTPs混合物为三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP，三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP，三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP，三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTP四种核苷酸，各组分浓度为2.5mM；5U/μl热启动Taq酶。
（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂：琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、Goldview染色液和DNA上样缓冲液，该缓冲液以溴酚蓝为指示剂稀释至1X后使用。
使用上述日常饮食反应基因检测试剂盒按如下步骤进行检测：
（1）提取样本基因组DNA。
采集该测试者唾液，向1-2ml唾液样品中加入500ul提取缓冲溶液，该DNA提取缓冲溶液溶剂为50mM的Tris-HClpH7.4、0.5mM的EDTA和50mM的NaCl，反复吹打混匀后，8000×g离心5分钟，弃去上清，此步骤重复一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液，该裂解液溶剂为50mMTris-HClpH7.4，50mMTris-HClpH7.4，150mMNaCl，1mMEDTA，1％Tritonx-100，1％Sodiumdeoxycholate，0.1％SDS，蛋白酶K20mg/mL，彻底悬浮沉淀并充分混匀后，室温放置30分钟，期间来回颠倒离心管数次；得到的混合液中，加入浓度为10mg/mLRNA酶的水溶液10μL，37℃下静置10min；得到的上清液中，加入等体积苯酚-氯仿混合溶液，苯酚和氯仿体积比为1∶1，充分混匀，混合液4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内；加入等体积苯氛-氯仿-异戊醇混合溶液，苯酚、氯仿和异戊醇体积比为25∶24∶1，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内；加入等体积氯仿-异戊醇混合溶液，充分混匀后，4℃，12000×g离心5分钟，上清液移入干净离心管内；加入0.6倍体积的冰浴异丙醇溶液及0.1倍的3mol/L醋酸钠溶液，-20℃静置60分钟后，4℃，12000×g离心10分钟，弃上清液；得到的沉淀物中加入0.5mL70％乙醇清洗沉淀物，4℃，12000×g离心5分钟，弃上清液，此步骤重复一次；得到的沉淀物自然风干，加入20μL无菌超纯水回溶，电泳检测，-20℃保存。
（2）PCR扩增
本实施例同时检测RS671、RS2187668、RS762551、RS4988235、RS713598、RS1800544、RS5400、RS1726866、RS16983422和RS11674786。每个SNP的检测需要一对上下游引物、两条多态引物共4条PCR引物，共需要40条引物。每个SNP的检测需要做两管PCR扩增，为防止出现假阳性之类的反应，衡量PCR是否成功，加设一管阴性对照组，共做21管PCR，所述阴性对照组基因组模板及反应体系是一样的，但没有引物存在。
根据不同的检测位点，用相应的引物按如下比例分别配制PCR反应体系：2.5μl10×PCR缓冲液，2μldNTPs，0.5μl引物组，热启动Taq酶0.15μl，基因组模板80mg，添加超纯水至总体积为25μl。
将装有反应溶液的Eppendorf试管放入ABI9700PCR仪中，设置反应条件如下：预变性95℃3min；热循环94℃30s，60℃30s，72℃30s，35个循环；延伸72℃3min。反应结束后，取出试管。
由于21管PCR扩增反应是在同一台PCR仪上同步进行的，为了实现检测的高效性、特异性，要求40条PCR引物的Tm值相近，为此需要先进行大量的DNA序列软件分析来设计PCR引物，并通过大量的实验来进行Tm值的优化并确定设计的合理性，本试剂盒各基因SNP多态性的检测是既相对独立又相互联系的，不可分割。
（3）琼脂糖凝胶电泳检测
将扩增后的产物进行琼脂糖电泳检测，过程如下：3g琼脂糖，加入100mL去离子水，微波炉加热1min，冷却到60℃时加入5μLGoldview染色液，制成3%的琼脂糖凝胶。PCR产物10μL与6×TBE缓冲液0.8μL混合上样，电压100V电泳15min。紫外灯下读取结果并拍照，所得琼脂糖电泳检测图如图1所示。
检测得到10个基因分型结果如下：
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
核苷酸序列表
<110>武汉白原科技有限公司
<120>一种人体对日常饮食反应的检测试剂盒和方法
<130>1
<160>40
<170>PatentInversion3.3
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<213>人工序列
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ctgcaggcatacacta16
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<213>人工序列
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cacagttttcacttc15
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ccaagagtgatttctgc17
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<212>DNA
<213>人工序列
<400>40
tttgatgccaaaatgc16
Claims (7)
1.日常饮食反应基因检测试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，其特征在于：存放的试剂包括：
（1）针对10个基因SNP多态位点的PCR反应引物组（以下引物序列方向均为5’端至3’端）：
针对SNPRS671的引物组：
1CTGCAGGCATACACTA
2CACAGTTTTCACTTC
3CCAAGAGTGATTTCTGC
4GCAGGTCCTGAACTTCCAG
针对SNPRS2187668的引物组：
1GGCAGCTGAGAGTAAA
2CCACATGGTCCTCAC
3GTGAAGCTATATCTGTAATAG
4GAAGTGTCATTCTC
针对SNPRS762551的引物组：
1GTGAGCTCTGTGGGCA
2CATCTACCATGCGTCCTGG
3GCATGCATGCTGTGCCAG
4GACTGGGACAATGCCATC
针对SNPRS4988235的引物组：
1CAGATAAGATAATGTAGC
2GTTCCTTTGAGGCCAGGGA
3GAGACGATCACGTCATAG
4CAAACCCCCTTTTCAAAG
针对SNPRS713598的引物组：
1CAATCACTGTTGCTCAGTGC
2GTAGTGAAGAGGCAGC
3GACTCTAACTCGCATC
4GGAAGGTGTGAGAGAAAC
针对SNPRS1800544的引物组：
1CTGCTCCGTCGGCCCC
2GTTGGCCATGCAGCTCC
3CTCCAGACGTAACTCACAC
4CAAGCGTTGCTGAG
针对SNPRS5400的引物组：
1GCAGTTGGTGGAATGAC
2CCAAAGAATGATGCAA
3TGGATGACCGAAAAG
4ATGCGCATAGGGTCATG
针对SNPRS1726866的引物组：
1GTGATATCATCCTGTGC
2CACAGAGATGAAGGCAA
3CTCTTCTGCTATCTGTG
4AAGAGGCATTTCATGT
针对SNPRS16983422的引物组：
1GTGTAAGATGATGTAAA
2GTCTAAATTATGTTC
3GTTATTTGGATAGACATAG
4TTTCTCAGCATGTGC
针对SNPRS11674786的引物组：
1CATAAAACCTAGCTCA
2GAACTCAAGACAGAAG
3CTGTGGAACATGAAG
4TTTGATGCCAAAATGC
（2）PCR扩增试剂；
（3）琼脂糖凝胶电泳分析试剂。
2.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述引物用量均为0.5-1.0μl。
3.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增试剂包括：10×PCR缓冲液，dNTPs，热启动Taq酶，基因组模板。
4.根据权利要求3所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR缓冲液包含：100mMTris-HClpH8.3，500mMKCl，15mMMgCl2。
5.根据权利要求3所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增试剂用量为：10×PCR缓冲液2.5μl，dNTPs2μl，热启动Taq酶0.1-0.2μl，基因组模板50-100ng。
6.根据权利要求1所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述琼脂糖凝胶电泳分析试剂包括：琼脂糖、TAE缓冲液、DNA分子量标准、DNA无毒染料和DNA上样缓冲液。
7.根据权利要求6所述的日常饮食反应基因检测试剂盒，其特征在于：所述DNA无毒染料优选BiotiumGelred无毒染料。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107674911A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-02-09 | 银川安龙基因科技有限公司 | 一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法 |
| CN108642152A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-10-12 | 深圳鼎新融合科技有限公司 | 基因分型检测的试剂盒及方法 |
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-
2014
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