CN105586275A - 高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂 - Google Patents

高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂。高山被孢霉突变株(高山被孢霉Y16，MortierellaalpineY16)于2015年7月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC？NO:M2015421。使用该高山被孢霉突变株生产的花生四烯酸油脂中，甘油三酯含量为92wt％以上，油脂中花生四烯酸含量至少为48wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于6.3wt％。

Description

高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂
技术领域
本发明涉及高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂。
背景技术
微生物油中存在多种不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸主要包括单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，它们均对人体健康有很大益处。多不饱和脂肪酸包括二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、花生四烯酸(ARA)等，它们在体内具有降血脂、改善血液循环、抑制血小板凝集、阻抑动脉粥样硬化斑块和血栓形成等功效，对心脑血管病也有良好的防治效果。
花生四烯酸油脂目前已经进入工业化生产阶段，但是，目前研究多只关注于油脂中花生四烯酸的含量，却忽略了油脂中其他成分，特别是长链饱和脂肪酸的含量。而长链饱和脂肪酸的含量对油脂的品质影响非常大，如花生四烯酸油脂中长链饱和脂肪酸在体系中所占的比例对油脂的凝固点起着决定作用，特别是二十碳以上的饱和脂肪酸，例如花生酸(C20:0)，山嵛酸(C22:0)，木蜡酸(C24:0)等，并且饱和脂肪酸的凝固点一般是随烷基碳链长度(即碳原子数)的增加而增加。目前，市售高山被孢霉所生产的花生四烯酸油脂产品中，二十碳以上的长链饱和脂肪酸的含量在20wt％左右。该油脂在12℃时即会析出饱和脂肪酸、出现体系浑浊的现象，这样就影响了花生四烯酸油脂的质量。此外，长链饱和脂肪酸摄入量过高是导致血胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高的主要原因，继发引起动脉管腔狭窄，形成动脉粥样硬化，增加患冠心病的风险，因此降低长链饱和脂肪酸的含量，同时提高油脂中花生四烯酸的含量(可降低花生四烯酸油脂的用量从而进一步降低长链饱和脂肪酸的添加量)则成为花生四烯酸油脂品质提高另一个重要的课题。
中国发明专利公开号为CN1362522A的专利申请公开了一种以高山被孢霉为出发菌株进行粒子束诱变的方法得到一种花生四烯酸产量较高的菌株。但是，本发明未提及如何降低长链饱和脂肪酸的含量。中国发明专利公布号为CN101709297的专利申请公开了一种采用紫外的方法对高山被孢霉进行诱变，从而能生产出较高产量的花生四烯酸。但是，本发明也未提及如何降低长链饱和脂肪酸的含量。中国发明专利公开号为CN1662642的专利涉及一种微生物油，含有至少90％的甘油三酯，PUFA含量为至少40％，其过氧化值(POV)低于1.5(或1.0)，和/或其茴香胺值(AnV)低于15，可选地，低于12。本申请主要关注的也只是微生物油脂中不饱和脂肪酸的含量、过氧化值及茴香胺值等，而并未提及长链饱和脂肪酸的含量。
中国发明专利公开号为CN103571896A的专利申请公开了一种利用高山被孢霉突变株生产花生四烯酸油脂的方法及其生产的花生四烯酸油脂，该专利利用高山被孢霉突变株生产的花生四烯酸油脂中，二十碳以上长链饱和脂肪酸的总含量比较低(低于15wt％)，但该专利所得到的花生四烯酸含量最高为44.56％，二十碳以上长链饱和脂肪酸的总含量最低为7.5％。
因此，有必要开发出新的高山被孢霉菌种，进一步的提升花生四烯酸的含量，并降低长链饱和脂肪酸的总含量。而有一点需要特别指出的是：花生四烯酸含量每一个百分比的提高都是很难的而且随着花生四烯酸含量越高，花生四烯酸含量提高难度则越大。如果要在对比文件1的基础上进一步提高花生四烯酸的含量(最高为44.56％)，更是难上加难。本发明则在CN103571896A所提到的菌种基础上通过大量的创造性劳动，进行了大量的诱变筛选，才获得了目前本专利所请求保护的新菌种。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的高山被孢霉突变株、利用其生产花生四烯酸油脂的方法及花生四烯酸油脂。由该高山被孢霉突变株制得的花生四烯酸油脂中，具有高花生四烯酸含量和低长链饱和脂肪酸含量。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为；
提供高山被孢霉突变株(高山被孢霉Y16，MortierellaalpineY16)，该菌株于2015年7月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2015421。
上述高山被孢霉突变株在生产具有高含量花生四烯酸和低含量长链饱和脂肪酸的花生四烯酸油脂中的应用。
利用上述高山被孢霉突变株生产花生四烯酸油脂的方法，其特征在于：将所述的高山被孢霉突变株发酵，收集发酵产物，后处理即得花生四烯酸油脂。
一种利用上述高山被孢霉突变株生产的花生四烯酸油脂，其特征在于：所述花生四烯酸油脂含有至少92wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为48.4wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于6.3wt％。所述的二十碳以上的长链饱和脂肪酸包括花生酸、山嵛酸、木蜡酸。
优选地，所述花生四烯酸油脂含有至少93.7wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为52.1wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于5.6wt％。
优选地，所述花生四烯酸油脂含有至少94.9wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为54.8wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于5.2wt％。
本发明具有如下有益效果：利用该发明所述的高山被孢霉突变株生产花生四烯酸油脂的方法生产的花生四烯酸油脂中，花生四烯酸含量最高可达到54.8wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量最低可低至5.2wt％。该油脂在较低温度下也不会凝固结晶，可保持清亮透明，具有较高的品质。
附图说明
图1为本发明单菌落的显色图。
图2为高山被孢霉菌株MortierellaalpineY16与相关种的ITSrDNA序列系统发育树。
具体实施方式
以下实施例用来详细说明本发明的具体内容，但本发明并不限于以下实施例的内容。
实施例1
高山被孢霉突变株的选育方法
(1)取CCTCCNO:M2013419菌种作为出发菌株，该菌株由嘉必优生物工程(武汉)有限公司于2013年9月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2013419。
(2)将菌种接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上在28℃恒温条件下培养8天至孢子成熟。
(3)通过纱布或滤纸过滤得到纯的孢子液，将孢子液注入到无菌培养皿上经过紫外灯照射,紫外灯照射距离为15厘米，照射时间为120秒，紫外灯的功率为30瓦。
(4)经过紫外诱变后的孢子液经无菌风风干，成为菌斑。将含菌斑的培养皿无菌移入高能粒子束注入机中，经过高能离子束注入诱变。
(5)将菌斑用无菌水洗脱，稀释，涂于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上进行培养，马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板中添加75ppm浓度的2，3，5—氯化三苯基四氮唑(TTC)，由于TTC可作为脱氢酶活性指示剂，当菌体内有脱氢酶时，其可在TTC指示剂作用下直接在平板上显色，由此根据显色深浅可判断单菌落的脱氢酶活性的高低，而花生四烯酸的产生与脱氢酶活性的高低非常相关，进而可找到花生四烯酸含量较高的单菌落。单菌落的显色见图1。
(6)在平板上挑取颜色较深的单菌落进行液体摇瓶培养，根据各菌获得的微生物油酯的脂肪酸分布，选取甘油三酯含量超过90wt％且花生四烯酸中长链饱和脂肪酸花生酸(C20:0)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)总含量最低(低于7wt％)的菌和花生四烯酸含量最高的菌(高于52wt％)的菌种作为下一次诱变的出发菌株。经过反复200次诱变，得到本发明的高山被孢霉突变株，该菌株于2015年7月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2015421。
上述高山被孢霉菌株CCTCCNO:M2015421具有以下生理生化特性：
(1)生长于PDA斜面培养基，在28℃下生长3天后，在培养基表面会形成白色菌落，4天后生长进入对数生长期，气生菌丝颜色雪白，7天后，菌丝布满整个斜面；部分菌落会形成乳白色油脂堆积物，菌丝包藏于堆积物内。10天后，部分菌丝生长出黄色孢子。(2)最适宜培养温度为25～27℃；
(3)诱变菌株发育树如图2所示。从图2可看出：诱变得到的菌株根据rDNA内转录间隔区ITS(ITSrDNA)鉴定结果，可判断诱变菌株为高山被孢霉。
实施例2
利用高山被孢霉突变株生产花生四烯酸
a)孢子悬浮液准备：分别取市售的高山被孢霉和本发明所使用的高山被孢霉(保藏编号：CCTCCM2015421)接种到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上，25-27℃培养10天至孢子成熟，后将马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上的孢子和菌丝刮到装有20毫升无菌水，震荡获得孢子悬浮液。
b)摇瓶种子培养：将步骤(1)的孢子悬浮液接种到放有培养基的种子瓶中，接种量15％(体积比)，置于27℃，220转/分钟的摇床上培养72小时，所述培养基为：碳源蔗糖35g/l；氮源酵母浸粉12g/l；pH7。
c)种子扩大培养：最终发酵罐培养采用50L的容积，因此种子罐选用10L种子扩大发酵罐。将步骤(2)的摇瓶种子发酵液接种到种子罐中进行种子扩大培养，其中的种子培养基碳源蔗糖35g/l；氮源酵母浸粉12g/l，控制pH7，发酵温度为28℃，搅拌速度220转/分钟，通气量1vvm(L/L.min)，罐压0.1Mpa，培养42h。
d)发酵培养：种子罐中菌浓达到20％后，通过移种管道接入到装有30L发酵培养基的50L发酵罐中进行培养，接种量15％(体积比)，发酵罐控制温度28℃，搅拌速度220转/分钟，通气量1vvm(L/L.min)，罐压0.1Mpa，培养170h。发酵过程中通过流加碳源来控制发酵液中碳源浓度在10g/L，所述发酵罐中的发酵培养基为：碳源蔗糖35g/l；氮源酵母浸粉12g/l；pH7。
e)后处理：将发酵培养得到的发酵液分离，得到湿菌体，烘干得到干菌体40g。向干菌体中加入萃取剂正己烷进行萃取，萃取后分离得到的固相物转入萃取容器中进行重复萃取，如此，直至萃取液中无油时结束萃取过程，第一次萃取时加入200毫升正己烷，之后每次加入150毫升正己烷，将每次萃取充后过滤分离得到的混合油，脱溶，得到微生物油酯。
f)将该微生物油脂进行气相色谱分析，同时进行凝固点试验，该微生物油脂中的主要不饱和脂肪酸和长链饱和脂肪酸的含量包括棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)、γ-亚麻酸(C18:3)、花生酸(C20:0)、二十碳三烯酸(C20:3)、花生四烯酸(C20:4)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)如下：
表1实施例2中花生四烯酸油脂中各脂肪酸含量
对照菌种(wt％) 本发明所用菌种(wt％)
十四烷酸(C14:0) 1.11 1.10
棕榈酸(C16:0) 9.68 9.20
棕榈一烯酸(C16:1) 0.23 0.26
硬脂酸(C18:0) 10.75 10.33
油酸(C18:1) 8.97 8.67
亚油酸(C18:2) 7.95 7.26
γ-亚麻酸(C18:3) 3.11 2.82
二十碳三烯酸(C20:3) 6.92 5.20
花生四烯酸(C20:4) 43.87 48.40
花生酸(C20:0) 1.46 1.20
山嵛酸(C22:0) 3.23 2.56
木蜡酸(C24:0) 2.98 2.51
由表2分析可知，本发明用高山被孢霉突变株菌种所制备的花生四烯酸油脂中，三种长链饱和脂肪酸，即花生酸(C20:0)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)的总含量为6.27wt％，明显低于对照菌种所制备的花生四烯酸油脂中三种长链饱和脂肪酸的总含量(7.67wt％)，同时花生四烯酸含量为48.4％，明显高于对照菌种的43.87％。所制备的花生四烯酸油脂含有92wt％的甘油三酯。
实施例3
利用高山被孢霉突变株生产花生四烯酸
a)孢子悬浮液准备：分别取市售的高山被孢霉和本发明所使用的高山被孢霉突变株(保藏编号：CCTCCM2015421)接种到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上，25-27℃培养10天至孢子成熟，后将马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上的孢子和菌丝刮到装有30毫升无菌水，震荡获得孢子悬浮液。
b)摇瓶种子培养：将步骤(1)的孢子悬浮液接种到放有培养基的种子瓶中，接种量20％(体积比)，置于30℃，300转/分钟的摇床上培养80小时，所述培养基为：碳源蔗糖50g/l；氮源酵母浸粉12g/l；pH8.5。
c)种子扩大培养：最终发酵罐的体积为50m3，依次选用容积为100L，1.7m3，12m3，50m3的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％(体积比)，培养过程工艺控制为：温度30℃，搅拌速度300转/分钟，通气量1.5vvm(L/L.min)，培养时间48h。所述种子罐中的种子培养基为：碳源淀粉50g/l；氮源酵母浸膏20g/l；pH8.5，将上述步骤的摇瓶培养液逐级扩大培养。
d)发酵培养：待12m3种子罐中的菌浓达到30％(体积比)后，通过移种管道接入到装有30m3发酵培养基的50m3发酵罐中进行培养，接种量20％(体积比)，发酵罐控制温度30℃，搅拌速度180转/分钟，通气量1.5vvm(L/L.min)，罐压0.17Mpa，培养180h。发酵过程中通过流加碳源来控制发酵液中碳源浓度在18g/L，所述发酵罐培养基为：碳源淀粉50g/l；氮源酵母浸膏20g/l；pH8.5。
e)后处理：将发酵培养得到的发酵液分离，得到湿菌体，烘干得到干菌体50g。向干菌体中加入萃取剂正己烷进行萃取，萃取后分离得到的固相物转入萃取容器中进行重复萃取，如此，直至萃取液中无油时结束萃取过程，第一次萃取时加入200毫升正己烷，之后每次加入150毫升正己烷，将每次萃取充后过滤分离得到的混合油，脱溶，得到花生四烯酸油酯。
f)将该微生物油脂进行气相色谱分析，同时进行凝固点试验，该微生物油脂中的主要不饱和脂肪酸和长链饱和脂肪酸的含量包括棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)、γ-亚麻酸(C18:3)、花生酸(C20:0)、二十碳三烯酸(C20:3)、花生四烯酸(C20:4)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)如下：
表2实施例3中花生四烯酸油脂中各脂肪酸含量
由表3分析可知，本发明用高山被孢霉突变株菌种所制备的花生四烯酸油脂中，三种长链饱和脂肪酸，即花生酸(C20:0)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)的总含量为5.55wt％，明显低于对照菌种所制备的花生四烯酸油脂中三种长链饱和脂肪酸的总含量(7.60wt％)，同时花生四烯酸含量为52.1％，明显高于对照菌种的44.56％。所制备的花生四烯酸油脂含有93.7wt％的甘油三酯。
实施例4
利用高山被孢霉突变株生产花生四烯酸
a)孢子悬浮液准备：分别取市售的高山被孢霉和本发明所使用的高山被孢霉突变株(保藏编号：CCTCCM2015421)接种到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上，25-27℃培养10天至孢子成熟，后将马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上的孢子和菌丝刮到装有30毫升无菌水，震荡获得孢子悬浮液。
b)摇瓶种子培养：将步骤(1)的孢子悬浮液接种到放有培养基的种子瓶中，接种量20％(体积比)，置于30℃，300转/分钟的摇床上培养50小时，所述培养基为：碳源蔗糖50g/l；氮源酵母浸粉12g/l；pH8.5。
c)种子扩大培养：最终发酵罐的体积为200m3，依次选用容积为10L，50L，5m3，50m3的种子罐扩大培养种子液，种子罐中培养基装量为60％(体积比)，培养过程工艺控制为：温度30℃，搅拌速度200转/分钟，通气量1.5vvm(L/L.min)，培养时间48h。所述种子罐中的种子培养基为：碳源淀粉50g/l；氮源酵母浸膏20g/l；pH8.5，将上述步骤的摇瓶培养液逐级扩大培养。
d)发酵培养：待50m3种子罐中的菌浓达到30％(体积比)后，通过移种管道接入到装有130m3发酵培养基的200m3发酵罐中进行培养，接种量20％(体积比)，发酵罐控制温度30℃，搅拌速度300转/分钟，通气量1.5vvm(L/L.min)，罐压0.15Mpa，培养180h。发酵过程中通过流加碳源来控制发酵液中碳源浓度在20g/L，所述发酵罐培养基为：碳源淀粉50g/l；氮源酵母浸膏20g/l；pH8.5。
e)后处理：将发酵培养得到的发酵液分离，得到湿菌体，烘干得到干菌体50g。向干菌体中加入萃取剂正己烷进行萃取，萃取后分离得到的固相物转入萃取容器中进行重复萃取，如此，直至萃取液中无油时结束萃取过程，第一次萃取时加入200毫升正己烷，之后每次加入150毫升正己烷，将每次萃取充后过滤分离得到的混合油，脱溶，得到花生四烯酸油酯。
f)将该微生物油脂进行气相色谱分析，同时进行凝固点试验，该微生物油脂中的主要不饱和脂肪酸和长链饱和脂肪酸的含量包括棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)、γ-亚麻酸(C18:3)、花生酸(C20:0)、二十碳三烯酸(C20:3)、花生四烯酸(C20:4)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)如下：
表3实施例4中花生四烯酸油脂中各脂肪酸含量
对照菌种(wt％) 本发明所用菌种(wt％)
十四烷酸(C14:0) 1.15 1.20
棕榈酸(C16:0) 9.67 6.90
棕榈一烯酸(C16:1) 0.22 0.29
硬脂酸(C18:0) 10.56 9.80
油酸(C18:1) 9.12 7.85
亚油酸(C18:2) 8.1 6.78
γ-亚麻酸(C18:3) 3.15 2.65
二十碳三烯酸(C20:3) 6.82 4.30
花生四烯酸(C20:4) 44.93 55.00
花生酸(C20:0) 1.45 1.00
山嵛酸(C22:0) 3.13 2.02
木蜡酸(C24:0) 2.94 2.09
由表3分析可知，本发明用高山被孢霉突变株菌种所制备的花生四烯酸油脂中，三种长链饱和脂肪酸，即花生酸(C20:0)、山嵛酸(C22:0)、木蜡酸(C24:0)的总含量为5.11wt％，明显低于对照菌种所制备的花生四烯酸油脂中三种长链饱和脂肪酸的总含量(7.52wt％)，同时花生四烯酸含量为55.00％，明显高于对照菌种的44.93％。所制备的花生四烯酸油脂含有94.9wt％的甘油三酯。
综合以上实施例可以看出，利用本发明所述的高山被孢霉突变株生产的花生四烯酸油脂，其二十碳以上长链饱和脂肪酸的总含量进一步降低(与对比菌株相比，本发明菌株至少可降低18％左右)，最低可降至5.11％，从而使得花生四烯酸油脂的凝固点进一步降低，且由于长链饱和脂肪酸含量的降低，可大大降低血胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高的概率，而花生四烯酸的含量也有较大程度的提高((与对比菌株相比，本发明菌株至少可提高10％左右)，最高可达到55％。由此也可降低花生四烯酸油脂的用量，从而进一步降低长链饱和脂肪酸的添加量，因此，新的突变株生产的花生四烯酸油脂的品质获得进一步提升。

Claims (6)

1.高山被孢霉突变株，其特征在于：所述高山被孢霉突变株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2015421。
2.权利要求1所述的高山被孢霉突变株在生产具有高含量花生四烯酸和低含量长链饱和脂肪酸的花生四烯酸油脂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：应用方法为：将权利要求1所述的高山被孢霉突变株发酵，收集发酵产物，后处理即得花生四烯酸油脂。
4.一种利用权利要求1所述的高山被孢霉突变株生产的花生四烯酸油脂，其特征在于：所述花生四烯酸油脂含有至少92wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为48.4wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于6.3wt％。
5.根据权利要求3所述的花生四烯酸油脂，其特征在于：所述花生四烯酸油脂含有至少93.7wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为52.1wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于5.6wt％。
6.根据权利要求3所述的花生四烯酸油脂，其特征在于：所述花生四烯酸油脂含有至少94.9wt％的甘油三酯，油脂中花生四烯酸含量至少为54.8wt％，二十碳以上长链饱和脂肪酸含量低于5.2wt％。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110760549A (zh) * 2019-11-12 2020-02-07 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种高山被孢霉发酵生产花生四烯酸的方法
CN112625912A (zh) * 2020-09-09 2021-04-09 中国科学院微生物研究所 一株高山被孢霉菌株xy05201及其应用
EP3795691A4 (en) * 2018-05-17 2022-04-27 Liang, Yun METHOD FOR ADJUSTING THE COMPONENTS OF A FATTY ACID COMPOSITION IN A MICROBIAL OIL OF MORTARELLA
EP4023761A4 (en) * 2019-11-26 2023-10-25 Qu, Hanpeng MORTIERELLA ALPINA AND ITS USE, AND MICROBIAL OIL RICH IN ARA IN SN-2 POSITION, THEIR PREPARATION METHOD AND THEIR USE

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667068A (zh) * 2012-09-14 2014-03-26 罗盖特兄弟公司 一种由微生物（单细胞真菌高山被孢霉）产生的富含花生四烯酸的油及其制备工艺

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667068A (zh) * 2012-09-14 2014-03-26 罗盖特兄弟公司 一种由微生物（单细胞真菌高山被孢霉）产生的富含花生四烯酸的油及其制备工艺
CN104662147A (zh) * 2012-09-14 2015-05-27 罗盖特兄弟公司 微生物(单细胞真菌高山被孢霉)的富含花生四烯酸的油及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PRAMOD K.BAJPAI ET AL.: "Production of arachidonic acid by Mortierella alpina ATCC32222", 《JOURNAL OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3795691A4 (en) * 2018-05-17 2022-04-27 Liang, Yun METHOD FOR ADJUSTING THE COMPONENTS OF A FATTY ACID COMPOSITION IN A MICROBIAL OIL OF MORTARELLA
CN110760549A (zh) * 2019-11-12 2020-02-07 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种高山被孢霉发酵生产花生四烯酸的方法
CN110760549B (zh) * 2019-11-12 2023-06-20 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种高山被孢霉发酵生产花生四烯酸的方法
EP4023761A4 (en) * 2019-11-26 2023-10-25 Qu, Hanpeng MORTIERELLA ALPINA AND ITS USE, AND MICROBIAL OIL RICH IN ARA IN SN-2 POSITION, THEIR PREPARATION METHOD AND THEIR USE
CN112625912A (zh) * 2020-09-09 2021-04-09 中国科学院微生物研究所 一株高山被孢霉菌株xy05201及其应用

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