CN105579839B - 电泳基质染色组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于与包含经分离的生物聚合物的基质例如电泳凝胶一起使用的染色组合物和方法。所述组合物包含酸、有机溶剂和主要由非纤维素材料组成的通常平面的、流体可渗透的凝胶接触层。酸和有机溶剂可以吸附至流体可渗透的凝胶接触片，或可以吸附至可与凝胶接触片的非凝胶接触侧接触的层。在一个实施方案中，组合物是包含染色试剂的源电泳染色组合物。在一个实施方案中，组合物是包含吸附剂的槽电泳染色组合物。
Description
本申请要求2013年9月26日提交的美国专利申请系列号61/882,951的优先权，其通过引用以其整体明确地并入本文。
用于使用电场对基质中的生物聚合物例如蛋白质、核酸、寡糖等进行染色的组合物(也称为消耗品)和方法。染色组合物具有用于与基质接触的流体可渗透片。在一个实施方案中，流体可渗透片主要是非纤维素材料例如聚酯或聚酯共混物，并且在一个实施方案中是非聚合的非纤维素材料，例如，天然纤维材料。组合物包含含有染色试剂的源接触片以及槽(sink)接触片，其中所述染色试剂与生物聚合物相互作用、缔合和/或结合。本发明的方法使用电场，利用这些源接触片和槽接触片对生物聚合物染色。在实施方案中，组合物是高吸收性、液体保持性和流体可渗透性的，其通过提供光滑表面、均匀的稠度和用于改善与基质表面的适应性的柔韧性中的至少一种来最大化与基质的接触。不受单一理论的约束，所公开的组合物与基质之间接触的最大化提供了电场电流的均匀传输并引起改善的染色和脱色。
美国专利申请公开号2010/0326828公开了用于在凝胶电泳后染色生物聚合物的组合物和方法，其使用纸材料，特别是吸水纸。染色溶液包含染色剂例如考马斯蓝R-250或G-250，其被预吸收或施加至多孔材料例如吸水纸。含有溶液的吸水纸被定位为与电泳凝胶的一侧接触，并且第二吸水纸(缺乏染料)被定位为与凝胶的另一侧接触，从而形成组装体。这个组装体被布置在一对电极之间并对电极且跨组装体施加DC电压。电极之间的电压差导致染料迁移出含有溶液的吸水纸并进入凝胶，其中该染色剂结合至凝胶基质中的生物聚合物。保持电压差以使任何未结合的染色剂完全迁移通过凝胶并进入第二吸水纸中，从而使凝胶基质脱色但不使基质中的生物聚合物脱色。组合物和方法替代了用于染色电泳分离物的被动的扩散驱动的过程；这些过程可能需要几个小时来完成，而主动的电驱动染色过程需要短至6分钟的时间。
如所述的，申请号2010/0326828使用纸材料例如滤纸、吸水纸、纸垫等，其是纤维素产品。商购可得的2.0蛋白染色系统(GenScript USA,Inc.,Piscataway NJ)基于棉纤维素纤维纸。
在电驱动染色方法中使用这些纤维素材料产生非期望的效果，例如电泳凝胶中高的背景和/或斑点背景。不受限于特定的理论，这样的非期望的背景因纸材料的不均匀和相对硬的表面(其不提供与基质表面的实质最大和/或均匀的接触)而产生。尽管申请号2010/0326828中公开的方法增加了速度，但其所得的高背景迫使在染色时间和低背景水平之间进行权衡，类似于扩散驱动的过程，这往往进行过夜以基本上完全去除背景和改善自动指纹检测方法和定量方法的精度和/或准确性。
本文公开的组合物和方法使用利用电驱动染色方法实现的减少的染色时间并且还提供实质性改善的染色背景(其是低且均匀的)。本文公开的组合物和方法对于例如在电泳指纹检测方法和定量方法中使用的半自动化或全自动化电泳分离过程是有用的并且在其中使用。
一个实施方案是包含含有染色溶液(即溶解于合适的溶剂中的染色剂)的源片和含有合适的溶液例如脱色溶液的一个或多个槽片的电泳染色组合物，其包括其中源片是多个片的实施方案。所述片是主要地非纤维素材料或纤维素共混物的通常平面的、流体可渗透的接触片。染色溶液和/或脱色溶液可以吸附到流体可渗透的接触片，或可以吸附到可与接触片的非基质接触侧接触的储存层。在一个结构中，源片是包含染色剂的源电泳染色组合物。在另一个结构中，槽片是包含脱色溶液的槽电泳染色组合物。
一个实施方案是电泳染色试剂盒。所述试剂盒包含酸、有机溶剂、染色试剂(即染色剂)和主要地非纤维素材料的第一通常平面的、流体可渗透的接触片的第一组合物。酸、有机溶剂和染色剂的任何一种或多种可以吸附到流体可渗透的接触片，或可以吸附到与第一接触片的非基质接触侧接触的储存层。该试剂盒还包含合适的溶液例如脱色溶液和主要地非纤维素材料的第二通常平面的、流体可渗透的接触片的第二组合物。吸附剂可以是第二凝胶接触片的非主要成分，或者可以是与第二接触片的非基质接触侧接触的吸附层。
一个实施方案是对包含生物聚合物的基质例如电泳凝胶进行染色的方法。该方法包括(a)制备或构建(i)包含生物聚合物的电泳凝胶、(ii)具有与电泳凝胶的一侧直接接触的基质接触侧的主要地非纤维素材料的第一通常平面的、流体可渗透的接触片和(iii)具有与电泳凝胶的相对侧直接接触的基质接触侧的主要地非纤维素材料的第二通常平面的、流体可渗透的接触片的组装体；(b)将该组装体定位在第一电极和第二电极之间并与所述电极电接触；以及(c)对电极且跨组装体施加DC电流。在施加电流之前，给第一接触片提供染色溶液，并且给第二接触片提供至少一种合适的溶液，例如脱色溶液。
在各实施方案中，通常平面的、流体可渗透的接触片主要由非纤维素材料组成，但不一定是无纤维素的。例如，凝胶接触片可以由聚酯或聚酯纤维素共混物制造，其中所述片主要是聚酯但包含较少部分的纤维素，例如非织造纤维素纤维。
附图简述
本专利或申请文件包含至少一个彩色附图。具有彩色绘图的本专利或专利申请公布的副本将在请求并支付必要的费用后由专利局提供。
图1A、B、C、D是利用2.0蛋白染色系统使用所提供的吸水纸作为凝胶接触染色溶液载体和脱色槽接触片处理的电泳凝胶(图1A，1B)和使用常规考马斯染色方案染色的凝胶(图1C，1D)的照片。
图2A-B比较使用滤纸或聚酯纤维素材料作为凝胶接触染色溶液载体和脱色槽接触片的电泳染色程序过程中的电阻(图2A)和产生的的温度(图2B)。
图3A-B是在GenScript eStain 2.0蛋白染色系统上利用美国专利申请公开号2010/0326828的程序，使用吸水垫作为凝胶接触染色溶液载体和脱色槽接触片(图3A)相较于使用聚酯纤维素材料(图3B)所处理的电泳凝胶的照片。
图4A、B、C是在G2Fast Blotting仪器上利用美国专利申请公开号2010/0326828的程序，使用吸水垫作为凝胶接触染色溶液载体和脱色槽接触片(图4A)相较于使用聚酯纤维素材料(图4B，4C)所处理的电泳凝胶的照片。
图5A、B、C、D是在G2Fast Blotting仪器上使用商购可得的考马斯染色剂根据常规方法染色的电泳凝胶(图5C，5D)，相较于使用聚酯纤维素作为染色和脱色垫来电染色的凝胶(图5A，5B)的照片。
生物聚合物包括，但不限于，肽、蛋白质、RNA、DNA、单链寡核苷酸、双链寡核苷酸、寡糖及其任何复合物、修饰物、衍生物等。复合物的实例包括，但不限于，多肽-多肽复合物、RNA-多肽复合物、DNA-多肽复合物、多核苷酸-多核苷酸复合物等。
基质材料包括其中生物聚合物与基质缔合、浸渍在基质内、与基质结合、吸附至基质的任何材料。在一个实施方案中，基质被配置为在电场中使用，通常为凝胶，例如SDS-聚丙烯酰胺凝胶或非变性凝胶，但也包括在已知的电泳过程中使用的膜、过滤介质等。在一个实施方案中，生物聚合物包含在存在于基质上或与基质关联的细胞和/或组织内，所述基质为例如多孔基材，例如，多孔滤纸。在实施方案中，使用本领域中已知的方法固定细胞，并且组织是可以根据本领域中已知的方法固定和制备的组织切片。
术语“吸附”包括吸附、吸收和流体因表面张力和相关的力而保持在纤维之间或纤维的多孔结构内或中空纤维中。
在一个实施方案中，用于染色或以其它方式标记基质中的生物聚合物的组合物包含染色试剂、酸、有机溶剂、染色剂、以及至少一个通常平面的接触片。在实施方案中，用于染色的组合物可以包含添加剂例如盐，螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)，固定剂等。与本领域中已知的多孔性、通常纸质的材料相反，本文公开的接触片是主要地非纤维素材料的流体可渗透的片材，其表现出与基质接触的基本上均匀的(例如，无孔的)表面。在一个实施方案中，所述片材可以主要由聚酯组成，并且可以是织造聚酯纤维或非织造聚酯纤维的形式。在一个实施方案中，片材可以可以主要由聚酯组成，但还可以包含聚酯纤维素共混物。例如，片材可以是织造的或非织造的聚酯纤维和棉纤维素纤维共混物和/或毡(felt)的形式。在实施方案中，片材可以主要是聚丙烯酰胺、多糖和/或琼脂糖。在实施方案中，片材可以主要地是如所描述的，但包含与纤维素、氧化铝、氧化硅等的混合物或共混物。
可以在本文公开的组合物中使用的材料的具体实例包括如在Contec Quiltec I擦拭巾中的织造聚酯，如在Contec SAT擦拭巾或LymTech Scientific C3SH擦拭巾中的非织造聚酯，如在LymTech Scientific C30Poly/Cellulose擦拭巾中的非织造聚酯纤维素，如在Contec Amplitude Ecotech擦拭巾中的非织造聚酯纤维素，聚酯纤维素，如在包含热粘结内纤维素层的LymTech Scientific 7408Compo擦拭巾中的非织造聚丙烯，聚丙烯和聚丙烯共混物，例如具有聚丙烯层和纤维素内层的多层片材，以及聚丙烯酰胺例如PiercePrecise Tris-Glycine凝胶。
酸可以是有机酸，例如，乙酸，柠檬酸，磺基水杨酸，磷酸，盐酸，硫酸等，并且可以是在约0.1％v/v至约20％v/v的范围内的浓度。通常地，酸可以是已知用于电泳分离的任何酸或酸的混合物，并且用于将生物聚合物在执行染色方法的过程中固定在电泳凝胶内。在一个实施方案中，组合物的液相包括百分之五(5％)的乙酸。
有机溶剂可以是水溶性溶剂，例如乙醇，甲醇，异丙醇等，并且可以是在约1％v/v至约50％v/v的范围内的浓度。通常，有机溶剂可以是适合用于与电泳分离目标和所选择的染色剂一起使用的任何溶剂或溶剂的混合物。在一个实施方案中，组合物的液相包括25％v/v的乙醇。在一个实施方案中，组合物的液相包括25％v/v的异丙醇。
任选地，组合物可以包含缓冲剂，例如磷酸钠，Tris，MES，MOPS等，并且可以是在约0.1％至约10％的范围内的浓度，并且在约pH 2至约pH 11的pH。在一个实施方案中，组合物的液相包括磷酸钠缓冲液。
在一个实施方案中，组合物是包含染色试剂(即染色剂)的源组合物。在一个实施方案中，染色剂是蛋白质染色剂，例如，已知的蛋白质染色剂包括考马斯蓝R-250或考马斯蓝G-250，浓度范围为约0.01％w/v至约5％w/v。可以使用包括生色、荧光、化学发光或生物发光分子的其它疏水性或带电荷的染色剂，包括用于检测蛋白质修饰例如磷酸化、糖基化、乙酰化、亚硝基化、SUMO化、表位标签的染色剂，银染剂，以及金属-蛋白质络合物染色剂。可以使用用来标记生物聚合物例如非蛋白生物聚合物用于其它检测手段的其它染色试剂，包括抗体、核酸、Fab、scFv抗体、适体、树状高分子、量子点、SYBR Green、SYTO 61、TOTO-3、溴化乙锭、碘化丙啶、Hoechst、DAPI等。在一个实施方案中，组合物的液相包括或如随后所描述的将包括0.01％w/v的考马斯蓝R-250。
在一个实施方案中，所述酸、有机溶剂和染色试剂被吸附至流体可渗透的接触片。组合物可包装在流体不可渗透的袋(例如，具有安全密封的塑料食品储存袋)、药囊、外包装纸等(其在组合物施加至凝胶之前被去除)中。在一个实施方案中，组合物可进一步包含可与接触片的非基质接触侧接触的储存层。所述储存层可以包含吸附剂材料，例如纤维素，其可保有实质部分的酸、染色试剂、有机溶剂、任选的缓冲液等用于接触片至基质的流体连通。在一个实施方案中，染色溶液或组分可以被干燥在接触片上并在使用前再水化。
在一个实施方案中，组合物是包含溶液例如脱色溶液的槽组合物。在一个实施方案中，脱色溶液包含有机溶剂、酸、水和任选地包含缓冲剂。在一个实施方案中，槽组合物是纸。在一个实施方案中，槽组合物是与染色片相同的片材但含有不同的所描述的溶液。在一个实施例中，槽组合物还可以含有吸附剂，例如纤维素，尽管相比掺入接触片中的非纤维素或部分纤维素的材料为较少的分数。在一个实施方案中，槽组合物还可以含有吸附剂例如氧化铝和氧化硅。在一个实施方案中，槽组合物还可以包含脱色溶液和/或吸附剂作为与槽接触片的非基质接触侧接触的层。吸附剂可以优先吸附染色试剂。例如，当染色试剂是考马斯蓝R-250、考马斯蓝G-250或类似的带电荷分子时，吸附剂可以包括优先结合有机阴离子的离子交换纤维素。
如从第一和第二结构可知的，组合物不需要略去所有的纤维素材料，而相反提供了与基质例如电泳凝胶的表面直接接触地沉积的主要地非纤维素或部分纤维素材料层。通过用基本上非纤维素或部分纤维素片取代纤维素材料，保留了增加的染色/脱色速度同时显著降低电泳脱色凝胶的染色背景和斑点性。
一个实施方案是含有包含酸、有机溶剂、染色试剂和主要由非纤维素材料组成的第一通常平面的、流体可渗透的接触片的第一组合物的试剂盒。所述酸、有机溶剂和染色试剂的任一种或多种可以吸附到流体可渗透的接触片，可以吸附到可与第一接触片的非凝胶接触侧接触的储存层，或者可以单独提供。在一个实施方案中，试剂盒还含有包含酸、有机溶剂、吸附剂和主要由非纤维素材料组成的通常平面的、流体可渗透的接触片的第二组合物。所述吸附剂可以是接触片的非主要成分，或者可以是与接触片的非凝胶接触侧接触的吸附剂层。各组合物的酸、有机溶剂和非纤维素材料不需要是相同的。吸附剂可以优先吸附试剂盒的第一组合物的特定染色试剂。
一个实施方案是使用电场对基质(例如含有生物聚合物的电泳基质，例如凝胶)染色的方法。在电泳后，具有经分离的生物聚合物的基质可以使用预组装的吸附有染色溶液(第一组合物；阴极片)和脱色溶液(第二组合物；阳极片)的非纤维素片来染色，或者它可以用吸附有由用户预先吸附的染色溶液(第一组合物；阴极片)和脱色溶液(第二组合物；阳极片)的非纤维素片来染色。
在一个实施方案中，在电泳后，将凝胶从电泳盒取出，并将预组装的具有溶液的片材从其包装中取出并定位在具有先前分离的生物聚合物的电泳凝胶的适当侧上。使用Pierce Fast G2Blotter(25伏特，1.0-1.3安培(恒定))或eStain 2.0蛋白染色系统，跨片材-凝胶-片材组装体施加DC电压持续7分钟。
在一个实施方案中，用户将非纤维素片置于单独的容器中，并添加13-15ml染色溶液(第一组合物)和13-15ml脱色液(第二组合物)，确保溶液均匀地吸附在片材中。电泳后，将凝胶和预先制备的具有溶液的片材定位在具有先前分离的生物聚合物的电泳凝胶的适当侧上。使用Pierce Fast G2Blotter(Thermo Scientific)(25伏特，1.0-1.3安培(恒定))或eStain 2.0蛋白染色系统，跨片材-凝胶-片材组装体施加DC电压持续7分钟。
实施例1
图1A-D显示了使用滤纸和通过常规考马斯染色方案电泳染色的SDS-PAGE凝胶的比较。根据凝胶供应商的建议在聚丙烯酰胺凝胶(图1A：4％-12％NuPage Bis Tris；图1B、D：4％-20％Criterion Tris-HCl；图1C：4％-20％Midi Tris-Glycine)上装载细胞裂解物、纯化的蛋白质和分子量梯度标准品并通过电泳分离。电泳后，将midi凝胶切成两半，而mini凝胶保持原样。图1A和B凝胶使用eStain Protein Staining Pad R-250(GenScriptL02011)(其使用滤纸)根据制造商的说明染色7分钟。图1C和D凝胶使用Imperial ProteinStain(Thermo Scientific产品#24615)通过用超纯水第一次洗涤凝胶三次十分钟和在染色剂中染色60分钟来进行染色。将凝胶在水中脱色过夜。这些结果显示，相较于通过考马斯染色产生的均匀染色，使用常规滤纸的电泳染色过程中产生了不均匀的和有斑点的染色假象。
实施例2
图2A、B显示了在电泳染色程序过程中的电阻(图2A)和产生的温度(图2B)的比较。将生物分子在如图1中的聚丙烯酰胺凝胶上分离，然后通过将凝胶置于聚酯纤维素片或常规滤纸的染色垫之间来制备用于电泳染色。阳极溶液是30％乙醇、5％乙酸并且阴极溶液是30％乙醇、5％乙酸、0.01％考马斯R-250。使用Pierce Fast G2Blotter(25伏特，1.0-1.3安培(恒定))，跨片材-凝胶-片材组装体施加DC电压持续7分钟。测量和绘制电阻和温度。这些结果显示，相较于滤纸，使用聚酯/纤维素材料的电染色过程中的电阻和热量产生更低。
实施例3
图3A、B显示相较于常规的滤纸，当在染色和脱色垫中使用聚酯纤维素材料进行电染色时，聚丙烯酰胺凝胶的染色和脱色得到改善。通过在4％-20％Precise Tris-Glycine聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳来分离蛋白质样品。电泳后，使用eStain 2.0蛋白染色系统电染色两个凝胶。将纤维素滤纸(图3A)或聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)(图3B)浸泡在阴极染色溶液(25％乙醇，5％乙酸，0.01％考马斯R-250)和阳极脱色溶液(25％乙醇，5％乙酸)中，并放置在未染色的凝胶的两侧。将组装的夹心置于eStain蛋白染色系统中并对凝胶电染色7分钟。照片代表来自本发明的方法的结果，显示出较少的斑点染色和在凝胶上更均匀的染色。相比于图1和图3A，图3B显示出经处理的电泳凝胶的更亮的染色背景并且缺乏出现在图1A和B(特别是在较下四分之一处)中和在图3A(特别是在较下的中心区域)中的显著斑点假象。因此仅通过使用柔软材料，例如容易适应于给定表面的材料，而非更刚性的滤纸，脱色效率得到了显著改善而不依靠通常用于获得染色背景的完全去除的被动的扩散驱动的染色和脱色过程。
实施例4
图4A-C显示使用Thermo Scientific G2Fast Blotter仪器，相较于滤纸，使用聚酯纤维素的电染色的聚丙烯酰胺凝胶的染色和脱色得到改善。通过在4％-20％CriterionHCl(图4A，4B)聚丙烯酰胺凝胶和4％-20％Midi Tris-Glycine聚丙烯酰胺凝胶(图4C)上电泳来分离蛋白质样品。电泳后，将两个midi凝胶切成两半并使用Pierce Fast G2Blotter仪器电染色。将纤维素滤纸(图4A)或聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)(图4B，4C)浸泡在阴极染色溶液(25％乙醇，5％乙酸，0.01％考马斯R-250)和阳极脱色溶液(25％乙醇，5％乙酸)中，并放置在未染色的凝胶的两侧。使用Pierce Fast G2Blotter对组装的夹心在1.3安培(恒定)和25伏特(限制)下电染色7分钟。
实施例5
图5A-D显示相较于常规考马斯染色，使用聚酯纤维素的电泳染色的优越性能。将PageRuler Unstained Protein Ladder和/或HeLa裂解物与经连续稀释并制备用于SDS-PAGE的牛血清白蛋白(BSA)一起加载到4％-20％Midi Tris-Glycine凝胶(图5A，5C)和4-20％Criterion HCl凝胶(图5B，5D)上。根据凝胶供应商的建议使凝胶经历电泳。电泳后，将midi尺寸的凝胶切成两半。凝胶A使用Pierce Fast G2Blotter电染色，其中将与阳极溶液(30％异丙醇，5％乙酸)浸泡的聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)放置在阳极板上，接着放置未染色的凝胶和与阴极溶液(30％异丙醇，5％乙酸，0.01％考马斯R-250)浸泡的聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)。凝胶B使用Pierce Fast G2Blotter电染色，其中使用与阳极溶液(35％乙醇，5％乙酸)浸泡的聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)，将其放置在阳极板上，接着放置未染色的凝胶和与阴极溶液(35％乙醇，5％乙酸，0.01％考马斯R-250)浸泡的聚酯纤维素材料(LymTech C30L；7层)。将阴极板放置在堆叠物的顶部，并将该盒插入Pierce G2Fast Blotter控制单元中持续7分钟，使用恒定电流(1.3安培)和限制电压(25伏特)。图5C和图5D凝胶使用Imperial Protein Stain通过用超纯水第一次洗涤凝胶三次十五分钟和在染色剂中染色60分钟来进行染色。将凝胶在水中脱色过夜。
为了与常规染色相比较，将凝胶使用商购可得的预配制考马斯染色剂例如PierceImperial Protein Stain进行常规染色(图1和5)。电泳后，从盒中取出凝胶，用超纯水洗涤三次，每次10-15分钟，伴随温和搅拌，然后染色60分钟，伴随温和搅拌。倒掉染色溶液，在水中洗涤凝胶三次每次20分钟或洗涤过夜，伴随温和搅拌。
在说明书中显示和描述的实施方案仅仅是作为本领域技术人员的本发明人的具体实施方案，并且不以任何方式是限制性的。因此，可以在不脱离本发明的精神的情况下在下述权利要求范围中作出对这些实施方案的各种改变、修改或替代。所引用的参考资料均明确地通过引用整体并入本文。
Claims (21)
1.一种用于对包埋在基质中的生物聚合物进行电泳染色的方法，所述方法包括：
将含有生物聚合物的基质的第一侧与非纤维素第一基质接触片或包含含有纤维素材料的共混物的第一基质接触片接触，所述第一基质接触片具有基质接触表面和染色试剂，并且所述第一基质接触片包含含有染色试剂和溶剂的染色溶液，
将含有生物聚合物的基质的第二侧与包含非纤维素或部分纤维素的材料、具有基质接触表面并含有脱色溶液的第二基质接触片接触，所述脱色溶液包含有机溶剂、酸、水和任选缓冲剂，第一基质接触片和第二基质接触片与基质的接触形成具有厚度的多层组装体，和
施加跨组装体厚度的电力，所述电力足以使染色试剂移动到基质中，由此对基质中的生物聚合物染色，并且所述电力足以使过量的游离染色试剂移出基质，由此使基质脱色。
2.权利要求1的方法，其中所述第一基质接触片还包含在基质的第一侧远端的至少一个附加片，和/或所述第二基质接触片还包含在基质的第二侧远端的至少一个附加片，所述至少一个附加片与所述第一基质接触片和/或所述第二基质接触片是相同或不同的。
3.权利要求1的方法，其中所述第一基质接触片能够吸收至少5ml的染色溶液，但少于15ml的染色溶液；所述第一基质接触片的厚度小于0.5英寸；和/或所述基质接触表面足以提供所述第一基质接触片与所述基质之间的最大接触。
4.权利要求1的方法，其中所述第一基质接触片或所述第一和第二基质接触片是聚酯，聚酯/纤维素共混物，聚丙烯，聚丙烯/纤维素共混物，聚丙烯酰胺，硝酸纤维素，非纤维素，多糖，琼脂糖，毡，聚偏氟乙烯(PVDF)，聚偏二氟乙烯，细织棉，羊毛，再生纤维素纤维，Lyocell，以及它们的组合。
5.权利要求4的方法，其中所述第一基质接触片是聚酯，聚酯/纤维素共混物，聚丙烯，聚丙烯/纤维素共混物，聚丙烯酰胺，硝酸纤维素，非纤维素，多糖，琼脂糖，毡，聚偏氟乙烯(PVDF)，聚偏二氟乙烯，再生纤维素纤维，Lyocell，以及它们的组合。
6.权利要求2的方法，其中所述至少一个附加片是聚酯，聚酯/纤维素共混物，聚丙烯酰胺，硝酸纤维素，多糖，琼脂糖，毡，聚偏氟乙烯(PVDF)，聚偏二氟乙烯，织物，泡沫，海绵，以及它们的组合。
7.权利要求2的方法，其中染色溶液和/或所述脱色溶液存在于不与所述基质接触的所述至少一个附加片中。
8.权利要求1的方法，其中所述第二基质接触片包含选自伤口敷裹非粘合材料、织造和非织造棉、泡沫、毡、琼脂糖、琼脂糖/聚丙烯酰胺基质、氧化铝、氧化硅、多糖、聚合物及其组合的吸附剂。
9.权利要求1的方法，其还包括在将所述基质与所述第一和第二基质接触片接触之前，将所述第一基质接触片与染色溶液接触，以使得将所述染色溶液吸收到所述第一基质接触片中，以及将所述第二基质接触片与脱色溶液接触，以使得将所述脱色溶液吸收到所述第二基质接触片中。
10.权利要求1的方法，其中所述染色溶液包含酸、有机溶剂和染色试剂。
11.权利要求10的方法，其中所述酸是乙酸，并且所述有机溶剂是乙醇或异丙醇。
12.权利要求10的方法，其中所述染色溶液还包含缓冲剂。
13.权利要求12的方法，其中所述缓冲剂是磷酸钠。
14.权利要求1的方法，其中所述染色试剂是蛋白质染色剂，并且选自考马斯蓝R-250，考马斯蓝G-250，银染剂，疏水性或带电荷的染色试剂，中性染色试剂和蛋白质修饰染色剂。
15.权利要求14的方法，其中所述带电荷的染色试剂包括生色、荧光、化学发光和/或生物发光分子。
16.权利要求14的方法，其中所述中性染色试剂进一步包括不带电荷的有机或非有机溶剂。
17.权利要求14的方法，其中所述蛋白质修饰是磷酸化、糖基化、乙酰化、亚硝基化、SUMO化、或表位标签中的至少一种。
18.权利要求1的方法，其中所述染色溶液包含25％乙醇、5％乙酸和0.01％考马斯亮蓝染料R-250或G-250，并且脱色溶液包含25％乙醇和5％乙酸。
19.权利要求1的方法，其中所述基质选自SDS-聚丙烯酰胺凝胶、非变性聚丙烯酰胺凝胶、膜和过滤介质。
20.一种用于对包埋在基质中的生物聚合物进行电泳染色的方法，所述方法包括：
通过下述形成电泳多层组装体：
将含有生物聚合物的基质的第一侧与第一基质接触片接触，所述第一基质接触片主要由非纤维素或部分纤维素的材料组成且具有与基质的第一侧直接接触的基质接触侧，所述第一基质接触片包含含有染色试剂和溶剂的染色溶液，
将含有生物聚合物的基质的第二侧与第二基质接触片接触，所述第二基质接触片包含非纤维素或部分纤维素的材料和具有与基质的第二侧直接接触的基质接触侧，所述第二基质接触片包含脱色溶液，所述脱色溶液包含有机溶剂、酸、水和任选缓冲剂，
将所述组装体置于第一电极和第二电极之间并与所述电极电接触；和
对电极且跨组装体施加电流以提供电力，所述电力足以使染色试剂移动到基质中，由此对基质中的生物聚合物染色，并且所述电力足以使过量的游离染色试剂移出基质，由此使基质脱色。
21.权利要求20的方法，其中所述第一电极是阴极并且是不锈钢或钛，以及所述第二电极是阳极并且是镀铂的钛或碳。
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