JP5300863B2 - エレクトロブロッティングのためのイオンリザーバーとしてのポリマー収着シート - Google Patents
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Description
本発明は、ゲル電気泳動の分野に関し、特に、電気泳動で分離された種が分離されたスラブゲルから、該種を検出、同定、かつ場合によっては定量することができるシート形支持マトリックスへの該種の転写に関する。
一般に電気泳動スラブゲルからニトロセルロース、ナイロン、ポリ二フッ化ビニルまたは同様な材料へのタンパク質、核酸または生物学的種のエレクトロブロッティングは、生化学者が、本質的に任意の生物学的混合物について成分を同定およびそうでなければ本質的に任意の生物学的混合物を特性決定することができる一般的な手段である。エレクトロブロッティングにおいては、ゲルおよび膜の平面を完全に直接接触させて配置し、電流をそれらにゲルおよび膜を横切る方向に通して、電流がゲルに対して平行な方向に通された場合に種がゲル内で動かされるのと同じように、種を転写させる。種がDNAフラグメントである場合、転写は、その創始者である英国人生物学者Edwin M. Southernにちなんでサザンブロットと呼ばれる。同様に、RNAフラグメントのエレクトロブロッティングはノーザンブロッティングと呼ばれ、タンパク質またはポリペプチドのエレクトロブロッティングはウエスタンブロッティングと呼ばれる。膜中の種に対して実施される分析手法は、転写される種のタイプに適切である手法である。たとえば、サザンおよびノーザンブロッティングにおいて、分析は、転写膜上の種をハイブリダイゼーションプローブによって処理したのち、蛍光または色素生成染料によって標識することによって開始され、ウエスタンブロッティングにおいては、分析は、標的タンパク質を抗体で処理することによって始まる。
[請求項1001]
ゲルと、
該ゲルに直接隣接し、かつ該ゲルと平面接触している膜と、
一方のシートが、該膜と接触している側とは反対の側で該ゲルに直接隣接し、かつ他方のシートが、該ゲルと接触している側とは反対の側で該膜に直接隣接し、それぞれの該シートが、ポリエステル、ポリエステル/セルロースブレンド、およびポリウレタン被覆セルロースからなる群より選択されるメンバーを含む、緩衝液で浸潤された吸収材料の二つのシートと
を含む、電気泳動で分離された種のゲルから膜への転写のための転写スタック(stack)。
[請求項1002]
それぞれの前記シートが、ポリエステルおよびポリエステル/セルロースブレンドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1003]
それぞれの前記シートが、本質的にポリエステルからなる、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1004]
それぞれの前記シートが、本質的にポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1005]
それぞれの前記シートが、本質的にポリウレタン被覆セルロースからなる、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1006]
それぞれの前記シートが、本質的にハイドロエンタングルメント加工(hydroentangled)ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1007]
それぞれの前記シートが、本質的に不織ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1008]
前記膜が、ニトロセルロースおよびポリビニリデンジフルオライドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1009]
前記膜がニトロセルロースである、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1010]
前記ゲルがポリアクリルアミドである、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1011]
前記ゲルがポリアクリルアミドであり、かつ前記膜がニトロセルロースである、請求項1001記載の転写スタック。
[請求項1012]
電気泳動で分離された種をゲルから膜へ転写させる方法であって、
ゲルと、
該ゲルに直接隣接し、かつ該ゲルと平面接触している膜と、
一方のシートが、該膜と接触している側とは反対の側で該ゲルに直接隣接し、かつ他方のシートが、該ゲルと接触している側とは反対の側で該膜に直接隣接し、それぞれの該シートが、ポリエステル、ポリエステル/セルロースブレンドおよびポリウレタン被覆セルロースからなる群より選択されるメンバーを含む、緩衝液で浸潤された吸収材料の二つのシートと
を含む転写スタックに電圧を印加することによって、電流を通す段階を含む、方法。
[請求項1013]
それぞれの前記シートが、ポリエステルおよびポリエステル/セルロースブレンドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1012記載の方法。
[請求項1014]
前記電圧が約5ボルト〜約25ボルトであり、かつ前記電流が約1mA/cm 2 〜約2A/cm 2 である、請求項1012記載の方法。
[請求項1015]
前記電圧が約5ボルト〜約15ボルトであり、かつ前記電流が約1mA/cm 2 〜約100mA/cm 2 である、請求項1012記載の方法。
[請求項1016]
前記電圧が約10ボルト〜約30ボルトであり、かつ前記電流が約1A/cm 2 〜約5mA/cm 2 である、請求項1012記載の方法。
[請求項1017]
それぞれの前記シートが、本質的にポリエステルからなる、請求項1012記載の方法。
[請求項1018]
それぞれの前記シートが、本質的にポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1012記載の方法。
[請求項1019]
それぞれの前記シートが、本質的にハイドロエンタングルメント加工ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1012記載の方法。
[請求項1020]
それぞれの前記シートが、本質的に不織ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1012記載の方法。
[請求項1021]
前記膜が、ニトロセルロースおよびポリビニリデンジフルオライドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1012記載の方法。
[請求項1022]
前記膜がニトロセルロースである、請求項1012記載の方法。
[請求項1023]
前記ゲルがポリアクリルアミドである、請求項1012記載の方法。
[請求項1024]
前記ゲルがポリアクリルアミドであり、かつ前記膜がニトロセルロースである、請求項1012記載の方法。
[請求項1025]
前記種が、タンパク質およびペプチドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1012記載の方法。
[請求項1026]
前記種が、核酸およびオリゴヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1012記載の方法。
ポリエステルシートを使用する本発明の態様で使用されるポリエステルは、上述した拭きものに使用される任意の従来のポリエステルであることができる。たとえば、ポリエステルは、水で浸潤させることができ、水性緩衝液を吸収し、保持することができる、ジカルボン酸とジヒドロキシアルコールとの任意の重縮合物であることができる。ジカルボン酸の例は、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、アジピン酸およびテレフタル酸である。二価アルコールの例は、エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコールおよびジプロピレングリコールである。好ましいポリエステルは、テレフタル酸のエステル少なくとも85重量%および上記の二価アルコールの一つで構成された長鎖ポリマーである。ポリエステルは、架橋していても架橋していなくてもよいが、非架橋ポリエステルが好ましい。親水性ポリエステル組成物が好ましく、親水性は、従来の手段、たとえば親水性組成物によるポリエステルの処理によって、疎水性ポリエステルに付与することができる。一つのそのような組成物は、エトキシ化ポリエステルおよび界面活性剤である。他の処理は当業者には公知である。本発明における使用に適したポリエステル布の例は、商標VWR SPEC-WIPE(登録商標)(VWR International, Leicestershire, United Kingdom)、ANTICON(登録商標)およびANTICON(登録商標)MILLISEAL(登録商標)(Milliken & Company, LaGrange, Georgia, USA)、VECTRA(登録商標)ALPHA(登録商標)、ALPHAWIPE(登録商標)、ALPHASORB(登録商標)、ALPHA10(登録商標)およびMIRACLE WIPE(登録商標)(ITW-Texwipe Company, Mahwah, New Jersey, USA)ならびにULTRASEAL(登録商標)およびVALUSEAL(商標)(Berkshire Corporation, Great Barrington, Massachusetts, USA)の下で販売されているものである。
(1):VWR International, Leicestershire, United Kingdom
(2)、(3)、(4)、(8):Milliken & Company, LaGrange, Georgia, USA
(5)、(14):ITW-Texwipe Company, Mahwah, New jersey, USA
(6)、(7)、(9)、(10)、(11)、(15):Berkshire Corporation, Great Barrington, Massachusetts, USA
(12)、(13):Contec, Spartanburg, South Carolina, USA
(16):Perfex Corporation, Poland, New York, USA
(17):3M, St. Paul, Minnesota, USA
(18):Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, California USA
(19):Contec, Inc., Spartanburg, South Carolina, USA
(20):Viking Car Care, St. Louis, Missouri, USA
Claims (26)
- ゲルと、
該ゲルに直接隣接し、かつ該ゲルと平面接触している膜と、
一方のシートが、該ゲルが該膜と接触している側とは反対の側で該ゲルに直接隣接し、かつ他方のシートが、該膜が該ゲルと接触している側とは反対の側で該膜に直接隣接し、それぞれの該シートが、ポリエステル、ポリエステル/セルロースブレンド、およびポリウレタン被覆セルロースからなる群より選択されるメンバーを含む、緩衝液で浸潤された吸収材料の二つのシートと
を含む、電気泳動で分離された種のゲルから膜への転写のための転写スタック(stack)。 - それぞれの前記シートが、ポリエステルおよびポリエステル/セルロースブレンドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1記載の転写スタック。
- それぞれの前記シートが、ポリエステルからなる、請求項1記載の転写スタック。
- それぞれの前記シートが、ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1記載の転写スタック。
- それぞれの前記シートが、ポリウレタン被覆セルロースからなる、請求項1記載の転写スタック。
- それぞれの前記シートが、ハイドロエンタングルメント加工(hydroentangled)ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1記載の転写スタック。
- それぞれの前記シートが、不織ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項1記載の転写スタック。
- 前記膜が、ニトロセルロースおよびポリビニリデンジフルオライドからなる群より選択されるメンバーである、請求項1記載の転写スタック。
- 前記膜がニトロセルロースである、請求項1記載の転写スタック。
- 前記ゲルがポリアクリルアミドである、請求項1記載の転写スタック。
- 前記ゲルがポリアクリルアミドであり、かつ前記膜がニトロセルロースである、請求項1記載の転写スタック。
- 電気泳動で分離された種をゲルから膜へ転写させる方法であって、
ゲルと、
該ゲルに直接隣接し、かつ該ゲルと平面接触している膜と、
一方のシートが、該ゲルが該膜と接触している側とは反対の側で該ゲルに直接隣接し、かつ他方のシートが、該膜が該ゲルと接触している側とは反対の側で該膜に直接隣接し、それぞれの該シートが、ポリエステル、ポリエステル/セルロースブレンドおよびポリウレタン被覆セルロースからなる群より選択されるメンバーを含む、緩衝液で浸潤された吸収材料の二つのシートと
を含む転写スタックに電圧を印加することによって、電流を通す段階を含む、方法。 - それぞれの前記シートが、ポリエステルおよびポリエステル/セルロースブレンドからなる群より選択されるメンバーである、請求項12記載の方法。
- 前記電圧が5ボルト〜25ボルトであり、かつ前記電流が1mA/cm2〜2A/cm2である、請求項12記載の方法。
- 前記電圧が5ボルト〜15ボルトであり、かつ前記電流が1mA/cm2〜100mA/cm2である、請求項12記載の方法。
- 前記電圧が10ボルト〜30ボルトであり、かつ前記電流が1A/cm2〜5mA/cm2である、請求項12記載の方法。
- それぞれの前記シートが、ポリエステルからなる、請求項12記載の方法。
- それぞれの前記シートが、ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項12記載の方法。
- それぞれの前記シートが、ハイドロエンタングルメント加工ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項12記載の方法。
- それぞれの前記シートが、不織ポリエステル/セルロースブレンドからなる、請求項12記載の方法。
- 前記膜が、ニトロセルロースおよびポリビニリデンジフルオライドからなる群より選択されるメンバーである、請求項12記載の方法。
- 前記膜がニトロセルロースである、請求項12記載の方法。
- 前記ゲルがポリアクリルアミドである、請求項12記載の方法。
- 前記ゲルがポリアクリルアミドであり、かつ前記膜がニトロセルロースである、請求項12記載の方法。
- 前記種が、タンパク質およびペプチドからなる群より選択されるメンバーである、請求項12記載の方法。
- 前記種が、核酸およびオリゴヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーである、請求項12記載の方法。
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