CN105560219A - 芬戈莫德或其盐在治疗囊肿性疾病中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种芬戈莫德(2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇，Fingolimod)或其盐的用途，用于制备治疗囊肿性疾病的药物组合物。具体地，本发明人发现了芬戈莫德(Fingolimod，芬戈莫德)或其盐通过抑制HDACs，并使囊肿细胞的细胞周期阻滞于G2/M期，对囊肿细胞具有诱导其凋亡和/或抑制其增殖的作用，从而使囊肿体积缩小，并恢复肾功能。此外，细胞毒性实验也证实了作为已知上市的药物，治疗剂量下的芬戈莫德用于治疗囊肿性疾病时，也无明显的毒性。芬戈莫德作为治疗囊肿性疾病，尤其是常染色体显性多囊肾病的药物，具有广阔的应用前景。

Description

芬戈莫德或其盐在治疗囊肿性疾病中的用途

技术领域

本发明属于医药技术领域。具体芬戈莫德(Flingolimod)或其盐在囊肿性疾病治疗中的用途，尤其是作为HDACs抑制剂在常染色体显性多囊肾病治疗中的应用。

背景技术

常染色体显性多囊肾病(autosomaldominantpolycystickidneydisease,ADPKD)是最常见的遗传性肾脏病，发病率约为1/400～1/1000，我国目前约有150～300万患者。ADPKD主要表现为双侧肾脏出现无数大小不一的囊肿，囊肿类似于良性肿瘤，进行性增大，最终破坏肾脏的结构和功能，导致终末期肾功能衰竭。60岁以上患者中有50％进展至尿毒症，占终末期肾衰竭病因的5～10％。作为遗传性疾病，患者子女有50％的患病概率。

ADPKD的发病机制仍不是十分明确，目前主要认为与纤毛功能障碍有关，即认为ADPKD也是纤毛病的一种。初级纤毛是一种流体的机械传感器，通过上面存在的多囊蛋白复合物感受流体变化，纤毛弯曲后刺激钙离子流入细胞内，引起细胞内信号传递的改变。

除累及肾脏外，ADPKD还可伴有肝囊肿、胰腺囊肿、颅内动脉瘤、心脏瓣膜异常等。因此，ADPKD的患者还往往需要同时治疗各种并发的其他部位的囊肿性疾病，例如手术切除肝囊肿、胰腺囊肿等，患者的生活质量也受到严重影响。

至今ADPKD仍无有效治疗方法，也无延缓疾病进展的治疗药物，临床上多以降压、止痛等对症支持治疗为主，疾病进展至终末期后采用透析或肾移植治疗，给患者家庭及社会都带来沉重负担。美国每年用于多囊肾病诊疗和护理的费用高达20亿美元。因此，研发多囊肾病治疗药物具有重大的科学价值、社会效益和经济效益。

因此，本领域迫切需要开发一种能够有效治疗囊肿性疾病、副作用小的药物。

发明内容

本发明发现了芬戈莫德在囊肿性疾病中的新用途。

本发明第一方面，提供了芬戈莫德(2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇，Fingolimod)或其盐的用途，(i)用于制备治疗囊肿性疾病的药物组合物；(ii)用于制备抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)表达和/或活性的药物组合物。

在另一优选例中，所述的囊肿性疾病为人或非人哺乳动物的囊肿性疾病。

在另一优选例中，所述的囊肿性疾病包括多囊性肾病、肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿。

在另一优选例中，所述的药物组合物包括安全有效量的芬戈莫德和药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的安全有效量的芬戈莫德的施用剂量为0.01-50mg/kg，较佳地，为0.1-20mg/kg，更佳地，为0.5-10mg/kg。

在另一优选例中，所述的治疗囊肿性疾病包括诱导囊肿细胞的凋亡，和/或抑制囊肿细胞的增殖。

在另一优选例中，所述的囊肿细胞为囊肿内衬上皮细胞。

在另一优选例中，所述的囊肿细胞来源于多囊性肾病、肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿。

在另一优选例中，所述的囊肿内衬上皮细胞的典型细胞系为WT9-12细胞系。

在另一优选例中，所述的HDACs包括HDAC1、2、3、4、5、6、7。

本发明第二方面，提供了一种体外非治疗性的诱导囊肿细胞的凋亡，和/或抑制囊肿细胞的增殖；或抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)表达和/或活性的方法，其特征在于，在芬戈莫德的存在下培养囊肿细胞，从而诱导囊肿细胞的凋亡或增殖；或抑制组蛋白去乙酰化酶表达和/或活性。

在另一优选例中，所述的囊肿细胞为囊肿内衬细胞。

在另一优选例中，所述的囊肿细胞来来源于多囊性肾病、肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿。

在另一优选例中，所述的芬戈莫德或其盐还可通过抑制HDAC6减少β-catenin的激活。

在另一优选例中，所述的接触为培养接触。

本发明第三方面，提供了一种筛选促进芬戈莫德活性的候选化合物的方法，包括步骤：

(a)向细胞培养体系中加入所述的候选化合物，作为实验组；向相同的细胞培养体系中不加入所述的候选化合物作为对照组；

(b)观察细胞培养体系中HDACs的表达量；

其中，当实验组细胞培养体系中HDACs的表达量E1与对照组细胞培养体系中HDACs的表达量E0相比时，E1显著低于E0，则表明，所述的候选化合物为能够促进芬戈莫德活性的候选化合物。

在另一优选例中，所述的细胞为囊肿细胞。

在另一优选例中，步骤(b)还包括观察细胞培养体系中囊肿细胞的增殖情况。

在另一优选例中，所述的显著低于指的是E1≤1/2E0。

本发明第四方面，提供了一种治疗囊肿性疾病的方法，向所需要的对象施用安全有效量的芬戈莫德。

在另一优选例中，所述的囊肿性疾病包括多囊性肾病、肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿。

在另一优选例中，所述需要的对象包括人或非人哺乳动物，较佳地，为人、小鼠或大鼠。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了FTY720对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12增殖的作用。

图2显示了FTY720对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12凋亡的作用。

图3显示了FTY720对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12细胞周期的作用。

图4显示了FTY720对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12内HDACs转录的影响。

图5显示了治疗后各组Han:SPRD大鼠肾重/体重比。

图6显示了治疗后Han:SPRD大鼠肾脏病理切片图，其中，

A.WTHan:SPRD大鼠肾组织(×40)E.WTHan:SPRD大鼠肾组织(×400)

B.Cy^+/-多囊肾大鼠肾组织(×40)F.Cy^+/-多囊肾大鼠肾组织(×400)

C.FTY720(1mg/Kg)治疗大鼠肾组织(×40)G.FTY720(1mg/Kg)治疗大鼠肾组织(×400)

D.FTY720(10mg/Kg)治疗大鼠肾组织(×40)H.FTY720(10mg/Kg)治疗大鼠肾组织(×400)

图7显示了治疗后各组大鼠BUN(图7A)和Scr(图7B)的水平。

图8显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织HDAC1的影响。

图9显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织HDAC2的影响。

图10显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织HDAC6的影响。

图11显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织和WT9-12细胞Ace-β-catenin的影响。

图12显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织和WT9-12细胞中β-catenin和c-myc的影响。

图13显示了FTY720对多囊肾病大鼠肾组织β-catenin定位的影响。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现了目前作为治疗多发性硬化症的上市药物芬戈莫德(Flingolimod)对人体囊肿性疾病有良好的治疗作用。实验证明，芬戈莫德通过抑制HDACs，并使囊肿细胞的细胞周期阻滞于G2/M期，对囊肿细胞具有诱导其凋亡和/或抑制其增殖的作用，从而使囊肿体积缩小，并恢复肾功能。此外，细胞毒性实验也证实了作为已知上市的药物，治疗剂量下的芬戈莫德用于治疗囊肿性疾病时，也无明显的毒性。在此基础上，完成了本发明。

术语

如本文所用，术语“芬戈莫德”、“本发明活性成分”、“FTY720”“式I所示化合物”均指化学结构式如式I所式的化合物：

式I；

其在用于多发性硬化症之外，还可以有效地应用于囊肿性疾病，尤其是常染色体线性多囊肾。

芬戈莫德(Flingolimod)或其盐

芬戈莫德是由FDA于2010年9月批准的、用于复发性多发性硬化症(Multiplesclerosis，MS)的治疗，其化学结构式如式I所示：

本发明人发现，芬戈莫德除了具有免疫抑制作用之外，还对囊肿内衬上皮细胞具有诱导凋亡和抑制增殖的作用。在体内实验中，芬戈莫德对患有常染色体显性多囊肾病大鼠的疾病进展有显著的延缓作用，并能够有效地改善肾功能，降低血肌酐、血尿素氮等肾功能指标。同时，在对肝囊肿和胰腺囊肿来源的囊肿内衬上皮细胞体外抑制实验中，发明人也发现了相同的诱导凋亡和抑制增殖作用。因此，芬戈莫德不仅可用于常染色体显性多囊肾并发其他多器官囊肿的全身性用药，也未单纯性的肝囊肿、肾囊肿或胰腺囊肿的患者提供了新的非手术治疗方法。

此外，发明人经过进一步的实验发现，芬戈莫德作为活性成分作用于囊肿内衬上皮细胞的作用机制是抑制组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases，HDACs)起到的作用。目前，临床上虽然已知HDAC过度激活使基因表达失控，导致包括肿瘤在内的多种增生性疾病的发生，但目前只开发了一些抗恶性肿瘤(如淋巴瘤等)的HDACs抑制剂，而这些抑制剂大多存在副作用大(如纳差、消瘦、静脉血栓形成、心源性猝死、严重胃肠道反应)、半衰期短等的缺点，根本无法用于囊肿这样的良性疾病。而本发明的发现无疑为HDACs抑制剂家族增加了新的成员，而HDACs抑制剂的治疗谱也相应得到扩展。

当然，作为已经上市的药物，芬戈莫德的毒理性质已经非常清晰，安全性得到证实，这为其作为治疗囊肿性疾病的药物而言带来极大的方便。

芬戈莫德可以以游离碱或盐酸盐等形式获得。目前芬戈莫德盐的制剂产品有胶囊剂或片剂等形式。

囊肿性疾病

在本发明中，囊肿性疾病包括在人体或非人哺乳动物的体表或体内形成的囊状良性包块。囊肿性疾病往往具有边界清楚、内容物呈液态的特征。

通常，在人体中，常见的囊肿性疾病包括肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿、多囊性肾病等。在多囊性肾病患者中，还往往多见同时并发肝囊肿或胰腺囊肿，肾脏、肝脏或胰腺上皮细胞的纤毛的功能的破坏被认为是囊肿疾病发生的一个因素，纤毛的功能与HDAC相关，而纤毛功能的破坏会增加细胞内的钙含量，激活一系列促进细胞增殖的信号通路，从而促进囊肿性疾病的发生。

正是由于芬戈莫德对HDAC具有抑制作用，因此可以改善上皮细胞的纤毛功能，从而改善或治疗囊肿性疾病。

药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，它含有(a)安全有效量的本发明活性成分；以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。本发明活性成分的数量通常为10微克-100毫克/剂，较佳地为100-1000微克/剂。

为了本发明的目的，有效的剂量为给予个体约0.01毫克/千克至50毫克/千克，较佳地0.05毫克/千克至10毫克/千克体重的本发明活性成分。此外，本发明的多肽可以单用，也可与其他治疗剂一起使用(如配制在同一药物组合物中)。

药物组合物还可含有药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体。该术语指这样一些药剂载体：它们本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后没有过分的毒性。这些载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐剂及其组合。

治疗性组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。

通常，可将治疗性组合物制成可注射剂，例如液体溶液或悬液；还可制成在注射前适合配入溶液或悬液中、液体载体的固体形式。

这些药物组合物可根据常规方法通过混合、稀释或溶解而进行配制，并且偶尔添加合适的药物添加剂，如赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、稀释剂、缓冲剂、等渗剂(isotonicities)、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂和助溶剂，而且该配制过程可根据剂型用惯常方式进行。

一旦配成本发明的组合物，可将其通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、静脉内、皮下、皮内、气道内、粘膜、或局部给药。待预防或治疗的对象可以是动物；尤其是人。

本发明的药物组合物还可以缓释剂形式给药。例如，本发明活性成分可被掺入以缓释聚合物为载体的药丸或微囊中，然后将该药丸或微囊通过手术植入待治疗的组织。作为缓释聚合物的例子，可例举的有乙烯-乙烯基乙酸酯共聚物、聚羟基甲基丙烯酸酯(polyhydrometaacrylate)、聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、乳酸聚合物、乳酸-乙醇酸共聚物等，较佳地可例举的是可生物降解的聚合物如乳酸聚合物和乳酸-乙醇酸共聚物。

当本发明的药物组合物被用于实际治疗时，作为活性成分的本发明活性成分或其药学上可接受的盐的剂量，可根据待治疗的每个病人的体重、年龄、性别、症状程度而合理地加以确定。

本发明的有益效果：

1.效果确切，适用于各种囊肿性疾病：本发明体外和体内芬戈莫德通过抑制HDACs，并使囊肿细胞的细胞周期阻滞于G2/M期，对囊肿细胞具有诱导其凋亡和/或抑制其增殖的作用，从而使囊肿体积缩小，并恢复肾功能。

2.药物来源可靠、稳定，且安全性高：作为已知上市的药物，芬戈莫德的毒理已经得到广泛证实，且细胞毒性实验也证实了治疗剂量下的芬戈莫德用于治疗囊肿性疾病时，无明显的毒性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

实施例1：芬戈莫德对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12增殖的影响

人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12采用DMEM/F12培养基加入10％胎牛血清，加入双抗培养，胰酶消化传代。至细胞融合70％左右后胰酶消化，制成细胞悬液后显微镜下细胞计数，然后接种于96孔板中，每孔6×10³个细胞。同步化后给予芬戈莫德处理，芬戈莫德浓度梯度为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.175μM、1.588μM、0.781μM。通过MTT法观察给药24、48、72小时后细胞增殖的变化。在各时间点吸去培养基，每孔予100μl培养基加10μlMTT(5mg/ml水溶液)，37℃孵育3小时后吸出培养液，每孔加入DMSO100μl，室温震荡15min后酶标仪于492nm波长测量OD值。计算芬戈莫德抑制WT9-12细胞增殖的IC₅₀＝2.091μM，具体抑制率见表1和图1。

细胞存活率(％)计算方法为：

存活率(％)＝(给药孔OD-空白孔OD)/(对照孔OD-空白孔OD)×100抑制率(％)＝1-存活率(％)

表1芬戈莫德抑制细胞生长的抑制率(％)

实施例2：芬戈莫德对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞WT9-12的凋亡和细胞周期的影响

WT9-12细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板中，达到60-70％融合时，分别给予芬戈莫德1μM，2μM，10μM处理细胞24小时。收取细胞和上清，胰酶消化后离心，用冷的1×PBS洗涤细胞后1000rpm/min离心10分钟。弃上清，加入1×结合缓冲液，将细胞浓度调整为1×10⁶个细胞/ml。每100μl细胞悬液中加入5μlAnnexinV和1μlPI(100μg/ml)工作液，室温下避光孵育15分钟后加入400μl1×结合缓冲液，混匀并置于冰上，然后尽快用流式细胞仪测定凋亡，结果见表2和图2，芬戈莫德能明显诱导WT9-12细胞凋亡。

表2不同浓度芬戈莫德对WT9-12凋亡的作用

*:P<0.05。

WT9-12细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板中，达到60-70％融合时，分别给予芬戈莫德1μM，2μM，10μM处理细胞24小时。收取细胞和上清，胰酶消化后离心，用冷的1×PBS洗涤细胞后1000rpm/min离心10分钟。弃上清，用300μl冷的1×PBS重悬细胞，加入700μl冷的无水乙醇，4℃过夜。过夜将细胞置于空气中平衡至室温，用1×PBS洗涤细胞两遍后，将细胞重悬于100μl的PBS中。加入适量的RNA酶，37℃避光孵育30分钟，再加入适量PI染液，室温下避光孵育15分钟后，用流式细胞仪测定细胞周期，结果见表3和图3，芬戈莫德能明显使WT9-12细胞的细胞周期阻滞在G2/M期。

表3不同浓度芬戈莫德对WT9-12细胞周期的影响。

*:P<0.05。

实施例3：芬戈莫德对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞株WT9-12中HDACs的影响

WT9-12细胞以8×10⁵个细胞/皿接种于10厘米培养皿中，达到60-70％融合时，分别给予芬戈莫德0μM或2.5μM处理细胞24小时。胰酶消化，收取细胞。用冷的1×PBS洗涤细胞后1000rpm/min离心10分钟，将PBS去除干净。加入1mlTrizol溶液使细胞完全溶解后抽提RNA。用HisScript1^ststrandcDNAsynthesiskit(Vazyme)将RNA逆转录成cDNA。逆转录得到的cDNA用于Realtime-PCR分析。如图4所示，芬戈莫德能抑制部分HDACs的转录。

实施例4：芬戈莫德对Han:SPRD大鼠的治疗作用

SPF级动物房，常规方法饲养Han:SPRD大鼠。取5周龄的雄性杂合子大鼠(Cy^+/-)，分为四组，每组7只，分别给予安慰剂、芬戈莫德1mg/Kg/d、3mg/Kg/d或10mg/Kg/d；两组雄性野生型Han:SPRD大鼠，每组7只，分别给予安慰剂和芬戈莫德10mg/Kg/d。灌胃给药，共12周(具体大鼠资料见表4)。芬戈莫德购自SelleckChemicals(Texas,USA)公司，用生理盐水溶解为10mg/ml，用生理盐水稀释后给药。大鼠入组前乙醚麻醉后，尾静脉抽血，检测血清肌酐、尿素氮。12周处死后，心脏取血检测肾功能指标，肾脏组织行病理检查。结果显示：与对照组相比，芬戈莫德治疗后多囊肾大鼠的肾脏体积明显减少(P<0.05)，肾脏囊肿体积明显缩小，结果见表4、图5和图6。并且经芬戈莫德治疗12周的多囊肾大鼠血清肌酐、尿素氮水平显著低于对照组(P<0.05)，肾功能明显改善，结果见图7。说明芬戈莫德对多囊肾病大鼠具有良好的治疗作用。

表4各组大鼠肾重/体重比

*和杂合型安慰剂组比p＜0.05

实施例5：芬戈莫德抑制HDACs缓解Han:SPRD大鼠病情

芬戈莫德治疗12周后处死Han:SPRDCy^+/-大鼠，提取大鼠肾组织RNA和蛋白，分别进行Realtime-PCR(RT-PCR)和Westernblotting检测。与野生型Han:SPRD大鼠相比，雄性杂合子Han:SPRD大鼠的β-catenin和HDAC1、2、6表达增加，c-Myc表达增多，而芬戈莫德治疗能降低HDAC1、HDAC2和HDAC6的表达(图8-10)，增加乙酰化β-catenin(Ace-β-catenin)(图11)，减少β-catenin(图12)，并减少β-catenin入核(图13)，从而减少经典Wnt信号通路激活，进一步减少c-Myc表达(图12)。说明芬戈莫德可能通过抑制HDACs调控多囊肾囊肿细胞的生长，通过抑制HDAC6减少β-catenin的激活，减少经典Wnt信号通路激活，从而起到治疗多囊肾病的作用。

因此，本发明的发明人发现化合物芬戈莫德可通过抑制HDACs，诱导多囊肾病囊肿衬里上皮细胞凋亡、调节细胞周期，从而抑制囊肿细胞的增殖。在动物实验中证实芬戈莫德可抑制多囊肾病大鼠肾脏囊肿的生长和肾脏体积的增大，进而保护肾功能。体外细胞实验和动物体内实验结果均未发现治疗剂量的芬戈莫德有明显毒性。这些结果表明芬戈莫德可作为研制新的预防或治疗常染色体显性多囊肾病的先导化合物，也可用于制备预防或治疗多囊肾病的药物。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.芬戈莫德(2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇，Fingolimod)或其盐的用途，其特征在于，(i)用于制备治疗囊肿性疾病的药物组合物；(ii)用于制备抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)表达和/或活性的药物组合物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的囊肿性疾病包括多囊性肾病、肾囊肿、肝囊肿、胰腺囊肿。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物包括安全有效量的芬戈莫德和药学上可接受的载体。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的安全有效量的芬戈莫德的施用剂量为0.01-50mg/kg，较佳地，为0.1-20mg/kg，更佳地，为0.5-10mg/kg。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的治疗囊肿性疾病包括诱导囊肿细胞的凋亡，和/或抑制囊肿细胞的增殖。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的HDACs包括HDAC1、2、3、4、5、6、7。

7.一种体外非治疗性的诱导囊肿细胞的凋亡，和/或抑制囊肿细胞的增殖；或抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)表达和/或活性的方法，其特征在于，将所述的囊肿细胞与芬戈莫德接触，从而抑制囊肿细胞的凋亡或增殖；或抑制组蛋白去乙酰化酶表达和/或活性。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的囊肿细胞为囊肿内衬细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的接触为培养接触。

10.一种筛选促进芬戈莫德活性的候选化合物的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)向细胞培养体系中加入所述的候选化合物，作为实验组；向相同的细胞培养体系中不加入所述的候选化合物作为对照组；

(b)观察细胞培养体系中HDACs的表达量；

其中，当实验组细胞培养体系中HDACs的表达量E1与对照组细胞培养体系中HDACs的表达量E0相比时，E1显著低于E0，则表面，所述的候选化合物为能够促进芬戈莫德活性的候选化合物。