CN105527239B - 一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法 - Google Patents
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Abstract
一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于主要包括如下步骤：1)茶树脂溶性色素单体分离；2）色素单体定性定量；3）检测。本发明实现了脂溶性色素单体可以随时制备获得，为茶叶脂溶性色素的定性和定量分析提供有效的参考，为液相色谱方法分析提供了有效的色素单体物质，提高了液相色谱发分析的准确度，丰富了液相色谱法检测的色素种类，克服了传统光谱法对不分离的混合溶液光谱测定中，导致相互干扰的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法。该方法可以用于茶叶色素单体的分离提取、茶树脂溶性色素组分的定量检测等技术领域。
背景技术
茶叶中脂溶性色素的分析具有重要意义，但是由于其容易见光分解，且易氧化变质，所以难以保存。而脂溶性色素单体在色素分析中具有参考定性定量的重要作用。
当前脂溶性色素分析主要采用比色法和液相色谱法。比色法通常是直接对色素提取液进行比色。该方法不适用色素单体作为参照，对所有色素组分没有预先分离，各色素组分在比色中相互影响，因此定量测定准确性不高，且可分析组分数量较少。液相色谱法一般采用的是正向液相色谱仪连接DAD检测器，其分离需要色素标准品作为定量辅助。然而色素标准品在储藏和运送中易见光分解，或者部分变质，所以分析结果受标准品的影响较大，同时标准品数量有限，很多脂溶性色素单体少有试剂公司生产。因此，色素单体的分离制备成为茶叶中脂溶性色素分离的限制性因子，对分析结果具有较大的影响作用。
同时脂溶性色素具有特征的光谱吸收曲线，容易进行定性分析，采用HPLC加DAD检测器或者紫外可见分光光度计可以很容易的得到色素单体的光谱曲线，通过比对即可鉴定色素单体，因此，使得临时分离制备色素单体具有可能。而特定的色素组分具有特定的消光系数，可以计算其组分含量，因此，也使得定量计算具有可能。
总之，传统脂溶性分析方法中由于缺少可供参考的色素单体组分，使得其分析定量结果不稳定，因此给茶叶脂溶性色素分析带来一定的困难。
发明内容
针对背景技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，即提供一种茶树脂溶性色素组分的分离和制备简易技术，以解决现有技术存在的弊端，克服了现有技术中定量结果不稳定等缺陷。
实现本发明的所采用的技术方案如下：
一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于主要包括如下步骤：
1)茶树脂溶性色素单体分离：将叶片剪碎，装入2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min后置于4℃冰箱中避光浸提过夜；12000 r/min 离心5min，取1 mL上清液装入2 ml样品瓶，用真空离心浓缩仪浓缩至50 μL；将浓缩液以条形点样至硅胶板，用石油醚、丙酮混合液作为展开剂进行层析；然后将各色条分别刮下装入2 mL离心管，加入1 mL丙酮或无水乙醇溶解并在转速12000r/min条件下离心2 min；
2）色素单体定性定量：采用分光光度计测定各单体紫外-可见吸收光谱，依据特征光谱参数对各单体成分进行定性分析，并根据色素特征吸光系数和吸光度计算色素单体浓度；
3）检测，定量称取0.1 g样品，装入2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5 mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min后置于4℃冰箱中避光浸提过夜；12000 r/min 离心5 min，取1 mL上清液装入样品瓶HPLC-DAD测定，同时测定步骤2）中已定性的各色素单体，并以各色素单体的保留时间、光谱特性，以及吸光度为依据，对样品中色素组分进行定性和定量计算。
所述的一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于：所述色素单体为β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、脱镁叶绿素a、脱镁叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、叶绿素b、紫黄质、玉米黄素、新黄质、脱镁叶绿素酸酯a、脱镁叶绿素酸酯b。
所述的一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于：所述展开剂的体积比为石油醚：丙酮=3：2 。
本发明的优点在于：脂溶性色素单体可以随时制备获得，用作定量分析的参照物质，为茶叶脂溶性色素的定性和定量分析提供有效的参考。克服了传统光谱法对不分离的混合溶液光谱测定中，导致的相互干扰的缺点。为液相色谱方法分析提供了有效的色素单体物质，提高了液相色谱发分析的准确度，丰富了液相色谱法检测的色素种类。
附图说明
图1为层析分离结果；
1：β-胡萝卜素；2：γ-胡萝卜素；3：脱镁叶绿素a；4：脱镁叶绿素b；5 ：叶绿素a；6：叶黄素；7：叶绿素b；8：紫黄质；9：玉米黄素；10：新黄质；11：脱镁叶绿素酸酯a；12：脱镁叶绿素酸酯b；
图2为茶树叶片脂溶性色素分析HPLC图谱；
图3为叶绿素a的特征光谱图；
图4为叶绿素b的特征光谱图。
具体实施方式
实施例
单体制备：将茶树叶片剪碎，装入2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5 mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min，低温（4℃冰箱）避光浸提过夜；离心：12000 r/min 离心5 min；取1mL上清液装入2 ml尖底最大回收型样品品，使用真空离心浓缩仪浓缩至约50 uL；将浓缩液以条形点样至G254硅胶板，石油醚、丙酮按体积比3:2混合作为展开剂进行层析；层析结果见图1，得到单体如下：1：β-胡萝卜素；2：γ-胡萝卜素；3：脱镁叶绿素a；4：脱镁叶绿素b；5：叶绿素a；6：叶黄素；7：叶绿素b；8：紫黄质；9：玉米黄素；10：新黄质；11：脱镁叶绿素酸酯a；12：脱镁叶绿素酸酯b。将各色条分开小心分开刮下装入2 mL离心管；加入1 mL丙酮或无水乙醇溶解并12000r/min离心2 min； 采用分光光度计测定各组分吸光度并根据吸光系数计算浓度。
色素单体定性定量：采用分光光度计测定各单体紫外-可见吸收光谱（图3和图4中分别例举了叶绿素a和叶绿素b的特征光谱图），依据特征光谱参数对各单体成分进行定性分析，并根据色素特征吸光系数和吸光度计算色素单体浓度；
样品测定：采收茶树1芽2叶新鲜组织，立即放入液氮中灭活；使用研钵将新鲜组织研磨成粉末；称取100 mg样品粉末装入-20℃预冷过的2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5 mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min；离心：12000 r/min 离心5 min；取1 mL上清液装入样品瓶；使用HPLC分析测定；参照单体物质的定性定量结果进行样品中色素的定性和定量，茶树叶片脂溶性色素分析HPLC图谱见图2。
Claims (2)
1.一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于主要包括如下步骤：
1)茶树脂溶性色素单体分离：将叶片剪碎，装入2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5 mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min后置于4℃冰箱中避光浸提过夜；12000 r/min 离心5 min，取1 mL上清液装入2 ml样品瓶，用真空离心浓缩仪浓缩至50 μL；将浓缩液以条形点样至硅胶板，用石油醚、丙酮混合液作为展开剂进行层析；然后将各色条分别刮下装入2 mL离心管，加入1 mL丙酮或1 mL无水乙醇溶解并在转速12000r/min条件下离心2 min；
2）色素单体定性定量：采用分光光度计测定各单体紫外-可见吸收光谱，依据特征光谱参数对各单体成分进行定性分析，并根据色素特征吸光系数和吸光度计算色素单体浓度；
3）检测，定量称取0.1 g样品，装入2 mL离心管中，加入丙酮和两粒5 mm钢珠，使用球磨仪30 Hz研磨1 min后置于4℃冰箱中避光浸提过夜；12000 r/min 离心5 min，取1 mL上清液装入样品瓶HPLC-DAD测定，同时测定步骤2）中已定性的各色素单体，并以各色素单体的保留时间、光谱特性，以及吸光度为依据，对样品中色素组分进行定性和定量计算;所述色素单体为β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、脱镁叶绿素a、脱镁叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、叶绿素b、紫黄质、玉米黄素、新黄质、脱镁叶绿素酸酯a、脱镁叶绿素酸酯b。
2.根据权利要求1所述的一种同步定量检测茶树脂溶性色素单体的方法，其特征在于：所述展开剂的体积比为石油醚：丙酮=3：2 。
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| 茶饮料中微量色素物质的HPLC分析方法研究;潘顺顺等;《茶叶科学》;20071231;第27卷(第04期);第1-2节 * |
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