CN105524186B - 一种龙牙楤木芽多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种多糖提取物的制备方法，尤其是涉及一种龙牙楤木芽多糖的制备方法。本发明以东北野生龙牙楤木芽为原料，通过原料的干燥、粉碎，石油醚脱脂，复合酶水浸提，大孔树脂脱色脱蛋白，浓缩醇沉、离心得沉淀，真空干燥得产品。本发明首次将复合酶协同作用运用于东北野生龙牙楤木芽多糖的提取过程中，条件温和，保证了多糖的生物活性，一次提取率高，并采用ADS‑7强极性大孔吸附树脂进行除杂，可同时高效率完成脱除色素及蛋白质，操作简单，所得多糖纯度、色泽及复水性好，适用于工业化生产及应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖提取物的制备方法，尤其是涉及一种龙牙楤木芽多糖的制备方法。
背景技术
龙牙楤木（Aralia elata（Miq.）Seem.），又名辽东楤木、刺嫩芽，系五加科楤木属植物，广泛分布于我国黑龙江、吉林、辽宁等省市，野生资源丰富。可药食两用，根皮及茎皮入药，食其嫩芽。龙牙楤木芽为进出口优质山野菜，每吨盐渍品可达近4000元人民币，为现代餐桌上难得的无污染纯天然绿色食品。
随着植物多糖增强免疫功能、抗辐射损伤、抗肿瘤等生物活性功能的研究，人们已成功的将多糖应用于保健品、药品及化妆品行业的研究与开发之中。研究证实楤木多糖具有明确的抗辐射损伤、抗肿瘤、抗氧化等生物活性，这为研究龙牙楤木芽多糖及综合利用龙牙楤木资源、开发相关副产品具有重大意义。目前，国内外对龙牙楤木芽的研究主要集中于皂苷类成分的提取、分离、纯化、生物活性等研究方面，已证实其对人体有兴奋、强壮作用，可用于急慢性炎症及各种神经衰弱，而对其所含多糖类成分的研究却只见于粗提含量较高，与根皮、茎皮中含量相似，未见将复合酶法运用于龙牙楤木芽多糖提取方面及利用大孔吸附树脂进行脱色脱蛋白的相关报道，为了更好的充分利用龙牙楤木芽资源，提供一种高效、快速、简便、易操作的制备方法，便于龙牙楤木芽多糖日后的精制与纯化、结构鉴定、生物活性研究及应用于生产实际，成了目前丞待解决的重要问题。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术的空白，提供一种以东北野生龙牙楤木芽为原料，高效、快速、简便、易操作的龙牙楤木芽多糖的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种龙牙楤木芽多糖的制备方法，以龙牙楤木芽鲜品为原料，其特征在于按照以下步骤制备：
（1）将龙牙楤木芽鲜品净选、切制成段，烘干（60～80℃），粉碎成粗粉备用；
（2）取粗粉，按1:15～1:25质量体积比加入石油醚常温条件下超声功率150～250W、脱脂30～90min，过滤，挥尽石油醚，得脱脂后粗粉；
（3）将脱脂后粗粉与水按1：25～1:35的质量体积比混合，再添加由纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶组成的复合酶，各酶添加量按脱脂后粗粉质量的0.5%～1.5%，于45～55℃水浴恒温振荡120～180min，过滤，得粗多糖提取液；
（4）将粗多糖提取液进行减压浓缩，浓缩至一定体积，冷却至室温后，按体积比1:4加入95%乙醇，搅拌，4℃静置12h，离心（6000r/min）得沉淀，沉淀用无水乙醇固化4～6h，再用丙酮、乙醚洗涤后低温干燥；
（5）将干燥后沉淀加水复溶，配制成1mg/mL粗多糖溶液，按照1g处理好的ADS-7强极性吸附树脂处理20～40mL粗多糖溶液，在50～70℃恒温水浴振摇条件下静态吸附15～45min，过滤，得脱色脱蛋白后的多糖溶液；
（6）将（5）所得多糖溶液进行减压浓缩，浓缩至一定体积，按体积比1:4加入95%乙醇，搅拌，4℃静置12h，离心（4000r/min）得沉淀，真空干燥得龙牙楤木芽多糖。
龙牙楤木芽为东北野生龙牙楤木春季新发的嫩芽。
所用溶剂水其pH值为6.5～7.5。
最佳技术方案为，步骤（3）中添加纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶组成的复合酶，酶添加量为脱脂后粗粉质量的1.5%～4.5%，其中纤维素酶-果胶酶-木瓜蛋白酶比例为2：3：1。
步骤（5）中采用ADS-7强极性大孔吸附树脂进行脱色脱蛋白处理，1g树脂处理30mg粗多糖，静态吸附条件为恒温水浴70℃条件下振摇30min。
本发明的优点及效果：
（1）本发明提供了从东北野生山野菜龙牙楤木芽中提取多糖的制备方法，为深入研究龙牙楤木芽多糖的组分分离、结构及组成、生物活性及应用研究提供支持。
（2）本发明在多糖提取过程加入纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶组成的复合酶，简化了工艺过程，省略了提取前的浸泡过程；酶可以改变细胞壁的通透性，加快内容物的溶出，且可酶解糖蛋白使多糖成分最大限度的释放出来，一次提取率高，减少提取次数，节约能耗，杂质溶出减少；提取条件温和，降低多糖结构发生改变的几率与保证了所提多糖的生物活性。
（3）本发明前期所提多糖颜色呈棕黑色，严重影响其在诸多方面的应用，在前期脱色研究基础上，采用ADS-7强极性大孔吸附树脂对多糖进行脱色操作，收到了意想不到的效果。本发明所提供的脱色操作只需将处理好的树脂按比例加入到配制好的多糖溶液中进行短时间的振摇或搅拌，无需调节多糖溶液至酸性或碱性，即可高效率完成多糖中色素的脱除，同时发现，多糖中蛋白质也可被高效率脱除。
（4）操作过程简单，便于实际生产。
（5）所得多糖纯度高，颜色美观，复溶性好，便于应用。
下面将结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明不局限于如下实施方式。
具体实施方式
实施例1
（1）将野生龙牙楤木芽鲜品净选、切制成2～3cm段，于80℃烘干24h除去大部分水分后，再于60℃烘干48h，粉碎成粗粉备用；
（2）取粗粉5g，加入100ml石油醚，常温条件下超声波功率200W脱脂60min，过滤，挥尽石油醚，得脱脂后粗粉；
（3）将脱脂后粗粉与150ml纯化水混合，加入50mg纤维素酶、75mg果胶酶、25mg木瓜蛋白酶搅匀后，于50℃水浴恒温振荡120min，过滤，得粗多糖提取液；
（4）将粗多糖提取液进行减压浓缩至15ml，冷却至室温后，缓慢加入95%乙醇60ml，边加边搅拌，4℃静置12h，离心（6000r/min）得沉淀，沉淀用无水乙醇固化4h、丙酮、乙醚洗涤后低温干燥，得多糖粗粉；
（5）将多糖粗粉加入纯化水溶解后，配制成1mg/mL粗多糖溶液，加入配制体积1/15质量处理好的ADS-7强极性吸附树脂，于70℃恒温水浴振摇条件下静态吸附30min，过滤，得脱色脱蛋白后的多糖溶液；
（6）将脱色脱蛋白溶液减压浓缩至15ml，冷却至室温后，缓慢加入95%乙醇60ml，边加边搅拌，4℃静置12h，离心（4000r/min）得沉淀，真空干燥得龙牙楤木芽多糖0.48g。
实施例2
（1）将野生龙牙楤木芽鲜品净选、切制成2～3cm段，于80℃烘干72h除去大部分水分后，再于60℃烘干48h，粉碎成粗粉备用；
（2）取粗粉100g，加入1500ml石油醚，常温条件下超声波功率250W脱脂30min，过滤，挥尽石油醚，得脱脂后粗粉；
（3）将脱脂后粗粉与3500ml纯化水混合，加入2g纤维素酶、1.5g果胶酶、0.5g木瓜蛋白酶搅匀后，于55℃水浴恒温振荡150min，过滤，得粗多糖提取液；
（4）将粗多糖提取液进行减压浓缩至300ml，冷却至室温后，缓慢加入95%乙醇1200ml，边加边搅拌，4℃静置12h，离心（6000r/min）得沉淀，沉淀用无水乙醇固化6h，再用丙酮、乙醚洗涤后低温干燥，得多糖粗粉；
（5）将多糖粗粉加入纯化水溶解后，配制成1mg/mL粗多糖溶液，加入配制体积1/10质量处理好的ADS-7强极性吸附树脂，于60℃恒温水浴振摇条件下静态吸附15min，过滤，得脱色脱蛋白后的多糖溶液；
（6）将脱色脱蛋白溶液减压浓缩至250ml，冷却至室温后，缓慢加入95%乙醇1000ml，边加边搅拌，4℃静置12h，离心（4000r/min）得沉淀，真空干燥得龙牙楤木芽多糖9.42g。
Claims (6)
1.一种龙牙楤木芽多糖的制备方法，以龙牙楤木芽鲜品为原料，其特征在于按照以下步骤制备：
（1）将龙牙楤木芽鲜品净选、切制成段，60～80℃烘干，粉碎成粗粉备用；
（2）取粗粉，按1：15～1：25g/mL质量体积比加入石油醚，在常温超声波功率150～250W条件下，脱脂30～90min，过滤，挥尽石油醚，得脱脂后粗粉；
（3）将脱脂后粗粉与水按1：25～1:35g/mL质量体积比混合，再添加由纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶组成的复合酶，各酶添加量按脱脂后粗粉质量的0.5%～1.5%，于45～55℃水浴恒温振荡120～180min，过滤，得粗多糖提取液；
（4）将粗多糖提取液进行减压浓缩，浓缩至一定体积，冷却至室温后，按浓缩液与95%乙醇体积比1:4加入95%乙醇，搅拌，4℃静置12h，6000r/min离心得沉淀，沉淀用无水乙醇固化4～6h，丙酮、乙醚洗涤后低温干燥；
（5）将干燥后沉淀加水复溶，配制成1mg/mL粗多糖溶液，按照1g处理好的ADS-7强极性大孔吸附树脂处理20～40mL粗多糖溶液，在50～70℃恒温水浴振摇条件下静态吸附15～45min，过滤，得脱色脱蛋白后的多糖溶液；
（6）将（5）所得多糖溶液进行减压浓缩，浓缩至一定体积，按浓缩液与95%乙醇体积比1:4加入95%乙醇，搅拌，4℃静置12h，4000r/min离心得沉淀，真空干燥得龙牙楤木芽多糖。
2.如权利要求1所述的龙牙楤木芽多糖的制备方法，其特征在于，龙牙楤木芽为东北野生龙牙楤木春季新发的嫩芽。
3.如权利要求1所述的龙牙楤木芽多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）与步骤（5）的水其pH值为6.5～7.5。
4.如权利要求1所述的龙牙楤木芽多糖的制备方法，其特征在于，步骤（3）中添加纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶组成的复合酶，复合酶的添加量为脱脂后粗粉质量的1.5%～4.5%，其中纤维素酶-果胶酶-木瓜蛋白酶质量比例为2：3：1。
5.如权利要求1所述的龙牙楤木芽多糖的制备方法，其特征在于，步骤（5）中采用ADS-7强极性大孔吸附树脂进行脱色脱蛋白处理，1g树脂处理30mg粗多糖，静态吸附条件为恒温水浴70℃条件下振摇30min。
6.一种龙牙楤木芽多糖，其特征在于按照权利要求1～5任一项所述的方法制备得到。
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