CN105518685A

CN105518685A - 用于为罹患抑郁症的个体选择治疗方案的测定和方法

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Publication number: CN105518685A
Application number: CN201480026826.3A
Authority: CN
Inventors: M·法瓦; G·帕帕科斯塔斯; H·O·小科克; D·克朗拉格
Original assignee: Societe dAssistance Technique pour Produits Nestle SA
Current assignee: Nestec SA
Priority date: 2013-03-12
Filing date: 2014-03-11
Publication date: 2016-04-20
Also published as: WO2014164882A1; IL241156A0; CA2904418A1; KR20150131147A; TW201437635A; EP2973135A1; BR112015022820A2; JP2016518816A; RU2015143177A; BR112015022820A8; AU2014248949A1; MX2015012520A; EP2973135A4

Abstract

本发明提供用于根据单核苷酸多态性(SNP)的具体组合与对含叶酸化合物的治疗应答相关的认识，来为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者选择治疗方案和/或治疗该个体中的至少一种抑郁症症状的测定、方法和组合物。本文还提供用于改善对罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体施用的抗抑郁药的有效性的方法，其通过如果该个体携带预测治疗应答的具体SNP组合，对该个体施用含叶酸化合物的辅助治疗来改善。此外，本文提供含叶酸化合物的组合物。

Description

用于为罹患抑郁症的个体选择治疗方案的测定和方法

相关申请的交叉参考

本申请要求2013年3月12日提交的美国专利申请号13/796,362、2013年3月12日提交的美国临时申请号61/777,650和2013年12月10日提交的美国临时申请号61/914,338的优先权，这些专利申请的公开内容在此为了所有目的以其整体引入作为参考。

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序列表在此为了所有目的以其整体引入作为参考，该序列表写在2014年3月11日创建的文件SEQ_LISTING_95768-902165.TXT中，机器型式IBM-PC、MS视窗操作系统。

背景技术

最近的估计表明，每年有超过1900万18岁以上的美国人经历抑郁症。一般认为，叶酸缺乏状态与抑郁症之间存在相关性。

已研究了叶酸在中枢神经系统功能中的作用，包括叶酸在提供SAMe的一碳循环中的作用，SAMe是涉及神经活性物质合成、膜磷脂形成和核酸代谢的一系列反应的主要甲基供体。该证据表明叶酸可以影响抑郁症。在胃肠外施用和某些口服形式施用时，已在欧洲人研究中报道，SAM具有比安慰剂高的抗抑郁功效，与三环抗抑郁药的抗抑郁功效相当。叶酸似乎还影响四氢生物蝶呤的合成速率，四氢生物蝶呤是苯丙氨酸和色氨酸羟化中的辅因子，苯丙氨酸和色氨酸羟化是多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺生物合成中的限速步骤，而多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺是被假定为在抑郁症的病理发生中发挥作用的神经递质。此外，已显示甲基四氢叶酸(MTHF)结合突触前谷氨酸受体，其中它可能可以调节其他神经递质(包括单胺)的释放。叶酸缺乏引起的提高水平的高半胱氨酸可以通过产生提高水平的S-腺苷高半胱氨酸(SAH，其强烈抑制甲基化反应)而在介导它的一些神经精神病并发症中发挥作用，且还可能通过对N-甲基-天冬氨酸谷氨酸受体的活性发挥直接的兴奋毒性作用(excitoxiceffect)。

已在吸收障碍相关叶酸缺乏状态、抗惊厥药治疗的癫痫、巨幼红细胞性贫血和膳食叶酸限制的临床描述中讨论了神经精神病症状和抑郁症症状，包括情感淡漠、疲劳、失眠、易怒和注意力不集中。之前的研究已报道，精神病群组(主要来自英国)中多达三分之一的患者显示低或不足的血清叶酸值，为数不多的评估红细胞(RBC)叶酸作为组织叶酸贮存的更准确反映的研究中的发现大体相当。在将抑郁症患者与精神病或非精神病对照个体相比较的研究的亚组中，据报道，抑郁症患者具有低于除具有相似的低叶酸流行率的酒精中毒患者之外的所有其他组中的水平的血清叶酸、RBC叶酸[21]或血清甲基四氢叶酸(MTHF)水平。此外，低血清或RBC叶酸和血清MTHF常与抑郁症患者中更高的症状严重度相关。

虽然过去十年已在抑郁症的治疗中取得了显著的进步，但多达29％至46％服用抗抑郁药的抑郁症患者仍部分地或完全地对治疗具有抗性。此外，患有抗治疗抑郁症的患者几乎没有其他选择。约50％接受抗抑郁药的MDD患者无应答或具有部分应答。残余症状的存在也与更高的复发风险、更长期的抑郁发作和更短的发作间持续时间相关。治疗指导推荐用于管理无应答或部分应答的四种可能的策略，包括：增加抗抑郁药的剂量；用不同抗抑郁药替换该药物；用非抗抑郁剂对抗(argument)抗抑郁治疗；或将初始抗抑郁药与第二抗抑郁药组合。由于不是每种治疗方案对每一个体都有效，存在鉴定可便于为罹患抑郁症的个体选择适当和有效的治疗方案的预测性标志的需要。

发明概述

大部分抑郁症(如严重抑郁性障碍)患者对常规抗抑郁药(例如选择性5-羟色胺再吸收抑制剂)仅显示部分应答或无应答。因此，存在开发有效的抗抑郁剂治疗和/或分层抑郁症患者以使他们可以接受适当的抗抑郁剂治疗的强烈需要。本文所述的多种实施方案的方面来自下述发现，该发现是与对用含叶酸化合物作为单一治疗或作为抗抑郁药的辅助剂(adjunct)治疗抑郁症(例如严重抑郁性障碍)的功效应答(efficacyresponse)相关的单核苷酸多态性(SNP)、外周生物标志物和/或临床特征。在一些实施方案中，本发明人也已指出，本文所述的这些标志或状况(condition)也可以用于为患有对治疗具有抗性，例如对至少一种选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)具有抗性的抑郁症(TRD)的个体选择更有效的治疗。

特别地，可以指示患者(例如患有严重抑郁性障碍和/或TRD)适合于包含含叶酸化合物的治疗方案的生物标志物之一或组合包括但不限于如下通过rs号标识的至少一个或更多个SNP：在亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)中存在的rs1801133；在MTHFR中存在的rs2274976；在甲硫氨酸合成酶(MTR)中存在的rs1805087；在甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)中存在的rs1801394；在钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)中存在的rs1006737；在DNA(胞嘧啶-5)-甲基转移酶3β(DNMT3B)中存在的rs1883729；在GTP环化水解酶1反馈调节蛋白(GCHFR)中存在的rs7163862；在还原型叶酸载体蛋白(RCF2)中存在的rs12659；在叶酸水解酶(前列腺特异的膜抗原)(FOLH1)中存在的rs202676；在还原型叶酸载体蛋白(RCF1)中存在的rs2297291；在还原型叶酸载体蛋白1(RCF1)中存在的rs1051266；在GTP环化水解酶1(GCH1)中存在的rs8007267；在磷酸胆碱转胞苷酰酶(cytidylytransferase)A(PCYT1A)中存在的rs7639752；在多巴胺受体D2(DRD2)中存在的rs6275；在DRD2中存在的rs1079596；在DRD2中存在的rs11240594；在儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)中存在的rs4633；在COMT中存在的rs4680；在多巴胺活性转运蛋白(DAT或SLC6A3)中存在的rs250682；在亚胺甲基转移酶环化脱氨酶(FTCD)中存在的rs2277820；在亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP+依赖型)1(MTHFD1)中存在的rs2236225；及其任何组合；和/或s-腺苷甲硫氨酸(SAM)、s-腺苷高半胱氨酸(SAH)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、高敏感性c-反应蛋白(hsCRP)及其任意组合中至少一个的表达。此外或备选地，确定人类个体是否肥胖(例如通过测量BMI值)也可以用作生物标志来为罹患抑郁症的患者或具有罹患抑郁症风险的患者选择适当的治疗方案(例如包含或不包含含叶酸化合物)。本文公开的此类生物标志的任意个体或组合可以用于鉴定诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者，用于接受包含含叶酸化合物的治疗方案。在一些实施方案中，含叶酸化合物可以在缺乏抗抑郁药的情况下使用，用于在所选携带至少一种或更多种本文所述生物标志的个体中治疗抑郁症(例如严重抑郁性障碍)。在备选实施方案中，含叶酸化合物可以单独使用或与抗抑郁药组合(例如作为辅助剂)使用，用于在所选携带至少一种或更多种本文所述生物标志的个体中治疗抑郁症(例如严重抑郁性障碍)。在一个实施方案中，该抗抑郁药可以包括选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。SSRI的实例包括但不限于氟西汀(fluoxetine)、西酞普兰(citalopram)、赛乐特(paroxetine)、依地普仑(escitalopram)、舍曲林(sertraline)及其任意组合。

因此，本文所提供的涉及这样的测定、方法、系统和试剂盒，其用于为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体选择治疗方案、治疗罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体，和/或改善向罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体推荐或施用的治疗方案的有效性。本文所提供的还涉及用于在所选携带本文所述生物标志物或状况中的至少一种(例如至少两种或更多种)或任何组合的个体(例如人类个体)中治疗抑郁症的包含叶酸的组合物。

在一方面，本文提供用于治疗人类个体中的至少一种抑郁症症状的方法。该方法包括，基于该至少两种生物标志的组合与对含叶酸化合物的阳性症状减轻应答相关的认识，对诊断罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险并进一步确定为携带至少两种以下生物标志的组合的人类个体施用包含有效量的含叶酸化合物的组合物：

i.SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP(标识为rs1801133)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:7分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；

ii.SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分；

iii.SEQIDNO:1的1793位或SEQIDNO:8的27位上的SNP(标识为rs2274976)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:8分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；

iv.SEQIDNO:3的66位或SEQIDNO:10的27位上的SNP(标识为rs1801394)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:3和SEQIDNO:10分别独立地是甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)的基因组核酸序列的部分；

v.SEQIDNO:11的27位上的SNP(标识为rs1006737)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:11是钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)的基因组核酸序列的部分；

vi.SEQIDNO:12的27位上的SNP(标识为rs1883729)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:12是DNA(胞嘧啶-5)-甲基转移酶3β(DNMT3B)的基因组核酸序列的部分；

vii.SEQIDNO:13的27位上的SNP(标识为rs7163862)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:13是GTP环化水解酶1反馈调节蛋白(GCHFR)的基因组核酸序列的部分；

viii.SEQIDNO:14的27位上的SNP(标识为rs12659)，其包含两个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:14是还原型叶酸载体蛋白(RCF2)的基因组核酸序列的部分；

ix.SEQIDNO:15的27位上的SNP(标识为rs202676)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:15是叶酸水解酶(前列腺特异的膜抗原)1(FOLH1)的基因组核酸序列的部分；

x.SEQIDNO:16的27位上的SNP(标识为rs2297291)，其包含两个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:16是还原型叶酸载体蛋白(RCF1)的基因组核酸序列的部分；

xi.SEQIDNO:17的27位上的SNP(标识为rs1051266)，其包含两个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:17是还原型叶酸载体蛋白(RCF1)的基因组核酸序列的部分；

xii.SEQIDNO:18的27位上的SNP(标识为rs8007267)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:18是GTP环化水解酶1(GCH1)的基因组核酸序列的部分；

xiii.SEQIDNO:19的27位上的SNP(标识为rs7639752)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:19是磷酸胆碱转胞苷酰酶A(PCYT1A)的基因组核酸序列的部分；

xiv.SEQIDNO:20的27位上的SNP(标识为rs6275)，其包含两个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:20是多巴胺受体D2(DRD2)的基因组核酸序列的部分；

xv.SEQIDNO:21的27位上的SNP(标识为rs1079596)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:21是多巴胺受体D2(DRD2)的基因组核酸序列的部分；

xvi.SEQIDNO:22的27位上的SNP(标识为rs11240594)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:22是多巴胺受体D2(DRD2)的基因组核酸序列的部分；

xvii.SEQIDNO:23的27位上的SNP(标识为rs4633)，其包含两个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:23是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；

xviii.SEQIDNO:24的27位上的SNP(标识为rs4680)，其包含两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:24是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；

xix.SEQIDNO:25的27位上的SNP(标识为rs250682)，其包含至少一个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:25是溶质载体家族6(神经递质转运(neurotransmittedtransported)的多巴胺)成员3(SLC6A3)的基因组核酸序列的部分；

xx.SEQIDNO:26的27位上的SNP(标识为rs2277820)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:26是亚胺甲基转移酶环化脱氨酶(FTCD)的基因组核酸序列的部分；

xxi.SEQIDNO:27的27位上的SNP(标识为rs2236225)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:27是亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP+依赖型)1(MTHFD1)的基因组核酸序列的部分；

xxii.肥胖；

xxiii.SAM与SAH的表达比值小于预先确定的参考比值；

xxiv.4-HNE的表达高于第一预先确定的参考值；和

xxv.hsCRP的表达高于第二预先确定的参考值；

在一些实施方案中，该至少两种生物标志的组合包含以下：

i.SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP(标识为rs1801133)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:7分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；和

ii.SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分。

在一些实施方案中，该至少两种生物标志的组合进一步包含本文所述的生物标志(iii)-(xxv)中的至少一种。在其他实施方案中，肥胖表征为以下肥胖指征中的至少一种：

a.BMI值大于30kg/m2；

b.男性腰围大于40英寸(或大于120cm)，或女性腰围大于35英寸(或大于88cm)；

c.男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和

d.男性体脂百分比为至少约25％，或女性体脂百分比为至少约32％。

在一些实施方案中，该方法进一步包括测定从个体获得的生物样品来确定该至少两种生物标志的存在。

在一些实施方案中，该生物样品包含选自血液样品、尿液样品、口腔样品、唾液样品或脑脊液样品的样品。

在一些实施方案中，该测定包括用至少一组任一个SNP侧翼的引物扩增该生物样品。在一些情况下，在多重扩增测定中使用扩增至少两个SNP的至少两组引物。在其他实施方案中，该测定包括用气相色谱、质谱分析法、高效液相色谱、核磁共振(NMR)波谱学、酶联测定或其任意组合分开和/或检测SAM、SAH、4-HNE、hsCRP或其任意组合在生物样品中的存在。

在一些实施方案中，预先确定的SAM/SAH参考比值是在正常健康个体的生物样品中测量的对照SAM/SAH比值。在一些实施方案中，在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值在从约4至约12的范围内。在某些实施方案中，预先确定的SAM/SAH参考比值是在血浆样品中测量的约3.0。在一些实施方案中，第一预先确定的4-HNE的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的4-HNE的对照值。在一些实施方案中，在正常健康个体的血清样品中测量的4-HNE的对照值约为0.24μmol/L血清(或约0.04mg/L血清)。在其他实施方案中，第一预先确定的4-HNE的参考值是在血浆样品中测量的约3mg/L血浆。在一些实施方案中，第二预先确定的hsCRP的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的hsCRP的对照值。在其他实施方案中，在正常健康个体的血清样品中测量的hsCRP的对照值在从约0.5mg/L血清至约4.5mg/L血清的范围内。在一些实施方案中，第二预先确定的hsCRP的参考值是在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆。

在一些实施方案中，该方法进一步包括测定个体的身体测量值。在一些情况下，该身体测量值包括体重、身高、腰围、臀围、体脂百分比或其任意组合。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量是约7.5mg/天至约50mg/天。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量以每天一个以上分剂量施用。

在一些实施方案中，该施用为口服。

在一些实施方案中，配制该组合物来在施用该组合物后至少约3-6小时的时期内释放至少部分含叶酸化合物。在一些情况下，该释放是稳态释放。

在一些实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用抗抑郁药。在一些情况下，该抗抑郁药与含叶酸化合物组合施用提高了该抗抑郁药的有效性。在一些实施方案中，该抗抑郁药包含选择性5-羟色胺再吸收抑制剂。在一些情况下，该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其任意组合。

在一些实施方案中，该方法进一步为个体选择包含含叶酸化合物的治疗，可选地与抗抑郁药组合施用。

在一些实施方案中，该抑郁症是严重抑郁性障碍。

在一些实施方案中，诊断为罹患抑郁症的个体对至少一种抗抑郁药单一治疗具有抗性。在一些实施方案中，该个体是成年个体。

在一些实施方案中，该至少一种抑郁症症状选自情绪低落或抑郁、快感缺乏、能量水平低、内疚、工作和兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知降低或其任意组合。

在另一方面，本文提供改善对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法。该方法包括，基于该至少两种生物标志的组合与提高抗抑郁药在与含叶酸化合物组合施用时的有效性相关的认识，与抗抑郁药组合对诊断罹患抑郁症并进一步确定为携带至少两个以下生物标志的组合的人类个体施用包含有效量的含叶酸化合物的组合物：

xix.SEQIDNO:25的27位上的SNP(标识为rs250682)，其包含至少一个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:25是溶质载体家族6(神经递质转运的多巴胺)成员3(SLC6A3)的基因组核酸序列的部分；

xxii.肥胖；

xxiii.SAM与SAH的表达比值小于预先确定的参考比值；

xxiv.4-HNE的表达高于第一预先确定的参考值；和

xxv.hsCRP的表达高于第二预先确定的参考值；

在一些实施方案中，该至少两种生物标志的组合包含以下：

在一些实施方案中，该至少两种生物标志的组合进一步包含本文所述的生物标志(iii)-(xxv)中的至少一种。

在一些实施方案中，肥胖表征为以下肥胖指征中的至少一种：

a)BMI值大于30kg/m2；

b)男性腰围大于40英寸(或大于120cm)，或女性腰围大于35英寸(或大于88cm)；

c)男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和

d)男性体脂百分比为至少约25％，或女性体脂百分比为至少约32％。

在一些实施方案中，该测定包括用至少一组任一SNP侧翼的引物扩增该生物样品。在一些情况下，在多重扩增测定中使用扩增至少两个SNP的至少两组引物。在其他实施方案中，该测定包括用气相色谱、质谱分析法、高效液相色谱、核磁共振(NMR)波谱学、酶联测定或其任意组合分开和/或检测SAM、SAH、4-HNE、hsCRP或其任意组合在生物样品中的存在。

在一些实施方案中，预先确定的SAM/SAH参考比值是在正常健康个体的生物样品中测量的对照SAM/SAH比值。在一些实施方案中，在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值在从约4至约12的范围内。在某些实施方案中，预先确定的SAM/SAH参考比值是在血浆样品中测量的约3.0。

在一些实施方案中，第一预先确定的4-HNE的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的4-HNE的对照值。在一些情况下，在正常健康个体的血清样品中测量的4-HNE的对照值约为0.24μmol/L血清(或约0.04mg/L血清)。在其他实施方案中，第一预先确定的4-HNE的参考值是在血浆样品中测量的约3mg/L血浆。

在一些实施方案中，第二预先确定的hsCRP的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的hsCRP的对照值。在一些情况下，在正常健康个体的血清样品中测量的hsCRP的对照值在从约0.5mg/L血清至约4.5mg/L血清的范围内。在一些实施方案中，第二预先确定的hsCRP的参考值是在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量是约7.5mg/天至约50mg/天。在一些情况下，该含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。在其他情况下，该含叶酸化合物的有效量以每天一个以上分剂量施用。在一些实施方案中，该施用为口服。

在一些实施方案中，该抗抑郁药包含选择性5-羟色胺再吸收抑制剂。在一些情况下，该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其任意组合。

在一些实施方案中，该方法进一步包括为个体选择包含与抗抑郁药组合施用的含叶酸化合物的治疗。

在一些实施方案中，该抑郁症是严重抑郁性障碍。

在一些实施方案中，改善对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法导致选自以下的至少一种抑郁症症状的改善：情绪低落或抑郁、快感缺乏、能量水平低、内疚、工作和兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知降低或其任意组合。

在另一方面，本文提供治疗个体中的至少一种抑郁症症状的方法，其包括，基于一个或多个SNP等位基因的存在与对含叶酸化合物的阳性症状减轻应答相关的认识，对个体施用有效量的含叶酸化合物，该个体诊断为罹患抑郁症或具有抑郁症的风险，且进一步确定为携带SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，该SNP包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分。

在另一方面，本文提供用于为诊断罹患抑郁症的个体选择治疗方案的方法。该方法包括：

确定以下SNP之一在来自该个体的试样中的存在：

(i)SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分；

(ii)SEQIDNO:23的27位上的SNP(标识为rs4633)，其包含两个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:23是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；或

(iii)SEQIDNO:24的27位上的SNP(标识为rs4680)，其包含两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:24是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；和

在确定该个体携带MTR、COMT(rs4633)和COMT(rs4680)SNP生物标志之一时，可选地对该个体施用含叶酸化合物(可选地与抗抑郁药组合)。

在另一方面，本文提供用于为诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体选择治疗方案的测定。该测定包括：

(a)分析来自该个体的样品，以确定选自以下的至少两种遗传生物标志的基因型：亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶(MTR)、GTP环化水解酶1(GCH1)、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)及其组合；

(b)通过基因型分型来检测该至少两种遗传生物标志的每一个中单核苷酸多态性(SNP)的存在或缺乏，其中SNP的存在如下所示：

(i)标识为rs1801133的SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP，其包含至少一个MTHFR的胸腺嘧啶“T”等位基因；

(ii)标识为rs1805087的SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP，其包含至少一个MTR的鸟嘌呤“G”等位基因；

(iii)标识为rs8007267的SEQIDNO:18的27位上的SNP，其包含至少一个GCH1的胸腺嘧啶“T”等位基因；

(iv)标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因；和

(c)基于该SNP的存在选择包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。

在一些实施方案中，该测定进一步包括施用该治疗方案。

在一些实施方案中，该至少两种遗传生物标志是MTHFR和MTR对。在其他实施方案中，该至少两种遗传生物标志是GCH1和COMT对。

在一些实施方案中，步骤(a)进一步包括测定至少一种附加状况，该附加状况选自肥胖、SAM/SAH比值、4-HNE水平、hsCRP水平及其组合。

在一些实施方案中，步骤(b)进一步包括检测以下状况中的至少一种：

(i)SAM与SAH的表达水平比值小于预先确定的参考比值；

(ii)4-HNE的表达水平高于第一预先确定的参考值；和

(iii)hsCRP的表达水平高于第二预先确定的参考值。

在一些情况下，在个体中存在任意以下状况时确定为肥胖：BMI值为30kg/m2或更大，男性腰围大于40英寸或女性腰围大于35英寸，男性腰臀比为约0.95或女性腰臀比高于0.80，或男性体脂百分比为至少约25％或女性体脂百分比为至少约32％。

在一些情况下，如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则预先确定的SAM/SAH参考比值从约4至约12。在其他情况下，如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则预先确定的SAM/SAH参考比值从为约3.0。

在一些情况下，如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则第一预先确定的4-HNE的参考值为约0.24微摩尔/L或约0.04mg/L。在其他情况下，如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则第一预先确定的4-HNE的参考值为约3.0mg/L。

在一些情况下，如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则第二预先确定的hsCRP的参考值从约0.5mg/L至约4.5mg/L。在其他情况下，如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则第二预先确定的hsCRP的参考值为约2.3mg/L。

在一些实施方案中，该样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、口腔样品和唾液样品。

在一些实施方案中，抑郁症是严重抑郁性障碍。

在该测定的一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约15mg/天至约50mg/天。在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约20mg/天。还在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约40mg/天。在一些情况下，按每天两次约20mg剂量施用该含叶酸化合物。

在一些实施方案中，该治疗方案进一步包括抗抑郁药。在一些情况下，该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。在一些实施方案中，该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林或其组合。

在一些实施方案中，该个体对抗抑郁药单一治疗应答不足或具有抗性。

在一些实施方案中，检测SNP的存在或缺乏的步骤包括杂交测定、扩增测定、引物延伸测定、寡核苷酸连接测定、测序测定或其组合。

在一些实施方案中，检测该状况的步骤包括免疫测定、免疫组织化学(IHC)、气相色谱(GC)、质谱分析法(MS)、高效液相色谱(HPLC)、核磁共振(NMR)波谱学或流式细胞术。

在另一方面，本文提供用于治疗诊断为罹患抑郁症或具有抑郁症的风险的人类个体中的至少一种抑郁症症状的方法。该方法包括：

(a)分析来自该个体的样品，以确定选自以下的至少两种单核苷酸多态性(SNP)的至少一种组合的存在或缺乏：

(i)标识为rs1801133的SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP，其包含至少一个MTHFR的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs1805087的SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP，其包含至少一个MTR的鸟嘌呤“G”等位基因；和

(ii)标识为rs8007267的SEQIDNO:18的27位上的SNP，其包含至少一个GCH1的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因，其中至少一种组合的存在与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关；和

(b)对该个体施用包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案，以治疗至少一种抑郁症症状。

在一些实施方案中，至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物在rs1801133上的存在和至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物在rs1805087上的存在与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。在其他实施方案中，至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物在rs8007267上的存在和两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物在rs4860上的存在与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。

在一些实施方案中，抑郁症是严重抑郁性障碍。在一些实施方案中，该至少一种抑郁症症状选自情绪抑郁、内疚、工作或兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知障碍及其组合。

在一些实施方案中，该个体肥胖。在一些情况下，肥胖表征为该个体中存在以下状况中的至少一种：BMI值为30kg/m2或更大，男性腰围大于40英寸或女性腰围大于35英寸，男性腰臀比为约0.95或女性腰臀比高于0.80，或男性体脂百分比为至少约25％或女性体脂百分比为至少约32％。

在该方法的一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约15mg/天至约50mg/天。在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约20mg/天。还在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量为约40mg/天。在一些情况下，按每天两次约20mg剂量施用该含叶酸化合物。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物口服施用。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物是L-甲基叶酸。

在一些实施方案中，该个体对抗抑郁药单一治疗(如SSRI)应答不足或具有抗性。

在一些实施方案中，该方法进一步包括测量至少一种生物标志的表达水平，并确定该生物标志的水平是否与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。在一些情况下，该附加生物标志选自SAM、SAH、4-HNE、hsCRP及其组合。

在一些实施方案中，如果符合以下状况中的一种或多种，则该个体可能对含叶酸化合物具有症状减轻应答：

(a)SAM与SAH的表达水平比值小于预先确定的参考比值；

(b)4-HNE的表达水平高于第一预先确定的参考值；和

(c)hsCRP的表达水平高于第二预先确定的参考值。

还在另一方面，本文提供用于改善对诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法。该方法包括：

如果该个体携带至少一种以下单核苷酸多态性(SNP)的组合，则与抗抑郁药组合施用包含有效量的含叶酸化合物的治疗组合物：

(i)标识为rs1801133的SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP，其包含至少一个MTHFR的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs1805087的SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP，其包含至少一个MTR的鸟嘌呤“G”等位基因；或

(ii)标识为rs8007267的SEQIDNO:18的27位上的SNP，其包含至少一个GCH1的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因。

在一些实施方案中，该个体接受抗抑郁药单一治疗。在一些实施方案中，该个体对抗抑郁药单一治疗应答不足。在一些情况下，该应答不足基于临床评估(例如神经心理学测试)。

在一些实施方案中，该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。在一些实施方案中，该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林或其组合。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。在其他实施方案中，该含叶酸化合物的有效量以每天至少两个分剂量施用。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物口服施用。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物是L-甲基叶酸。

在一些实施方案中，抑郁症是严重抑郁性障碍。

在另一方面，本文提供含叶酸组合物，其用于治疗人类个体中的抑郁症，该人类个体诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险，且携带至少两个选自以下的SNP：

(iv)标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因。

在一些实施方案中，该至少两个SNP是标识为rs801133的SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP，其包含至少一个MTHFR的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs1805087的SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP，其包含至少一个MTR的鸟嘌呤“G”等位基因。在其他实施方案中，该至少两个SNP是标识为rs8007267的SEQIDNO:18的27位上的SNP，其包含至少一个GCH1的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因。

在一些实施方案中，抑郁症是严重抑郁性障碍。

在一些实施方案中，该个体接受至少一种抗抑郁药。

在一些实施方案中，对携带至少两个SNP的个体施用包含含叶酸化合物的辅助治疗和抗抑郁药。

在一些实施方案中，该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物包含约15mg至约50mgL-甲基叶酸。在一些实施方案中，该含叶酸化合物包含约20mgL-甲基叶酸。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物具有预先确定的释放特征(profile)。在一些情况下，该预先确定的释放特征是缓释。在其他情况下，该预先确定的释放特征是脉冲释放。还在其他情况下，该预先确定的释放特征是计时控制释放(chrono-controlledrelease)。

在一些实施方案中，该含叶酸组合物配制为在施用该组合物后至少3至6小时的时期内释放至少30％的含叶酸化合物。

还在另一方面，本文提供用于为诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体选择治疗方案的试剂盒。该试剂盒包含至少一种试剂，该试剂用于确定至少两种(例如2、3或4)以下单核苷酸多态性(SNP)在从该个体采集的样品中的存在或缺乏：

该试剂盒的使用说明书。

在一些实施方案中，该至少一种试剂选自限制酶、寡核苷酸、核酸探针、聚合酶及其组合。

对本领域技术人员而言，本发明的其他目的、特征和优势将从以下发明详述和附图显而易见。

附图简述

图1A-B是表格，总结了用含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)治疗两个组后，与携带完全正常的各基因的MDD患者相比，携带一个SNP标志(例如所示基因上的罕见变体)或2个所示SNP标志的组合的MDD患者中HAMD-28、HAM7和CPFQ的平均变化。图1A是一组表格，总结了用含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)治疗两个组后，与携带完全正常的各基因的MDD患者相比，携带一个SNP标志(例如所示基因上的罕见变体)的MDD患者中HAMD-28、HAM7和CPFQ的平均变化。图1B是一组表格，总结了用含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)治疗两个组后，与携带完全正常的各基因的MDD患者相比，携带2个所示SNP标志的组合的MDD患者中HAMD-28、HAM7和CPFQ的平均变化。

图2是一组结果表格，显示在用包含含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)的治疗方案治疗患者时，所示状况(2个SNP标志的组合、或1个SNP标志和肥胖指征(例如BMI>30kg/m²)的组合)在MDD患者中的存在或缺乏对HAMD-28或HAMD-7值的影响。

图3是一组结果表格，显示在用包含含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)的治疗方案治疗患者时，所示状况(单个SNP标志)在MDD患者中的存在或缺乏对HAMD-7值的影响。

图4是一组结果表格，显示在用包含含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)的治疗方案治疗患者时，所示状况(1个SNP标志和肥胖指征(例如BMI>30kg/m²)的组合)在MDD患者中的存在或缺乏对HAMD-28或HAMD-7值的影响。

图5是一组结果表格，显示在用包含含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)的治疗方案治疗患者时，所示状况(2个SNP标志的组合、或1个SNP标志和肥胖指征(例如BMI>30kg/m²)的组合)在MDD患者中的存在或缺乏对CPFQ值的影响。

图6是一组结果表格，显示在用包含含叶酸化合物(例如作为SSRI的辅助剂)的治疗方案治疗患者时，所示状况(单个SNP标志)在MDD患者中的存在或缺乏对CPFQ值的影响。

图7A-B是一组结果表格，显示关于遗传调节因子(例如种族、年龄、性别和BMI)的影响的统计学分析，比较临床研究的安慰剂(施用抗抑郁药而无含叶酸化合物)或含叶酸治疗(施用含叶酸化合物作为抗抑郁药的佐剂)组内的生物标志阳性个体和生物标志阴性个体。图7A代表一组患者。图7B代表第二组患者。结果显示MTR2756AG或GG基因型(rs1805087)阳性个体的所有所示遗传修饰因子(例如种族、年龄、性别和BMI)内与此SNP阴性的个体相比在统计上显著的治疗作用。COMTCC(rs4633)或COMTGG(rs4680)SNP阳性个体也在至少一个遗传调节因子类别中显示统计上显著的治疗作用。

图8A-B是一组结果表格，显示临床研究的安慰剂和含叶酸治疗组内的生物标志阳性个体的应答率。应答者通过评价期内HAMD-28降低至少约50％来指示。图8A显示单个生物标志的应答率。图8B显示双标志组合的应答率。

图9A-B显示按正常和假定阳性的涉及甲基化的标志(上)和涉及L-甲基叶酸代谢的标志(下)分层的L甲基叶酸的HDRS-28应答率(治疗减安慰剂)。图9A显示总体、MTHFRCC、MTHFRCT/TT、FOLH1AA、FOLH1AG/GG、GCHFRAA、GCHFRTA/TT、RFC2AA(例如RFC1815AA)、RFC2815TT(例如RFC1815TT)、RFC1GG、RFC1AA、RFC180GG、RFC180AA、GCH1CC和GCH1TC/TT的应答率。图9B显示总体、CACNA1CGG、CACNA1CAG/AA、DNMT3BGG、DNMT3BAG/AA、DRD2129CC、DRD2129TTCC、MTR2756AA、MTR2756AG/GG、COMTTT、COMTCC、COMTAA和COMTGG的应答率。

图10按照单个生物标志例如COMTA/GG、COMTGG、GCH1CC、GCH1TC/TT、MTR2756AA、MTR2756AA/GG、MTHFR677CC、MTHFR677TC/TT、BMI<30kg/m²和BMI≥30kg/m²的存在显示L-甲基叶酸对安慰剂的HDRS-28偏离基线的平均变化。p值用于L-甲基叶酸对安慰剂的比较。

图11按照单个标志的存在显示L-甲基叶酸对安慰剂的合并效应大小。

图12按照生物标志的双重组合的存在显示L-甲基叶酸对安慰剂的CGI、HDRS-7和CPFQ得分的合并平均变化。NA表示数据由于样本量小而不可得。对于L-甲基叶酸对安慰剂，*p<0.05，**p<0.001。

发明详述

I.前言

本发明部分提供用于为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者选择治疗方案(例如，含叶酸化合如L-甲基叶酸的辅助(附加)治疗)的测定。还提供用于治疗罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者中的至少一种抑郁症症状的方法。此外，还提供用于改善对罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者施用的抗抑郁药的有效性的方法。该测定和/或方法包括鉴定该患者是否携带协同双标志组合，如亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR677CT/TT；rs1801133)和甲硫氨酸合成酶(MTR2756AG/GG；rs1805087)SNP标志对和/或GTP环化水解酶1(GCH1TC/TT；rs8007267)和儿茶酚-O-甲基转移酶(COMTVal158MetGG；rs4680)SNP标志对。本文还提供含叶酸组合物，其用于治疗诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者，该患者还携带协同双标志组合。

本文提供的测定、方法和组合物涉及见于例如美国专利申请号US2013/0172361和US2013/0267523及国际专利申请公开号WO2013/074676中的描述，其公开内容在此为了所有目的以其整体引入作为参考。

II.定义

如本文所使用，除非另有说明，以下术语具有归结于它们的含义。

应理解，本发明不限于本文所述的具体方法、流程和试剂，因为这些可以变动。本文所用的术语仅是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求书定义。

术语“生物标志”或“标志”包括可以用于按照本文提供的测定和/或方法预测、鉴定、评价、评估、测定、监测和/或优化含叶酸化合物应答、功效、毒性和/或抗性的任意遗传标志、生化标志、血清标志、或其他临床特征。

术语“核酸”为本领域公知。本文所用的“核酸”将泛指DNA、RNA或其衍生物或类似物的分子(即链)，其包含核碱基(nucleobase)。核碱基包括例如见于DNA(例如腺嘌呤“A”、鸟嘌呤“G”、胸腺嘧啶“T”或胞嘧啶“C”)或RNA(例如A、G、尿嘧啶“U”或“C”)中的天然存在的嘌呤或嘧啶碱基。术语“核酸”涵盖术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”，其各作为术语“核酸”的亚属。术语“寡核苷酸”指长度在约3个和约100个核碱基之间的分子。术语“多核苷酸”指长度大于约100个核碱基的至少一个分子。

本文所用的术语“互补的”或“互补序列”指两条核酸链的区域之间或同一核酸链的两个区域之间的序列互补性的广义概念。已知如果该残基是胸腺嘧啶或尿嘧啶，则第一核酸区的腺嘌呤残基能够与与该第一区域反向平行的第二核酸区的残基形成特异性氢键(“碱基配对”)。类似地，已知如果该残基是鸟嘌呤，则第一核酸链的胞嘧啶残基能够与与该第一链反向平行的第二核酸链的残基碱基配对。如果在两个区域以反向平行方式排列时，第一区域的至少一个核苷酸残基能够与第二区域的残基碱基配对，则核酸的第一区域与相同或不同核酸的第二区域互补。优选地，第一区域包含第一部分，第二区域包含第二部分，由此，在第一和第二部分以反向平行方式排列时，使得第一部分的至少约50％、优选至少约75％、至少约90％或至少约95％或至少100％的核苷酸残基能够与第二部分中的核苷酸残基碱基配对。更优选地，第一部分的所有核苷酸残基都能够与第二部分中的核苷酸残基碱基配对。

术语“变体”、“变异”、“突变”或“多态性”在本文中可互换使用，指核酸序列在一群个体的成员间的差异。在它们在单个核苷酸处变动时，多态性有时可以称为“单核苷酸多态性”或“SNP”。在一些实施方案中，多态性可以是同义的或非同义的。在存在于编码区或非编码区中时，同义多态性通常不导致氨基酸改变，但可以导致mRNA稳定性改变或选择性剪接位点改变。在存在于编码区中时，非同义多态性可以导致一个或多个密码子的改变，导致氨基酸链中的氨基酸替换。这类突变和多态性在个体内可以是杂合的或纯合的。纯合个体在同源染色体上的一个或多个对应的基因座上具有相同的等位基因，而杂合个体在同源染色体上的一个或多个对应的基因座上具有两个不同的等位基因。因此称多态性是“等位的”，这是因为，由于多态性的存在，物种的一些成员携带具有一种序列的基因(例如正常或野生型“等位基因”)，而其他成员可以具有改变的序列(例如变体或突变“等位基因”)。

在定义SNP位置、SNP等位基因或核苷酸序列中，提到核酸分子的一条链上的具体位点上的腺嘌呤“A”、胸腺嘧啶“T”(尿嘧啶“U”)、胞嘧啶“C”或鸟嘌呤“G”，也(分别)定义了该核酸分子的互补链上的对应位点上的胸腺嘧啶“T”(尿嘧啶“U”)、腺嘌呤“A”、鸟嘌呤“G”或胞嘧啶“C”。因此，为了提及具体SNP位置、SNP等位基因或核苷酸序列，可以提到任一条链。

术语“基因型”指整个细胞或某个基因的具体等位基因组成，而术语“表型”指具体基因型的可检测到的外在表现。

本文所用的术语“等位基因”指一对不同形式的基因的一个成员。本文所用的等位基因指编码及非编码序列。等位基因占据同源染色体上相同的基因座或位置。在个体具有基因的两个相同的等位基因时，称该个体为该基因或等位基因纯合。在个体具有基因的两个不同等位基因时，称该个体为该基因杂合。具体基因的等位基因可以在单个核苷酸或若干个核苷酸上彼此不同，且可以包含核苷酸的取代、缺失和插入。基因的等位基因还可以是含有突变的基因的形式。

术语“SAM“指S-腺苷甲硫氨酸，通常称为SAM、或SAM-e、或AdoMet，其是见于活细胞中的天然化合物。它是生物化学反应中使用最多的酶底物之一。S-腺苷甲硫氨酸是涉及甲基转移的常见辅底物。它通过甲硫氨酸腺苷基转移酶从腺苷三磷酸(ATP)和甲硫氨酸产生。SAM用于诸如转甲基作用、转硫作用和氨基丙基化作用的代谢途径。

术语“SAH”指通过S-腺苷-L-甲硫氨酸的脱甲基作用形成的S-腺苷高半胱氨酸。血液、血浆或血清中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷高半胱氨酸(SAH)的相对水平可以用来预测与营养状态和慢性病状态(如心血管疾病、一些癌症和神经精神疾病)相关的代谢变化。

术语“SAM/SAH比值”指S-腺苷甲硫氨酸与S-腺苷高半胱氨酸的相对水平。在一些情况下，SAM/SAH比值的减小与血清中高半胱氨酸的增加和SAH的增加相关。

术语“4-HNE”指4-羟基壬烯醛、或4-羟基-2-壬烯醛，其是通过细胞中的脂质过氧化产生的α,β-不饱和羟基烯醛。4-HNE是此过程中形成的主要α,β-不饱和羟基烯醛。它遍布身体组织，由于应激事件中脂质过氧化链反应的增加，在氧化应激期间具有更高的量。它似乎在从细胞周期事件至细胞黏附的多种途径的细胞信号转导中发挥关键作用。还认为4-HNE是许多疾病，如慢性炎症、神经变性疾病、成年型呼吸窘迫综合征、动脉粥样硬化发生、糖尿病和不同类型癌症可能的病原体。

术语“hsCRP”指见于例如血液、血清和血浆中的高敏感性c反应蛋白。在具有抑郁症症状的患者、以及患有炎性疾病的患者中检测到了血清和血浆中hsCRP的水平提高。例如，已报道，严重抑郁症与hsCRP及炎性标志如IL-6和TNF-α的水平提高相关(参见例如DinanTG.CurrentOpinionPsychia.,2009,22(1):32-6)。

术语“抑郁症”指抑郁情绪的精神状态，其特征在于悲伤、绝望和沮丧的感觉。在一些情况下，抑郁症是临床症状，且可以包括但不限于严重抑郁性障碍(包括单次发作和复发)、单相抑郁症、难治性抑郁症、抗性抑郁症、焦虑性抑郁症和心境恶劣(也称为心境恶劣障碍)。此外，术语“抑郁症”可涵盖任意严重抑郁性障碍、心境恶劣障碍、医学病症引起的具有抑郁特征的情绪障碍、医学病症引起的具有严重抑郁样发作的情绪障碍、物质诱发的具有抑郁特征的情绪障碍和通过其诊断标准定义的未明确的抑郁性障碍，如美国精神病学会精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-IV)或其任意后续版本、或世界卫生组织国际疾病及有关健康问题统计分类(ICD-10)中所列。

对于疾病的治疗，本文所用的术语“治疗”意指阻止疾病的进展、或改变障碍的过程(例如但不限于减慢障碍的进展)、或部分逆转障碍的症状或减少个体中的一种或多种症状和/或一个或多个生物化学标志、防止一种或多种症状恶化或进展、促进恢复或改善预后。

术语“治疗方案”指与疾病或障碍(例如抑郁症)相关的至少一种症状的临床相关减轻。

术语“阴性应答”包括接受治疗的患者中的障碍状况恶化，使得患者经历增加的或附加的障碍病征或症状。

术语“阳性应答”包括具有障碍状况的患者中的改善，使得治疗减轻了障碍的病征或症状。

术语“抗抑郁剂”或“抗抑郁药”指治疗抑郁症的任意药剂。在一些实施方案中，按照本文所述的方法对个体施用的抗抑郁药可以是常标示用于治疗抑郁症的任意常规药剂。

术语“含叶酸化合物”或“含叶酸药物”指含有有效量的用于本文所述方法中的至少一种叶酸的化合物。叶酸是水溶性维生素B9的形式。术语“叶酸”涵盖叶酸的天然存在的形式、叶酸(也称为维生素B9或叶酸)及其代谢物或衍生物，如甲基叶酸、四氢叶酸和甲基四氢叶酸。术语“叶酸”还可以指蝶酸单谷氨酸(叶酸)和还原形式，如二氢叶酸和四氢叶酸，例如5-甲酰四氢叶酸、5-甲基四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸、5,10-次甲基四氢叶酸、10-甲酰四氢叶酸和四氢叶酸、其多聚谷氨酸、其旋光异构体(例如，其光学纯天然异构体，以及旋光异构体的混合物，如外消旋混合物)、其衍生物、其可药用盐和酯、其葡糖胺盐，及其半乳糖胺盐。

术语“可药用盐和酯”指药理学上可接受的和药学上可接受的盐和酯。药理学上和药学上可接受的盐可以包括但不限于碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐。药理学上和药学上可接受的酯可以包括但不限于C1-C4烷基、C5环烷基或C6环烷基、苯基、C1-C4烷基苯基、苄基或Cl-C4-烷基苄基酯。酯可以是单酯或二酯。二酯可以是同质的或异质的。在一些实施方案中，药理学上和药学上可接受的酯可以是同质的二酯，如C1-C4二烷基酯，例如二甲酯或二乙酯。

本文所用的术语“佐剂”、“辅助剂”、“辅助药物”或“辅助治疗”泛指提高另一药物或实体的作用的任意药物或实体。在某些实施方案中，术语“佐剂”在本文中用来指含叶酸化合物作为附加药物(药物)，以提高或增强抗抑郁药的作用(例如功效和/或治疗作用)。

本文所用的术语“施用”指通过方法或途径将组合物放入个体，其导致该组合物至少部分定位于希望的部位，使得产生希望的作用。适合用于本文所述方法的给药途径可以包括局部和全身施用。通常，与个体的整个身体相比，局部施用导致更高量的抗抑郁药(例如SSRI)和/或含叶酸化合物递送至具体位置(例如中枢和/或外周神经系统中的5-羟色胺受体)，而全身施用导致抗抑郁药(例如SSRI)和/或含叶酸化合物递送至个体的基本上整个身体。在一些实施方案中，本文所述的组合物对罹患抑郁症的个体口服施用。在其他实施方案中，本文所述的组合物通过注射来对罹患抑郁症的个体施用。

在治疗的背景中，术语“应答不足”指未能减轻或最少化疾病/障碍的症状，因此未对患者提供治疗益处的药物应答。在一些情况下，抑郁症患者的应答不足包括根据神经心理学评估量表的抑郁症症状严重度没有或几乎没有减轻。

术语“症状减轻应答”或“阳性症状减轻应答”指减轻或最少化疾病/障碍的症状，从而对患者提供治疗益处的药物应答。在一些情况下，抑郁症个体的症状减轻应答表征为通过熟练的从业人员确定的临床相关量的药物减轻了至少一种抑郁症症状，而对该个体无显著负作用。

术语“个体(subject)”或“患者”或“个体(individual)”通常包括人类，但也可以包括其他动物，如其他灵长类、啮齿类、犬、猫、马、羊、猪等。

术语“正常健康个体”指没有任何疾病或障碍的症状、或未鉴定出患有任何疾病或障碍、或未进行任何药物治疗的个体，或医生根据体格检查鉴定为健康的个体。

III.实施方案详述

本文所述的测定、方法和组合物针对诊断罹患抑郁症(例如严重抑郁性障碍)或具有罹患抑郁症风险的个体。抑郁症可以用标准临床标准(例如DSM-IV-TR系统)诊断。例如，用于诊断MDD的DSM-IV系统需要存在10种抑郁症症状中的至少5种，包括情绪抑郁或易怒、兴趣或快乐减少、显著体重变化(5％)或食欲变化、睡眠变化(例如失眠症或嗜睡症)、活动变化、疲劳或能量损失、内疚或自卑、专注力减弱和自杀倾向。此外，症状应出现至少两周，且每种症状应足够严重，几乎每天出现。

通常，临床医生用例如DSM-IV中的标准列表或功效测量(神经心理学评估)评价抑郁症，如汉密尔顿抑郁症分级量表(HAMD-28或HAMD-7)、临床总体印象(CGI)量表、抑郁症分级量表(MADRS)、Beck抑郁症调查表(BDI)、Zung自分级抑郁症量表、Wechsler抑郁症分级量表、Raskin抑郁症分级量表、抑郁症症状调查表(IDS)和抑郁症症状快速调查表(QIDS)。例如，抑郁症的可测量的减轻(抑郁症的改善)包括可测量的标志或症状的任何临床上显著的下降，如测量血液中的抑郁症标志，例如红细胞叶酸、血清叶酸、血清MTHF，或例如用神经心理学评估评估抑郁的程度。

例如，HAMD上0-7的得分通常视为正常。20或更高的得分指示中度、严重或非常严重的抑郁症。可以记录问题18-21，以提供关于抑郁症的进一步信息(如是否存在日变化或偏执症状)，但不必是量表的部分。因此，如果例如HAMD得分减少至例如20以下，则可认为症状的减轻在临床上相关。

在一方面，本文提供的一些实施方案涉及用于为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者选择治疗方案的测定或测定方法，该测定或测定方法通过对患者进行基因型分型来确定是否存在叶酸应答性标志的协同对。在一些实施方案中，指示叶酸应答性的基因型包括含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的MTHFR中的SNP(标识为rs1801133)，及含有至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的MTR中的SNP(标识为rs1805087)(例如，MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG)。在其他实施方案中，指示叶酸应答性的基因型包括含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的GCH1中的SNP(标识为rs8007267)，及含有两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的COMT中的SNP(标识为rs4680)(例如，GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG)。还在其他实施方案中，指示叶酸应答性的基因型包括表4中所述的任意协同双标志。如果确定患者携带叶酸应答性SNP对，则为该患者选择包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。

在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且肥胖，则开出含叶酸化合物的辅助治疗。在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值，则开出该辅助治疗。在其他情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平，则开出该辅助治疗。还在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平，则开出该辅助治疗。

在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且肥胖，则开出含叶酸化合物的辅助治疗。在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值，则开出该辅助治疗。在其他情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平，则开出该辅助治疗。还在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平，则开出该辅助治疗。

在另一方面，本文提供的一些实施方案涉及治疗罹患抑郁症的人类个体的方法，其包括对该个体施用含叶酸化合物(可选地与抗抑郁药组合)。在一个实施方案中，通过施用含叶酸化合物(可选地与抗抑郁药组合)来治疗抑郁个体的方法基于该个体携带以下两种叶酸应答性标志的测定：含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的MTHFR中的SNP(标识为rs1801133)，及含有至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的MTR中的SNP(标识为rs1805087)。在另一实施方案中，通过对个体施用含叶酸化合物(可选地与抗抑郁药组合)来治疗罹患抑郁症的人类个体的方法基于该个体携带以下两种叶酸应答性标志的测定：含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的GCH1中的SNP(标识为rs8007267)，及含有两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的COMT中的SNP(标识为rs4680)。

在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且肥胖的患者选择施用含叶酸化合物。在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者选择施用含叶酸化合物。在其他情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者选择施用含叶酸化合物。还在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者选择施用含叶酸化合物。

在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且肥胖的患者选择施用含叶酸化合物。在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者选择施用含叶酸化合物。在其他情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者选择施用含叶酸化合物。还在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者选择施用含叶酸化合物。

用本文所述方法治疗的罹患抑郁症的个体可以是目前正接受抗抑郁药的个体。因此，本文所述治疗罹患抑郁症的人类个体的方法也可以用于选择人类个体来用含叶酸化合物和抗抑郁药的组合治疗，以改善个体目前所接受的抗抑郁药的有效性。因此，如果确定目前正接受抗抑郁药的人类个体携带一种或多种协同双生物标志组合，则该个体可以进一步施用或开具含叶酸化合物作为该抗抑郁药的佐剂。

在另一方面，本文提供的一些实施方案涉及用于治疗罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体中的至少一种抑郁症症状的方法。该症状包括情绪抑郁、内疚、工作或兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知障碍或其任意组合。在一些实施方案中，用于治疗个体中的至少一种抑郁症症状的方法包括对个体进行基因型分型，以确定该个体是否携带SNP的协同对，如(i)含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的MTHFR中的SNP(标识为rs1801133)，及含有至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的MTR中的SNP(标识为rs1805087)，或(ii)含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的GCH1中的SNP(标识为rs8007267)，及含有两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的COMT中的SNP(标识为rs4680)。如果确定存在协同SNP对，则对该个体施用包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。

在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且肥胖的患者选择包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者选择该治疗方案。在其他情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者选择该治疗方案。还在一些情况下，为携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者选择该治疗方案。

在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且肥胖的患者选择包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者选择该治疗方案。在其他情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者选择该治疗方案。还在一些情况下，为携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者选择该治疗方案。

在一些实施方案中，与对照(例如，与所治疗的个体具有相同或相似的抑郁程度的个体在无含叶酸化合物的情况下施用，或不符合本文所述状况中的任何一种的个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案)相比，如医生或心理学家所评价，通过“临床相关量”或“有效量”减轻了至少一种抑郁症症状。

例如，在一些实施方案中，在用治疗方案治疗个体后，至少一种神经心理学测试改善(例如，HAMD-17分级减小)至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％或至少约50％。在另一实施方案中，至少一种神经心理学测试改善(例如，HAMD-17分级减小)超过50％，例如至少约60％、或至少约70％。在一个实施方案中，与对照(例如，与所治疗的个体具有相同或相似的抑郁程度的个体在无含叶酸化合物的情况下施用，或不符合本文所述状况中的任何一种的个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案)相比，至少一种神经心理学测试改善(例如，HAMD-17分级减小)至少约80％、至少约90％或更高。在一些实施方案中，在至少约10天，包括例如至少约20天、至少约30天、至少约40天或更长的治疗期内，如医生或心理学家所评价，可通过临床相关量减轻至少一种抑郁症症状。在一些实施方案中，在至少约10天，包括例如至少约20天、至少约30天、至少约40天或更长的治疗期内，至少一种神经心理学测试改善(例如，HAMD-17分级减小)至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％或至少约50％或更高。

在另一方面，本文提供的一些实施方案涉及提高对罹患抑郁症的人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法，其包括，基于该个体携带至少两种叶酸应答性标志(其组合产生协同作用)的测定，与抗抑郁药组合对该个体施用含叶酸化合物。在一些实施方案中，提高对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法包括，基于所示生物标志的组合与提高抗抑郁药在与含叶酸化合物组合施用时的有效性相关的认识，对诊断罹患抑郁症并进一步确定携带一种或多种(例如1、2、3或更多种)协同双生物标志组合的个体施用。在一些实施方案中，提高抗抑郁药的有效性的方法包括，基于该个体携带以下两种叶酸应答性标志的确定，与抗抑郁药组合对该个体施用含叶酸化合物：含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的MTHFR中的SNP(标识为rs1801133)，及含有至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的MTR中的SNP(标识为rs1805087)。在其他实施方案中，提高抗抑郁药的有效性的方法包括，基于该个体携带以下两种叶酸应答性标志的确定，与抗抑郁药组合对该个体施用含叶酸化合物：含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的GCH1中的SNP(标识为rs8007267)，及含有两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的COMT中的SNP(标识为rs4680)。

在一些实施方案中，测定和/或改善对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法包括例如通过例如用本文所述的测定来测定该人类个体是否适于用叶酸或其衍生物作为佐剂。

在一些情况下，该个体对抗抑郁药应答不足。对抗抑郁药的充分应答可以是症状严重度减小50％。例如，与基线相比，应答抗抑郁药的患者的神经心理学测试得分减少50％或更多。抑郁症的缓解可定义为没有或几乎没有抑郁症发作的症状。

在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且肥胖，则开出含叶酸化合物的辅助治疗。在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值，则开出该辅助治疗。在其他情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平，则开出该辅助治疗。还在一些情况下，如果患者携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平，则开出该辅助治疗。

在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且肥胖，则开出含叶酸化合物的辅助治疗。在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值，则开出该辅助治疗。在其他情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平，则开出该辅助治疗。还在一些情况下，如果患者携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平，则开出该辅助治疗。

还在另一方面，本文提供的一些实施方案涉及如果个体具有指示叶酸应答性的基因型，用于治疗罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体的含叶酸化合物。在一些实施方案中，如果携带含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的MTHFR中的SNP(标识为rs1801133)，及含有至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的MTR中的SNP(标识为rs1805087)，则该个体可能应答含叶酸化合物。在其他实施方案中，如果携带含有至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物的GCH1中的SNP(标识为rs8007267)，及含有两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物的COMT中的SNP(标识为rs4680)，则该个体可能应答含叶酸化合物。

在一些情况下，对携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且肥胖的患者施用含叶酸化合物。在一些情况下，对携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者施用含叶酸化合物。在其他情况下，对携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者施用含叶酸化合物。还在一些情况下，对携带SNP对MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者施用含叶酸化合物。

在一些情况下，对携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且肥胖的患者施用含叶酸化合物。在一些情况下，对携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有小于预先确定的参考比值的SAM/SAH比值的患者施用含叶酸化合物。在其他情况下，对携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有高于预先确定的参考值的4-HNE表达水平的患者施用含叶酸化合物。还在一些情况下，对携带SNP对GCH1TC/TT和COMTVal158MetGG对且具有高于预先确定的参考值的hsCRP水平的表达水平的患者施用含叶酸化合物。

在一些实施方案中，该含叶酸化合物可以以对减轻至少一种与抑郁症(例如严重抑郁性障碍)相关的症状(例如但不限于情绪低落、快感缺乏、低能量、失眠症、激动、焦虑和/或体重减轻)有效的量施用。在一些实施方案中，含叶酸化合物的有效量可以是每天施用于人类个体至少约0.1至约1mg/kg体重/天。在一些实施方案中，含叶酸化合物的有效量是约7.5mg/天至约50mg/天。在一些实施方案中，含叶酸化合物的有效量可以是每天施用于人类个体至少约15mg/天至约50mg/天。在一些实施方案中，含叶酸化合物的有效量可以是每天施用于人类个体至少约15mg/天的叶酸。在其他实施方案中，含叶酸化合物的有效量可以是每天施用于人类个体至少约20mg/天的叶酸。在其他实施方案中，含叶酸化合物的有效量可以是每天施用于人类个体至少约40mg/天的叶酸。在一些情况下，含叶酸化合物作为单个日剂量每天一次或作为分剂量每天两次经任意适宜的给药途径(例如口服施用)施用。例如，可以每天施用20mg的单剂量。备选地，可以每天施用20mg的两个剂量。在其他情况下，每天施用含叶酸化合物两次以上。

在一些实施方案中，含叶酸化合物与抗抑郁药组合施用。在一些情况下，在对确定为携带至少两个叶酸应答性生物标志的人类个体施用含叶酸化合物的辅助治疗时，治疗作用(例如减轻至少一种与抑郁症相关的核心症状)可以是协同的。在治疗作用的背景中，本文所用的术语“协同”或“协同的”指至少两种或多种药物的组合作用大于它们的单个作用的总和。具体而言，本文所用的术语“协同”或“协同的”是指，在对人类个体施用包含含叶酸化合物的治疗时，与携带两个或多个叶酸应答性生物标志的人类个体相关的组合治疗作用大于与单个叶酸应答性生物标志相关的治疗作用的总和(累加效应)。在一些实施方案中，协同作用可以比累加效应高至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或更多(例如，如通过HAMD-28或用于评价抑郁症症状的任意其他等同的测量所测定)。在一些实施方案中，协同作用可以比累加效应高至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍或更高，例如，如通过HAMD-28或本申请中其他地方所述的用于评价抑郁症症状的任意其他等同的测量所测定。

在一些实施方案中，可以用神经心理学测试如HAMD-28、CGI-S和CPFQ测定治疗作用。因此，在一些实施方案中，协同治疗作用是指，在对携带至少两个或多个叶酸应答性标志的人类个体施用含叶酸化合物时，HAMD-28得分的总的减少大于与各生物标志相关的单个HAMD-28减少的总和。在一些实施方案中，对平均HAMD-28变化的协同作用可以比累加效应高至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或更多。在一些实施方案中，对平均HAMD-28变化的协同作用可以比累加效应高至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍或更高。

例如，确定为携带单个叶酸应答性生物标志(i)(即MTHFR中至少一个“T”变体)的患者在施用含叶酸化合物(例如可选地与抗抑郁药组合)后显示约-3.0至约-5.0的平均HAMD-28变化，还显示，确定为携带单个叶酸应答性生物标志(iii)(即MTR基因中至少一个“G”变体)的患者在施用含叶酸化合物(例如可选地与抗抑郁药组合)后显示约-8.2的平均HAMD-28变化。在患者携带这两种基因突变时，患者应答包含含叶酸化合物的治疗(例如可选地与抗抑郁药组合)的平均HAMD-28变化为约-23.3，这不仅大于单独地与各生物标志相关的作用，还令人惊奇地比与各单个生物标志相关的作用的总和(即累加作用将产生约-11.2至约-13.2的平均HAMD-28变化)大至少约2倍。

A.叶酸应答性遗传生物标志

可以预测对个体施用的含叶酸化合物(例如在联合治疗中提高抗抑郁药的功效)对治疗抑郁症的治疗功效的SNP包括以下SNP中的至少两种：在亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)中存在的rs1801133；在MTHFR中存在的rs2274976；在甲硫氨酸合成酶(MTR)中存在的rs1805087；在甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)中存在的rs1801394；在钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)中存在的rs1006737；在DNA(胞嘧啶-5)-甲基转移酶3β(DNMT3B)中存在的rs1883729；在GTP环化水解酶1反馈调节蛋白(GCHFR)中存在的rs7163862；在还原型叶酸载体蛋白(RCF1)中存在的rs12659；在叶酸水解酶(前列腺特异的膜抗原)(FOLH1)中存在的rs202676；在还原型叶酸载体蛋白(RCF1)中存在的rs2297291；在还原型叶酸载体蛋白1(RCF1)中存在的rs1051266；在GTP环化水解酶1(GCH1)中存在的rs8007267；在磷酸胆碱转胞苷酰酶A(PCYT1A)中存在的rs7639752；在多巴胺受体D2(DRD2)中存在的rs6275；在DRD2中存在的rs1079596；在DRD2中存在的rs11240594；在儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)中存在的rs4633；在COMT中存在的rs4680；在多巴胺活性转运蛋白(DAT或SLC6A3)中存在的rs250682；在亚胺甲基转移酶环化脱氨酶(FTCD)中存在的rs2277820；在亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP+依赖型)1(MTHFD1)中存在的rs2236225；及其任何组合(参见表1和2)。

表1.叶酸应答性基因的单核苷酸多态性

表2.标志基因的叶酸应答性等位基因

在一些实施方案中，用本文所述的一对SNP来确定罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体是否可能对含叶酸化合物具有阳性应答。具体而言，至少两种以下SNP的存在与对含叶酸化合物的应答相关：

xx.SEQIDNO:26的27位上的SNP(标识为rs2277820)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:26是亚胺甲基转移酶环化脱氨酶(FTCD)的基因组核酸序列的部分；和

xxi.SEQIDNO:27的27位上的SNP(标识为rs2236225)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:27是亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP+依赖型)1(MTHFD1)的基因组核酸序列的部分。

表3中提供显示比由两个标志中的任一个单独产生的应答高的治疗应答的两种生物标志的组合。

表3.指示叶酸应答的双生物标志组合

在一些实施方案中，可将表3中所示的双生物标志组合用于本文所述的测定和/或方法，以鉴定将对包含含叶酸化合物的治疗具有阳性应答的患者。在其他实施方案中，本文所述的含叶酸化合物可以用于治疗携带表3中所示的双生物标志组合的患者。

本文所述的协同双生物标志组合指示对含叶酸治疗的治疗应答大于有两种单个生物标志单独产生的应答的总和，或大于由两种生物标志中的任一种单独产生的应答(表4)。

表4.指示叶酸应答的协同双生物标志组合

在一些实施方案中，可将表2中所示的协同双生物标志组合用于本文所述的测定和/或方法，以鉴定将对包含含叶酸化合物的治疗具有阳性应答的患者。在其他实施方案中，本文所述的含叶酸化合物可以用于治疗携带表2中所示的协同双生物标志组合的患者。

在一些实施方案中，预测对含叶酸化合物的应答性的协同双遗传对是：1)SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP(标识为rs1801133)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:7分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；和2)SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分。

在其他实施方案中，预测对含叶酸化合物的应答性的协同双遗传对是：(i)SEQIDNO:18的27位上的SNP(标识为rs8007267)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:18是GTP环化水解酶1(GCH1)的基因组核酸序列的部分；和2)SEQIDNO:24的27位上的SNP(标识为rs4680)，其包含两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:24是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分。

还在其他实施方案中，预测对含叶酸化合物的应答性的协同双遗传对是：1)SEQIDNO:18的27位上的SNP(标识为rs8007267)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:18是GTP环化水解酶1(GCH1)的基因组核酸序列的部分；和2)SEQIDNO:23的27位上的SNP(标识为rs4633)，其包含两个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:23是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分。

其他协同双生物标志组合包括：

(i)SEQIDNO:11的27位上的SNP(标识为rs1006737)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:11是钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)的基因组核酸序列的部分；和(ii)SEQIDNO:24的27位上的SNP(标识为rs4680)，其包含两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:24是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；

(i)SEQIDNO:11的27位上的SNP(标识为rs1006737)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:11是钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)的基因组核酸序列的部分；和(ii)SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分；

(i)SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP(标识为rs1801133)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:7分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；和(ii)SEQIDNO:15的27位上的SNP(标识为rs202676)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，或一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:15是叶酸水解酶(前列腺特异的膜抗原)1(FOLH1)的基因组核酸序列的部分；

(i)SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分；和(ii)肥胖；

(i)SEQIDNO:18的27位上的SNP(标识为rs8007267)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:18是GTP环化水解酶1(GCH1)的基因组核酸序列的部分；和(ii)肥胖；

(i)SEQIDNO:12的27位上的SNP(标识为rs1883729)，其包含至少一个腺嘌呤“A”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:12是DNA(胞嘧啶-5)-甲基转移酶3β(DNMT3B)的基因组核酸序列的部分；和(ii)肥胖；及

(i)SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP(标识为rs1801133)，其包含至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:1和SEQIDNO:7分别独立地是亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因组核酸序列的部分；和(ii)肥胖。

此外，可以预测对人类个体施用含叶酸化合物(例如在联合治疗中提高抗抑郁药的功效)对治疗抑郁症的功效的外周生物标志状况包括s-腺苷甲硫氨酸(SAM)和s-腺苷高半胱氨酸(SAH)之间的相对表达水平、4-羟基壬烯醛(4-HNE)的表达、高敏感性c-反应蛋白(hsCRP)的表达及其任意组合。此外，已发现肥胖可预测包含含叶酸化合物(例如，作为单一治疗或与抗抑郁药的联合治疗)的治疗方案的有效性。

在本文提供的测定和/或方法的一些实施方案中，测量至少一种协同生物标志组合，并可选地测量至少一种外周生物标志，如肥胖、SAM/SAH比值、4-HNE水平、hsCRP水平或其组合，以确定个体是否将对含叶酸化合物(例如L-甲基叶酸)的辅助治疗具有治疗应答。

B.其他叶酸应答性生物标志

在一些实施方案中，在s-腺苷甲硫氨酸(SAM)与s-腺苷高半胱氨酸(SAH)的表达比值[SAM/SAH比值]小于预先确定的参考比值，例如小于在正常健康个体的生物样品中测量的对照SAM/SAH比值时，可以为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案和/或可选地对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。在一个实施方案中，该预先确定的SAM/SAH参考比值可以是在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值，其中该对照SAM/SAH比值可以在从约4至约12的范围内，如4、5、6、7、8、9、10、11或12。在其他实施方案中，在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值可以是约7。在一些实施方案中，该预先确定的SAM/SAH参考比值可以是在血浆样品中测量的约3。在其他实施方案中，该预先确定的SAM/SAH参考比值可以是在血浆样品中测量的约2.8。在另一实施方案中，该预先确定的SAM/SAH参考比值可以是在血浆样品中测量的约2.71。在一些实施方案中，如果SAM/SAH表达比值至少是该预先确定的参考比值或高于该预先确定的参考比值(例如，至少是在血浆样品中测量的2.71或高于在血浆样品中测量的2.71)，则不为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案，也不对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。取决于试样来源，例如血清样品对尿液样品，用于血浆样品的预先确定的SAM/SAH参考比值可以不同于用于例如尿液样品的预先确定的SAM/SAH参考比值。参见例如StablerSP和AllenRH.2004ClinicalChemistry50:365-372。下文描述用于检测SAM和SAH的方法。

在一些实施方案中，在个体中的4-HNE表达高于第一预先确定的参考值，例如高于在正常健康个体的生物样品中测量的4-HNE的对照值时，可以为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案和/或可选地对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。在一个实施方案中，该第一预先确定的4-HNE的参考值可以是在正常健康个体的血清样品中测量的4-HNE的对照值，其中该4-HNE的对照值可以是约0.24mol/L血清，或约0.04mg/L血清。参见例如GocmenAY等2008ClinicalBiohemistry41:836-840。在一个实施方案中，该第一预先确定的4-HNE的参考值可以是在血浆样品中测量的约3mg/L血浆。在一个实施方案中，该第一预先确定的4-HNE的参考值可以是在血浆样品中测量的约3.2mg/L血浆。在一个实施方案中，该第一预先确定的4-HNE的参考值可以是在血浆样品中测量的约3.28mg/L血浆。在一些实施方案中，如果4-HNE的表达低于该第一预先确定的参考值(例如低于在血浆样品中测量的3.28mg/L血浆)，则不为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案，也不对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。取决于试样来源，例如血液样品对脑脊液样品，用于血浆样品的预先确定的参考值可以不同于用于例如脑脊液样品的预先确定的参考值。下文描述用于测量从患者采集的样品中的4-HNE水平的方法。

在一些实施方案中，本文所述的测定和方法可以进一步包括测定高敏感性c反应蛋白(hsCRP)的表达，其中该hsCRP表达高于第二预先确定的参考值，例如高于在正常健康个体的生物样品中测量的hsCRP的对照值是为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案和可选地对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案的指示。在一些实施方案中，该第二预先确定的hsCRP的参考值可以是在正常健康个体的血清样品中测量的hsCRP的对照值，其中该hsCRP的对照值可以在从约0.5mg/L血清至约4.5mg/L血清的范围内。参见例如GuvenSF等,2012SleepBreath16:217-221。在其他实施方案中，该第二预先确定的hsCRP的参考值可以是在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆。在一些实施方案中，如果该hsCRP的表达低于该第二预先确定的参考值(例如低于在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆)，则不为该个体推荐包含含叶酸化合物的治疗方案，也不对该个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。取决于试样来源，例如血液样品对脑脊液样品，用于血浆样品的hsCRP表达可以不同于用于例如脑脊液(CSF)样品的hsCRP表达。下文描述用于测量从患者采集的样品中的hsCRP水平的方法。

在一些实施方案中，也可以测量体格生物标志，例如肥胖指征，其中肥胖(例如，定义为至少约30kg/m²或更高的BMI值；男性腰围大于40英寸(或大于120cm)，或女性腰围大于35英寸(或大于88cm)；男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和/或男性体脂百分比为至少约25％，或女性体脂百分比为至少约32％。)指示为该人类个体推荐和/或对该人类个体施用包含含叶酸化合物的治疗方案。

在一些实施方案中，本文提供的测定/方法可以包括测定该人类个体是否肥胖。如果该人类个体确定为肥胖，则为该人类个体选择并可选地对该人类个体施用包含有效量的含叶酸化合物的治疗方案。确定人类个体中的肥胖的方法为本领域已知，且可以包括但不限于体重指数(BMI)测量、腹部脂肪测量(例如通过腰围或腰臀比)、体脂测量、皮褶厚度、水下称重(密度测定法)、空气置换体积描记术、计算机化断层显像(CT)和磁共振成像(MRI)、双能X射线吸收测定法(DEXA)、及其任意组合。

C.用于检测或测量生物标志的方法

在一些实施方案中，在本文所述测定和/或方法中进行分析的试样源自个体的样品(例如生物样品)。本文所用的术语“生物样品”指从生物有机体采集或分离的样品，例如细胞裂解物、来自个体的组织样品或来自个体的流体样品的匀浆。“生物样品”包括未经处理的或经预处理的(或预加工的)生物样品。生物样品的非限制性实例包括生物流体，如血液(包括全血、血浆、脐带血和血清)、泌乳产品(例如乳)、羊水、痰、唾液、尿液、精液、脑脊液、支气管抽吸物、汗、粘液、液化粪便、滑膜液、淋巴液、眼泪、气管抽吸物及其级分。在其他实施方案中，生物样品可以包括细胞裂解物及其级分。例如，可以收集细胞(如红细胞、血小板、白细胞和在本文所述生物流体中循环的任意细胞)并裂解以获得细胞裂解物。在一些实施方案中，该生物样品是血液样品。在一些实施方案中，该生物样品是血浆样品。在其他实施方案中，该生物样品是唾液样品。在另一实施方案中，该生物样品是口腔样品。还在其他实施方案中，该生物样品是尿液样品。在其他实施方案中，该生物样品是脑脊液样品。

在一些实施方案中，该样品包含来自个体的细胞和/或非细胞生物材料，如血液、唾液或尿液的非细胞级分，其可以用于测量血浆/血清生物标志表达水平或确定SNP。在一些实施方案中，样品来自切除术、活组织检查或芯针活组织检查。此外，可以使用细针抽吸物样品。样品可以是石蜡包埋的或冰冻的组织。

可以通过从个体取出细胞的样品来获得样品，也可以通过使用先前分离的细胞(例如由另一人分离的)来完成。此外，生物样品可以是新鲜收集的或先前收集的样品。在一些实施方案中，生物样品可以是冰冻的生物样品，例如冰冻组织或流体样品，如尿液、血液、血清或血浆。可以在利用本文所述方法、测定和系统之前融化冰冻样品。融化后，可以在用于本文所述方法、测定和系统之前离心冰冻样品。

在一些实施方案中，样品可以是聚合酶链式反应(PCR)后扩增的核酸产物。核酸产物可以包括DNA、RNA和mRNA，并且可以使用本领域所熟知的许多方法中的任何一种从具体的生物样品中分离，所选的具体分离方法适合于该具体的生物样品。上文所述分离和分析核酸变体的方法为本领域技术人员所熟知，并可以见于例如MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版,Sambrook和Russel,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001中。

技术人员知道适合于预处理测试样品或生物样品，例如血液的方法和过程，其为确定本文所述的SNP或血清/血浆生物标志物的表达水平所需。

SNP的鉴定方法可以是正向类型(包括等位基因)或反向类型(排除等位基因)。正向类型的方法确定多态性位点中所包含的核苷酸的身份，而反向类型的方法确定多态性位点中不存在的核苷酸的身份。因此，野生型位点可以鉴定为野生型或非突变体。例如，在野生型等位基因含有胸腺嘧啶并且突变体等位基因含有胞嘧啶的二等位基因多态性位点上，可以将位点正向确定为胸腺嘧啶或胞嘧啶或反向确定为不是胸腺嘧啶(并因此是胞嘧啶)或不是胞嘧啶(并因此是胸腺嘧啶)。

在一些方面，本文提供用于确定个体的多态性是纯合的、杂合的、还是完全缺少多态性(即纯合的野生型)的方法。仅作为示例性实施方案，提供检测SEQIDNO:1的677位上的C>T变异的方法、用于确定SNP基因座上的C和T等位基因是杂合或C等位基因或T等位基因是纯合的方法。基本上可以使用检测本文所述的SNP的任意等位基因的任意方法，如等位基因辨别、限制性内切核酸酶消化、限制性片段长度多态性分析、等位基因特异性探针杂交、等位基因特异性引物延伸、等位基因特异性扩增、测序(例如Sanger测序、pyrosequencing^TM和下一代测序)、5’核酸酶消化、分子信标测定、寡核苷酸连接测定、单碱基延伸或微测序、大小分析、同源测定(例如测定)、熔解曲线FRET杂交、荧光偏振、测定、SNP微阵列和单链构象多态性。

检测基因中的突变或多态性的任意方法均可用于检测本文所述SNP生物标志的存在或缺乏，其包括但不限于单链构象多态性(SSCP)分析(Orita等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2766-2770)、异源双链体分析(Prior等(1995)Hum.Mutat.5:263-268)、寡核苷酸连接(Nickerson等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:8923-8927)和杂交测定(Conner等(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA80:278-282)。基于传统Taq聚合酶PCR的策略，如PCR-RFLP、等位基因特异性扩增(ASA)(Ruano和Kidd(1989)NucleicAcidsRes.17:8392)、单分子稀释(SMD)(Ruano等(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:6296-6300)及偶联扩增和测序(CAS)(Ruano和Kidd(1991)NucleicAcidsRes.19:6877-6882)是确定单元型的容易进行且高度灵敏的方法(Michalatos-Beloin等(1996)NucleicAcidsRes.24:4841-4843；Barnes(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:5695-5699；Ruano和Kidd(1991)NucleicAcidsRes.19:6877-6882)。

SNP基因型分型方法可从例如Sequenom(SanDiego,CA)、Illumina(SanDiego,CA)、LifeTechnologies(Carlsbad,CA)和Affymetrix(SantaClara,CA)获得。

在一些实施方案中，本文提供的测定和方法包括测量来自罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体的样品(例如血清、血浆或CSF样品)中的代谢物(如SAM、SAH和/或4-HNE)的水平。可以通过本领域已知的任意方法来检测代谢物(例如SAM、SAH和/或4-HNE)的水平。例如，可以在通过GC、HPLC(LC-MS)和/或CE分离后用质谱分析法(MS)来鉴定和定量代谢物。在一些实施方案中，MS可以用作单机技术，例如，将生物样品直接灌注入质谱仪，该质谱仪提供代谢物(例如SAM、SAH和/或4-HNE)的分离和检测二者。在一些情况下，可选地通过气相色谱(GC)(例如，在连接质谱分析法(GC-MS)时)、和/或高效液相色谱(HPLC)、和/或毛细管电泳(CE)来将靶代谢物(例如SAM、SAH和/或4-HNE)从生物样品分开(例如，在检测之前)。关于检测SAM和SAH，包括用于测定SAM、SAH和/或其比值的免疫测定的其他详情描述于美国专利申请号US2009/0263879中，其在此引入作为参考。

其他用于检测代谢物的方法包括纳米结构启动质谱分析法，激光解吸/离子化质谱分析法，例如基质辅助激光解吸/离子化(MALDI)质谱分析法、表面增强激光解吸/离子化质谱分析法，次级离子质谱分析法(SIMS)，解吸电喷雾离子化(DESI)质谱分析法，核磁共振(NMR)波谱学，电化学检测(偶联至HPLC)和放射性标记(在与薄层层析组合时)，诸如MALDI/TOF(飞行时间)、SELDI/TOF、液相色谱-质谱分析法(LC-MS)、气相色谱-质谱分析法(GC-MS)、高效液相色谱-质谱分析法(HPLC-MS)、毛细管电泳-质谱分析法或串联质谱分析法(例如MS/MS、MS/MS/MS、ESI-MS/MS等)的质谱分析法。

在其他实施方案中，可以用酶偶联测定来测定生物样品中的代谢物(例如SAM、SAH和/或4-HNE)水平。仅作为实例，基于酶偶联反应巯基嘌呤甲基转移酶催化的巯基甲基化的立体特异性SAM比色测定(参见例如Cannon,L.M等,AnalyticalBiochemistry,308(2)358-363,2002)可以检测样品中的SAM水平。例如描述于美国专利号8,344,115及美国专利申请公开号US2012/0130212和US2008/0081375中的其他代谢物分析方法也可以用于测量生物样品中的代谢物(例如SAM、SAH和/或4-HNE)。关于检测SAM和SAH，包括用于测定SAM、SAH和/或其比值的免疫测定的其他详情描述于美国专利申请号US2009/0263879中，其在此引入作为参考。4-HNE的水平可以通过测量4-HNE加合物(例如4-HNE-His)的表达水平来测定。用于测量4-HNE加合物的市售ELISA试剂盒(例如OxiSelect^TMHNE-HisAdductELISAKit)可例如从CellBioLabs获得。

在一些实施方案中，可以通过测量蛋白质水平或mRNA水平来测定从个体采集的样品中的hsCRP表达水平。

非限制性地，hsCRP蛋白质的水平可以通过免疫测定来检测，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫放射分析(IRMA)、Western印迹、免疫细胞化学或免疫组织化学。适合用于测定血清、血浆、血液、CSF样品中hsCRP的存在或水平的ELISA试剂盒可从例如MPBiomedicals,Abcam和Calbiotech获得。

本领域技术人员知晓，可以特异性结合(例如识别)生物标志的抗体、抗体片段、免疫缀合物等可用于检测本文所述分析物的蛋白质表达水平。本领域已知的任何用于测量样品中的蛋白质表达水平的方法都可以用于本文所述的测定和/或方法。

在其他实施方案中，用诸如例如杂交测定(例如微阵列)或基于扩增的测定的测定在mRNA表达水平检测hsCRP的表达。在优选实施方案中，通过Northern印迹、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、定量RT-PCR(qRT-PCR)、测定或微阵列来进行本文提供的分析物的mRNA表达水平的测定。本领域已知的任何用于测量样品中的RNA表达水平的方法都可以用于本文所述的测定和/或方法。

D.罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的个体

在一些实施方案中，适于本文所述测定、方法和组合物的个体是已诊断或疑似患有或效能应答抑郁症的个体。因此，可以在对它们进行本文所述测定、方法和/或组合物之前选择已诊断或疑似患有或效能应答抑郁症的个体。在其他实施方案中，本文所述的个体是这样的个体，该个体显示一种或多种指示抑郁症(包括严重抑郁性障碍(例如未得到解释的失眠症、疲劳、易怒等))的症状，或是例如按照DSM-IV或ICD-10中所列的标准针对包括严重抑郁性障碍的抑郁症筛查的(例如在例行体检期间)。

DSM-IV和ICD-10为精神障碍的分类提供了共同语言和标准准则，常被经适宜培训的全科医师或精神病学家或心理学家用来诊断包括严重抑郁性障碍的抑郁症。抑郁症的症状可以包括但不限于专注力、记忆力和/或作决定的问题，进食和/或睡眠习惯的改变，对快乐活动的兴趣丧失，去工作或照顾日常责任的困难，内疚和/或绝望感，思维和/或说话减慢，专注于死亡或自杀的想法。本领域技术人员可以基于DSM-IV或ICD-10来确定抑郁症的得分或分级。

也可以用本领域已知的其他用于分类精神障碍的量表或标准来确定抑郁症的程度，例如Maier或HAMD-7量表、或社会功能问卷(SFQ)、视觉模拟量表(VAS)和/或认知和身体功能问卷(CPFQ)。

在抑郁症的诊断过程中，医师也可以评估患者的病史，讨论个体目前调整其情绪的方式(健康的或其他)，如酒精和药物使用，和/或进行精神状态检查，其是对人目前的情绪和想法内容，特别是存在绝望或悲观、自残或自杀主题和缺乏积极想法或计划的评估。此外，医师一般可以进行医学检查，以排除抑郁症状的其他非认知原因。例如，测量TSH和甲状腺素的血液测试可以用于排除甲状腺功能减退；碱性电解质和血清钙排除代谢紊乱；和包括ESR的全血细胞计数排除全身感染或慢性病。也可以评价睾酮水平，以诊断性腺机能减退，其为男性抑郁的原因。

本领域已知的任何遗传或生物标志方法也可以用于诊断抑郁症。例如，美国专利申请号US2010/0273153描述了TG7AT单元型的存在可以指示严重抑郁性障碍的诱因。用于抑郁症的其他遗传标志，如ATP2A2、SCYA5、STIP1、EEF1A1、GRB10、CASP6、TSSC1、RAB9、NFATC3、TPR和列于例如美国专利申请号US2005/0239110中的任何其他遗传标志也可以用于诊断抑郁症。

在一些实施方案中，适于本文所述测定、方法和组合物的个体是已诊断患有或疑似患有或效能应答严重抑郁性障碍的个体。严重抑郁发作的特征在于存在持续至少两周的严重抑郁情绪。发作可以是孤立或反复的，并且可以由熟练的医师分类为轻度(超过最低标准的很少症状)、中度或重度(对社会或职业功能具有显著影响)。

在一些实施方案中，适于本文所述测定、方法和组合物的个体是已诊断罹患抑郁症(例如严重抑郁性障碍(MDD))并且对抗抑郁药单一治疗(即仅用单一的抗抑郁药治疗抑郁症)具有抗性的个体。在一些情况下，罹患抑郁症的个体对一类或更多类的至少一种抗抑郁药(例如一类或更多类的至少2、3、4、5或更多种抗抑郁药)具有抗性。在一些实施方案中，本文所述的个体已诊断患有严重抑郁性障碍(MDD)，且对至少一种5-羟色胺再吸收抑制剂(SRI)(包括至少1、2、3、4、5或更多种SRI)具有抗性。在其他实施方案中，本文所述的个体已诊断患有严重抑郁性障碍(MDD)，且对至少一种选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)(包括至少1、2、3、4、5或更多种SSRI)具有抗性。

在一些实施方案中，在对它们施用抗抑郁药单一治疗至少约3周或更多周、或至多约3周之后，对抗抑郁药单一治疗具有抗性的个体未显示它们所患抑郁症的至少一种症状的临床相关减轻(例如，如医生或心理学家所评价)。抑郁症症状的非限制性实例包括但不限于情绪低落或抑郁、快感缺乏、能量水平低、内疚、工作和兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知降低或其任意组合。

在一些实施方案中，在对它们施用抗抑郁药单一治疗至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、或至少约12周或更多周之后，对抗抑郁药单一治疗具有抗性的个体未显示至少一种抑郁症症状(例如，1、2、3或更多种症状)的临床相关减轻。在一些实施方案中，在对它们施用抗抑郁药单一治疗至少或至多约3周、至少或至多约4周、至少或至多约5周、至少或至多约6周、至少或至多约7周、至少或至多约8、至少或至多约9周、至少或至多约10周、至少或至多约11周、或至少或至多约12周之后，如果它们未显示至少一种抑郁症症状(例如，1、2、3或更多种症状)的临床相关减轻，则确定个体对治疗具有抗性。抑郁症症状的临床相关减轻可以由医生或心理学家评价。

在一些实施方案中，本文所述的个体诊断患有对治疗具有抗性的抑郁症(TRD)或难治性抑郁症。例如，该个体显示对至少两种或更多种抗抑郁药(例如至少三种或更多种、或至少四种或更多种抗抑郁药)无应答或具有抗性的一种抑郁症。对治疗具有抗性的抑郁症可以包括在4-12周的时间内接受两次治疗或两种抗抑郁药后未能达到缓解。

在一些实施方案中，在施用至少两种或更多种抗抑郁药(单独地或组合地)至少约3周或更多周，例如至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周或更多周之后，如果个体未显示至少一种本文所述抑郁症症状的临床相关减轻，则诊断该个体患有对治疗具有抗性的抑郁症。在一些实施方案中，在对他/她施用至少两种或更多种抗抑郁药(单独地或组合地)至多约12周，包括例如至多约11周、至多约10周、至多约9周、至多约8周、至多约7周、至多约6周、至多约5周、至多约4周、或至多约3周之后，如果个体未显示至少一种本文所述抑郁症症状的临床相关减轻，则诊断该个体患有对治疗具有抗性的抑郁症。在一些实施方案中，在施用至少约两种或更多种抗抑郁药(单独地或组合地)至少或至多约6周、至少或至多约7周、至少或至多约8周、至少或至多约9周、至少或至多约10周、至少或至多约11周、或至少或至多约12周之后，如果个体未显示至少一种本文所述抑郁症症状的临床相关减轻，则诊断该个体患有对治疗具有抗性的抑郁症。在一些实施方案中，在接受抗抑郁药至少或至多约12周之后，如果个体未经历临床相关的抑郁症症状改善，则诊断对治疗具有抗性的抑郁症。

在一些实施方案中，本文所述的个体诊断患有对治疗具有抗性的抑郁症(TRD)或难治性抑郁症，且目前正接受TRD的非药物治疗，例如，但不限于电惊厥治疗、迷走神经刺激、经颅磁刺激和/或“谈话”治疗。可以为这些个体推荐或对这些个体施用单独的或与本文所述的TRD非药物治疗组合的包含含叶酸化合物的治疗方案。在一些实施方案中，可以为这些个体推荐或对这些个体施用与至少一种抗抑郁药及可选的TRD非药物治疗组合的包含含叶酸化合物的治疗方案。在这些实施方案中，为患有TRD的个体推荐或对患有TRD的个体施用的与含叶酸化合物组合的抗抑郁药可以是该个体之前已对其显示抗性的抗抑郁药，或该个体从未尝试过的抗抑郁药。

在一些实施方案中，为本文所述的测定、方法和组合物选择的个体已从抑郁症缓解，且现在诊断具有复发或易复发。在其他实施方案中，为本文所述的测定、方法和组合物选择的个体已诊断罹患抑郁症，且目前正接受至少一种抗抑郁药。

E.含叶酸化合物的辅助治疗

本文所述的测定和/或方法可以用作筛查来鉴定和选择具体的抑郁症患者，其中包含抗抑郁药和含叶酸化合物的治疗方案将对增强该抗抑郁药的治疗作用有益。在一些实施方案中，所选择的患者，例如罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险且携带协同双SNP组合(COMTVal158MetGG和GCH1TC/TT对及MTHFR677CT/TT和MTR2756AG/GG对)的患者目前正接受至少一种抗抑郁药。在一些实施方案中，所选择的患者经历或已经历对抗抑郁药单一治疗的应答不足。

治疗方案中所包括的含叶酸化合物可以通过单次剂量形式或通过分开的施用一起施用。在某些实施方案中，含叶酸化合物可以以单次剂量形式施用。例如，单次剂量形式可以作为单个片剂、丸剂、胶囊用于口腔施用或作为溶液用于肠胃外施用。备选地，含叶酸化合物可以作为分开的组合物，例如作为分开的片剂或溶液施用。可以调整施用含叶酸化合物的亚剂量之间的时间长度，以达到希望的治疗作用。

在一些实施方案中，包含含叶酸化合物的治疗方案进一步包含至少一种抗抑郁药(例如，1、2、3或更多种抗抑郁剂)。抗抑郁药的非限制性实例包括三环抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)、5-羟色胺-去甲肾上腺素再吸收抑制剂、去甲肾上腺素和多巴胺再吸收抑制剂及非典型抗抑郁药。

在一些实施方案中，该治疗方案可以包括与抗抑郁药组合的含叶酸化合物。在一些实施方案中，该抗抑郁药包括选择性5-羟色胺再吸收抑制剂，如但不限于氟西汀、三氟戊肟胺(fluvoxamine)、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其任意组合。

包含含叶酸化合物和至少一种抗抑郁药的治疗方案可以通过单次剂量形式或通过分开的施用一起施用。在某些实施方案中，抗抑郁药和含叶酸化合物以单次剂量形式一起施用。例如，单次剂量形式可以作为单个片剂、丸剂、胶囊用于口腔施用或作为溶液用于肠胃外施用。备选地，抗抑郁药和含叶酸化合物可以作为分开的组合物，例如作为分开的片剂或溶液施用。抗抑郁药可以与含叶酸化合物同时施用，或者抗抑郁药可以与含叶酸化合物间隔施用。可以调整施用抗抑郁药和含叶酸化合物之间的时间长度，以达到希望的治疗作用。具体而言，可以以任意频率或施用方案施用含叶酸化合物，以与单独抗抑郁药(例如，在缺乏含叶酸化合物的情况下)的功效相比增强抗抑郁药的功效。

在一些实施方案中，可以在施用抗抑郁药之前或之后仅几分钟(例如，1、2、5、10、30或60分钟)施用含叶酸化合物。备选地，可以在施用抗抑郁药之前或之后几小时(例如，2、4、6、10、12、24或36小时)施用含叶酸化合物。在某些实施方案中，取决于抗抑郁药和含叶酸化合物的半衰期，可以有利地在施用抗抑郁药之间施用多于一个剂量的含叶酸化合物。例如，可以在施用抗抑郁药后3小时，然后再次在6小时施用含叶酸化合物。备选地，可以有利地在施用含叶酸化合物之间施用多于一个剂量的抗抑郁药。重要的是，在一些实施方案中，每种抗抑郁药和含叶酸化合物的治疗作用在每种治疗剂的至少部分持续期间可以重叠，使得联合治疗的整体治疗作用部分归因于联合治疗的组合。在一些实施方案中，含叶酸化合物和抗抑郁药可以以脉冲施用来施用。在其他实施方案中，它们可以作为脉冲追踪施用来施用，例如其中短时间施用含叶酸化合物(脉冲)，接着更长时间施用抗抑郁药(例如，追踪)。

在抗抑郁药和含叶酸化合物在分开的组合物中施用的一些实施方案中，该抗抑郁药和该含叶酸化合物可以通过相同的或不同的途径施用。例如，抗抑郁药可以通过静脉注射施用，而含叶酸化合物可以通过口腔施用，或反之亦然。备选地，例如，抗抑郁药和含叶酸化合物都可以通过静脉注射或通过口腔施用一起施用。

与抗抑郁药组合施用的含叶酸化合物的佐剂效应可以是累加的。在一种药物对第二药物具有累加效应的背景中，本文所用的术语“累加的”指与单独使用第一药物相比，在存在第二药物的情况下第一种试剂的有效性提高。用另一种方式陈述，第二药物可以充当这样的药物，其增强器官或生物体对第一药物存在的生理学应答。因此，第二药物将通过增加个体对第一药物存在的应答而提高第一药物的有效性。

在一些情况下，与抗抑郁药组合施用的含叶酸化合物的佐剂作用可以是协同的，其中两种或更多种药物的相互作用产生组合作用，该组合作用大于其相同剂量单独的单个作用中的每一个。

在一些实施方案中，治疗方案可以进一步包括认知行为治疗(CBT)、人际关系治疗(IPT)、生活方式建议，包括例如规定锻炼方案、饮食建议和/或施用对治疗抑郁症有效的另一药物(例如抗精神病药、锂、L-三碘甲状腺氨酸和刺激剂)。

用本文所述方法治疗的罹患抑郁症的个体可以是目前正接受抗抑郁药的个体。因此，本文所述治疗罹患抑郁症的人类个体的方法也可以用于鉴定可从含叶酸化合物的辅助治疗受益的人类个体。该方法还提供用于改善对药物显示应答不足(不满意)或抗性的个体目前所接受的抗抑郁药的有效性的手段。

F.含叶酸化合物

可以选择和/或可选地对所选携带至少一个双标志组合(例如，至少一个协同双标志组合)的人类个体施用任意本领域认可的含叶酸化合物。

在一些实施方案中，含叶酸化合物可以包括叶酸的至少一种(包括至少两种、至少三种或更多种)碱金属或碱土金属盐，例如但不限于叶酸的钙盐。

在一些实施方案中，含叶酸化合物可以包括叶酸的至少一种(包括至少两种、至少三种或更多种)葡糖胺盐和/或半乳糖胺盐(包括，例如，叶酸和还原型叶酸，例如但不限于四氢叶酸及其衍生物)。例如公开于美国专利号7,947,662中的葡糖胺-叶酸和/或半乳糖胺-叶酸及其衍生物的实例可以在该方法中对人类个体施用或包括在本文所述的组合物中。在一个实施方案中，(GnosisS.p.A,Milan,IT)或N-[4-[[[(6S)-2-氨基-1,4,5,6,7,8-六氢-5-甲基-4-氧-6-喋啶]甲基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、葡糖胺盐可以在该方法中对人类个体施用或包括在本文所述的组合物中。

在一些实施方案中，对于缺乏酶二氢叶酸还原酶的罹患抑郁症的个体，甲基叶酸(也称为Me-THF、N5-甲基-THF、MTHF、5-MTHF,L-甲基叶酸和甲基四氢叶酸)或其可药用盐(例如，钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、葡糖胺盐或半乳糖胺盐)对用作含叶酸化合物而言是更想要的。例如，甲基叶酸钙盐在美国可以作为(L-甲基叶酸钙盐)开处方获得。甲基叶酸钙盐在美国以外也可以作为和获得。

可以在该方法中对个体施用或包括在本文所述的组合物中的叶酸或含叶酸化合物的其他实例可以包括但不限于，描述于美国专利号4,336,185、6,921,754和7,947,662及美国专利申请公开号US2008/0064702中的那些，其公开内容在此为了所有目的引入作为参考。

根据本文所述的测定和/或方法，已确定存在本文所述状况中的至少一种(例如，本文所述的双SNP组合和/或血浆/血清生物标志)的抑郁症个体可以受益于与有效量的含叶酸化合物组合施用的抗抑郁药的治疗作用。在一些实施方案中，含叶酸化合物可以包含L-甲基叶酸。在一些实施方案中，含叶酸化合物可以包含6(S)-5-甲基四氢叶酸(也称为6(S)-5-MTHF)。

用于本文所述的治疗方法中的叶酸的有效量可以取决于抗抑郁药(如果有的话)的类型和/或剂量、叶酸的类型、抑郁症的严重度、个体的身体状况(例如，年龄、性别、体重)而变化。本文所用的术语“有效量”指在对所选个体施用时，与缺乏含叶酸化合物的治疗相比，叶酸或含叶酸化合物的量可以将与抑郁症相关的至少一种症状减轻例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或更多。

在一些实施方案中，本文所用的术语“有效量”指在与抗抑郁药组合对所选个体施用时，与抗抑郁药单独治疗相比，叶酸或含叶酸化合物的量可以增加抗抑郁药的作用(例如，功效或治疗作用)例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或更多。用另一种方式陈述，本文所用的术语“有效量”指在与抗抑郁药组合对所选个体施用时，与抗抑郁药单独治疗相比，叶酸或含叶酸化合物的量可以将与稍后所述抑郁症相关的至少一种症状减轻例如至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或更多。

在一些实施方案中，本文所述治疗方案中叶酸的有效量可以在从约1mg/天至约70mg/天、从约1mg/天至约50mg/天、从约2.5mg/天至约40mg/天、从约5mg/天至约40mg/天、从约5mg/天至约30mg/天或从约7mg/天至约15mg/天的范围内。在一些实施方案中，本文所述治疗方案中叶酸的有效量可以在从约15mg/天至约50mg/天的范围内。在其他实施方案中，本文所述治疗方案中叶酸的有效量可以在从约20mg/天至约40mg/天的范围内。在一些实施方案中，治疗方案中叶酸的有效量可以是约20mg/天。在其他实施方案中，治疗方案中叶酸的有效量可以是约40mg/天。

G.抗抑郁药

对于一些罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的患者，包含抗抑郁药和含叶酸化合物的治疗方案将对增强该抗抑郁药的治疗作用有益。在一些情况下，该抗抑郁药和含叶酸化合物具有协同治疗作用。

抗抑郁剂或抗抑郁药的实例包括但不限于，单胺氧化酶抑制剂如苯乙肼、反苯环丙胺和摩氯苯胺；三环抗抑郁剂如米帕明、阿米替林、地昔帕明、去甲替林、多虑平、丙氮环庚烯、三甲丙咪嗪、氯米帕明和氯氧平；四环抗抑郁剂如马普替林；非环抗抑郁剂如氨苯甲异喹；三唑并吡啶类如曲唑酮；5-羟色胺再吸收抑制剂如氟西汀、舍曲林、赛乐特、西酞普兰和三氟戊肟胺；5-羟色胺受体拮抗剂如萘发扎酮；5-羟色胺去甲肾上腺素能再吸收抑制剂如文拉法辛和米那普仑；去甲肾上腺素能和特异性5-羟色胺能药物如米尔塔扎平；去甲肾上腺素再吸收抑制剂如瑞波西汀。可以用于本文所述发明中的其他抗抑郁剂可以包括但不限于，丁氨苯丙酮；天然产物如Kava-Kava和St.John'sWort；膳食补充剂如s-腺苷甲硫氨酸；神经肽如促甲状腺激素-释放激素；靶向神经肽受体的化合物如神经激肽受体拮抗剂；和激素如三碘甲腺原氨酸。

在一些实施方案中，抗抑郁剂或抗抑郁药可以是5-羟色胺再吸收抑制剂(SRI)或选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。SRI和/或SSRI的实例非限制性地包括西酞普兰、依他普仑、氟西汀、R-氟西汀、舍曲林、赛乐特、三氟戊肟胺、文拉法辛、度洛西汀、达泊西汀、萘法唑酮、米帕明、N-氧化丙咪嗪、地昔帕明、吡喃茚胺、氮卓尼尔、奈福泮、苯呋苄哌嗪、非唑拉明、苯哌甲氧苯、氯丙咪嗪、cianoimipramine、利托西汀、西克拉明、塞罗西汀、WY27587、WY27866、齐美立定、伊福西汀、替氟卡宾、维喹啉、米那普仑、巴嗪普令、YM922、S33005、F98214TA、OPC14523、丙氨苯丁酯、cyanodothepine、三甲丙咪嗪、奎核氮卓、二苯噻庚英、氯氧平、nitroxazepine、McN5652、McN5707、Ol77、Org6582、Org6997、Org6906、阿米替林、阿米替林N-氧化物、去甲替林、CL255.663、吡吲哚、吲达曲林、LY113.821、LY214.281、CGP6085A、RU25.591、萘帕咪唑、diclofensine、曲唑酮、EMD68.843、BMY42.569、NS2389、sercloremine、nitroquipazine、腺苷甲硫氨酸、西布曲明和氟伏草胺。SRI可以以碱或其可药用酸加成盐的形式使用。

在其他实施方案中，可以在突触间隙中引起5-HT的胞外水平升高的其他治疗化合物，例如噻萘普丁可以用作抗抑郁剂。

选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)是单胺转运蛋白的抑制剂，其对5-羟色胺转运蛋白比对多巴胺和去甲肾上腺素转运蛋白具有更强的抑制作用。选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)的实例可以包括但不限于，氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依他普仑、舍曲林及其任意组合。

可以与含叶酸化合物组合对罹患抑郁症的个体施用的其他SRI和/或SSRI可以包括例如，描述于美国专利申请公开号2005/0054688和2008/0138411及美国专利号6,720,003、6,787,560、7,893,261和7148238中的那些。

本领域技术人员将能够通过翻阅适当的参考如药物包装说明书、FDA指导方针和医生的案头参考(Physician'sDeskReference)来容易地确定已知和/或市售抗抑郁药的推荐剂量水平。在一些实施方案中，抗抑郁药剂量可以在从0.1mg/天至约1000mg/天、从约0.5mg/天至约500mg/天、从约1mg/天至约400mg/天、从约5mg/天至约300mg/天、或从约10mg/天至约200mg/天的范围内。本领域技术人员可以根据许多因素如抗抑郁剂的类型和/或效能、抑郁症的严重度、个体的身体状况(例如，年龄、性别和体重)、给药途径、个体所接受的其他药物及其任意组合来容易地调整每一种不同抗抑制药的剂量。

H.药物组合物

本文提供用于对携带至少一个协同双生物标志组合的个体体内施用的包含治疗有效量的含叶酸化合物和可药用载体的药物组合物。

在一些实施方案中，与在缺乏含叶酸化合物(例如，具有或不具有抗抑郁剂单一治疗)的情况下获得的改善程度相比，与抗抑郁剂或其可药用盐一起施用的治疗有效量的含叶酸化合物或叶酸足以使至少一项神经心理测试中的改善程度提高至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％，例如通过HAMD-17、HAMD-28或实施例中所述的其他功效测量所测定。在一些实施方案中，与在缺乏含叶酸化合物(例如，具有或不具有抗抑郁剂单一治疗)的情况下获得的改善程度相比，与抗抑郁剂或其可药用盐一起施用的治疗有效量的含叶酸化合物或叶酸足以使至少一项神经心理测试中的改善程度提高至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍或更多，例如通过HAMD-17、HAMD-28或实施例中所述的其他功效测量所测定。

在一些实施方案中，用于对人施用的含叶酸化合物或叶酸的剂量可以在约0.01至约50mg/千克受体体重/天、约0.05至约5mg/千克受体体重/天或约0.1至约1mg/千克受体体重/天的范围内。在某些实施方案中，想要的剂量可以作为一个单次单位剂量形式提供，例如含有约0.5mg至约500mg、约5mg至约250mg、约10mg至约100mg、或约10mg至约50mg。在一些实施方案中，一个单次单位剂量形式可以提供约1mg至约70mg叶酸、约5mg至约60mg叶酸或约7mg至约50mg叶酸。在其他实施方案中，一个单次单位剂量形式可以提供约15mg至约50mg叶酸。还在其他实施方案中，一个单次单位剂量形式可以提供约20mg叶酸。在其他实施方案中，想要的剂量可以作为一天内以适当间隔施用的两个、三个、四个、五个或更多个亚剂量提供。这些亚剂量可以以例如含有约0.1mg至约250mg、约1mg至约100mg、约2mg至约20mg或约2mg至约10mg的单位剂量形式施用。

在一些实施方案中，药物组合物可以进一步包含至少一种抗抑郁药。一般而言，适合用于对人施用的抗抑郁剂或其可药用盐的剂量在约0.01至50mg/千克受体体重/天的范围内，或在0.1至5mg/千克受体体重/天的范围内。在某些实施方案中，想要的剂量可以作为一个单次单位剂量形式提供，例如含有约1mg至约500mg，或约5mg至约300mg。在其他实施方案中，想要的剂量可以以一天内以适当间隔施用的两个、三个、四个、五个或更多个亚剂量提供。这些亚剂量可以以例如含有约0.1mg至约100mg或约1mg至约50mg的单位剂量形式施用。

可药用载体包括可药用材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制备辅剂(例如，润滑剂、滑石、硬脂酸镁、钙或锌，或硬脂酸)、或溶剂封装材料，其涉及将主题化合物从一个器官或身体部分携带或转运到另一器官或身体部分。每种载体在与制剂的其他成分相容的意义上必须是“可接受的”并且对患者无害。可以用作可药用载体的材料的一些实例包括：(i)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(ii)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(iii)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维素；(iv)西黄蓍胶粉；(v)麦芽；(vi)明胶；(vii)润滑剂，如硬脂酸镁、硫酸月桂酯钠和滑石；(viii)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(ix)油，如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(x)乙二醇，如丙二醇；(xi)多元醇，如丙三醇、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇(PEG)；(xii)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(xiii)琼脂；(xiv)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(xv)褐藻酸；(xvi)无热原水；(xvii)等渗盐水；(xviii)Ringer's溶液；(xix)乙醇；(xx)pH缓冲液；(xxi)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；(xxii)填充剂，如多肽和氨基酸；(xxiii)血清组分，如血清白蛋白、HDL和LDL；(xxiv)C2-C12醇，如乙醇；和(xxv)药物制剂中使用的其他无毒相容物质。湿润剂、着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于制剂中。

可药用载体取决于给药途径和制剂在本文所述的组合物中可以变化。例如，本文所述的可药用组合物可以通过注射递送。这些给药(递送)途径包括但不限于皮下或肠胃外，包括静脉内、动脉内、肌内、腹膜内、心肌内和输注技术。在一个实施方案中，可药用组合物是适合于注射的形式。在另一实施方案中，药物组合物配制成通过导管递送。

在经肠胃外施用药物组合物时，它一般可以配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳状液)。适合于注射的药物制剂包括无菌水溶液或分散体。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、细胞培养基、缓冲液(例如，磷酸缓冲盐溶液)、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇、液体聚乙二醇等)、其适宜的混合物。在一些实施方案中，药物载体可以是缓冲溶液(例如，PBS)。在一些实施方案中，药物组合物可以配制成乳状液或凝胶。

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物可以配制用于口腔施用或吸入。对于口腔施用，适宜的剂量形式可以包括片剂、含片、扁囊剂、小胶囊和胶囊，包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。

在一些实施方案中，抗抑郁剂和含叶酸化合物可以配制在单个药物组合物中。例如，抗抑郁剂和含叶酸化合物可以配制在用于口腔施用的单个片剂中。

在其中抗抑郁剂和含叶酸化合物配制在单个组合物中的一些实施方案中，它们可以同时或在不同时间从组合物释放。仅作为实例，如果含叶酸化合物配制在组合物(例如，片剂或药物递送颗粒)的外层，而抗抑郁剂配制在组合物的内层，则含叶酸化合物可以以较快的速率首先从组合物释放，而抗抑郁剂则以较慢的速率稍后从组合物释放。在另一方面，如果抗抑郁剂和含叶酸化合物均匀地混合在组合物内，则二者可以同时从组合物释放。

在其他实施方案中，抗抑郁剂和含叶酸化合物可以配制在分开的药物组合物中用于在治疗过程的相同或不同的给药途径。例如，抗抑郁剂可以配制用于吸入施用，而含叶酸化合物可以配制用于口腔施用。在其他实施方案中，抗抑郁剂和含叶酸化合物可以配制在例如分开的片剂中用于口腔施用。

对所选人类个体施用治疗本文所述抑郁症的叶酸的有效量显著高于作为膳食补充剂摄取的典型量(在50-600μg/天之间)。在一些实施方案中，对所选人类个体施用的叶酸的有效量比作为膳食补充剂摄取的典型量高至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约250倍、至少约500倍、至少约1000倍或更多倍。因此，在一些实施方案中，希望将含叶酸化合物配制在缓慢释放或持续释放组合物中。

因此，在一些实施方案中，包含含叶酸化合物的药物组合物(含有或不含有抗抑郁剂)可以配制用于持续释放或持续递送。在一些实施方案中，药物组合物可以配制在受控释放的药物递送系统中，例如以提供含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)的持续释放。如本文所用，术语“持续释放”或“持续递送”指在施用后的时期内在体内连续递送治疗剂。例如，持续释放可以发生在施用后至少约1小时、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约9小时、至少约12小时、至少约16小时、至少约24小时的时期内。在一些实施方案中，持续释放可以发生在施用后至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天的时期内。在一些实施方案中，含叶酸化合物从药物递送系统的释放可以是稳态(零级动力学)，其中在施用后约3-6小时之间，或施用后约4-5小时之间释放至少约30％(例如，包括至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或更多)的含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)。在一个实施方案中，含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)从药物递送系统的释放可以是稳态(零级动力学)，其中在施用后约3-6小时之间，或施用后约4-5小时之间释放的含叶酸化合物基本上完全释放(例如，～100％)。在一些实施方案中，含叶酸化合物可以以这样的速率从药物递送系统释放，该速率足够的低，以至于不超载患者十二指肠(小肠的前1/3，其中发生含叶酸化合物(例如L-MTHF)的～90％的吸收)的肠吸收能力。在一些实施方案中，含叶酸化合物和抗抑郁剂(如果有的话)可以以相同的或不同的释放速率同时或分别从药物递送系统释放。

在预定时期内提供含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)的持续释放的任何药物递送系统(例如但不限于基于聚合物的)都可以用于含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)的施用。在一个实施方案中，药物递送系统可以是小胶囊设计，其足够大以被胃和十二指肠之间的幽门瓣阻挡，因此允许小胶囊在希望的时期内，例如约2-3小时的时期内缓慢地和部分地溶解，在该时期内含叶酸化合物从小胶囊稳定地释放。随着小胶囊在完成其稳态释放时(例如，附加的时期，例如附加的2小时)溶解成可以通过幽门瓣的大小，小胶囊可以继续通过空肠(小肠的第二个1/3)，其中吸收是最少的。

在一些实施方案中，药物递送系统可以使用亲水和疏水聚合物的混合物，以控制含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)通过聚合物基质的扩散和侵蚀的释放。

在一些实施方案中，药物递送系统可以包含包封在基于聚合物的颗粒中的含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)。可以将这些基于含叶酸聚合物的颗粒填充到胶囊或单剂量囊剂中用于附加的释放控制。

用于不同施用方法(例如，口腔施用、注射、植入和吸入)的受控释放(例如，持续释放)药物递送系统为本领域抑制，并且可以用于递送含叶酸化合物(和可选的抗抑郁剂)用于本文所述的治疗方法。对于通过多种给药途径递送活性剂的多种类型的药物递送系统，参见例如国际专利申请号WO2012/111961(口服制剂)、WO2012/131678(可注射制剂)；美国专利申请号US2012/0258161(可植入制剂)、US2001/0038854、US2001/0033866；和美国专利号8268347(吸入制剂)，其公开内容在此为了所有目的以其整体引入作为参考。

此外，可以加入增强组合物的稳定性、无菌性和等渗性的多种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。可以通过多种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等来确保防止微生物的活动。在许多情况下，可以希望包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。

取决于所希望的给药途径和制剂，组合物还可以包含辅助物质，如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂、凝胶或黏度增强添加剂、防腐剂、着色剂、黏合剂等。可以查阅本文所引入作为参考的标准教科书，如“REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCE”,第17版，1985，以在没有过多实验的情况下制备适宜的制剂。然而，对于本文所述的组合物，所使用的任何载体、稀释剂或添加剂应该与抗抑郁剂或其可药用盐和/或含叶酸化合物生物相容。

药物组合物可以是等渗的，即它们可以具有与血液和泪液相同的渗透压。可以用氯化钠或其他可药用物质，如葡萄糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇或其他无机溶质或有机溶质达到本文所述组合物的组成的想要的等渗性。在一个实施方案中，氯化钠用于含有钠离子的缓冲液中。

可以用可药用增稠剂将组合物的黏度维持在所选水平上。在一个实施方案中，使用甲基纤维素，因为它可以容易地并且经济地获得并且易于操作。其他适宜的增稠剂包括例如，黄单胞菌胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆等。增稠剂的优选浓度将取决于所选物质。重要的一点是使用将达到所选黏度的量。通常通过加入此类增稠剂来从溶液制备黏性组合物。

通常，任何添加剂(除了抗抑郁剂和/或含叶酸化合物)可以以磷酸缓冲盐溶液中0.001-50wt％溶液的量存在，并且活性成分以微克至毫克至克的数量级，如约0.0001-约5wt％、约0.0001-约1wt％、约0.0001-约0.05wt％或约0.001-约20wt％、约0.01-约10wt％和约0.05-约5wt％存在。对于将对患有压迫症的个体施用的任何治疗组合物，及对于任何具体的施用方法，优选测定毒性，如通过在合适的动物模型，例如啮齿类，如小鼠中测定致死剂量(LD)和LD50；及组合物的剂量、其中组分的浓度和施用组合物的时间，其引出适宜的应答。根据技术人员的知识，这种测定不需要过多的实验。

可以通过按照普遍接受的方法混合成分来制备本文所述的组合物。例如，可以将成分混合在适宜的可药用载体中，且可以通过加入水或增稠剂并可能加入缓冲剂控制pH或加入附加溶质控制张力，将混合物调整至最终的浓度和黏度。一般而言，pH可以从约3至约7.5变化。在一些实施方案中，组合物的pH可以是约6.5至约7.5。可以通过医学和兽医领域技术人员所熟知的剂量和技术，考虑诸如具体患者的年龄、性别、体重和状况以及用于施用的组合物形式(例如，液体)的因素来施用组合物。

I.试剂盒

在一些实施方案中，本文提供用于为诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体选择治疗方案的试剂盒。该试剂盒包含用于确定从该个体采集的样品中至少两种以下单核苷酸多态性(SNP)的存在或缺乏的至少一种试剂：

该试剂盒的使用说明书。

在一些实施方案中，该至少一种试剂选自限制酶、寡核苷酸、核酸探针、聚合酶及其组合。该试剂盒可以用于本文所述的方法来对叶酸应答性遗传生物标志进行基因型分型。在一些实施方案中，该试剂盒包含至少一组任意一个SNP侧翼的引物。在一些情况下，该至少两组引物可以在多重扩增测定中扩增至少两个SNP。

本文所述多种方面的实施方案还可以通过以下编号的段落中的任一个来描述。

1.用于为诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体选择治疗方案的测定，该测定包括：

(b)通过基因型分型来检测该至少两种遗传生物标志的每一个中单核苷酸多态性(SNP)的存在或缺乏，其中该SNP的存在如下所示：

2.段落1的测定，其进一步包括施用该治疗方案。

3.段落1或2的测定，其中该至少两种遗传生物标志是MTHFR和MTR对。

4.段落1-3中任一段落的测定，其中该至少两种遗传生物标志是GCH1和COMT对。

5.段落1-4中任一段落的测定，其中步骤(a)进一步包括确定选自肥胖、SAM/SAH比值、4-HNE水平、hsCRP水平及其组合的至少一种附加状况。

6.段落5的测定，其中步骤(b)进一步包括检测以下状况中的至少一种：

(i)SAM与SAH的表达水平比值小于预先确定的参考比值；

(ii)4-HNE的表达水平高于第一预先确定的参考值；和

(iii)hsCRP的表达水平高于第二预先确定的参考值。

7.段落5的测定，其中如果该个体中存在任意以下状况，则确定为肥胖：BMI值为30kg/m²或更大，男性腰围大于40英寸或女性腰围大于35英寸，男性腰臀比为约0.95或女性腰臀比高于0.80，或男性体脂百分比为至少约25％或女性体脂百分比为至少约32％。

8.段落6的测定，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该预先确定的SAM/SAH参考比值为约3.0。

9.段落6的测定，其中如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则该第一预先确定的4-HNE的参考值为约0.24微摩尔/L或约0.04mg/L。

10.段落6的测定，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该第一预先确定的4-HNE的参考值为约3.0mg/L。

11.段落6的测定，其中如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则该第二预先确定的hsCRP的参考值从约0.5mg/L至约4.5mg/L。

12.段落6的测定，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该第二预先确定的hsCRP的参考值为约2.3mg/L。

13.前述段落中任一段落的测定，其中该样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、口腔样品和唾液样品。

14.前述段落中任一段落的测定，其中抑郁症是严重抑郁性障碍。

15.前述段落中任一段落的测定，其中该含叶酸化合物的有效量是约15mg/天至约50mg/天。

16.段落15的测定，其中该含叶酸化合物的有效量是约20mg/天。

17.段落15的测定，其中该含叶酸化合物的有效量是约40mg/天。

18.段落17的测定，其中该含叶酸化合物按每天两次20mg剂量施用。

19.前述段落中任一段落的测定，其中该治疗方案进一步包括抗抑郁药。

20.段落19的测定，其中该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。

21.段落20的测定，其中该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林或其组合。

22.前述段落中任一段落的测定，其中该个体对抗抑郁药单一治疗应答不足或具有抗性。

23.前述段落中任一段落的测定，其中检测该SNP的存在或缺乏包括杂交测定、扩增测定、引物延伸测定、寡核苷酸连接测定、测序测定或其组合。

24.段落6-22中任一段落的测定，其中检测该状况包括免疫测定、免疫组织化学(IHC)、气相色谱(GC)、质谱分析法(MS)、高效液相色谱(HPLC)、核磁共振(NMR)波谱学或流式细胞术。

25.用于治疗诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体中的至少一种抑郁症症状的方法，该方法包括：

26.段落25的方法，其中该治疗方案进一步包括抗抑郁药。

27.段落26的方法，其中该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。

28.段落27的方法，其中该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其组合。

29.段落25-28中任一段落的方法，其中至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物在rs1801133上的存在和至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物在rs1805087上的存在与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。

30.段落25-28中任一段落的方法，其中至少一个胸腺嘧啶“T”等位基因或其互补物在rs8007267上的存在和两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物在rs4860上的存在与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。

31.段落25-30中任一段落的方法，其中抑郁症是严重抑郁性障碍。

32.段落25-31中任一段落的方法，其中该至少一种抑郁症症状选自情绪抑郁、内疚、工作或兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知障碍及其组合。

33.段落25-32中任一段落的方法，其中该个体肥胖。

34.段落33的方法，其中该肥胖表征为以下状况中的至少一种存在于该个体中：

a)BMI值大于30kg/m²；

b)男性腰围大于40英寸，或女性腰围大于35英寸；

c)男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和

35.段落25-34中任一段落的方法，其中该样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、口腔样品和唾液样品。

36.段落25-35中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约15mg/天至约50mg/天。

37.段落36的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约20mg/天。

38.段落36的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约40mg/天。

39.段落35-38中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。

40.段落25-38中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量按每天至少两个分剂量施用。

41.段落25-36、38或40中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物按每天两次约20mg/剂量施用。

42.段落25-41中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物口服施用。

43.段落25-42中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物是L-甲基叶酸。

44.段落25-43中任一段落的方法，其中该个体对抗抑郁药单一治疗应答不足或具有抗性。

45.段落25-44中任一段落的方法，其进一步包括测量至少一种生物标志的表达水平，并确定该生物标志的水平是否与对含叶酸化合物的症状减轻应答相关。

46.段落45的方法，其中该附加生物标志选自SAM、SAH、4-HNE、hsCRP及其组合。

47.段落45的方法，其中如果符合以下状况中的一种或多种，则该个体可能对该含叶酸化合物具有症状减轻应答：

a)SAM与SAH(SAM/SAH)的表达比值小于预先确定的参考比值；

b)4-HNE的表达水平高于第一预先确定的参考值；和

c)hsCRP的表达水平高于第二预先确定的参考值。

48.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则该预先确定的SAM/SAH参考比值从约4至约12。

49.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该预先确定的SAM/SAH参考比值为约3.0。

50.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则该第一预先确定的4-HNE的参考值为约0.24微摩尔/L或约0.04mg/L。

51.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该第一预先确定的4-HNE的参考值为约3.0mg/L。

52.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血清样品中测量，则该第二预先确定的hsCRP的参考值从约0.5mg/L至约4.5mg/L。

53.段落47的方法，其中如果在来自正常健康个体的血浆样品中测量，则该第二预先确定的hsCRP的参考值为约2.3mg/L。

54.用于改善对诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法，该方法包括：

如果该个体携带至少一种以下单核苷酸多态性(SNP)的组合，则与该抗抑郁药组合施用包含有效量的含叶酸化合物的治疗组合物：

55.段落54的方法，其中该个体已接受抗抑郁药单一治疗。

56.段落54或55的方法，其中该个体对抗抑郁药单一治疗应答不足。

57.段落56的方法，其中该应答不足基于临床评估。

58.段落54-57中任一段落的方法，其中该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。

59.段落58的方法，其中该选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其组合。

60.段落54-59中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约15mg/天至约50mg/天。

61.段落60的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约20mg/天。

62.段落61的方法，其中该含叶酸化合物的有效量为约40mg/天。

63.段落54-62中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。

64.段落54-62中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物的有效量按每天至少两个分剂量施用。

65.段落54-60、62或64中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物按每天两次约20mg施用。

66.段落54-65中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物口服施用。

67.段落54-66中任一段落的方法，其中该含叶酸化合物是L-甲基叶酸。

68.段落54-67中任一段落的方法，其中该抑郁症是严重抑郁性障碍。

69.用于治疗诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险且携带至少两个选自以下的SNP的人类个体中的抑郁症的含叶酸组合物：

70.段落69的组合物，其中该至少两个SNP是标识为rs1801133的SEQIDNO:1的677位或SEQIDNO:7的27位上的SNP，其包含至少一个MTHFR的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs1805087的SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP，其包含至少一个MTR的鸟嘌呤“G”等位基因。

71.段落69的组合物，其中该至少两个SNP是标识为rs8007267的SEQIDNO:18的27位上的SNP，其包含至少一个GCH1的胸腺嘧啶“T”等位基因，及标识为rs4680的SEQIDNO:24的27位上的SNP，其包含两个COMT的鸟嘌呤“G”等位基因。

72.段落69-71中任一段落的组合物，其中抑郁症是严重抑郁性障碍。

73.段落69-72中任一段落的组合物，其中该个体正接受至少一种抗抑郁药。

74.段落69-73中任一段落的组合物，其中对携带该至少两种SNP的个体施用包含含叶酸化合物的辅助治疗和抗抑郁药。

75.段落74的组合物，其中该抗抑郁药是选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)。

76.段落69-74中任一段落的组合物，其中该含叶酸化合物包含约15mg至约50mg的L-甲基叶酸。

77.段落76的组合物，其中该含叶酸化合物包含约20mg的L-甲基叶酸。

78.段落69-77中任一段落的组合物，其中该含叶酸化合物具有预先确定的释放特征。

79.段落69-78中任一段落的组合物，其中该预先确定的释放特征是缓释。

80.段落79的组合物，其中该预先确定的释放特征是稳态释放。

81.段落69-78中任一段落的组合物，其中该预先确定的释放特征是脉冲释放。

82.段落69-78中任一段落的组合物，其中该预先确定的释放特征是计时控制释放。

83.段落69-82中任一段落的组合物，其中该含叶酸组合物配制为在施用该组合物后至少3至6小时的时期内释放至少30％的含叶酸化合物。

84.用于为诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类个体选择治疗方案的试剂盒，其包含：

用于确定从该个体采集的样品中至少两种以下单核苷酸多态性(SNP)的存在或缺乏的至少一种试剂：

该试剂盒的使用说明书。

85.段落84的试剂盒，其中该至少一种试剂选自限制酶、寡核苷酸、核酸探针、聚合酶及其组合。

IV.实施例

提供以下实施例来说明而不是限制所要求保护的发明。

实施例1.鉴定用于选择抑郁症患者的生物标志，该患者用与SSRI组合的含叶酸化合物的治疗

在罹患严重抑郁性障碍(MDD)的SSRI抗性门诊患者中进行6(S)-5-MTHF的双盲、安慰剂对照研究，来鉴定特异性生物标志组合，该生物标志组合与在除抗抑郁药外对患者施用含叶酸化合物(例如6(S)-5-MTHF)时更大的功效应答(例如，大于两种SNP产生的累加应答的应答，或大于两个SNP中任一个单独产生的应答的应答)相关。参见例如PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012)。

针对它们对包含含叶酸化合物(例如6(S)-5-MTHF)和SSRI的治疗在抑郁症患者中的功效的影响，评估了两种遗传生物标志、一种遗传生物标志和临床特征的多种组合。具体而言，所评估的具体组合在图1B、2、4和5中显示。

图1-6中显示用含叶酸化合物(例如6(S)-5-MTHF)和SSRI治疗患者时，多种单标志和双生物标志组合如何影响改善程度的结果，如通过HAMD-17得分、HAMD-28得分或认知和身体功能问卷(CPFQ)得分测量。通过测量I期和II期结束时HAMD-17得分、HAMD-28得分或HAMD-28与基线(例如，无治疗的个体)相比的平均变化来确定功效影响。

图7A-B是一组结果表格，显示关于遗传调节因子(例如种族、年龄、性别和BMI)的影响的统计学分析，比较临床研究的安慰剂(施用抗抑郁药而无含叶酸化合物)或含叶酸治疗(施用含叶酸化合物作为抗抑郁药的佐剂)组内的生物标志阳性个体和生物标志阴性个体。结果显示MTR2756AG或GG基因型相关单核苷酸多态性(SNP)rs1805087)阳性个体的所有所示遗传修饰因子(例如种族、年龄、性别和BMI)内与此SNP阴性的个体相比在统计上显著的治疗作用。COMTCC(rs4633)或COMTGG(rs4680)SNP阳性个体也在至少一个遗传调节因子类别中显示统计上显著的治疗作用。

图8A-B是一组结果表格，显示临床研究的安慰剂和含叶酸治疗组内的生物标志阳性个体的应答率。应答者通过评价期内HAMD-28降低至少约50％来指示。

图1B中的结果总结表按它们在MDD患者中的影响递减的顺序(即HAMD-28减少越大的SNP在表格中越靠前列出)列出了两种生物标志的组合。显示大于各单标志产生的应答总和的治疗应答(如通过HAMD-28的变化测定)的两种生物标志的组合以较暗阴影突出显示，它们是图1B中所示的(A+O)、(K+P)、(K+Q)、(B+Q)、(C+O)、(C+K)、(B+O)、(C+H)、(A+G)和(A+C)，其中每一相应SNP的字母标识符在图1A中列出。显示大于两个标志中的任一个单独产生的应答的治疗应答(如通过HAMD-28的变化测定)的两种生物标志的组合以较浅阴影突出显示，例如图1B中所示的(O+P)。显示与两个标志中的任一个单独产生的应答相当或小于两个标志中的任一个单独产生的应答的治疗应答(如通过HAMD-28的变化测定)的两种生物标志的组合不突出显示，例如图1B中所示的(O+Q)。

虽然图1B中的结果表格按它们在MDD患者中的影响递减的顺序列出了两种生物标志的组合，但不应解释为，在突出显示的组合(即通过深色和浅色加亮标记的那些)间，一种双生物标志组合是比另一组合更可靠的用于本文所述测定、方法、系统和试剂盒的预测因子，因为与在这些基因上携带正常等位基因的MDD患者相比，在用含叶酸化合物治疗携带具体生物标志组合的MDD患者时，所有这些突出显示的双生物标志组合都已显示HAMD-28的显著变化。

实施例2.为含叶酸增强治疗(与SSRI)选择患者的示例性方法和进行这种治疗的MDD患者的个体化预后

基于利用含叶酸化合物(例如)的MDD治疗增强上的双盲安慰剂对照多位置研究(其中36名患者接受含叶酸化合物(例如)，它们的HAMD-28从基线测量值上具有降低)，诊断具有测试系列(PT)中所述至少一种状况(具有对应的“值”(如稍后详细显示))的患者一般按照下表中所示的预期HAMD-28降低应答。

因此，本文还提供治疗MDD患者和/或确定或改善MDD患者服用的抗抑郁药的有效性的方法。例如，在一些实施方案中，该方法可以包括(1)筛选对治疗具有抗性的MDD患者(参见例如，下文的步骤1的细节)；和(2)对MDD患者的试样进行系列测试(PT)(参见例如，下文步骤2的细节)。在一些实施方案中，如果PT结果显示下文表5中所示的至少一种编码分组，则可以为患者推荐包含抗抑郁药和含叶酸化合物(例如)的治疗方案。在一些实施方案中，如果PT结果显示下表中所示的至少一种编码分组，则可以预期可在利用含叶酸化合物(例如)与抗抑郁药(例如SSRI)组合的最少4周的治疗内达到HAMD-28从基线值(例如在基线就诊时测量的值)的对应降低。

步骤1：筛选对治疗具有抗性的MDD患者，以确定(a)他们是否满足MDD的DSM-IV标准；和(b)他们是否接受足够剂量的SSRI并且对一个或更多个疗程的SSRI无充分应答。如果患者满足筛选标准(a)和(b)二者，则推荐医生预定下文所述的系列测试(PT)。

步骤2：可以进行下文所示的系列测试(PT)的实例。

可以修改上文所示的系列测试(PT)，以去除或添加本文所述生物标志的任意组合，或包括52种双生物标志组合(参见表3)中的一种或更多种，或10种协同双生物标志组合(参见表4)中的一种或多种。

步骤3：基于步骤(2)的PT中列出的状况的测试结果，鉴定测试为阳性(即具有判定Y)的任意PT(项目A-F)，然后以下表中所示编码的最大数字的“编码”的字母顺序进行记录。一旦已为给定患者的PT选择了编码分组，即可以检查该编码分组的对应的“95％CI”(95％的置信区间)。在一些实施方案中，如果CI的上端低于0，则HAMD-28从基线值的降低可能是显著的。在其他实施方案中，如果CI的上端高于0，则应该慎重解释HAMD-28从基线值的降低。

步骤4：例如可以按以下确定HAMD-28从基线的预期降低：

(a)如果患者仅具有PT的单个命中(即一种状况为阳性)，则HAMD-28从基线的降低可以基于编码“All”；或

(b)如果患者具有PT的双命中(即两种状况为阳性)，则HAMD-28从基线的降低可以基于从表5中所示的A、B、C、E或“ALL”获得的最高应答(即HAMD-28中的最大变化)。在一些实施方案中，如果双命中是“D+F”，则该降低可以基于编码“All”；

(c)如果患者具有PT的三个命中(即三种状况为阳性)，则HAMD-28从基线的降低可以基于从表5中所示的最佳组合(即2编码组合中最好的)获得的最高应答(即HAMD-28中的最大变化)。仅作为实例，如果患者在PT的A、C和E上具有三个命中，则可能的2编码组合是A+C、A+E和C+E。在这些组合中，因为组合“A+E”对应于表5中所示的最大HAMD-28降低，所以认为组合“A+E”是对应于最大HAMD-28降低的最佳组合。然而，如果该三个命中含有“D+F”，则HAMD-28降低应基于从A、B、C、E或“ALL”的单编码获得的最高应答；

(d)表5中的负HAMDΔ数值反映了试验2基线HAMD-28的可能降低(～24.47)。HAMDΔ数值代表患者可以在少至4周中应答增强治疗(与SSRI)而获得的HAMD-28量表中的预期降低。在一些实施方案中，实际的降低可以落入下文表5中所示的95％内的任何地方。

表5：多种编码组合的基于试验2的24.47的平均基线的预期HAMD-28降低。

实施例3.辅助性L-甲基叶酸15mg在按生物标志水平和基因型分层的抑郁患者中的作用：来自随机临床试验的结果

此实施例说明改善对诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险的人类患者施用的抗抑郁药(例如选择性5-羟色胺再吸收抑制剂)的有效性的方法。该方法包括确定该患者是否携带至少一种单核苷酸多态性(SNP)，其中该SNP与该抗抑郁药在与含叶酸化合物(例如L-甲基叶酸)组合施用时的有效性提高相关。此实施例还提供用于治疗人类个体中的至少一种抑郁症症状(例如情绪抑郁、内疚、工作或兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知障碍或其任意组合)的方法。该方法包括对该个体施用含叶酸化合物(例如L-甲基叶酸)，该个体1)诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险且2)携带与对该含叶酸化合物的阳性症状减轻应答相关的具体SNP的组合(例如多个)。

具体遗传标志或生物标志的存在可以预测对严重抑郁症治疗的应答不足。此分析的目的是评价单独和组合的具体生物标志和遗传标志对来自SSRI应答不足者的试验的辅助性L-甲基叶酸15mg对安慰剂的抗抑郁功效的影响。这是使用序列平行比较设计(SPCD)的双盲、随机化、安慰剂对照试验。患有SSRI抗性抑郁症的门诊患者接受L-甲基叶酸15mg/天60天，安慰剂30天，然后L-甲基叶酸15mg/天30天，或安慰剂60天。评价了所选生物标志和遗传标志的基线水平单独和组合对L-甲基叶酸对安慰剂的治疗应答的影响。招募了75名患者。对于L-甲基叶酸对安慰剂，基线时具有具体生物标志(体重指数[BMI]≥30kg/m²、高敏感性c-反应蛋白[hsCRP]或4-羟基-2-壬烯醛[4-HNE]、低S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷高半胱氨酸[SAM/SAH]比值)和遗传标志的患者在HDRS-28上具有显著(p≤0.05)更高的偏离基线的合并平均变化。对于大多数遗传标志的L-甲基叶酸对安慰剂，CGI-I上的偏离基线的合并平均变化显著(p<0.05)更高。对于L-甲基叶酸对安慰剂的HDRS-28得分，基线生物标志和遗传标志的大多数组合预测偏离基线的合并平均变化显著(p≤0.05)更高的减低。概括起来，与炎症或代谢相关的生物标志或与L-甲基叶酸合成和代谢相关的基因组标志可以鉴定应答15mgL-甲基叶酸辅助治疗的患有SSRI抗性MDD的患者。

尽管有许多抗抑郁药可用，但超过60％的严重抑郁性障碍(MDD)患者未能在它们的首次抗抑郁药治疗后经历症状的完全缓解，确实缓解的那些中的大多数经历复发或再发(RushAJ,TrivediMH,WisniewskiSR等,AmJPsychiatry,163:1905-1917(2006)；PapakostasGI,IntJNeuropsychopharmacol,15:841-854(2012))。此实施例描述通过使用临床标志和生物标志来鉴定对更有效的治疗策略具有改善的成功率的具体患者的方法。

已将代谢系统紊乱与MDD的病理生理学和病程相关联(McIntyreRS,SoczynskaJK,KonarskiJZ等,AnnClinPsychiatry,19:257-264(2007)；VogelzangsN,BeekmanAT,BoelhouwerIG等,JClinPsychiatry,72:598-604(2011)；PapakostasGI,SheltonRC,KinrysG等,MolPsychiatry,18:332-339(2013))。例如，前瞻性群组研究发现，罹患抑郁症和共病代谢综合征的参与者具有效能应答慢性、复发性抑郁症的更高风险(VogelzangsN,BeekmanAT,BoelhouwerIG等,JClinPsychiatry,72:598-604(2011))。同时，近年来，还认识到MDD与受损的细胞免疫和炎症之间的相关性，该受损的细胞免疫和炎症的特征在于白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和高敏感性c反应蛋白(hsCRP)水平提高(PapakostasGI,SheltonRC,KinrysG等,MolPsychiatry,18:332-339(2013)；BlumeJ,DouglasSD,EvansDL,BrainBehavImmun.,25:221-229(2011)；MillerAH,MaleticV,RaisonCL,BiolPsychiatry,65:732-741(2009)；SimonNM,McNamaraK,ChowCW等,EurNeuropsychopharmacol.,18:230-233(2008))。此外，脑内炎症途径的激活也可促成氧化应激，产生MDD的神经病理学特征(MillerAH,MaleticV,RaisonCL,BiolPsychiatry,65:732-741(2009)；NgF,BerkM,DeanO等,IntJNeuropsychopharmacol.,11:851-876(2008)；StaffordL,BerkM.,JClinPsychiatry72:1229-1235(2011))。在住院进行心脏介入的患者的前瞻性研究中，具有抗炎症和抗氧化特性的抑制素的使用与第9个月时MDD风险的显著降低相关(NgF,BerkM,DeanO等,IntJNeuropsychopharmacol.,11:851-876(2008)；StaffordL,BerkM.,JClinPsychiatry72:1229-1235(2011))。

已观察到叶酸缺乏、代谢失调和炎症之间的相关性(VogelzangsN,BeekmanAT,BoelhouwerIG等,JClinPsychiatry,72:598-604(2011)；BlumeJ,DouglasSD,EvansDL,BrainBehavImmun.,25:221-229(2011)；MillerAH,MaleticV,RaisonCL,BiolPsychiatry,65:732-741(2009)；SimonNM,McNamaraK,ChowCW等,EurNeuropsychopharmacol.,18:230-233(2008))。叶酸及其生物活性形式L-甲基叶酸对治疗MDD的益处已得到认可；最近还认识到叶酸缺乏与MDD风险提高、抗抑郁药有效性降低和更慢的病程之间的联系(VogelzangsN,BeekmanAT,BoelhouwerIG等,JClinPsychiatry,72:598-604(2011)；GinsbergLD,OubreA,DaoudY,InnovClinNeurosci.,8:19-28(2011)；FavaM.,JClinPsychiatry,68Suppl10:4-7(2007)；FavaM,BorusJS,AlpertJE等,AmJPsychiatry,154:426-428(1997)；PapakostasGI,PetersenT,MischoulonD等,JClinPsychiatry,65:1096-1098(2004))。最近，公开了来自未达到对选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)的充分应答的MDD患者中的随机、安慰剂对照试验的结果，其用序列平行比较设计(SPCD)证明了每天15mgL-甲基叶酸对安慰剂的更高的辅助治疗功效(PapakostasGI,SheltonRC,ZajeckaJM等,AmJPsychiatry,169:1267-1274(2012))。

此实施例将15mgL-甲基叶酸对安慰剂的治疗作用描述为集中于代谢或炎症状态标志的基线生物标志水平或基因型的函数。具体而言，它还说明低叶酸症(hypofolatemia)与代谢紊乱以及炎症之间的关系，例如，用来自这些领域的具体标志定义的基线代谢状态或炎症状态与每天15mgL-甲基叶酸对安慰剂增强的治疗结果之间的相互作用。此外，此实施例按照L-甲基叶酸在增强四氢生物蝶呤(BH₄)依赖性单胺合成中的作用(HyndmanME,VermaS,RosenfeldRJ等.AmJPhysiolHeartCircPhysiol282:H2167-2172(2002))，显示相互作用。观察到了MDD与红细胞叶酸、单胺神经递质和脑脊液BH4水平之间的显著相关。此外，BH4调节神经递质从神经末梢的突触前释放(BottiglieriT.,ProgNeuropsychopharmacolBiolPsychiatry,29:1103-12(2005))。最后，此实施例还显示与一碳循环代谢和治疗结果相关的标志的影响。

方法

此报告显示来自15mgL-甲基叶酸作为SSRI抗性MDD患者的辅助治疗的多中心、60天、随机、双盲试验的探究性分析的结果(PapakostasGI,SheltonRC,ZajeckaJM等,AmJPsychiatry,169:1267-1274(2012))。按照FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003)的顺序平行比较设计(SPCD)，将研究分为两个30天的阶段(I期和II期)。研究设计和结果之前已描述过(PapakostasGI,SheltonRC,ZajeckaJM等,AmJPsychiatry,169:1267-1274(2012))，但在下文中简要总结。研究方案经以下机构审查委员会(IRB)审查和批准：马萨诸塞州综合医院合作人类研究办公室(MassachusettsGeneralHospital,PartnersHumanResearchOffice)；拉什大学医学中心研究和临床试验管理办公室(RushUniversityMedicalCenter,ResearchandClinicalTrialsAdministrationOffice)；GoodwynIRB；加利福尼亚大学圣迭戈分校人类研究保护计划(UniversityofCalifornia,SanDiego,HumanResearchProtectionsProgram)；辛辛那提大学医学中心机构审查委员会办公室(UniversityofCincinnatiMedicalCenter,InstitutionalReviewBoardOffice)；范德堡大学机构审查委员会(VanderbiltUniversity,InstitutionalReviewBoard)；和宾夕法尼亚大学管理事务办公室(UniversityofPennsylvania,OfficeofRegulatoryAffairs)。在进行任何研究流程之前从所有研究患者获得书面知情同意书(ClinicalTrials.gov注册号NCT00955955)。

患者选择

如果他们在筛查和基线就诊时抑郁症症状快速调查表-自我报告(QuickInventoryofDepressiveSymptoms-SelfReport，QIDS-SR)得分≥12，则年龄18-65岁且当前MDD发作符合DSM-IV标准的成年人合格。如用马萨诸塞州综合医院(MGH)抗抑郁药治疗应答问卷(ATRQ)(ChandlerGM,IosifescuDV,PollackMH等,CNSNeurosciTher.,16:322-325(2010))评估，患者在当前MDD发作期间必须已按充足剂量(定义为20mg/天或更多的氟西汀、西酞普兰或赛乐特，10mg/天或更多的依地普仑，及50mg/天或更多的舍曲林)用SSRI治疗≥8周。患者还必须在过去4周中接受稳定的SSRI剂量。如果患者在当前发作期间有2次充足(adequate)抗抑郁药试验失败，则将他排除。将在QIDS-SR总得分上从筛查至基线显示≥25％的抑郁症症状减少的患者排除。

研究流程

在筛查和基线就诊期间评估合格性，筛查和基线就诊发生在彼此的14天之内。用之前所述的SPCD(FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003))将基线就诊期间合格的患者招募入研究。用主研究中心产生的随机化编码将患者随机至三个治疗组之一，其中他们在I期和II期期间接受安慰剂-安慰剂、安慰剂-L-甲基叶酸15mg/天、或L-甲基叶酸-L-甲基叶酸15mg/天。每个阶段持续时间为30天。研究就诊每10天进行，其间并行的SSRI剂量保持不变，将不能耐受研究药物的患者从研究中撤出。患者和研究人员对研究分配不知情。

在每次研究就诊时用汉密尔顿抑郁症分级量表(HDRS)评估患者。此外，用HAMD-7(McIntyreR,KennedyS,BagbyRM等,JPsychiatryNeurosci,27:235-239(2002))、认知和身体功能问卷(CPFQ)(FavaM,IosifescuDV,PedrelliP等,ReliabilityandvalidityoftheMGHCognitiveandPhysicalFunctioningQuestionnaire(CPFQ).PsychotherPsychosom78:91-97(2009))和临床总体印象量表(CGI-S)(GuyW.Ecdeu.AssessmentManualforPsychopharmacology—Revised(DHEWPublNoADM76-338).Rockville,MD,U.S.DepartmentofHealth,Education,andWelfare,PublicHealthService,Alcohol,DrugAbuse,andMentalHealthAdministration,NIMHPsychopharmacologyResearchBranch,DivisionofExtramuralResearchPrograms(1976))评价症状应答。测量身高和体重，按kg/m²计算BMI。收集基线血液样品来评估血浆hsCRP、4-羟基-2-壬烯醛[4-HNE]的基线水平和低S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷高半胱氨酸[SAM/SAH]比值。还评估了以下的遗传多态性：a)亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的C677T、1298C和G1793A基因型；b)甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)的A66G基因型；和c)甲硫氨酸合成酶(MTR)的A2756G基因型。对于其他分析，评估了基线样品的钙通道、电压依赖型、L型、α1C亚基(CACNA1C)；儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)；DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶3β(DNMT3B)；多巴胺受体D₂(DRD2)；叶酸还原酶1(FOLH1)；GTP环化水解酶1(GCH1)；GTP环化水解酶1反馈调节蛋白(GCHFR)；和溶质载体家族19(叶酸转运蛋白)成员1(也称为SLC19A1或还原型叶酸载体(RFC1))的遗传多态性(表6)。

表6.探索性分析中检查的遗传标志列表

遗传变体	RS编号	基因型比较
			CACNA1C	rs1006737	GG vs.AG/AA
COMT Val158	rs4633	TT vs.CC
			COMT Val158Met	rs4680	AA vs.GG
DNMT3B	rs1883729	GG vs.AG/AA和GG vs.AA
			DRD2	rs1079596	CC vs.TC/TT
DRD2129	rs6275	CC vs.TT
			FOLH1	rs202676	AA vs.AG/GG
GCH1	rs8007267	CC vs.TC/TT
			GCHFR	rs7163862	AA vs.TA/TT
MTHFR 677	rs1801133	CC vs.CT/TT
			MTHFR 1298	rs1801131	AA vs.AC/CC
MTHFR 1793	rs2274976	AA vs.GA
			MTR 2756	rs1805087	AA vs.AG/GG
MTRR 66	rs1801394	AA vs.AG/GG
			RFC180	rs1051266	GG vs.AA61 -->
RFC1	rs2297291	GG vs.AA
			RFC1815	rs12659	CC vs.TT

测定方法

通过市售试剂盒胶乳颗粒增强免疫比浊测定(PointeScientific,Inc.,Canton,MI)测量了血清hsCRP。在ACEAlera临床化学分析仪(AlphaWassermann,WestCaldwell,NJ)上读取浊度(吸光度)。通过用酶免疫测定(OxiSelectHNE-His加合物ELISA试剂盒,CellBiolabs,Inc.,SanDiego,CA)分析存在于样品中的HNE-His蛋白质加合物的量来测量血浆4-HNE。通过之前所述的稳定同位素稀释液相色谱-电喷雾离子化串联质谱分析法来测定血浆SAM和SAH(Inoue-ChoiM,NelsonMH,RobienK等,IntJMolEpidemiolGenet,3:160-173(2012))。对用DNeasy血液和组织试剂盒(QiagenInc,Valencia,CA)从全血纯化的DNA进行遗传多态性的存在的确定。用MassArray平台(Sequenom,Inc.,SanDiego,CA)进行基因型分型。

统计分析

对于探索性分析，与FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003)的SPCD一致，跨研究的两个阶段合并，通过L-甲基叶酸和安慰剂组从基线至终点的平均变化的平均差异来评估合并治疗作用。通过BMI(≥30或<30kg/m²)、hsCRP水平(平均基线值≥或<2.25mg/L)、SAM/SAH比值(平均基线值≥或<2.71)和4-HNE水平(平均基线水平≥或<3.28μg/mL)来分层生物标志对与安慰剂比较的L-甲基叶酸在HDRS-28上的应答的影响。此外，测量了基因型的分子多态性的存在。将提高的BMI、低SAM/SAH比值、提高的血浆hsCRP和4-HNE水平及分子多态性评价为更大的合并(根据SPCD的I期和II期)药物/安慰剂差异的预测因子。

为了分析研究功效数据，利用了标准SPCD分析法。具体而言，将意向治疗/末次观察结转(ITT/LOCF)法用于I期期间用L-甲基叶酸治疗的患者。II期目的数据集限于I期期间用安慰剂治疗的患者，该患者完成了I期，I期期间在HDRS上未经历临床应答，并进入II期。将LOCF法应用于II期的数据集，将I期的最后一次就诊/II期的首次就诊作为新的基线就诊。按照SPCD的模型将I期期间比较L-甲基叶酸和安慰剂的ITT/LOCF数据与II期中比较L-甲基叶酸和安慰剂的数据组合，并用FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003)中所列的一般方法分析，使用权重(w＝0.50)和随机化分数(a＝0.333)。

按照用于两分结果的方法分析两分测量值(FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003))，而用似不相关回归分析、基线得分控制进行连续结果的比较(TamuraRN,HuangX.,ClinTrials,4:309-317(2007))。所有检验都按双尾进行，α设为0.05。按各生物标志和遗传标志分层L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上从基线至终点的合并平均变化。计算各生物标志的治疗作用、作用大小(平均值之差除以标准差)和95％置信区间(CI)。此外，确定了组内分析、HDRS-28应答率(从基线降低至少50％)、优势比和需治数。以生物标志或遗传标志状态为暴露，对接受L-甲基叶酸(I期中或在II期中作为安慰剂非应答者)或安慰剂(I期中或在II期中作为安慰剂非应答者)的个体分别进行了组内分析。因为个体未根据其生物标志状态随机化，所以针对包括年龄、性别、种族和BMI的潜在混杂因素以及HDRS-28基线水平调整组内分析。对于连续的HDRS-28，用线性回归进行调整，对于二元结果，通过倾向得分分层分析进行调整(以减少最终模型中的预测因子数目)。

结果

总体上，74名患者提供了数据，61名患者(81.3％)完成了研究。来自研究的初步分析的详细结果(15mgL-甲基叶酸对安慰剂的功效、安全性、耐受性)已在其他地方公开(PapakostasGI,SheltonRC,ZajeckaJM等,AmJPsychiatry,169:1267-1274(2012))。对于所有分析，按照SPCD法(FavaM,EvinsAE,DorerDJ等,PsychotherPsychosom,72:115-127(2003))合并来自研究的I期和II期的结果。对于HDRS-28，辅助性L-甲基叶酸15mg/天的偏离基线的合并(I期和II期)平均变化显著高于安慰剂(-6.8±7.2对-3.7±6.5，p＝0.017)。

在通过多种生物标志或其组合的存在或缺乏鉴定的患者亚组中检查了L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上的合并平均变化。L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上的偏离基线的合并平均变化在具有低于研究中值的血浆SAM/SAH比值、高于研究中值的hsCRP或4-HNE血液水平或BMI≥30kg/m²(与肥胖一致)的患者亚组中显著(p≤0.05)更大(表7)。

表7.按血浆标志的基线水平分层的L-甲基叶酸15mg/天对安慰剂对HDRS-28偏离基线的合并平均变化的影响

变量	N	合并^*平均变化对安慰剂	95％置信区间	p-值	合并^*作用大小
						SAM/SAH≥2.71	36	0.07	(-3.33,3.48)	0.966	0.01
SAM/SAH<2.71	37	-4.57	(-7.73,-1.41)	0.005	-0.75
						hsCRP≥2.25mg/L	37	-3.61	(-7.23,0.002)	0.050	-0.50
hsCRP<2.25mg/L	36	-2.29	(-5.47,0.89)	0.158	-0.36
						4-HNE≥3.28μg/mL	37	-4.55	(-7.61,-1.50)	0.003	-0.74
4-HNE<3.28μg/mL	36	-0.11	(-3.67,3.46)	0.953	0.01

*以相同权重跨研究阶段合并。合并作用大小的负号表示治疗作用有利于L-甲基叶酸组。

探索性分析证明基于基线时大多数遗传标志的存在的L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上偏离基线的合并平均变化的显著(p≤0.05)差异。与各纯合显性基因型相比，L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上偏离基线的合并平均变化在具有MTR2756AG/GG或MTRR66AG/GG基因型的患者亚组中显著更高，但MTHFR677CT/TT或MTHFR1298AC/CC基因型不显著(表8)。对于HDRS-28，所有基因型的偏离基线的显著平均变化的合并作用大小在-0.05至-1.57的范围内。类似地，在按大多数遗传标志的基线存在分层时，L-甲基叶酸对安慰剂的HDRS-28应答率(治疗减安慰剂)显著(p<0.05)改善。基线时正常和假定的阳性标志的存在的比较证明HDRS-28应答率的明显差异，记录到除MTHFR677CT/TT、FOLH1AG/GG和GCHFRTA/TT外的大多数标志的显著(p<0.05)差异(图9A-B)。

表8.按单标志的基线水平分层的L-甲基叶酸的作用的分析(n＝59)

^*HDRS-28，治疗减安慰剂；^#针对基线、种族、年龄和BMI调整；^&n＝72(三名患者缺失用于计算BMI的身高值)；n＝65(10名患者未同意遗传测试)；⁺n＝58(一名患者中SNP结果不可读)；对于n＝59，用于遗传测试的样品用尽；NA＝不可得。

进行了其他探索性分析来确定在用HAMD-7、CGI-S和CPFQ评估应答时按单标志的基线水平分层的L-甲基叶酸对安慰剂的作用(表9)。在CGI-S上对于除MTHFR1298AC/CC外的所有遗传标志及在HAMD-7和CPFQ上对于许多标志，记录到L-甲基叶酸对安慰剂的偏离基线的合并平均变化的显著(p<0.05)改善。

表9.按单遗传标志的基线水平分层的L-甲基叶酸对HAMD-7、CGI-S和CPFQ的影响的分析

还检查了基线时存在生物标志和遗传标志的组合的患者中L-甲基叶酸对安慰剂对HDRS-28偏离基线的合并平均变化的影响。标志的组合证明L-甲基叶酸对安慰剂的偏离基线的合并平均变化在-3.6至-23.3的范围内，合并作用大小在-0.56至-4.50的范围内(表10)。MTHFR677CT/TT+MTR2756AG/GG、GCH1TC/TT+COMTGG和GCH1TC/TT+COMTCC的组合证明最大的作用大小(分别为-23.3、-20.7和-18.2)，L-甲基叶酸对安慰剂的合并平均变化高度显著(p<0.001)。

表10.按生物标志水平状态和基因型的组合分层的L-甲基叶酸15mg/天对安慰剂对HDRS-28偏离基线的合并平均变化的影响的分析

^*以相同权重跨研究阶段合并；NA＝不可得；通过n＝72(三名患者缺失用于计算BMI的身高值)解释了样本量差异；n＝65(10名患者未同意遗传测试)；n＝59，用于遗传测试的样品用尽；n＝58(一名患者中SNP结果不可读)。

讨论

来自初步分析的结果证明15mgL-甲基叶酸对安慰剂在对SSRI应答不足的患者中作为辅助治疗的显著差别功效(PapakostasGI,SheltonRC,ZajeckaJM等,AmJPsychiatry,169:1267-1274(2012))。L-甲基叶酸对HDRS的总体作用大小(0.41)类似于在MDD的其他辅助治疗研究中观察到的作用大小(0.35至0.37)(MarcusRN,McQuadeRD,CarsonWH等,JClinPsychopharmacol.,28:156-165(2008)；ReimherrFW,MartinML,EudiconeJM等,JClinPsychopharmacol.,30:300-305(2010))。本文提供的结果揭示L-甲基叶酸对安慰剂在按与代谢机能障碍、炎症或L-甲基叶酸代谢的变体(例如BMI、hsCRP、MTRR、MTR)相关的基线水平生物标志和遗传生物标志(结果的调节因子)的存在分层的患者中更大的差别治疗作用。

本文提供基线时所选生物标志的存在与对L-甲基叶酸的应答之间的相关性。在按具体生物血浆标志或遗传标志的存在分层时，15mgL-甲基叶酸对安慰剂的治疗作用和作用大小似乎比从常规抗抑郁药-安慰剂试验报道的那些更大(FournierJC,DeRubeisRJ,HollonSD等,JAMA,303:47-53(2010)；NelsonJC,MankoskiR,BakerRA等,JAffectDisord.,120:133-140(2010))。标志的组合证明15mgL-甲基叶酸具有甚至更大的治疗作用，作用大小在大多数比较中超过1.0。

已鉴定了几种与MDD的风险或严重度提高相关的生物标志。体重增加和肥胖与MDD风险提高和对抗抑郁药治疗的应答较差正相关(KloiberS,IsingM,ReppermundS等,BiolPsychiatry,62:321-326(2007)；LuppinoFS,deWitLM,BouvyPF等,ArchGenPsychiatry,67:220-229(2010)；FaithMS,ButrynM,WaddenTA等,ObesRev.,12:e438-453(2011)；MaJ,XiaoL.,Obesity,18:347-353(2010))。已针对其与MDD的相关性研究了涉及叶酸代谢的遗传标志(PeerboomsOL,vanOsJ,DrukkerM等,BrainBehavImmun.,25:1530-1543(2011)；R,JasniewiczK,MeczekalskiB等,Maturitas,61:252-255(2008)；LewisSJ,LawlorDA,DaveySmithG等,MolPsychiatry,11:352-360(2006)；Lopez-LeonS,JanssensAC,Gonzalez-ZuloetaLaddAM等,MolPsychiatry,13:772-785(2008))。本文提供的结果为作为辅助治疗的L-甲基叶酸对未充分应答SSRI的患者的益处的支持，并提出用于鉴定最有可能应答此治疗的那些个体的其他途径。本文所述的方法可以用于为对最初的抗抑郁药治疗无应答的抑郁患者提供个性化治疗方法。

汉密尔顿抑郁症分级量表(HDRS)在MDD的临床试验中广泛用作评估药物应答的标准。但是，HDRS已受到批评，因为它是多维的，缺乏检测临床变化的敏感性，且缺乏定义缓解的判别力(BallesterosJ,BobesJ,BulbenaA等,JAffectDisord.,102:93-99(2007))。对于这些分析，用HDRS-28而不是HDRS-17项得分来比较L-甲基叶酸对安慰剂的症状改善，因为长版本对具有非典型抑郁症或忧郁型抑郁症症状的患者中的变化更敏感(NemeroffCB,JPsychiatrRes.,41:189-206(2007)；CusinC,YangH,YeungA,FavaM.,In:BaerL,BlaisMA(编辑),HandbookofClinicalRatingScalesandAssessmentinPsychiatryandMentalHealth,HumanaPress(2010))。此外，在探索性分析中使用7项汉密尔顿抑郁症分级量表(HAMD-7)及认知和身体功能问卷(CPFQ)，因为HAMD-7可以对抑郁症临床试验中的变化更敏感(McIntyreR,KennedyS,BagbyRM等,JPsychiatryNeurosci,27:235-239(2002)；McIntyreRS,KonarskiJZ,ManciniDA等,CMAJ,173:1327-1334(2005))，而已发现CPFQ测量抑郁症的认知和身体症状，其是残留症状的预测(FavaM,IosifescuDV,PedrelliP等,ReliabilityandvalidityoftheMGHCognitiveandPhysicalFunctioningQuestionnaire(CPFQ).PsychotherPsychosom78:91-97(2009))。

综上所述，在应答不足者中用作SSRI治疗的辅助时，用L-甲基叶酸观察到了更大的功效。本分析表明，L-甲基叶酸对安慰剂就功效而言的相对优越性在按与炎症和叶酸代谢紊乱相关的代谢标志和遗传标志的存在分层的患者亚组中可以进一步得到增强。这些结果表明，可以用某些替代标志的存在来鉴定尤其应答15mgL-甲基叶酸辅助治疗的患有SSRI抗性MDD的患者。

实施例4.严重抑郁性障碍患者中对辅助性L-甲基叶酸的抗抑郁应答的预测性生物标志

此实施例说明遗传生物标志(例如单核苷酸多态性(SNP))在预测严重抑郁性障碍患者是否将应答L-甲基叶酸和抗抑郁药(例如选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI))的联合治疗中的用途。具体而言，此实施例显示，具体的协同双标志组合指示诊断患有MDD的患者对L-甲基叶酸和抗抑郁药的辅助治疗的治疗应答。此外，用多种神经心理学评估如HDRS、CGI-S和CPFQ检测了对辅助治疗的治疗应答。

摘要

生物标志或遗传标志可以与提高的MDD风险或对治疗的应答不足相关。此研究分析的目的是评价单独和组合的具体标志对辅助性L-甲基叶酸(15mg)在SSRI应答不足的患者中的抗抑郁作用的影响。

在初步研究中，在双盲、随机、安慰剂对照试验中在75名患有SSRI抗性MDD的门诊患者中评价了L-甲基叶酸。患者接受15mg/天L-甲基叶酸60天，安慰剂30天，然后15mg/天L-甲基叶酸30天，或安慰剂60天。临床研究的详细描述见于例如PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012)及美国专利申请号US2013/0172361和US2013/0267523及国际专利申请公开号WO2013/074676中，其公开内容在此为了所有目的以其整体引入作为参考。

在下文所述的分析中，评价了基线体重指数(BMI)及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR677CT/TT；rs1801133)、甲硫氨酸合成酶(MTR2756AG/GG；rs1805087)、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMTVal158MetGG；rs4680)和GTP环化水解酶1(GCH1TC/TT；rs8007267)多态性的存在单独和组合对L-甲基叶酸的治疗应答的影响。

与BMI<0kg/m²的那些患者相比，使用L-甲基叶酸的BMI≥30kg/m²的患者经历了显著更大的症状减轻(28项汉密尔顿抑郁症分级量表(HDRS-28)合并平均变化为-4.66；p＝0.001)。对于L-甲基叶酸对安慰剂，COMTVal158MetGG、GCH1TC/TT和MTR2756AG/GG的HDRS-28偏离基线的合并平均变化显著(p≤0.05)更高，合并作用大小在0.75至1.57的范围内。这五种标志(BMI、MTHFR、MTR、COMT和GCH1)的大多数组合的HDRS-28偏离基线的合并平均变化也显著(合并平均变化范围分别为-23.29,-9.88；p<0.05)。这些结果为使用结果测量HDRS-7、临床总体印象-严重度量表(CGI-S)及认知和身体功能问卷(CPFQ)的大多数比较的显著差异所支持。

15mg/天L-甲基叶酸辅助治疗在按生物标志、基因型或其组合分层的患者中证明了显著的治疗作用。这些状况单独和组合预测对SSRI治疗的应答不足。具体生物标志和基因型的组合的存在似乎还预测来自L-甲基叶酸增强的益处，而它们的缺乏指示几乎没有或没有来自这种增强的益处。

前言

据报道，严重抑郁性障碍(MDD)的12个月流行率在美国成年人中为6.7％(KesslerRC,ArchGenPsychiatry.,62:617-27(2005))，终生流行率为16.9％(AndradeL等,IntJMethodsPsychiatrRes.,12:3-21(2003))。MDD的复发与患者和照料者的实质性负担及明显更高的经济负担相关(Fostick等,EurNeuropsychopharmacol.,20:671-5(2010)；IvanovaJI等,CurrMedResOpin.,26:2475-84(2010)；KnothRL等,AmJManagCare,16:e188-96(2010))。绝大多数患者经历对抗抑郁药的弱应答率(RushAJ等,AmJPsychiatry,163:1905-17(2006))。没有可靠的治疗功效预测因子(FabbriC等,AmJMedGenetBNeuropsychiatrGenet.,162B:487-520(2013))，因此，抗抑郁治疗常产生药物应答弱或不足。

在至多三分之二的患者中，对最初抗抑郁治疗的应答不足继续妨碍MDD的有效管理(Thase,2003；RushAJetal.,AmJPsychiatry,163:1905-17(2006))。虽然转换抗抑郁药、增强策略和联合治疗是未应答的患者的治疗选择，但另一种途径是尝试鉴定将具有最佳应答的患者，即通过测量与MDD风险和/或治疗应答相关的生物标志或分子标志的水平。

已假定，遗传多态性促成抗抑郁药应答的个体间差异(FabbriC等,AmJMedGenetBNeuropsychiatrGenet.,162B:487-520(2013))。已鉴定了与抗抑郁药功效、耐受性和安全性相关的多态性。但是，这些研究具有小的样本量、确定性差的患者群体和混杂因素变量，这限制了结果的临床适用性(FabbriC等,AmJMedGenetBNeuropsychiatrGenet.,162B:487-520(2013))。MDD复杂的神经生物学和遗传药理学对将临床试验结果转换为临床实施提出了挑战。需要增加对与抗抑郁药应答相关的分子机制的理解，这应在MDD中产生改善的结果(O'Leary等,PharmacolBiochemBehav.,[Epubaheadofprint]PubMedPMID:24161683(2013年10月24日))

已鉴定了与提高的MDD风险、更高的MDD严重度或对抗抑郁药治疗的弱应答相关的多种遗传生物标志(VogelzangsN等,JClinPsychiatry,71:391-9(2010)；KloiberS,BiolPsychiatry.,62:321-6(2007)；LuppinoFS等,ArchGenPsychiatry,67:220-9(2010))。例如，遗传标志5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFRC677T)和儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)被公认为对抗抑郁治疗的应答或提高的自杀风险的预测(PeerboomsOL等,BrainBehavImmun.,25:1530-43(2011)；Lanctot等,2010；Slopien等,2008；SchosserA等,EurNeuropsychopharmacol.,22:259-66(2012))。因此，生物标志的基线水平或遗传标志的存在或缺乏的评估可以用于鉴定更有可能应答抗抑郁治疗的MDD患者。

L-甲基叶酸作为MDD的常规抗抑郁治疗的有价值的辅助治疗的作用越来越得到认可(PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012)；FarahA.,CNSSpectr.,14(1Suppl2):2-7(2009)；GinsbergLD,OubreA,DaoudY.,InnovClinNeurosci.,8:19-28(2011))。L-甲基叶酸通过四氢生物蝶呤(BH₄)调节多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺的合成，通过激活酪氨酸羟化酶和色氨酸羟化酶，四氢生物蝶呤对它们的合成至关重要(Bottiglieri,2005；MillerAL,AlternMedRev.,13:216-26(2008))。功能失调性叶酸配置可以提高抑郁症风险，干扰抗抑郁药治疗作用，导致治疗应答减少(VogelzangsN,BeekmanAT,BoelhouwerIG等,JClinPsychiatry,72:598-604(2011))。来自对SSRI具有充分应答的MDD患者中的两项随机、安慰剂对照试验的结果证明，与持续的SSRI单一治疗相比，辅助性L-甲基叶酸治疗的应答率和缓解率改善(PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012))。本文所示的一项试验的分析评价了单独和组合的五种生物标志对对辅助性L-甲基叶酸的治疗应答的预测值。

方法

基于来自L-甲基叶酸作为患有MDD且之前对SSRI治疗应答不足的患者的辅助治疗的多中心、60天、随机、双盲试验的结果进行了事后分析。研究设计和结果全部显示并总结在PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012)中。研究方案、修订和知情同意书表格由机构审查委员会审查和批准。在进行任何研究流程之前从所有患者获得书面知情同意书(ClinicalTrials.gov注册号NCT00955955)。

患者选择

如果他们在筛查和基线就诊时抑郁症症状快速调查表-自我报告(QuickInventoryofDepressiveSymptoms-SelfReport，QIDS-SR)得分≥12，则当前MDD发作符合诊断和统计手册IV(DSM-IV)标准且年龄18-65岁的患者合格。如用马萨诸塞州综合医院(MGH)抗抑郁药治疗应答问卷(ATRQ)(ChandlerGM等,CNSNeurosciTher.,16:322-5(2010))评估，患者需在当前MDD发作期间具有之前按充足剂量(定义为20mg/天或更多的氟西汀、西酞普兰或赛乐特，10mg/天或更多的依地普仑，及50mg/天或更多的舍曲林)用SSRI治疗≥8周的历史，该充足剂量在之前4周保持稳定。排除标准包括在当前发作期间有≥2次充足抗抑郁药试验失败，及在QIDS-SR总得分上从筛查至基线具有≥25％的抑郁症症状减少。

研究流程

筛查和基线发生在彼此的14天之内，基线就诊期间合格的患者在提供书面知情同意书后招募入研究。用序列平行比较设计(SPCD)(FavaM等,PsychotherPsychosom.,72:115-27(2003))将患者按2:3:3的比例随机化至由安慰剂-安慰剂、安慰剂-L-甲基叶酸15mg/天、或I期和II期的30天治疗期间L-甲基叶酸-L-甲基叶酸15mg/天组成的治疗组，并保持当前SSRI治疗处于稳定剂量。如果患者不能耐受研究药物，则将他们从研究中撤出。

在每次研究就诊时用汉密尔顿抑郁症分级量表(HDRS)(HamiltonM.,JNeurolNeurosurgPsych.,23:56-62(1960))和临床总体印象严重度和量表(CGI-S)(GuyW.,In:ECDEUassessmentmanualforpsychopharmacology.Washington(DC):SuperintendentofDocuments,USGovernmentPrintingOffice,USDepartmentofHealth,Education,andWelfarePublicationNO:76-338,1976:218-22)评价患者。此外，用HAMD-7(McIntyreRS,CMAJ,173:1327-34(2005))及认知和身体功能问卷(CPFQ)(FavaM.等,PsychotherPsychosom.,78:91-7(2009))评价症状应答。应答定义为在HDRS-28上从基线降低≥50％。测量身高和体重，按kg/m²计算BMI。收集基线血液样品来评估亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)T677C等位基因、COMTVal158MetGG、GTP环化水解酶1(GCH1)TC/TT和甲硫氨酸合成酶(MTR)A2756G的遗传多态性的存在。

测定方法

对用DNeasy血液和组织试剂盒(QiagenInc,Valencia,CA)从全血纯化的DNA进行MTHFR、MTR、COMT和GCH1的遗传多态性的测定。用MassArray平台(Sequenom,Inc.,SanDiego,CA)进行基因型分型。

统计分析

对于分析，跨研究的两个阶段合并，通过L-甲基叶酸和安慰剂组从基线至终点的平均变化的差值来评估合并治疗作用。这与FavaM等,PsychotherPsychosom.,72:115-27(2003))的SPCD一致。按基线BMI(≥30kg/m²或<30kg/m²)分层与安慰剂比较的L-甲基叶酸在HDRS-28上的治疗应答。此外，测定了MTHFR677TC/TT(rs1801133)、MTR2756AG/GG(rs1805087)、GCH1TC/TT(rs8007267)和COMTVal158MetGG(rs4680)基因型的多态性的存在或缺乏，并用作两分(dichotomous)变量。

用SPCD和意向治疗/末次观察结转(ITT/LOCF)法分析了在I期期间用L-甲基叶酸治疗的患者的功效数据。II期数据集限于在I期期间完成了安慰剂治疗、且在HDRS上未经历临床应答并进入II期的患者。将I期的最后一次就诊/II期的首次就诊视为新的基线就诊。按照SPCD模型将来自I期和II期的比较L-甲基叶酸和安慰剂的数据组合，并用FavaM等,PsychotherPsychosom.,72:115-27(2003)中所列的方法分析，使用权重(w＝0.50)和随机化分数(a＝0.333)。按照用于两分结果的方法分析两分测量结果(FavaM等,PsychotherPsychosom.,72:115-27(2003))，而用似不相关回归分析、基线得分控制进行连续结果的比较(TamuraRN,HuangX.,ClinTrials,4:309-317(2007))。所有检验都按双尾进行，α设为0.05。

对于HDRS-28，按各生物标志和遗传标志分层L-甲基叶酸对安慰剂的从基线至终点的合并平均变化。计算各生物标志的治疗作用和作用大小。计算组内分析、HDRS-28应答率(从基线降低≥50％)、优势比和需治数。以生物标志或遗传标志状态为暴露，对接受L-甲基叶酸(I期中或在II期中作为安慰剂非应答者)或安慰剂(I期中或在II期中作为安慰剂非应答者)的个体分别进行了组内分析。针对包括年龄、性别、种族和BMI的潜在混杂因素以及HDRS-28的基线水平调整组内分析，以解释单个患者未通过生物标志状态随机化的事实。为了减少最终模型中的预测因子数目，用线性回归对连续的HDRS-28进行调整，用倾向得分分层分析对二元结果进行调整。

结果

来自74名患者的数据可用于分析，61名(81.3％)患者完成了研究。来自L-甲基叶酸对安慰剂的初步分析的结果之前已公开(PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012))。总体上，对于组合的L-甲基叶酸和安慰剂组，合并平均(SD)基线HDRS-28得分为26.0(5.0)。对于HDRS-28，辅助性L-甲基叶酸15mg/天的偏离基线的合并平均变化对安慰剂显著更大(-2.74,p＝0.017)。

L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上偏离基线的合并平均变化在具有COMTVal158MetGG、GCH1TC/TT和MTR2756AG/GG基因型及提高的BMI的患者亚组中显著(p≤0.01)更大，MTHFR677TC/TT基因型轻微显著(p＝0.087)(表11和图10)。对于这些标志中的每一个，合并作用大小大于0.50(图11)。治疗减安慰剂的合并应答率在23.1％至66.7％的范围内，且按除MTHFR677TC/TT外的各标志分层的L-甲基叶酸显著(p<0.05)更大。

表11.按单个分子标志分层的L-甲基叶酸的作用的分析

^*HDRS-28，治疗减安慰剂；^#针对基线、种族、年龄、性别和BMI调整；NA＝不可得；通过n＝72(两名患者缺失用于计算BMI的身高值)解释了样本量差异；n＝65(10名患者未同意遗传测试)；n＝59，用于遗传测试的样品用尽。

用多种生物标志和遗传标志的组合在患者亚组中检查了L-甲基叶酸对安慰剂对HDRS-28偏离基线的合并平均变化的影响(表12)。对于除MTHFR677TC/TT+BMI≥30kg/m²外的所有组合，L-甲基叶酸对安慰剂的偏离基线的合并平均变化的显著(p<0.05)差异超过-10。在所有组合中，合并作用大小在从-40.32至-1.36的范围内。对于三种标志的组合，患者数目对许多组合的统计分析而言太少。

表12.按分子标志的组合分层的L-甲基叶酸的作用的分析

^*HDRS-28，治疗减安慰剂；^#针对基线、种族、年龄、性别和BMI调整；NA＝不可得。

除GCH1TC/TT+MTHFR677TC/TT+BMI≥30kg/m²(其仅是趋势(p＝0.056))和COMTVal158MetGG+MTHFR677TC/TT+BMI≥30kg/m²(p＝0.071)外，包括BMI≥30kg/m²的所有组合都证明L-甲基叶酸对安慰剂的显著(p<0.05)的治疗组内合并平均变化(范围：-5.29至-2.85)(表13)。

表13.根据三种标志的组合的存在的L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上偏离基线的合并平均变化

^*针对基线、种族、年龄、性别和BMI调整；NA＝不可得。

用HDRS-7、CGI-S和CPFQ量表检查了L-甲基叶酸对安慰剂的合并平均变化，以确认来自HDRS-28的发现的一致性(表14)。在总群体中在HDRS-7和CGI-S上观察到了L-甲基叶酸对安慰剂的显著(p<0.05)差异。对于这三个量表，除MTHFR677TC/TT基因型(其仅在CGI-S和CPFQ上显著(p<0.05))外，针对每个目的比较(COMTVal158MetGG、GCH1TC/TT和MTR2756AG/GG基因型及BMI≥30kg/m²)观察到了L-甲基叶酸对安慰剂的显著(p<0.05)差异。对于大多数比较，标志的组合证明L-甲基叶酸对安慰剂的合并平均变化的显著(p<0.05)差异。

表14.根据单个标志的存在的L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-7、CGI-S和CPFQ上偏离基线的合并平均变化

^*合并平均变化对安慰剂；通过n＝72(两名患者缺失用于计算BMI的身高值)解释了样本量差异；^#针对基线、种族、年龄、性别和BMI调整；n＝65(10名患者未同意遗传测试)；n＝59，用于遗传测试的样品用尽。

讨论

L-甲基叶酸对安慰剂作为具有对SSRI应答不足的记录的患者的辅助治疗的初步分析证明L-甲基叶酸显著改善应答率(PapakostasGI等,AmJPsychiatry,169:1267-74(2012))。来自之前在SSRI应答不足者中用L-甲基叶酸作为单一治疗或辅助治疗的研究的结果也已显示改善的应答(FarahA.,CNSSpectr.,14(1Suppl2):2-7(2009)；GinsbergLD,OubreA,DaoudY.,InnovClinNeurosci.,8:19-28(2011))。

来自此探索性分析的结果证明，五种生物标志中任一种的存在或缺乏为利用L-甲基叶酸作为标准抗抑郁症治疗的辅助治疗提供预后信息。用单个标志观察到了预后益处，但是，两个或更多个标志的组合令人惊奇地提供显著改善的预测值。这些结果表明，筛查这五个生物标志可以是用于鉴定对有效辅助治疗具有高度未得到满足的需要的患者、用于预测治疗应答或应答的缺乏及用于鉴定可以显示对L-甲基叶酸的有益应答的单个患者的有价值的工具。这些生物标志的存在似乎表明L-甲基叶酸增强的中等独立益处，并在存在某些生物标志组合(例如COMT(Val158Met)GG和GCH1TC/TT对及MTR2756AG/GG+MTHFR677TC/TT对)时预测更稳健、协同的L-甲基叶酸作用。在缺乏这些生物标志的情况下，似乎几乎没有或没有来自L-甲基叶酸增强的益处。

与其他抗抑郁药治疗研究相比，此分析中报道的单个标志或标志的组合的作用大小是实质性的。安慰剂对照的抗抑郁药试验的元分析报道了活性药物治疗的0.31的平均作用大小(TurnerEH,RosenthalR.,BMJ,336:516-7(2008))。非典型抗精神病药(阿立哌唑(aripiprazole)、喹硫平(quetiapine)、利培酮(risperidone)和/或奥氮平(olanzapine)/氟西汀)作为MDD的辅助治疗的安慰剂对照试验的第二元分析也报道了所有研究中的作用大小为0.31，MADRS上合并平均变化差异对安慰剂为2.69分(SpielmansGI等,PLoSMed.,10:e1001403(2013))。在本文提供的分析中，在根据单个标志或这些标志的组合分层时，L-甲基叶酸的作用大小和合并平均变化明显更高。

某些生物标志的存在趋向于与MDD的风险或严重度相关，而其他生物标志是对抗抑郁药治疗的应答的预测因子。大量文献证明，体重增加和肥胖与更高的MDD风险和对标准抗抑郁药治疗的较弱应答这二者相关(OskooilarN,JClinPsychiatry,70:1609-10(2009)；KloiberS,BiolPsychiatry.,62:321-6(2007)；Ma等,2010；FaithMS等,ObesRev.,12:e438-53(2011)；LuppinoFS等,ArchGenPsychiatry,67:220-9(2010)；Simon等,2008；McIntyreRS等,CanJPsychiatry,51:274-80(2006))。已报道了MTHFR677TC/TT多态性的存在与MDD的风险之间的强相关(WuYL等,ProgNeuropsychopharmacolBiolPsychiatry,46:78-85(2013)；Lopez-LeonS等,MolPsychiatry,13:772-85(2008)；PeerboomsOL等,BrainBehavImmun.,25:1530-43(2011)；GilbodyS,LewisS,LightfootT.,AmJEpidemiol.,165:1–13(2007)；LewisSJ等,MolPsychiatry,11:352-60(2006))。此外，COMTVal158Met多态性与对标准抗抑郁药治疗的更坏应答或提高的自杀风险相关(BauneBT等,Neuropsychopharmacology,33:924-32(2008)；Benedetti等,2009；SchosserA等,EurNeuropsychopharmacol.,22:259-66(2012))。关于本文所述分析中包括的其他遗传标志及其与MDD的相关性的公开数据更有限。在日本MDD患者的研究中，未发现GCH1的存在与MDD之间的相关性，但GCH1是对SSRI的应答的预测因子(KishiT等,JAffectDisord.,142:315-22(2012))。在绝经后的女性中，MTR2756GG基因型与提高5倍的MDD风险相关，MTHFR677TC/TT多态性的存在也如此(Slopien等,2008)。关于两个或更多个标志对MDD风险及对治疗的应答的影响的发表文献稀少。PanCC等,IntJGeriatrPsychiatry,24:847-55(2009)用MRI来在老年群体中评价COMT和MTHFR基因与壳核体积和MDD之间的相关性，并发现没有一种基因型单独显示作用，但两种多态性的存在与抑郁和非抑郁患者之间的MRI差异相关。SecherA等,IntClinPsychopharmacol.,24:199-203(2009)报道了接受抗抑郁药治疗的抑郁患者中增加的体重与COMT多态性的存在之间的相关性。在此研究中，在按具体标志组合的存在分层时，L-甲基叶酸对安慰剂在HDRS-28上的平均变化超过10分，还用CGI-S、HDRS-7和CPFQ记录到了大多数标志组合的显著差异。该发现提示可以用来鉴定可能应答辅助性L-甲基叶酸治疗方案的诊断患有MDD的个体的具体生物标志组合(例如(例如COMT(Val158Met)GG和GCH1TC/TT对及MTR2756AG/GG+MTHFR677TC/TT对)。

HDRS在抑郁症的临床试验中广泛用作用于评估药物应答的标准。但是，HDRS已受到批评，因为它是多维的，缺乏检测临床变化的敏感性，且缺乏定义缓解的判别力(BallesterosJ等,JAffectDisord.,102:93-9(2007))。HDRS的潜在局限性之一是，除MDD的核心症状外，它还评估可反映常规抗抑郁药的副作用的症状应答，例如睡眠、失眠症、焦虑和烦躁不安(KennedySH,ClinNeurosci.,10:271-7(2008))。已广泛评价了HDRS的其他子量表来作为比长版本HDRS更敏感的MDD核心症状的评估(SantenG等,JPsychiatrRes.,42:1000-9(2008)；KennedySH,ClinNeurosci.,10:271-7(2008)；McIntyreRS,CMAJ,173:1327-34(2005))。为此，除HDRS-28外，此研究用HDRS-7、CGI-S和CPFQ来验证该发现。在用这些附加量表测量时，在HDRS-28上针对单个标志和标志的组合鉴定的大多数显著差异也显著，这增加了该发现的力度。甚至在按多种标志的存在分层时，结果也证明L-甲基叶酸在急性、短期MDD治疗期间作为辅助治疗的统计上显著、稳健的抗抑郁应答。

本文提供的分析证明按生物标志和遗传标志的存在分层的患者亚组中的稳健应答。无论分析是基于HDRS-28还是CGI-S，或在使用其他评估量表时，L-甲基叶酸的显著治疗作用都是一致的。因此，结果证明了单个标志或标志的组合(如COMT(Val158Met)GG和GCH1TC/TT对及MTR2756AG/GG+MTHFR677TC/TT对)作为预测工具来鉴定应答L-甲基叶酸治疗的个体的效用。

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虽然已为了理解的清晰性的目的以说明和实例的方式较为详细地描述了前述发明，但本领域技术人员将理解，可以在所附权利要求书的范围内实施某些改变和修改。此外，本文提供每篇参考文献以相同的程度以其整体引入作为参考，就如同单独地引入每篇参考文献作为参考一样。

Claims

1.用于治疗人类个体中的至少一种抑郁症症状的方法，其包括，基于所述至少两种生物标志的组合与对含叶酸化合物的阳性症状减轻应答相关的认识，对诊断罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险并进一步确定为携带至少两种以下生物标志的组合的人类个体施用包含有效量的含叶酸化合物的组合物：

xxii.肥胖；

xxiii.SAM与SAH的表达比值小于预先确定的参考比值；

xxiv.4-HNE的表达高于第一预先确定的参考值；和

xxv.hsCRP的表达高于第二预先确定的参考值。

2.权利要求1的方法，其中该至少两种生物标志的组合包括以下：

3.权利要求2的方法，其中该至少两种生物标志的组合进一步包括生物标志(iii)-(xxv)中的至少一种。

4.权利要求1的方法，其中肥胖表征为以下肥胖指征中的至少一种：

a.BMI值大于30kg/m²；

c.男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和

5.权利要求1的方法，其进一步包括测定来自所述个体的生物样品来确定所述至少两种生物标志的存在。

6.权利要求5的方法，其中生物样品包含选自血液样品、尿液样品、口腔样品、唾液样品或脑脊液样品的样品。

7.权利要求5的样品，其中测定包括用至少一组所述SNP中任一个侧翼的引物扩增所述生物样品。

8.权利要求7的方法，其中在多重扩增测定中使用扩增至少两个SNP的至少两组引物。

9.权利要求5的方法，其中测定包括用气相色谱、质谱分析法、高效液相色谱、核磁共振(NMR)波谱学、酶联测定或其任意组合分开和/或检测SAM、SAH、4-HNE、hsCRP或其任意组合在所述生物样品中的存在。

10.权利要求1的方法，其中预先确定的SAM/SAH参考比值是在正常健康个体的生物样品中测量的对照SAM/SAH比值。

11.权利要求10的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值在从约4至约12的范围内。

12.权利要求1的方法，其中预先确定的SAM/SAH参考比值是在血浆样品中测量的约3.0。

13.权利要求1的方法，其中第一预先确定的4-HNE的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的4-HNE的对照值。

14.权利要求13的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的4-HNE的对照值约为0.24μmol/L血清(或约0.04mg/L血清)。

15.权利要求1的方法，其中第一预先确定的4-HNE的参考值是在血浆样品中测量的约3mg/L血浆。

16.权利要求1的方法，其中第二预先确定的hsCRP的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的hsCRP的对照值。

17.权利要求16的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的hsCRP的对照值在从约0.5mg/L血清至约4.5mg/L血清的范围内。

18.权利要求1的方法，其中第二预先确定的hsCRP的参考值是在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆。

19.权利要求1的方法，其进一步包括测定所述个体的身体测量值。

20.权利要求19的方法，其中身体测量值包括体重、身高、腰围、臀围、体脂百分比或其任意组合。

21.权利要求1的方法，其中含叶酸化合物的有效量是约7.5mg/天至约50mg/天。

22.权利要求1的方法，其中含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。

23.权利要求1的方法，其中含叶酸化合物的有效量以每天一个以上分剂量施用。

24.权利要求1的方法，其中施用是口服。

25.权利要求1的方法，其中配制所述组合物来在施用所述组合物后至少约3-6小时的时期内释放至少部分所述含叶酸化合物。

26.权利要求25的方法，其中释放是稳态释放。

27.权利要求1的方法，其进一步包括对所述个体施用抗抑郁药。

28.权利要求27的方法，其中与所述含叶酸化合物组合施用所述抗抑郁药提高了所述抗抑郁药的有效性。

29.权利要求27的方法，其中抗抑郁药包含选择性5-羟色胺再吸收抑制剂。

30.权利要求29的方法，其中选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其任意组合。

31.权利要求1的方法，其进一步包括为所述个体选择包含所述含叶酸化合物的治疗，可选地与所述抗抑郁药组合施用。

32.权利要求1的方法，其中抑郁症是严重抑郁性障碍。

33.权利要求1的方法，其中诊断为罹患抑郁症的个体对至少一种抗抑郁药单一治疗具有抗性。

34.权利要求1的方法，其中个体是成年个体。

35.权利要求1的方法，其中至少一种抑郁症症状选自情绪低落或抑郁、快感缺乏、能量水平低、内疚、工作和兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知降低或其任意组合。

36.改善对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法，其包括，基于所述至少两种生物标志的组合与提高所述抗抑郁药在与所述含叶酸化合物组合施用时的有效性相关的认识，与所述抗抑郁药组合，对诊断罹患抑郁症并进一步确定为携带至少两个以下生物标志的组合的人类个体施用包含有效量的含叶酸化合物的组合物：

xxii.肥胖；

xxiii.SAM与SAH的表达比值小于预先确定的参考比值；

xxiv.4-HNE的表达高于第一预先确定的参考值；和

xxv.hsCRP的表达高于第二预先确定的参考值。

37.权利要求36的方法，其中该至少两种生物标志的组合包含以下：

38.权利要求37的方法，其中该至少两种生物标志的组合进一步包括生物标志(iii)-(xxv)中的至少一种。

39.权利要求36的方法，其中肥胖表征为以下肥胖指征中的至少一种：

a.BMI值大于30kg/m²；

c.男性腰臀比高于0.95，或女性腰臀比高于0.80；和

40.权利要求36的方法，其进一步包括测定从所述个体获得的生物样品来确定所述至少两种生物标志的存在。

41.权利要求40的方法，其中生物样品包含选自血液样品、尿液样品、口腔样品、唾液样品或脑脊液样品的样品。

42.权利要求40的方法，其中包括用至少一组所述SNP中任一个侧翼的引物扩增所述生物样品。

43.权利要求42的方法，其中在多重扩增测定中使用扩增至少两个SNP的至少两组引物。

44.权利要求40的方法，其中测定包括用气相色谱、质谱分析法、高效液相色谱、核磁共振(NMR)波谱学、酶联测定或其任意组合分开和/或检测SAM、SAH、4-HNE、hsCRP或其任意组合在所述生物样品中的存在。

45.权利要求36的方法，其中预先确定的SAM/SAH参考比值是在正常健康个体的生物样品中测量的对照SAM/SAH比值。

46.权利要求45的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的对照SAM/SAH比值在从约4至约12的范围内。

47.权利要求36的方法，其中预先确定的SAM/SAH参考比值是在血浆样品中测量的约3.0。

48.权利要求36的方法，其中第一预先确定的4-HNE的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的4-HNE的对照值。

49.权利要求48的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的4-HNE的对照值约为0.24μmol/L血清(或约0.04mg/L血清)。

50.权利要求36的方法，其中第一预先确定的4-HNE的参考值是在血浆样品中测量的约3mg/L血浆。

51.权利要求36的方法，其中第二预先确定的hsCRP的参考值是在正常健康个体的生物样品中测量的hsCRP的对照值。

52.权利要求51的方法，其中在正常健康个体的血清样品中测量的hsCRP的对照值在从约0.5mg/L血清至约4.5mg/L血清的范围内。

53.权利要求36的方法，其中第二预先确定的hsCRP的参考值是在血浆样品中测量的约2.3mg/L血浆。

54.权利要求36的方法，其进一步包括测定个体的身体测量值。

55.权利要求54的方法，其中身体测量值包括体重、身高、腰围、臀围、体脂百分比或其任意组合。

56.权利要求36的方法，其中含叶酸化合物的有效量是约7.5mg/天至约50mg/天。

57.权利要求36的方法，其中含叶酸化合物的有效量作为单个日剂量施用。

58.权利要求36的方法，其中含叶酸化合物的有效量以每天一个以上分剂量施用。

59.权利要求36的方法，其中施用是口服。

60.权利要求36的方法，其中配制所述组合物来在施用所述组合物后至少约3-6小时的时期内释放至少部分所述含叶酸化合物。

61.权利要求60的方法，其中释放是稳态释放。

62.权利要求36的方法，其中抗抑郁药包含选择性5-羟色胺再吸收抑制剂。

63.权利要求62的方法，其中选择性5-羟色胺再吸收抑制剂选自氟西汀、西酞普兰、赛乐特、依地普仑、舍曲林及其任意组合。

64.权利要求36的方法，其进一步包括为所述个体选择包含与所述抗抑郁药组合施用的含叶酸化合物的治疗。

65.权利要求36的方法，其中抑郁症是严重抑郁性障碍。

66.权利要求36的方法，其中诊断为罹患抑郁症的个体对至少一种抗抑郁药单一治疗具有抗性。

67.权利要求36的方法，其中个体是成年个体。

68.权利要求36的方法，其中改善对人类个体施用的抗抑郁药的有效性的方法导致选自以下的至少一种抑郁症症状的改善：情绪低落或抑郁、快感缺乏、能量水平低、内疚、工作和兴趣减少、精神运动阻滞、激动、精神性焦虑、身体性焦虑、全身症状、认知降低或其任意组合。

69.治疗个体中的至少一种抑郁症症状的方法，其包括，基于一个或多个SNP等位基因的存在与对所述含叶酸化合物的阳性症状减轻应答相关的认识，对个体施用有效量的含叶酸化合物，所述个体诊断为罹患抑郁症或具有罹患抑郁症风险，且进一步确定为携带SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，所述SNP包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分。

70.用于为诊断罹患抑郁症的个体选择治疗方案的方法，其包括：

确定以下SNP之一在来自所述个体的试样中的存在：

i.SEQIDNO:2的2756位或SEQIDNO:9的27位上的SNP(标识为rs1805087)，其包含至少一个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:2和SEQIDNO:9分别独立地是甲硫氨酸合成酶(MTR)的基因组核酸序列的部分；

ii.SEQIDNO:23的27位上的SNP(标识为rs4633)，其包含两个胞嘧啶“C”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:23是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；或

iii.SEQIDNO:24的27位上的SNP(标识为rs4680)，其包含两个鸟嘌呤“G”等位基因或其互补物，其中SEQIDNO:24是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的基因组核酸序列的部分；和

在确定所述个体携带MTR、COMT(rs4633)和COMT(rs4680)SNP生物标志之一时，可选地对所述个体施用含叶酸化合物(可选地与抗抑郁药组合)。