CN105510330A - 一种区分黔琼种质艾纳香的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种区分黔琼种质艾纳香的方法。本发明方法通过测量待测艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，将测量结果与标准数值比对，即可有效区分黔琼种质艾纳香。所述方法操作简单，能够快速有效地区分黔琼种质艾纳香，为不同种质来源的艾纳香栽培、定向选育或药材生产提供科学依据和参考。

Description

一种区分黔琼种质艾纳香的方法
技术领域
本发明涉及不同地区植物种质的区分方法，尤其涉及一种区分黔琼种质艾纳香的方法。
背景技术
艾纳香（Blumeabalsamifera），又名冰片艾、大风艾，在我国黎族地区被称为“娜龙”，在苗族地区则被称之为“档窝凯”，是菊科艾纳香暑多年生木质草本，散发出冰片香气，是中药艾片和中成药原料艾纳香油的唯一来源植物，主产于我国贵州、海南、云南和东南亚等热带、亚热带地区。
由于不同种质的艾纳香叶片的形貌和结构基本相同，难以区分不同地区种质的艾纳香，这给艾纳香在不同产区的栽培、定向选育及药材生产等造成了一定的困难。现有技术中，有利用SSR分子标记技术鉴别百合花卉品种，该技术经DNA提取、引物设计、扩增、电泳检测、统计分析等步骤；也有研究利用18SrDNA序列PCR扩增及测序技术区分中药材半夏品种；还有基于稳定性同位素指纹图谱鉴别道地中药材的方法，该方法通过质谱鉴定，可以鉴别中药材真假、产地等。现有技术中大多采用的生物分子学技术，步骤繁琐、操作复杂，难以快速、简便地鉴别出不同地区的植物种质，并且对于区分不同地区种质艾纳香的方法还未见报道。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种简单、快速区分黔琼种质艾纳香的方法。所述方法通过显微测量海南种质或贵州种质艾纳香叶的稍部叶片厚度、中部叶片厚度、基部叶片厚度、上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，比对测量结果与本方法中的数值范围即可有效区分黔琼种质艾纳香。
本发明的另一目的在于提供上述方法的应用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。
一种区分黔琼种质艾纳香的方法，测量待测艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，将测量结果与如下标准比对，从而区分黔琼种质艾纳香：
叶稍部厚度：海南种质艾纳香为135.48±2.56μm，贵州种质艾纳香为102.60±1.94μm；
叶中部厚度：海南种质艾纳香为110.36±1.85μm，贵州种质艾纳香为79.02±1.72μm；
叶基部厚度：海南种质艾纳香为140.72±2.42μm，贵州种质艾纳香为94.05±3.51μm；
叶上表皮厚度：海南种质艾纳香为18.02±0.75μm，贵州种质艾纳香为13.93±0.62μm；
栅栏组织厚度：海南种质艾纳香为35.33±0.74μm，贵州种质艾纳香为21.82±0.93μm；
海绵组织厚度：海南种质艾纳香为44.69±1.55μm，贵州种质艾纳香为35.43±1.25μm；
栅海比：海南种质艾纳香为0.81±0.035μm，贵州种质艾纳香为0.63±0.036μm。
本发明方法通过测量海南种质或贵州种质艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，比对测量结果与本方法中的数值范围即可有效区分黔琼种质艾纳香。
优选地，本发明选择成熟叶片测量待测艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比。
优选地，本发明将成熟叶片进行石蜡切片后显微测量以上指标，包括如下步骤：
S1.将成熟叶片分割成小片，放入固定液中固定；
S2.系列酒精脱水、渗透、包埋，切片，切片厚度6-15μm，染色，封片；
S3.显微观察、测量。
优选地，S1所述小片为0.2cm×0.2cm至1.5cm×1.5cm的小片。更优选地，S1所述小片为1cm×1cm的小片。
优选地，S1所述固定液为FFA固定液。
优选地，S1所述固定时间为12-36h。更优选地，S1所述固定时间为24h。
优选地，S2所述切片厚度为8μm。
优选地，S2所述染色的试剂为番红-固绿或固绿。
优选地，S2所述封片为中性树胶封片。
优选地，包括如下步骤：
S1.将生长发育正常的成熟叶片，分割为1cm×1cm的小片，迅速放入FAA固定液中，固定24h；
S2.系列酒精脱水、渗透、包埋，切片，切片厚度8μm，番红-固绿染色，中性树胶封片，
S3.显微成像系统观察、拍照、测量。
本发明还提供上述方法在艾纳香栽培、定向选育或药材生产中的一种或多种中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明方法操作简单，能够快速有效区分黔琼种质的艾纳香。所述方法通过显微测量海南种质或贵州种质艾纳香叶的稍部叶片厚度、中部叶片厚度、基部叶片厚度、上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，比对测量结果与本方法中的数值范围即可有效区分黔琼种质艾纳香，为不同种质来源的艾纳香栽培、定向选育或药材生产提供科学依据和参考。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
实施例中所使用的植物材料分别来自贵州省罗甸县和海南省儋州市，经中国农业科学院热带作物品种资源研究所南药研究室鉴定，为艾纳香属植物艾纳香。经引种，保存在海南省儋州市的农业部儋州热带药用植物种质资源圃，露天栽培，常规水肥管理。
实施例1
分别随机取若干海南种质和贵州种质生长发育正常的成熟叶片，分割为1cm×1cm的小片，迅速放入FAA固定液中，固定24h，系列酒精脱水、渗透、包埋，德国LeicaRM2245切片机切片，切片厚度8μm，番红-固绿染色，中性树胶封片，德国莱卡(Leica)DMI4000B数码光学显微成像系统观察、拍照、测量艾纳香叶厚度。
分别从海南种质和贵州种质组中随机选取15个样本，应用SPSS19.0软件进行统计学分析计算叶厚度的平均值和标准误差，结果用“平均值±标准误差”形式表示，用t检验进行两组数据差异显著性分析（P＜0.05），结果见表1~7。
根据显微测量和统计学分析结果可知，海南种质的叶片的在近叶稍部、叶中部和近叶基部的厚度分别为135.48±2.56μm、110.36±1.85μm和140.72±2.42μm，均显著大于贵州种质叶片相应位置的叶片厚度。因此，艾纳香叶的近叶稍部、叶中部和近叶基部的厚度均可作为区分黔琼艾纳香种质的标准。
表1黔琼艾纳香叶片厚度比较
*数值表示为均值±标准误差，每列数值后不同的字母表示t检验结果为差异显著（P＜0.05）。
表2黔琼艾纳香叶片稍部厚度t检验组统计量结果
表3黔琼艾纳香叶片稍部厚度t检验独立样本检验结果
表4黔琼艾纳香叶片中部厚度t检验组统计量结果
表5黔琼艾纳香叶片中部厚度t检验独立样本检验结果
表6黔琼艾纳香叶片基部厚度t检验组统计量结果
表7黔琼艾纳香叶片基部厚度t检验独立样本检验结果
实施例2
分别随机取若干海南种质和贵州种质生长发育正常的成熟叶片，分割为1cm×1cm的小片，迅速放入FAA固定液中，固定24h，系列酒精脱水、渗透、包埋，德国LeicaRM2245切片机切片，切片厚度8μm，番红-固绿染色，中性树胶封片，德国莱卡(Leica)DMI4000B数码光学显微成像系统观察、拍照、测量艾纳香叶上表皮厚度。
分别从海南种质和贵州种质组中随机选取15个样本，应用SPSS19.0软件进行统计学分析计算上表皮厚度的平均值和标准误差，结果用“平均值±标准误差”形式表示，用t检验进行两组数据差异显著性分析(P＜0.05)，结果见表8～10。
根据显微测量和统计学分析结果可知，海南种质的艾纳香叶片上表皮厚度为18.02±0.75μm，显著大于贵州种质艾纳香叶片上表皮厚度（P＜0.05）。因此，艾纳香叶的上表皮厚度可作为区分黔琼艾纳香种质的标准。
表8黔琼叶上表皮厚度比较（μm）
*数值表示为均值±标准误差，每列数值后不同的字母表示t检验结果为差异显著（P＜0.05）。
表9黔琼艾纳香叶片上表皮厚度t检验组统计量结果
表10黔琼艾纳香叶片上表皮厚度t检验独立样本检验结果
实施例3
分别随机取若干海南种质和贵州种质生长发育正常的成熟叶片，分割为1cm×1cm的小片，迅速放入FAA固定液中，固定24h，系列酒精脱水、渗透、包埋，德国LeicaRM2245切片机切片，切片厚度8μm，番红-固绿染色，中性树胶封片，德国莱卡(Leica)DMI4000B数码光学显微成像系统观察、拍照、测量艾纳香叶栅栏组织、海绵组织厚度。
分别从海南种质和贵州种质组中随机选取15个样本，应用SPSS19.0软件进行统计学分析计算栅栏组织、海绵组织厚度的平均值和标准误差，结果用“平均值±标准误差”形式表示，用t检验进行两组数据差异显著性分析(P＜0.05)，结果见表11～13。
根据显微测量和统计学分析结果可知，海南种质来源的艾纳香叶片栅栏组织、海绵组织厚度分别为35.33±0.74μm和44.69±1.55μm，均显著大于贵州种质艾纳香叶片插烂组织和海绵组织厚度；海南种质艾纳香叶栅-海比为0.81±0.035，也显著大于贵州种质艾纳香叶栅海比。因此，艾纳香叶的栅栏组织、海绵组织厚度及栅-海比均可作为区分黔琼艾纳香种质的标准。
表11黔琼叶栅栏组织、海绵组织厚度及栅-海比的比较
表12黔琼艾纳香叶片栅海比t检验组统计量结果
表13黔琼艾纳香叶片栅海比t检验独立样本检验结果

Claims (9)

1.一种区分黔琼种质艾纳香的方法，其特征在于，测量待测艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比中的一种或多种，将测量结果与如下标准比对，从而区分黔琼种质艾纳香：
叶稍部厚度：海南种质艾纳香为135.48±2.56μm，贵州种质艾纳香为102.60±1.94μm；
叶中部厚度：海南种质艾纳香为110.36±1.85μm，贵州种质艾纳香为79.02±1.72μm；
叶基部厚度：海南种质艾纳香为140.72±2.42μm，贵州种质艾纳香为94.05±3.51μm；
叶上表皮厚度：海南种质艾纳香为18.02±0.75μm，贵州种质艾纳香为13.93±0.62μm；
栅栏组织厚度：海南种质艾纳香为35.33±0.74μm，贵州种质艾纳香为21.82±0.93μm；
海绵组织厚度：海南种质艾纳香为44.69±1.55μm，贵州种质艾纳香为35.43±1.25μm；
栅海比：海南种质艾纳香为0.81±0.035μm，贵州种质艾纳香为0.63±0.036μm。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，选择成熟叶片测量待测艾纳香的叶稍部厚度、叶中部厚度、叶基部厚度、叶上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度或栅海比。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将成熟叶片石蜡切片后显微测量，包括如下步骤：
S1.将成熟叶片分割成小片，放入固定液中固定；
S2.系列酒精脱水、渗透、包埋，切片，切片厚度6-15μm，染色，封片；
S3.显微观察、测量。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1所述小片为0.2cm×0.2cm至1.5cm×1.5cm的小片。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1所述固定液为FFA固定液。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1所述固定时间为12-36h。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S2所述染色的试剂为番红-固绿或固绿。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S2所述封片为中性树胶封片。
9.权利要求1~8任一项所述方法在艾纳香栽培、定向选育或药材生产中的一种或多种中的应用。
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