CN105506102B - 来自海岛棉与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及分子育种技术领域，具体涉及来自海岛棉海1与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记及其应用。所述分子标记为NAU5421200和NAU2325240。其中，NAU5421200与棉花纤维强度QTL位点qFS‑C14‑1和纤维长度QTL位点qFL‑C14‑1同时紧密连锁，NAU2325240与棉花纤维马克隆值QTL位点qFM‑C17‑1紧密连锁。qFS‑C14‑1和qFL‑C14‑1同时位于染色体C14上的同一位置，qFM‑C17‑1位于染色体C17上。本发明有助于克服现有育种技术对纤维品质鉴定存在的不足，能提高纤维强度、长度、马克隆值的选择效率，加快优质新品种的培育进程。

Description

来自海岛棉与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记及其 应用
技术领域
本发明涉及棉花分子育种技术领域，具体涉及到来自海岛棉海1与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记及其应用。
背景技术
棉花是世界上重要的经济作物之一，也是纺织工业主要的原料，棉花的产量和品质是棉花生产的产值和效益的直接决定因素。陆地棉产量高，适应性广，但品质差，遗传基础狭窄；海岛棉纤维具有长、强、细的特点，并且高抗黄萎病，但产量低。因此将海岛棉与陆地棉的优良基因进行聚合，创造优异新材料，对改良我国陆地棉纤维品质至关重要。由于采用传统的育种方法，每一世代的品质选择都需等到棉花吐絮后收取棉花进行纤维品质检测后才能决定，而且纤维品质性状受环境影响较大，使得表型选择准确性差、周期长、效率低，育种进展缓慢。又由于棉花的产量和品质均为数量性状，受多种因素影响,并且性状之间存在负相关(Smith and Coyle,1997；Liu et al，2000；Clement et al.,2012)，因此，棉花纤维品质和产量的同步改良受到严重阻碍，使常规育种研究进展缓慢(Percy et al.,2006)。随着分子标记技术的不断发展和完善，国内外研究者广泛开展了棉花遗传图谱的构建与纤维品质和产量QTL的筛选与定位的研究工作，为培育优异纤维品质和高产的棉花品种奠定了基础。
渐渗系(Introgression Line，IL，又叫染色体片段代换系，或导入系)，为永久性群体,群体之间遗传背景相同，仅是一个或几个外源染色体片段的区别，可有效减少遗传背景的干扰，是研究QTL定位的理想材料。在棉花中利用渐渗系进行QTL研究的较少。目前报道的棉花渐渗系群体多是以陆地棉遗传标准系TM-1为遗传背景,虽有益于QTL定位，但难以有效应用于育种。
本发明人为了在进行基础研究的同时获得育种直接应用的新品系，利用生产上大面积推广种植的陆地棉品种中棉所36与海岛棉海1构建了陆地棉渐渗系群体，并绘制了含有2292个标记的分子遗传连锁图谱(Shi et al.,2015)，在此基础上对棉花纤维品质和产量相关QTL进行了定位。梁燕等(Liang et al.,2010)利用渐渗系群体，在BC5F2群体中检测到20个与产量相关的QTLs。张金凤等(Zhang et al.,2012)和何蕊等(He et al.,2014)通过对BC5F3、BC5F3:4、BC5F3:5三个世代多个环境下产量和纤维品质的多点评价，筛选出稳定的具优良性状的渐渗系材料，定位出部分纤维品质和产量性状的QTL。
本发明在本发明人构建的大量陆海(陆地棉中棉所36和海岛棉海1)渐渗系群体基础上，根据多年多点调查结果，选取纤维品质优异的中棉所36背景的4个渐渗系为亲本材料，构建了双交F1及F2分离大群体，对其海岛棉染色体渐渗片段进行评价，并在F2：3中进行验证；利用SSR标记对3个世代的渐渗系群体的纤维品质和产量性状进行了QTL定位，通过这些纤维品质和产量相关QTL位点的识别及在多环境、多世代中的验证，获得了较稳定的QTL，为棉花纤维品质分子标记辅助育种奠定了基础。
本发明利用双交F1、F2分离大群体及F2：3群体筛选出稳定的纤维强度、长度、马克隆值QTLs及其紧密连锁的分子标记，并利用与这些QTL紧密连锁的分子标记筛选出纤维强度、长度、马克隆值得到了改良的株系。
发明内容
为了克服传统育种中表型选择准确性差、周期长、效率低等许多缺点，解决纤维品质育种进展缓慢的问题。本发明提供一种来自纤维高优质材料海岛棉海1与棉花纤维强度、长度、马克隆QTL/主效基因连锁的分子标记，即：通过筛选来自纤维高优质材料海岛棉海1中与纤维强度、长度、马克隆QTL/主效基因连锁的分子标记，进行DNA水平上的早期标记辅助选择，提高育种效率。本发明以陆地棉品种中棉所36为遗传背景的4个优质陆海渐渗系作为亲本，构建双交F1、F2双交分离大群体及F2：3家系群体，利用这三个世代的群体挖掘海岛棉纤维品质性状的QTL，为棉花纤维品质辅助选择培育新品种奠定了基础。
本发明提供的技术方案是：提供来自海岛棉海1与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记，所述分子标记为NAU5421200和NAU2325240，其中，NAU5421200与棉花纤维强度QTL位点qFS-C14-1和纤维长度QTL位点qFL-C14-1同时紧密连锁，NAU2325240与棉花纤维马克隆值QTL位点qFM-C17-1紧密连锁，qFS-C14-1和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上，其中，分子标记NAU5421200的特异性引物NAU5421其正向序列如SEQID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增长度为200bp；分子标记NAU2325240的特异性引物NAU2325其正向序列如SEQ ID NO.3所示，反向序列如SEQ ID NO.4所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增为240bp。
本发明还提供所述来自海岛棉海1与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记的应用。
本发明还提供一种陆地棉纤维强度、长度、马克隆值辅助育种方法，该方法包括包括以下步骤：
(1)提取苗期单株DNA；
(2)使用分子标记NAU5421200和NAU2325240对上述(1)群体单株的基因型进行分子标记检测，并以陆地棉中棉所36和海岛棉海1基因型作为对照；
(3)对检测结果进行分析；
(4)选择带有海岛棉海1特征条带的植株，获得纤维强度、长度、马克隆值可能得到不同程度的改良的单株；
其中，分子标记NAU5421200的特异性引物NAU5421其正向序列如SEQ ID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增长度为200bp；分子标记NAU2325240的特异性引物NAU2325其正向序列如SEQ ID NO.3所示，反向序列如SEQ ID NO.4所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增为240bp。
根据本发明的与陆地棉纤维强度、长度、马克隆值辅助育种方法，使用SSR标记NAU5421200和NAU2325240在与海岛棉海1等有关的育种群体中对纤维强度、长度、马克隆值性状进行分子标记选择，可提高陆地棉的纤维强度、纤维长度、降低纤维马克隆值。该方法所用的分子标记为NAU5421200和NAU2325240，其中，NAU5421200与棉花纤维强度性状和纤维长度性状的2个QTLs：qFS-C14-1和qFL-C14-1(FS是纤维强度的英文单词fiber Strength的缩写，FL是纤维长度的英文单词fiber Length的缩写；QTL的命名：q+性状名称英文缩写+染色体序号+同一染色体上控制该性状QTL的顺序编号，如：qFS-C14-1表示在第14条染色体上控制纤维强度的第1个QTL。)紧密连锁，NAU2325240与棉花纤维马克隆值QTL位点qFM-C17-1(FM是纤维强度的英文单词fiber micronaire的缩写)紧密连锁。这3个QTLs中：qFS-C14-1和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上，增效基因都来源于海岛棉海1，qFS-C14-1对棉花纤维强度的贡献率分别为5.06-6.06％，加性效应分别为0.49-1.03cN/tex；qFL-C14-1对棉花纤维长度的贡献率分别为3.68-6.11％，加性效应分别为0.35-0.57cm；qFM-C17-1对棉花纤维马克隆值的贡献率分别为6.78-7.67％，加性效应分别为负值0.12-0.14。
本发明不仅有助于筛选纤维强度高、纤维长、纤维细的材料，为今后海岛棉海1杂交、回交后代及其衍生品系的纤维强度、长度、马克隆值性状育种利用提供了极大的便利，同时也为QTL的精细定位及基因克隆奠定了基础。
使用本发明可以在苗期预测纤维强度、长度、马克隆值的高低并进行淘汰，进而可以快速筛选纤维强度高、纤维长、纤维细的株系用于棉花纤维品质育种，辅助育种选择目标明确，节约成本。通过与纤维强度高、纤维长度长、纤维细度细的QTLs紧密连锁的分子标记在与海岛棉海1等有关的育种群体中的分子标记选择，快速地改良现有陆地棉品种的纤维品质，以克服现有技术存在的上述不足。
通过这些分子标记选择可获得纤维强度、长度、马克隆值得到改良的陆地棉品种，加速棉花纤维品质的育种进程。
本发明所述与棉花纤维强度、长度、马克隆值QTL/主效基因位点qFS-C14-1和qFS-C20-1连锁的分子标记是通过以下方法按照下列步骤获得的：
(1)采用早熟陆地棉中棉所36为受体亲本,海岛棉海1为供体亲本，构建了中棉所36遗传背景的陆海渐渗系材料，并进行了多环境评价。筛选出多环境表现稳定、纤维品质突出的四个渐渗系MBI9804、MBI9855、MBI9752、MBI9134作为亲本，通过单交、双交配制了[(MBI9804×MBI9855)×(MBI9752×MBI9134)]双交F1群体材料。
(2)2012年将双交F1群体材料种植于中国农业科学院棉花研究所试验农场(河南安阳)，种植亲本材料各两行，群体所有单株自交，获得868个双交F1单株群体，收获单株纤维及种子；随机抽取F1单株混合于2013年在安阳种植，获得F2分离群体839个单株；从双交F2中随机选出237个于2014年在新疆石河子种植成株行。进行田间农艺性状的调查和纤维品质测定，并用CTAB法(Paterson et al.,1993)提取双交F1群体及双交F2群体单株及其亲本DNA。
(3)从以中棉所36×海1BC1F1群体构建的高密度分子遗传连锁图谱(Shi et al.,Journal of Integrative Plant Biology,2015,57(5):450-467)上，每隔大约10cM选择一个SSR标记，挑选出459个标记位点,并用其对上述(2)渐渗系材料及其亲本DNA进行基因型检测。
(4)利用三个世代群体(双交F1、双交F2群体及F2:3家系群体)在三年三个环境(2012年安阳、2013年安阳、2014年石河子)的纤维强度、长度、马克隆值性状的表型数据和2个群体的基因型数据，进行纤维强度、长度、马克隆值性状的多环境QTL定位分析，获得多世代、多环境表现稳定的纤维强度、长度、马克隆值性状的QTLs，其中有3个QTL是新发现的。这3个新发现的QTLs：qFS-C14-1和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上，增效基因都来源于海岛棉海1，qFS-C14-1对棉花纤维强度的贡献率分别为5.06-6.06％，加性效应分别为0.49-1.03cN/tex；qFL-C14-1对棉花纤维长度的贡献率分别为3.68-6.11％，加性效应分别为0.35-0.57cm；qFM-C17-1对棉花纤维马克隆值的贡献率分别为6.78-7.67％，加性效应分别为负值0.12-0.14。
各分子标记的特异性引物序列和扩增的目的片段长度如下：
①NAU5421200正向引物序列为CAATTAAGTTGGGTCTTTTCC，
反向引物序列为CGGAAGGCAAAATGATAAAT，扩增长度为200bp的海1的DNA片段；
②NAU2325240
正向引物序列为GGCCAAAGAGATGATGAAGA，
反向引物序列为CATTACAAGGCGGAGTTTCT，扩增长度为240bp的海1的DNA片段。
本发明的有益效果如下：
本发明提供了一种改良陆地棉纤维强度、长度、马克隆值性状的分子标记选择方法，在与海岛棉海1有关的育种群体中进行分子标记选择，使用SSR标记NAU5421200可分别提高陆地棉棉纤维强度0.49-1.03cN/tex和纤维长度0.35-0.57cm；使用与qFL-C17-1紧密连锁的SSR标记NAU2325240可降低陆地棉棉纤维马克隆值0.12-0.14。
使用这些分子标记可以在棉花苗期进行选择，提高纤维强度、长度、马克隆值性状的选择效率。本发明不但有助于解决我国棉花纤维强度、长度、马克隆值育种进展缓慢的问题，而且有助于克服传统育种技术对纤维品质鉴定存在的成本高、时间长、稳定性低、准确性差、效率低等不足，快速地改良现有陆地棉品种的纤维强度、长度、马克隆值，大大加快我国高优质纤维新品种的培育进程。
附图说明
图1为本发明与纤维强度、长度、马克隆值性状有关的3个QTLs在BC1F1分子标记连锁图谱的位置。
其中，qFS-C14-1和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上；
FS是纤维强度的英文单词fiber strength的缩写；
FL是纤维长度的英文单词fiber length的缩写；
FM是纤维马克隆值的英文单词fiber micronaire的缩写；
QTL的命名：q+性状名称英文缩写+染色体序号+同一染色体上控制该性状QTL的顺序编号，如：qFS-C14-1表示在第14条染色体上控制纤维强度的第1个QTL。
具体实施方式
下面通过具体实施例方式的详细描述来进一步阐明本发明，但并不是对本发明的限制，仅仅作示例说明。
实施例1筛选分子标记
(1)试验材料及表型数据的获得
海1(Hai1)为供体亲本，是带有显性无腺体基因的高抗黄萎病的海岛棉品系，其纤维品质优良(Jing and Zhan，1990)；中棉所36(CCRI36)为轮回亲本，是丰产早熟的陆地棉推广品种，由中国农业科学院棉花研究所培育(国审棉990007)。中棉所36和海1进行杂交，经过高代回交、自交构建渐渗系BC5F3：5株系，根据多年多点的产量及纤维品质性状的评价，筛选出多环境表现稳定、纤维品质突出的四个材料MBI9804、MBI9855、MBI9752、MBI9134作为亲本，分别简称为P1、P2、P3和P4，通过单交、双交配制了[(MBI9804×MBI9855)×(MBI9752×MBI9134)]双交F1群体材料。2012年将双交F1群体材料种植于中国农业科学院棉花研究所试验农场(河南安阳)，种植亲本材料各两行，群体所有单株自交，获得868个双交F1单株群体，收获单株纤维及种子；随机抽取F1单株混合于2013年在安阳种植，获得F2分离群体839个单株；从双交F2中随机选出237个于2014年在新疆石河子种植成株行。双交F1、双交F2和F2：3作为本实验材料，在安阳种植行长5m，行距0.8m，株距0.25m；新疆石河子种植行长3m，双行区，宽窄行，株距0.01m。当地常规大田管理。
2012年和2013年9月中旬以单株为单位进行表型性状调查，单株收取自然吐絮棉铃进行室内考种，称籽棉重和皮棉重，考查铃重、衣分等产量性状，2014年9月以株行为单位，收取30铃。收获的棉花双交F1、双交F2单株和F2:3株行的纤维样品由农业部棉花品质检验监督检测中心用HVI1000测定纤维品质，包括上半部分平均长度(简称长度)、纤维整齐度指数(％)、马克隆值、纤维伸长率和断裂比强度(简称强度)，采用HVICC国际校准棉样。
获得了三个世代在三年三个环境的纤维品质性状的数据，纤维强度、长度、马克隆值的数据见表1。
表1亲本纤维强度、长度、马克隆值的表现
表2渐渗系群体纤维强度、长度、马克隆值性状描述性统计
备注：AY：安阳；SHZ：石河子
(2)分别在2012年和2013年7月在田间摘取亲本及双交F1和F2单株的幼嫩叶片，用CTAB法(Paterson et al.,1993)提取DNA。
(3)多态性引物的筛选
以中棉所36×海1BC1F1为作图群体，构建了含有2292个SSR标记位点的分子连锁图谱，覆盖棉花的26条染色体，总图距5115.16cM，标记间平均距离2.23cM，覆盖整个棉花基因组，是目前覆盖遗传距离最广的一张SSR分子遗传连锁图谱(Shi et al.,Journal ofIntegrative Plant Biology,2015,57(5):450-467)，从上述分子连锁图上每大约10cM选择一个标记，共选择530个标记位点(表3)，对(2)亲本及双交F1和F2单株及海1和中棉所36的DNA进行基因型分子检测，海1和中棉所36的DNA基因型作为对照。
表3从连锁图谱上筛选的分子标记
引物由上海生工和北京三博公司合成。
SSR扩增反应体系为10μ1，其中10×Buffer 1.0μ1，10mM dNTPs 0.50μ1，正向引物(10μM)0.50μ1，反向引物(10μM)0.50μ1，Taq DNA聚合酶(5U/μ1)0.10μ1,模板DNA(30ng/μ1)1.0μ1，超纯水6.40μ1。SSR扩增反应程序：94℃预变性45s；94℃变性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，29个循环。94℃变性60s，57℃退火45s，72℃延伸2min。扩增反应在BIOMETRA公司TGRADIENT及BIO-RAD公司PTC-200上进行，扩增产物在8％的聚丙烯凝胶中进行电泳，按照张军(2000)的方法进行凝胶银染，记录结果。
(4)纤维强度、长度、马克隆值的QTL定位
利用QTL IciMapping V4.0软件(http://www.isbreeding.net/software/)，检测三个群体在三个环境(2012年安阳、2013年安阳、2014石河子)纤维强度、长度、马克隆值QTL，检测到多世代多环境表现稳定的QTLs，其中有3个QTLs是新发现的，这3个QTLs为qFS-C14-1、qFL-C14-1和qFM-C17-1。qFS-C14-1和qFL-C14-1都能在双交F1(2012年安阳)、双交F2(2013年安阳)两个群体、两个环境中被检测到；qFM-C17-1能在双交F2(2013年安阳)、F2:3家系(2014年石河子)两个群体、两个环境中被检测到中被检测到(具体结果见表4)。
表4两个世代或两个环境都能检测到的3个纤维强度、长度、马克隆值的QTLs
AY:安阳；SHZ：新疆石河子
这3个QTLs为1个纤维强度的QTL、1个纤维长度的QTL和1个纤维马克隆值的QTL：qFS-C14-1和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上(图1)，增效基因都来源于海岛棉海1。qFS-C14-1对棉花纤维强度的贡献率为5.06-6.06％，加性效应为0.49-1.03cN/tex；qFL-C14-1对棉花纤维长度的贡献率为3.68-6.11％，加性效应为0.35-0.57cm；qFM-C17-1对棉花纤维马克隆值的贡献率为6.78-7.67％，加性效应为负值0.12-0.14。
与棉花纤维强度QTL位点qFS-C14-1和纤维长度QTL位点qFL-C14-1同时紧密连锁的SSR标记为NAU5421200，可提高陆地棉纤维强度0.49-1.03cN/tex和纤维长度0.35-0.57cm；与棉花纤维马克隆值QTL位点qFM-C17-1紧密连锁的SSR标记为NAU2325240，可降低陆地棉纤维马克隆值0.12-0.14。各分子标记的特异性引物序列和扩增的目的片段长度如下：
①NAU5421200正向引物序列为CAATTAAGTTGGGTCTTTTCC(SEQ ID NO.1)，
反向引物序列为CGGAAGGCAAAATGATAAAT(SEQ ID NO.2)，扩增长度为200bp的海1的DNA片段；
②NAU2325240
正向引物序列为GGCCAAAGAGATGATGAAGA(SEQ ID NO.3)，
反向引物序列为CATTACAAGGCGGAGTTTCT(SEQ ID NO.4)，扩增长度为240bp的海1的DNA片段。
实施例2陆地棉纤维强度、长度、马克隆值性状改良的分子标记选择方法
使用实施例1获得的分子标记NAU5421200和NAU2325240在与海岛棉海1有关的育种群体中进行分子标记选择，包括以下步骤：
(1)DNA提取：以海岛棉海1为供体亲本，陆地棉品种或品系(如鲁棉研28和中棉所60)为受体亲本，进行杂交、回交获得获得的有关群体或材料如：分离群体其渐渗系及其衍生品系、其渐渗系与陆地棉品种杂交、回交的后代群体等，在苗期采用CTAB法(Paterson etal.,1993)提取分离群体单株DNA；
(2)使用分子标记NAU5421200和NAU2325240对上述(1)群体单株的基因型进行分子标记检测；
(3)对检测结果进行分析；
(4)选择带有海岛棉海1特征条带的植株，这些中选单株的纤维强度、长度、马克隆值可能得到不同程度的改良(表5、表6)
表5分子标记选择的陆地棉中棉所45与海1回交4代自交5代的株系纤维强度、长度的表现
“Y”表示能检测到标记的特征带
表6分子标记选择的陆地棉中棉所45与海1回交4代自交5代的株系纤维马克隆值的表现
材料 NAU2325<sub>240</sub> 纤维马克隆值
ZAY20 Y 4.1
ZAY105 Y 3.8
ZAY137 Y 4.0
ZAY152 Y 3.8
ZAY160 Y 3.3
ZAY211 Y 4.1
CK(中棉所45) 4.28
通过本发明可获得纤维强度、长度、马克隆值得到改良的陆地棉品种(系)，可加速棉花纤维品质的育种进程。
<110> 中国农业科学院棉花研究所
<120>来自海岛棉与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记及其应用
<160> 4
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：人工合成的序列
<400> 1
CAATTAAGTTGGGTCTTTTCC 21
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：人工合成的序列
<400> 2
CGGAAGGCAAAATGATAAAT 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：人工合成的序列
<400> 3
GGCCAAAGAGATGATGAAGA 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：人工合成的序列
<400> 4
CATTACAAGGCGGAGTTTCT 20

Claims (3)

1.来自海岛棉海1与纤维强度、长度、马克隆值有关的分子标记在棉花育种中的应用，其特征在于，所述分子标记为NAU5421200和NAU2325240，其中，NAU5421200与棉花纤维强度QTL位点qFS-C14-1和纤维长度QTL位点qFL-C14-1同时紧密连锁，NAU2325240与棉花纤维马克隆值QTL位点qFM-C17-1紧密连锁，qFS-C14-1 和qFL-C14-1位于染色体C14上的同一位置，qFM-C17-1位于染色体C17上，其中，分子标记NAU5421200的特异性引物NAU5421其正向序列如SEQ ID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增长度为200bp；分子标记NAU2325240的特异性引物NAU2325其正向序列如SEQ ID NO.3所示，反向序列如SEQ ID NO.4所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增为240bp；
其中，所述育种是指改良陆地棉纤维强度、长度、马克隆值。
2.一种陆地棉纤维强度、长度、马克隆值辅助育种方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）提取苗期单株DNA；
（2）使用分子标记NAU5421200和NAU2325240对上述（1）群体单株的基因型进行分子标记检测，并以陆地棉中棉所36和海岛棉海1基因型作为对照；
（3）对检测结果进行分析；
（4）选择带有海岛棉海1特征条带的植株，获得纤维强度、长度、马克隆值可能得到不同程度的改良的单株；
其中，分子标记NAU5421200的特异性引物NAU5421其正向序列如SEQ ID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增长度为200bp；分子标记NAU2325240的特异性引物NAU2325其正向序列如SEQ ID NO.3所示，反向序列如SEQ ID NO.4所示，用该引物扩增出的特异标记，扩增为240bp。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中提取DNA：以陆地棉为受体亲本，海岛棉海1为供体亲本，组配陆海杂交组合，利用陆地棉为轮回亲本进行多代回交，自交，获得分离群体，在苗期提取分离群体单株DNA。
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