CN105506047A - 一种从油牡丹粕制取多肽的方法 - Google Patents

一种从油牡丹粕制取多肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105506047A
CN105506047A CN201610104603.5A CN201610104603A CN105506047A CN 105506047 A CN105506047 A CN 105506047A CN 201610104603 A CN201610104603 A CN 201610104603A CN 105506047 A CN105506047 A CN 105506047A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tree peony
rice
enzymolysis
oily tree
dregs
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610104603.5A
Other languages
English (en)
Inventor
郭鹏
王轶
王晨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences filed Critical Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201610104603.5A priority Critical patent/CN105506047A/zh
Publication of CN105506047A publication Critical patent/CN105506047A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种从油牡丹粕制取多肽的方法。该方法包括步骤：(1)将油牡丹粕进行脱脂；(2)采用由凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵；(3)将经步骤(2)处理的油牡丹粕中提取出蛋白质，并对所述蛋白质在蛋白酶下酶解。本发明从油牡丹粕制取多肽的方法中，于蛋白酶酶解之前采用凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的混合菌进行发酵，可将油牡丹粕中的木质纤维等降解为多糖等小分子，从而避免了纤维素对蛋白质的束缚，增大蛋白质与蛋白酶的充分接触，提高蛋白质的酶解效果，保证了得率。

Description

一种从油牡丹粕制取多肽的方法
技术领域
本发明涉及多肽制取技术领域，具体而言，涉及一种从油牡丹粕制取多肽的方法。
背景技术
油牡丹(即油用牡丹)为一种木本油料作物，与大豆、油菜、油茶、油橄榄等油料作物相比，其具有高产出(五年生亩产可达300公斤，亩综合效益可达万元)、高含油率(籽含油率22％)、高品质(不饱和脂肪酸含量92％)、低成本(油用牡丹耐旱耐贫瘠，适合荒山绿化造林、林下种植；一年种百年收，成本低)的特点。以油牡丹榨取的食用油被誉“液体黄金”。经科学院研究表明，牡丹籽油的不饱和脂肪酸含量90％以上，尤其难能可贵的是，多不饱和脂肪酸-亚麻酸含量超过40％，是橄榄油的40倍。
多肽是是氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。人体很多活性物质都是以肽的形式存在的。肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。肽是涉及人体内多种细胞功能的重要物质。肽可以合成细胞，并调节细胞的功能活动。肽在人体作为神经递质，传递信息。肽可在人体作为运输工具，将人体所食的各种营养物质与各种维生素、生物素、钙及对人体有益的微量元素输送到人体各细胞、器官和组织。肽是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，增强和发挥人体生理活性，它具有重要的生物学功能。肽对人的细胞活性、功能活动、生命存在太重要了。但现代人因各种因素使人体中的肽流失、损失，合成肽的能力大大减弱，因此现代人体缺乏肽，必须补充人工合成肽，补肽就是补活性，补肽就是补活力，补肽就是补生命。
粕(油粕)为榨油的副产品，其为榨油所剩下的废渣。经研究表明，每千克干物质粕中消化能均在3000千卡以上，粗蛋白质含量在40％以上。其中畜禽所必需的赖氨酸含量达2.5％～3％，比玉米高10倍。有鉴于此，粕被应用添加到饲料和用作肥料。但是，这些简单地应用并不能未最大限度地开发出其营养价值。
从粕中提取多肽，在近年来得出现了一些报道。例如中国专利CN102048026A公开了一种功能性饲料用添加剂油茶粕蛋白多肚的制备方法，该制备方法，其包括以下步骤：(1)将油茶饼粕粉碎；(2)脱皂素；(3)加复合酶进行水解；(4)灭酶，温度80～90℃，时间5～15min；(5)离心分离收集上清液；(6)调上清液pH值至中性；(7)用微孔膜过滤；(8)低温真空干燥，温度35～55℃,真空度低于0.098MPa，得到油茶粕蛋白多肽；由此制得的油茶粕蛋白多肚的相对分子质量低于1000Da。又比如中国专利CN104131059A公开了具有葡萄糖昔酶抑制活性的汉麻籽粕多肚的酶解制备方法，具体包括：将汉麻籽粕干燥，粉粹成粉末，加入水均匀搅拌，pH调至8.0～10.5，温度调至30～80℃，匀速搅拌0.5～2h，离心，上清液pH调至3～6，得蛋白沉淀；将蛋白加水溶解，比例为2～7g:100mL，pH调至7.0～9.5，再加入碱性蛋白酶，蛋白重量与该酶酶活之比0.1～5:1000，温度50～75℃，时间1～4h；将酶解液通过大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶柱分离纯化，收集干燥。
尽管如此，但以上现有技术中从油粕中制取多肽的得率都较低。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种从油牡丹粕制取多肽的方法，该方法制取的多肽具有较高的得率。
一种从油牡丹粕制取多肽的方法，包括以下步骤：
(1)将油牡丹粕进行脱脂；
(2)将经步骤(1)处理的油牡丹粕采用由凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵；
(3)将经步骤(2)处理的油牡丹粕中提取出蛋白质，并对所述蛋白质在蛋白酶下酶解。
进一步地，步骤(2)中所述凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌以菌液的形式加入，凝结芽孢杆菌菌液和地衣芽孢杆菌体积之比为1：1～5，所述凝结芽孢杆菌菌液的活菌数为4×1010～6×1010cfu/ml，地衣芽孢杆菌的活菌数为2×1010～4×1010cfu/ml。
进一步地，步骤(2)中所述发酵的温度为42～58℃，发酵的时间为36～72h。
进一步地，步骤(2)中所述发酵的pH为4.5～5.5。
进一步地，步骤(2)中所述发酵在有氧条件下进行，氧气通入量为0.3～0.6vvm。
进一步地，步骤(2)之前、步骤(1)之后还包括将待处理的油牡丹粕进行稀酸或稀碱处理。
进一步地，步骤(1)所述脱脂采用磷脂酶和脂肪酶进行酶解。
进一步地，所述磷脂酶的用量为占待脱脂的油牡丹粕质量的0.3～3‰，所述脂肪酶占待脱脂的油牡丹粕质量的0.2～2‰。
进一步地，所述酶解的温度为30～40℃，酶解的时间为0.5～5h。
进一步地，步骤(1)之前还包括对油牡丹粕进行粉碎；所述粉粹至20～30目粒度，所述粉碎采用超微粉粉碎或超声波粉碎。
本发明从油牡丹粕制取多肽的方法中，于蛋白酶酶解之前采用凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的混合菌进行发酵，可将油牡丹粕中的木质纤维等降解为多糖等小分子，从而避免了纤维素对蛋白质的束缚，增大蛋白质与蛋白酶的充分接触，提高蛋白质的酶解效果，保证了得率。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面合实施例来进一步说明本发明的技术方案。
作为本发明的发酵，其采用由凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌所组成的混合菌。对混合菌的加入形式不加限定，例如可以使用经培养后所得菌液添加，也可以将菌株在添加氮源等营养成分的条件下直接接种到该待发酵的原料中。上述菌液可采用常规的种子培养基及培养条件方法来获得。可列举出一种种子培养基的成分，即每升含木糖30～50克，酵母粉5～10克，玉米浆干粉5～15克，磷酸二氢钾4克，乙酸钠2～6克，氯化钾1～2克，硫酸镁0.2克，余量为水，pH为6～7，于115℃灭菌20分钟。应当知道的是，菌液加到待发酵的原料后，可加入发酵基，发酵基的成分可类似于上述培养基，发酵基所含氮源为酵母粉5～20克、蛋白陈5～20克、玉米浆干粉5～20克、大豆肤5～20克、大豆蛋白陈5～20克五种氮源中的至少一种，还可辅助地含有初糖量不少于500克/升，磷酸二氢钾4克，乙酸钠1～6克，氯化钾2克，硫酸镁0.2克，其余为水，pH为6～70，于115℃灭菌20分钟。类推地，对于上述将菌株在添加氮源等营养成分的条件下直接接种到该待发酵的原料，这里的氮源、营养成分可采用上述相同的，在此不再赘述。
前述菌液中，较好地，凝结芽孢杆菌菌液和地衣芽孢杆菌体积之比为1：1～5，例如1：1、1：1.5、1：2、1：2.5、1：3、1：4、1：4.5、1：4.8、1：4.9或1：5等，优选为1：3。这里，凝结芽孢杆菌菌液的活菌数以4×1010～6×1010cfu/ml为宜，例如4×1010、4.2×1010、4.5×1010、5×1010、5.5×1010、5.8×1010或6×1010等；地衣芽孢杆菌的活菌数2×1010～4×1010cfu/ml，例如2×1010、2.2×1010、2.5×1010、3×1010、3.4×1010、3.6×1010、3.8×1010或4×1010等。当然上述两种菌液的活菌数若过大或过小也可实施本方案，在影响到发酵产物及发酵时间等。应当知晓的是，cfu为菌落形成单位(Colony-FormingUnits)指单位体积中的细菌群落总数，在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。
作为本发明的发酵中，其温度较好地为42～58℃，例如42℃、43℃、45℃、50℃、55℃、56℃、57℃、57.5℃、58℃。已为本领域所熟知的是，根据目标微生物的繁殖情况，可将发酵阶段分为第一发酵阶段(繁殖增大期)和第二发酵阶段(稳定期)两个阶段。在第一发酵阶段，其温度可以控制在45～58℃；在第二发酵阶段，其温度可以控制在48～52℃。本发明中以凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌为发酵菌，此两种菌具有上述较高的发酵温度，高于杂菌通常的繁殖代谢温度，从而避免了因选用其它可分解木质纤维素的微生物所导致的发酵杂质较多难去除等问题。于上述发酵温度下，发酵的时间以36～72h，例如36h、38h、43h、50h、60h、65h、68h或70h等。
作为本发明的发酵酸碱度环境，其pH较佳地为4.5～5.5，例如4.5、4.6、4.8、5、5.2或5.5。可以理解的是，调节pH的试剂有很多，譬如硫酸、磷酸等常见酸，以及氢氧化钠、强氧化钾等常见碱。
由于上述凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌为兼性厌氧菌，在有氧及无氧的环境下都可生长。因而，本发明不对发酵的有氧或无氧做特别限定，不过为了将木质纤维素降解为更小的分子，其采用有氧条件下进行。氧气通入量可参考为0.3～0.6vvm，例如0.3vvm、0.35vvm、0.4vvm、0.45vvm、0.5vvm、0.55vvm、0.58vvm或0.6vvm。作为发酵领域较为常见的术语，vvm为通气比，指每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值(airvolume/culturevolume/min)，通气比＝通气速率(单位：立方米/分钟)/发酵液体积(单位：立方米)。
为了提高混合菌对其中的木质纤维素的发酵，可较好地将待发酵原料进行预处理。例如，稀酸或稀碱处理。具体地，可在pH为4～5的酸下浸渍4～10h。采用酸或碱处理，可以使得降低木质纤维素的交联化，打断其分子的网状结构，有助于微生物的更好分解。除此，预处理还可以通过高温蒸汽蒸的处理。
注意，上述凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌可采用本领域熟知的菌株。可列举出一种地衣芽孢杆菌的菌株，其形态为棒杆状，长l.5～3.0μm，直径0.6～0.7μm，菌落颜色为黄色或白色，产芽孢；生理生化特征是：VP反应呈阳性，可利用葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖产酸，可水解酪蛋白、明胶、吐温80，可利用柠檬酸盐，可在含70克/升NaCl的培养基中生长，可在42～60℃条件下生长；16SrDNA序列长度为1369bp。可列举出一种凝结芽孢杆菌的菌株，其细菌革兰氏染色呈阳性，在一定条件下可产生芽抱，为兼性厌氧菌，光学显微镜观察，菌体杆状，少数稍弯曲，单个排列，宽约0.6～1μm，长约3.0～5.0μm。该菌株过氧化氢酶和接触酶试验为阳性，V-P试验及硫化氢试验为阳性，能水解酪素、明胶和淀粉，能利用柠檬酸盐和硝酸盐，不能利用丙酸盐，吲哚试验为阴性。该菌株能在2％氯化钠中生长，最高生长温度60℃。该菌株能够利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、甘露糖、木糖、乳糖、半乳糖及淀粉，不能利用鼠李糖，16SrRNA长度为1586bp。
作为本发明的脱脂，其可采用本领域通用的用溶剂溶取的方式。这些有机溶剂可列举出丙酮、石油醚、正已烷烃、乙醇、乙酸乙酯等一种或任意组合等。以石油醚和乙醇为例，可先采用石油醚进行溶取，再采用乙醇溶取。石油醚溶取可采用索氏提取器在常温下进行为0.5～1.5h，石油醚的用量为8～12ml，以待脱脂的固体质量为1g计；乙醇溶取可采用索氏提取器在常温下进行为0.5～1h，乙醇的用量为6～10ml(其为质量分数为70～90％的乙醇水溶液)，以待脱脂的固体质量为1g计。上述有机溶剂溶取后，再烘干有机溶剂。
本发明中脱脂优选为采用磷脂酶和脂肪酶进行酶解。酶解避免了采用上述有机溶剂溶取方式的脱脂所导致的对环境的污染，以及后期对有机溶剂回收的麻烦，更重要的是，酶解的转化率较高。本发明不对脂肪酶和磷脂酶的具体种类做特别限定，例如可采用天津诺奥酶制剂有限公司所生产的。
磷脂酶和脂肪酶的用量不做特别严苛的规定，但较好地，磷脂酶可为占待脱脂的油牡丹粕质量的0.3～3‰，例如0.3‰、0.5‰、1‰、1.5‰、2‰、2.5‰、2.8‰或3‰。脂肪酶可占待脱脂的油牡丹粕质量的0.2～2‰，例如0.2‰、0.5‰、1‰、1.5‰、1.8‰、1.9‰或0.2‰。该两种酶过多，不会带来转化率的显著提高；过少则会影响脂类的转化率。
脱脂的酶解的较好的温度为30～40℃，例如30℃、32℃、35℃、38℃、39℃或40℃。于上述酶用量及酶解的温度前提下，酶解的时间为较佳为0.5～5h，例如0.5h、0.75h、1h、2h、3h、4h、4.5h、5h或5h等。
前述，提取蛋白质并酶解的工艺条件(例如蛋白酶种类、温度、时间、底物浓度)等可按照本领域通用的工艺条件来实施。提取蛋白的方法很多，可采用公知的植物蛋白提取方法，例如水溶法和/或溶剂法。提取蛋白的次数可根据提取效果选择。水溶法指以水为溶剂，主要包括预处理、水溶、离心处理等。可列举出一种水溶法提取蛋白的实例：首先将待提取原料在50℃下浸泡3～6h，可按照1g/5ml加入水，再加3mol/L氢氧化钠碱溶液调pH至8.5左右，在3500rpm下离心15min，再将上层清液用3mol/L柠檬酸，调pH至4.5，在3500rpm下离心15min，对得到的沉淀进行冷冻干燥。
溶剂法的一种实例为：将经液氮研磨的待提取原料置入由45mlTris-HCl缓冲液(pH＝8)、75ml甘油、6g聚乙烯吡咯烷酮所组成的提取液在冰上静置3～4小时，再在4℃下以8000rpm转速离心40min。还可列举出溶剂法的又一种实例为：经液氮研磨的待提取原料加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清加入等体积的冰浴丙酮(含0.07％的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)。这里，提取液为含10％TCA和0.07％的β-巯基乙醇的丙酮，裂解液为2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65μl/ml。
蛋白酶酶解的方法可采用公知技术来实施，例如可参照专利CN104073540A，具体包括以下几个步骤：(1)原料预处理:取含蛋白质的原料，加水浸泡后得到第一料液；(2)均质处理：将步骤(1)得到的第一料液搅拌均匀后进行均质处理；(3)碱性蛋白酶酶解:将均质处理后的第一料液灭菌后调整其温度至37～50℃，并调节其pH值至7.5～9.5，然后加入占原料重量1～5％的蛋白酶，在搅拌的情况下酶解1～3小时；本步骤所用的蛋白酶是碱性蛋白酶、胰蛋白酶和Protamex复合蛋白酶中的一种或其中两种的组合；(4)第一次灭酶、离心分离:将步骤(3)得到的酶解液灭酶，然后以3000～4500转/分钟的转速离心10～15分钟，得到上清液A和沉淀A；(5)中性蛋白酶酶解：将沉淀A加水并搅拌均匀，得到第二料液；然后将第二料液的度调整到37～50℃，并调节其pH值至7.0～7.5，再加入占沉淀A重量2～8％的蛋白酶，在搅拌的情况下酶解1～3小时；本步骤所用的蛋白酶是中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味酶中的一种或其中两种的组合；(6)第二次灭酶、离心分离:将步骤(5)得到的酶解液灭酶，然后以3000～4500转/分钟的转速离心10～15分钟，得到上清液B和沉淀B；(7)酸性蛋白酶酶解：将沉淀B加水并搅拌均匀，得到第三料液；然后将第三料液的温度调整到37～50℃，并调节其pH值至3～5，再加入占沉淀B重量1～5％的蛋白酶，在搅拌的情况下酶解1～2小时；本步骤所用的蛋白酶是酸性蛋白酶和胃蛋白酶中的一种或两者的组合；(8)第三次灭酶、离心分离:将步骤(7)得到的酶解液灭酶，然后以3000～4500转/分钟的转速离心10～15分钟，弃去沉淀，得到上清液C；(9)将上清液A、上清液B和上清液C混合并将其混合液的pH值调节到6.5～7.0，得到多肤混合液；(10)除去多肤混合液中的水，得到多肽。
值得补充的是，前述“经发酵的油牡丹粕”指发酵产物，既包括发酵后的固体残渣，也包括发酵液。
下面通过具体的实施例来说明本发明的方案。
实施例1
将油牡丹粕粉采用超微粉粉碎至20目粒度的油牡丹粕粉。将油牡丹粕粉采用占待脱脂的油牡丹粕质量的0.3‰的磷脂酶和占待脱脂的油牡丹粕质量的0.2‰的脂肪酶在40℃，酶解的时间为0.5h，得到脱脂的油牡丹粕粉。
将脱脂后的油牡丹粕粉加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：1的凝结芽孢杆菌菌液(活菌数为4×1010fu/ml)和地衣芽孢杆菌液(活菌数为4×1010cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为4.5，在42℃下发酵72h，分离出发酵残渣和发酵液。
将上述发酵残渣和发酵液按照公知的植物蛋白提取方法进行蛋白质提取，并在公知的蛋白酶下进行酶解，得到多肽。
实施例2
将油牡丹粕粉采用超微粉粉碎至30目粒度的油牡丹粕粉。将油牡丹粕粉采用占待脱脂的油牡丹粕质量的3‰的磷脂酶和占待脱脂的油牡丹粕质量的2‰的脂肪酶在30℃，酶解的时间为5h，得到脱脂的油牡丹粕粉。
将脱脂后的油牡丹粕粉加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：5的凝结芽孢杆菌菌液(活菌数为6×1010cfu/ml)和地衣芽孢杆菌液(活菌数为2×1010cfu/ml)。向发酵罐中通入0.6vvm的氧气，控制pH为5.5，在58℃下发酵36h，分离出发酵残渣和发酵液。
将上述发酵残渣和发酵液按照公知的植物蛋白提取方法进行蛋白质提取，并在公知的蛋白酶下进行酶解，得到多肽。
实施例3
将油牡丹粕粉采用超微粉粉碎至25目粒度的油牡丹粕粉。将油牡丹粕粉采用占待脱脂的油牡丹粕质量的1.5‰的磷脂酶和占待脱脂的油牡丹粕质量的1‰的脂肪酶在35℃，酶解的时间为2.5h，得到脱脂的油牡丹粕粉。
将脱脂后的油牡丹粕粉加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：3的凝结芽孢杆菌菌液(活菌数为5×1010cfu/ml)和地衣芽孢杆菌液(活菌数为3×1010cfu/ml)。向发酵罐中通入0.45vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵54h，分离出发酵残渣和发酵液。
将上述发酵残渣和发酵液按照公知的植物蛋白提取方法进行蛋白质提取，并在公知的蛋白酶下酶解，得到多肽。
实施例4
将油牡丹粕粉采用超微粉粉碎至25目粒度的油牡丹粕粉。将油牡丹粕粉采用占待脱脂的油牡丹粕质量的1.5‰的磷脂酶和占待脱脂的油牡丹粕质量的1‰的脂肪酶在35℃，酶解的时间为2.5h，得到脱脂的油牡丹粕粉。
将脱脂后的油牡丹粕粉加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：5的凝结芽孢杆菌菌液(活菌数为6×1010cfu/ml)和地衣芽孢杆菌液(活菌数为4×1010cfu/ml)。向发酵罐中通入0.6vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵72h，分离出发酵残渣和发酵液。
将上述发酵残渣和发酵液按照公知的植物蛋白提取方法进行蛋白质提取，并在公知的蛋白酶下进行酶解，得到多肽。
实施例5
将油牡丹粕粉采用超微粉粉碎至25目粒度的油牡丹粕粉。将油牡丹粕粉采用占待脱脂的油牡丹粕质量的3‰的磷脂酶和占待脱脂的油牡丹粕质量的2‰的脂肪酶在35℃，酶解的时间为2.5h，得到脱脂的油牡丹粕粉。
将脱脂后的油牡丹粕粉加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：1的凝结芽孢杆菌菌液(活菌数为4×1010cfu/ml)和地衣芽孢杆菌液(活菌数为2×1010cfu/ml)。向发酵罐中通入0.6vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵54h，分离出发酵残渣和发酵液。
将上述发酵残渣和发酵液按照公知的植物蛋白提取方法进行蛋白质提取，并在公知的蛋白酶下进行酶解，得到多肽。
对比例1
除了不包括发酵的步骤，其它同实施例3。
按照以下方法测量实施例以对比例所得的多肽得率。
多肽得率＝(酶解后过滤液的固含量×过滤液总重量)/(原料使用量×原料粗蛋白含量)。测试结果如下表所示：
由上表可知，实施例的多肽得率显著高于对比例，由此说明经过经过混合菌发酵可显著提高多肽得率，其原因为，油牡丹粕中的木质纤维等降解为多糖等小分子，从而避免了纤维素对蛋白质的束缚，增大蛋白质与蛋白酶的充分接触，提高蛋白质的酶解效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种从油牡丹粕制取多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将油牡丹粕进行脱脂；
(2)将经步骤(1)处理的油牡丹粕采用由凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵；
(3)将经步骤(2)处理的油牡丹粕中提取出蛋白质，并对所述蛋白质在蛋白酶下酶解。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述凝结芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌以菌液的形式加入，凝结芽孢杆菌菌液和地衣芽孢杆菌液体积之比为1：1～5，所述凝结芽孢杆菌菌液的活菌数为4×1010～6×1010cfu/ml，地衣芽孢杆菌的活菌数为2×1010～4×1010cfu/ml。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵的温度为42～58℃，发酵的时间为36～72h。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵的pH为4.5～5.5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵在有氧条件下进行，氧气通入量为0.3～0.6vvm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)之前、步骤(1)之后还包括将待处理的油牡丹粕进行稀酸或稀碱处理。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述脱脂采用磷脂酶和脂肪酶进行酶解。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述磷脂酶的用量为占待脱脂的油牡丹粕质量的0.3～3‰，所述脂肪酶占待脱脂的油牡丹粕质量的0.2～2‰。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为30～40℃，酶解的时间为0.5～5h。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)之前还包括对油牡丹粕进行粉碎；所述粉粹至20～30目粒度，所述粉碎采用超微粉粉碎或超声波粉碎。
CN201610104603.5A 2016-02-25 2016-02-25 一种从油牡丹粕制取多肽的方法 Pending CN105506047A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610104603.5A CN105506047A (zh) 2016-02-25 2016-02-25 一种从油牡丹粕制取多肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610104603.5A CN105506047A (zh) 2016-02-25 2016-02-25 一种从油牡丹粕制取多肽的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105506047A true CN105506047A (zh) 2016-04-20

Family

ID=55714337

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610104603.5A Pending CN105506047A (zh) 2016-02-25 2016-02-25 一种从油牡丹粕制取多肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105506047A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020082419A1 (zh) * 2018-10-24 2020-04-30 白洪响 一种发酵蛋白纯化多肽及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103911420A (zh) * 2014-04-08 2014-07-09 南京财经大学 菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法
CN103937865A (zh) * 2014-04-28 2014-07-23 李�杰 牡丹多肽，及制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103911420A (zh) * 2014-04-08 2014-07-09 南京财经大学 菌酶协同发酵菜籽粕制备菜籽肽的方法
CN103937865A (zh) * 2014-04-28 2014-07-23 李�杰 牡丹多肽，及制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘波等: "《微生物发酵床零污染养猪技术研究与应用》", 31 May 2009, 北京：中国农业科学技术出版社 *
赵欣等: "《天然纤维清洁加工技术》", 31 January 2004, 哈尔滨：东北林业大学出版社 *
魏益民等: "《食品挤压理论与技术.下卷》", 31 March 2011, 北京：中国轻工业出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020082419A1 (zh) * 2018-10-24 2020-04-30 白洪响 一种发酵蛋白纯化多肽及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101611767B (zh) 一种海参用微生物发酵饵料的生产方法
CN107032886B (zh) 一种富硒天然多功能叶面肥及其制备方法
CN1769424A (zh) 一种芽孢杆菌菌株及其用途
CN106148251B (zh) 一种类芽孢杆菌发酵液及其制备方法和应用
CN106480149A (zh) 一种从酒糟中提取多肽的方法
CN115039636B (zh) 一种栽培银耳的培养基及其制作方法
WO2018182555A2 (en) Microorganisms which are effective for preventing plant's cold stress
CN111642622A (zh) 一种发酵复合菌和桃金娘发酵提取物的制备及应用
CN113559022A (zh) 一种用益生菌发酵中药“新七白”的发酵方法
CN114107403B (zh) 一种微生物群落发酵石榴皮联产鞣花酸和生物饲料的方法
CN117603889B (zh) 饲用产酸性蛋白酶的枯草芽孢杆菌及其应用
CN108203729B (zh) 一种巨藻抗氧化肽的制备方法
CN100425152C (zh) 利用味精生产过程中的废液生产饲料酵母的方法
CN107058119A (zh) 一种提高蛹虫草液态发酵生产虫草素和耐热蛋白酶产量的方法
CN109722341A (zh) 一种金花葵烟用香料的制备方法和应用
CN111484368A (zh) 一种微生物肥料固体发酵生产方法及固体复合微生物肥料
CN107176865A (zh) 海藻‑蚯蚓水解液高效生物活性增甜液肥制备及使用方法
Andriani et al. Quality improvement of biomaterial of Lemna sp
CN116355816A (zh) 一种发酵翅果油种子的微生物及其降血脂组合物
CN110964674A (zh) 高产纳米硒的光合细菌及其纳米硒活菌制剂的制备方法
CN103849575B (zh) 一种单细胞蛋白的生产方法
CN105506047A (zh) 一种从油牡丹粕制取多肽的方法
CN102943049B (zh) 一种固体发酵生产白地霉培养物的工艺
CN112143770B (zh) 一种海洋红酵母及其在以秸秆为原料生产β-胡萝卜素中的应用
CN102994427A (zh) 利于家禽生长的胶质类芽孢杆菌粗多糖的制备法及所用菌

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160420