CN105503831B - 一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，化学结构式如式(Ⅰ)所示：式中，X为‑C(CH3)2‑、‑O‑、‑S‑或‑Se‑，Z为或以‑R'NH2所示的基团，其中，R'为C1‑12的亚烷基，R1和R2分别独立地选自H原子、C1‑18烷基或以‑SO3R5所示的基团，其中，R5为C1‑18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1‑18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I。该近红外荧光探针具有较低的pKa值，对H+有较高的灵敏度、高选择性、stocks位移较大、背景干扰小，对细胞和活体伤害较小，很适合用来进行极酸环境下pH的检测，克服了现有技术荧光探针的缺陷。本发明还提供了该探针的制备方法及应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物荧光分析技术领域，具体涉及一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用。
背景技术
细胞内的pH在酶活性、细胞增殖和调亡、抗药性、离子传输、细胞内吞作用以及肌肉收缩等一系列组织活动中起着至关重要的作用。pH值的微小变化就有可能导致细胞功能紊乱,引起癌症和阿尔茨海默病等疾病。酸性和碱性过强会导致心、肺病变或神经类疾病，严重时甚至会有生命危险。在正常的生理条件下，细胞液中H+的浓度约为7.40，其变动幅度一般在0.1-0.2个pH单位。而一些酸性细胞器，如溶酶体的pH值范围为4.5-5.5。极度酸性环境(pH<4)对大多数生物体是致命的。细胞内pH值与细胞功能的密切关系意味着对细胞内pH值的精确测量可以为研究小至单个细胞器的生理学和病理学过程提供关键信息。因此，如何精确地检测细胞内pH值的变化显得非常重要。
相比于其他pH的测定方法，使用荧光探针法进行pH检测具有灵敏度高、选择性好等优点，但目前大部分pH探针波长较短，不能避开组织自吸收和自荧光，背景干扰较强，部分stocks位移小，紫外吸收波谱和荧光光谱重叠较大，信噪比低，毒性较大，不能用于细胞和活体pH检测。而近红外荧光探针的最大吸收波长和发射波长为600～900nm，可避免背景干扰。因此，近红外荧光检测在生物样品分析中有明显的优越性。
目前报道的许多pH荧光探针集中在检测细胞内中性，即细胞液的pH值以及溶酶体和内涵体等酸性细胞器pH值。测定极度环境，如pH<5或pH>9的荧光探针报道的非常少。因此，设计合成具有大的Stokes位移、背景干扰少、能测定极度环境下pH的荧光探针具有非常重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用。所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的stocks位移较大、背景干扰少，对H+有较高的灵敏度、高选择性，对细胞和活体伤害较小，且pKa较低，很适合用来进行极酸环境下(pH<4.0)pH的检测，该探针在结合H+前后颜色变化较明显,可方便地通过裸眼识别。
本发明第一方面提供了一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：
式(Ⅰ)中，X为-C(CH3)2-、-O-、-S-或-Se-，Z为或以-R'NH2所示的基团，其中，R'为C1-12的亚烷基，R1和R2分别独立地选自H原子、C1-18烷基或以-SO3R5所示的基团，其中，R5为C1-18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I。
优选地，所述Z为或-CH2CH2NH2。当所述R'为亚乙基时，所述Z为-CH2CH2NH2。
优选地，所述X为-C(CH3)2-。
优选地，所述R1和所述R2均为H原子。
优选地，所述R3和所述R4均为乙基。
优选地，所述Y为I。
进一步优选地，所述X为-C(CH3)2-，所述R1和所述R2均为H原子，所述R3和所述R4均为乙基，所述Y为I。
所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，以近红外花菁类荧光染料为母体，在中位上分别修饰上对H+敏感的供体分子(R'为C1-12的亚烷基)，在光激发下会产生从电子给体向受体荧光团的电荷转移，在酸性条件下，H+与供体结合，促进了分子内电荷转移，增加了体系的共轭程度，电子流动性增加，吸收光谱红移。在pH3.5～7.5时，其在激发光760nm、670nm下发射波长790nm处的荧光强度比(简写为F760/F670)随着pH的降低而逐渐增强。
所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的最大吸收波长随着pH降低由670nm红移到760nm，能有效避开组织自吸收和自荧光，其最大发射波长为790nm-800nm，stocks位移高达130nm，背景干扰少、信噪比较高。同时毒性较小，对细胞和活体伤害较小。另外，所述探针的pKa在4左右，由于所述探针带正电，在细胞膜负电的作用下能很快进入细胞内检测细胞内pH。
本发明第一方面提供的所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，具有较低的pKa值，对H+有较高的灵敏度、高选择性、stocks位移较大、背景干扰小，对细胞和活体伤害较小，很适合用来进行极酸环境下pH的检测(其中，极酸是指pH<4.0)，克服了现有技术荧光探针的缺陷。而且该探针在结合H+前后颜色变化较明显,可方便地通过裸眼识别。
本发明第二方面提供了一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)分别提供化学结构式如式(Ⅱ)所示的化合物和第一化合物，所述第一化合物的结构式如(Ⅲ)或式(Ⅳ)所示：
式(Ⅱ)中，X为-C(CH3)2-、-O-、-S-或-Se-，R1和R2分别独立地选自H原子、C1-18烷基或以-SO3R5所示的基团，其中，R5为C1-18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I；式(Ⅳ)中，R'为C1-12的亚烷基；
(2)将式(Ⅱ)所示的化合与所述第一化合物按照摩尔比为1:(3-6)的比例溶解在溶剂中，再加入缚酸剂，保护气体氛围下，在50-70℃反应下1-5h，提纯后得到具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的化学结构式如式(Ⅰ)所示：
式(Ⅰ)中，X为-C(CH3)2-、-O-、-S-或-Se-，Z为或以-R'NH2所示的基团，其中，R'为C1-12的亚烷基，R1和R2分别独立地选自H原子、C1-18烷基或以-SO3R5所示的基团，其中，R5为C1-18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I。
优选地，所述Z为或-CH2CH2NH2。
优选地，所述X为-C(CH3)2-。
优选地，所述R1和所述R2均为H原子。
优选地，所述R3和所述R4均为乙基。
优选地，所述Y为I。
进一步优选地，所述X为-C(CH3)2-，所述R1和所述R2均为H原子，所述R3和所述R4均为乙基，所述Y为I。
步骤(2)的反应方程式为：
或者为：
优选地，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈。
优选地，所述缚酸剂为三乙胺、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)或吡啶。
优选地，所述缚酸剂与所述化学结构式如式(Ⅱ)的化合物的摩尔比为(2-4):1。
优选地，所述保护气体为氮气、氩气或氦气。
优选地，所述提纯的方法包括：反应结束后旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱以除去溶剂，得到所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针。
更优选地，所述梯度洗脱中，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比从30:1到10:1进行变化。
进一步优选地，当所述第一化合物的结构式如(Ⅳ)所示时，所述提纯还包括：
在所述进行梯度洗脱后，采用乙腈和乙二胺的混合溶剂来脱去Fmoc。
优选地，所述化学结构式(Ⅱ)所示的化合物采用以下方法制得：
提供化学结构式如式(Ⅴ)所示的化合物：
式(Ⅴ)中，X为-C(CH3)2-、-O-、-S-或-Se-，R1和R2分别独立地选自H原子、C1-18烷基或以-SO3R5所示的基团，其中，R5为C1-18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I；
将化学式如(Ⅴ)所示的化合物和按摩尔比为1:(3-6)的比例溶解在第二溶剂中，保护气体氛围下，在60℃-80℃进行反应1-2h，提纯后制得化学式如式(Ⅱ)所示的化合物。
更优选地，所述第二溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈。
更优选地，所述保护气体为氮气、氩气或氦气。
更优选地，所述提纯的方法为：反应结束后旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，除去溶剂，即得化学结构式如式(Ⅱ)所示的化合物。
进一步优选地，所述梯度洗脱中，所述二氯甲烷和所述甲醇的体积比从40:1到20:1进行变化。
本发明第二方面提供的一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，该制备方法简单易操作。
本发明第三方面提供了第一方面所述的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针在制备肿瘤的早期检测、诊断、治疗或诊疗的药物中的应用。
所述探针可以对配合肿瘤的早期检测、诊断、治疗或诊疗的药物中的其他成分对肿瘤内的pH进行检测。
所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的最大吸收波长随着pH降低由670nm红移到760nm，能有效避开组织自吸收和自荧光，其最大发射波长为790nm-800nm，stocks位移高达130nm，背景干扰少、信噪比较高。另外，所述探针的pKa较低，在pH3.5～7.5时，其在激发光760nm、670nm下发射波长790nm处的荧光强度比(简写为F760/F670)随着pH的降低而逐渐增强。该探针对H+有较高的灵敏度、高选择性、背景干扰小，对细胞和活体伤害较小，很适合用来进行极酸环境下pH的检测。
综上，本发明提供的一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针及其制备方法和应用的有益效果包括以下几个方面：
(1)所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的最大吸收波长随着pH降低由670nm红移到760nm，能有效避开组织自吸收和自荧光，最大发射波长为790nm-800nm，stocks位移高达130nm，背景干扰少；
(2)所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针有较低的pKa值，在pH3.5～7.5时，在激发光760nm、670nm下的荧光强度比随着pH的降低而逐渐增强，很适合用来进行极酸环境下pH的检测。而且该探针在结合H+前后颜色变化较明显,可方便地通过裸眼识别；
(3)所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法简单易操作；
(4)所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针有较低的pKa值，所述探针带正电，在细胞膜负电的作用下能很快进入细胞内检测酸性细胞内pH。
附图说明
图1为实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的高分辨质谱图；
图2为实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的高分辨质谱图；
图3为实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的吸收光谱随pH的变化曲线；
图4为实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的吸收光谱随pH的变化曲线；
图5为实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的荧光强度随pH的变化曲线；
图6为实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的荧光强度随pH的变化曲线；
图7为实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的选择性荧光光谱；
图8为实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的选择性荧光光谱。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
实施例1：
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备
将25.8mg(0.3mmol)的和63.8mg(0.1mmol，分子量为638.19)的化合物溶解在2ml的无水DMF溶剂中，在氩气气体氛围下，在80℃进行反应1h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从40:1变至20:1，除去溶剂，得蓝色固体产品55mg，产率80％，该蓝色固体产品的结构式为
(2)制备具有极酸性pH响应的近红外荧光探针：
将化学式为的68.8mg(0.1mmol)与68.4mg(0.4mmol)的加入三口烧瓶中，加入3mL无水DMF作溶剂，再加35μL的三乙胺(0.25mmol)做缚酸剂，氩气保护下，于温度60℃下反应4h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从30:1变至10:1，除去溶剂，得靛蓝色固体产品58mg，即具有极酸性pH响应的近红外荧光探针
收率74％。
对实施例1得到的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针进行ABI Q-star Elite质谱(四级杆飞行时间质谱)测试，测试结果如图1所示，从图1中可以看出，通过质谱测出的分子离子峰M+为652.4376，符合C44H54N5 +的理论分子量。
实施例2：
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备
将化学式为的化合物1.02g(5mmol)溶解在15ml的1,4-二氧六环中，加入1.05g的Fmoc-Cl，再加入10％的碳酸钠水溶液，实时控制反应溶液的pH值在8.0-9.0之间，室温下搅拌过夜即可。然后加入10mL蒸馏水，用乙酸乙酯多次萃取，收集有机相，旋去溶剂，真空干燥12h，即得到化学式为的白色絮状产品。
(2)的制备同实施例1；
(3)将化学式为的34.4mg(0.05mmol)与41mg(0.2mmol)的加入三口烧瓶中，加入2mL无水DMF作溶剂，再加14μL的三乙胺(0.1mmol)做缚酸剂，氩气保护下，于温度40℃下反应4h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从30:1变至10:1，除去溶剂，之后用乙腈和乙二胺的体积比1:1混合溶液搅拌15min，脱去Fmoc，旋去溶液，得蓝色固体产品15mg，即具有极酸性pH响应的近红外荧光探针收率42％。
对实施例2得到的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针进行质谱测试，测试结果如图2所示，从图2中可以看出，通过质谱测出的分子离子峰M+为604.4375，符合C40H54N5 +的理论分子量。
实施例3：
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备
将52mg(0.6mmol)的和63.8mg(0.1mmol)的化合物溶解在3ml的无水DMF溶剂中，在氩气气体氛围下，在70℃进行反应1.5h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从40:1变至20:1，除去溶剂，得蓝色固体产品55mg，产率80％，该蓝色固体产品的结构式为
(2)制备具有极酸性pH响应的近红外荧光探针：
将化学式为的68.8mg(0.1mmol)与102mg(0.6mmol)的加入三口烧瓶中，加入3mL无水DMF作溶剂，再加35μL(0.25mmol)的三乙胺做缚酸剂，氩气保护下，于温度60℃下反应4h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从30:1变至10:1，除去溶剂，得靛蓝色固体产品58mg，即具有极酸性pH响应的近红外荧光探针
收率74％。
实施例4：
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备
将41.62mg(0.48mmol)的和77.2mg(0.12mmol)的化合物溶解在3.5ml的无水DMF溶剂中，在氩气气体氛围下，在60℃进行反应2h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从40:1变至20:1，除去溶剂，得蓝色固体产品68mg，产率80％，该蓝色固体产品的结构式为
(2)制备具有极酸性pH响应的近红外荧光探针：
将化学式为的68.8mg(0.1mmol)与85mg(0.5mmol)的加入三口烧瓶中，加入3.5mL无水DMF作溶剂，再加35μL(0.25mmol)的三乙胺做缚酸剂，氩气保护下，于温度60℃下反应4h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从30:1变至10:1，得靛蓝色固体产品58mg，即具有极酸性pH响应的近红外荧光探针收率74％。
实施例5：
一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
(1)的制备同实施例4；
(2)的制备同实施例1；
(3)将化学式为的34mg(0.05mmol)与51mg(0.25mmol)的加入三口烧瓶中，加入2.5mL无水DMF作溶剂，再加28μL(0.2mmol)的三乙胺做缚酸剂，氩气保护下，于温度40℃下反应4h，旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱，洗脱剂二氯甲烷和甲醇的体积比从30:1变至10:1，除去溶剂，之后用乙腈和乙二胺的体积比1:1混合溶液搅拌15min，脱去Fmoc，旋去溶液，得蓝色固体产品15mg，即具有极酸性pH响应的近红外荧光探针收率42％。
效果实施例
将实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针置于pH为3.5～10.0的磷酸缓冲液(含10％的二甲基亚砜(DMSO))中，保持该探针的最终浓度为8μmol/L，测试其在紫外-可见-近红外区的吸收光谱变化，结果如图3所示。随着pH的降低，该探针的吸收光谱红移，其最大吸收波长由680nm红移至770nm，同时随着H+浓度增大，其在最大吸收波长760nm处的吸收强度也逐渐增强。
将实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针保持在8μmol/L，置于pH为3.0～10.0的磷酸缓冲液(含10％的二甲基亚砜(DMSO))中，测试其吸收光谱变化，结果如图4所示。随着pH的降低，该探针的吸收光谱红移，其最大吸收波长由680nm红移至760nm，同时随着pH的降低，其在最大吸收波长770nm处的吸收强度也逐渐增强。
将实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针保持在8μmol/L置于pH为2.5～8.0的浓度为20mM的磷酸缓冲液(含10％的二甲基亚砜(DMSO))中，测试其荧光强度，结果如图5所示。在pH2.5～8.0时，该探针在激发光760nm、670nm下发射波长790nm处的荧光发射强度之比(简写为F760/F670)随着pH的降低而逐渐增强。利用公式pH＝pKa+c[log(R-Rmin)/(Rmax-R)]+log(Ia/Ib)，可得实施例1制得的该探针的pKa＝4.5。
将实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针保持在8μmol/L置于pH为1.5～7.0的磷酸缓冲液(含10％的二甲基亚砜(DMSO))中，测试其荧光强度，结果如图6所示。在pH 1.5.～7.0时，该探针在激发光760nm、670nm下790nm处的荧光发射强度之比(简写为F760/F670)随着pH的降低而逐渐增强。利用公式pH＝pKa+c[log(R-Rmin)/(Rmax-R)]+log(Ia/Ib)，可得实施例2制得的pKa＝3.5。
将实施例1、2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针分别置于pH7.4的浓度为20mM的磷酸缓冲液(含10％的二甲基亚砜(DMSO))中，保持探针的浓度在8μmol/L，分别考察该探针对常见的金属离子的响应情况，如图7、8所示。
图7、图8中物质的顺序和浓度依次为：1.探针；2.K+(100mM)；3.Na+(100mM)；4.Ca2+(0.5mM)；5.Fe2+(0.5mM)；6.Fe3+(0.5mM)；7.Cu2+(0.5mM)；8.Zn2+(0.5mM)；9.Mg2+(0.5mM):10.Ag+(0.5mM)；11.Cd2+(0.5mM)；12.Co2+(0.5mM)；13.Mn2+(0.5mM)；14.Ni2+(0.5mM)；15.Pb2+(0.5mM)；16.Sn2+(0.5mM)。其中，序号1为只加入探针，序号2-16为加入了各金属离子的探针，括号内代表金属离子的浓度。
图7为实施例1制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针对常见的金属离子的响应情况，从图7可以看出，该探针对金属离子几乎没有响应，证明本探针对金属离子几乎无响应，在用于测试pH时，体系的金属离子几乎对其测试不造成影响。
图8为实施例2制得的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针对常见的金属离子的响应情况，从图8可以看出，该探针对金属离子几乎没有响应，证明该探针对金属离子几乎无响应，在用于测试pH时，体系的金属离子几乎对其测试不造成影响。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，其特征在于，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：
式(Ⅰ)中，X为-C(CH3)2-，Z为或-CH2CH2NH2，其中，R1和R2均为H原子，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I。
2.如权利要求1所述的近红外荧光探针，其特征在于，所述X为-C(CH3)2-，所述R1和所述R2均为H原子，所述R3和所述R4均为乙基，所述Y为I。
3.一种具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别提供化学结构式如式(Ⅱ)所示的化合物和第一化合物，所述第一化合物的结构式如(Ⅲ)或如式(Ⅳ)所示：
式(Ⅱ)中，X为-C(CH3)2-，R1和R2均为H原子，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I；式(Ⅳ)中，R'为C2的亚烷基；
(2)将式(Ⅱ)所示的化合物与所述第一化合物按照摩尔比为1:(3-6)的比例溶解在溶剂中，再加入缚酸剂，保护气体氛围下，在50-70℃下反应1-5h，提纯后得到具有极酸性pH响应的近红外荧光探针，所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针的化学结构式如式(Ⅰ)所示：
式(Ⅰ)中，X为-C(CH3)2-，Z为或-CH2CH2NH2，其中，R1和R2均为H原子，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述缚酸剂与所述化学结构式如式(Ⅱ)的化合物的摩尔比为(2-4):1。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述提纯的方法包括：反应结束后旋蒸除去溶剂，真空干燥12h，过硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇的混合溶液进行梯度洗脱以除去溶剂，得到所述具有极酸性pH响应的近红外荧光探针。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，当所述第一化合物的结构式如(Ⅳ)所示时，所述提纯还包括：
在所述进行梯度洗脱后，采用乙腈和乙二胺的混合溶剂来脱去Fmoc。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述化学结构式如式(Ⅱ)所示的化合物采用以下方法制得：
提供化学结构式如式(Ⅴ)所示的化合物：
式(Ⅴ)中，X为-C(CH3)2-，R1和R2均为H原子，R3和R4分别独立地选自C1-18烷基或苄基，Y为F、Cl、Br或I；
将化学式如(Ⅴ)所示的化合物和按摩尔比为1:(3-6)的比例溶解在第二溶剂中，保护气体氛围下，在60℃-80℃进行反应1-2h，提纯后制得化学式如式(Ⅱ)所示的化合物。
8.如权利要求1所述的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针或如权利要求3所述的方法制得到的具有极酸性pH响应的近红外荧光探针在制备肿瘤的早期检测、诊断、治疗或诊疗的药物中的应用。
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| CN102627869A (zh) * | 2012-03-17 | 2012-08-08 | 江南大学 | 近红外七甲川菁染料的制备方法及其在弱极性-极性混合溶剂中荧光光谱的测试中的应用 |
| CN103387830A (zh) * | 2013-07-30 | 2013-11-13 | 湘潭大学 | 一种铬离子比率型荧光探针及其制备方法和应用 |
| CN104592987A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-06 | 深圳先进技术研究院 | 一种具有pH响应的恢复型近红外荧光探针及其制备方法和应用 |
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2015
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