CN105494316B - 人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体及低温保存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，属于生殖医学领域，其包括依次连接的三节不同材质的管体，其中位于中间的管体由金属制成，使用时，人分裂期胚胎及囊胚位于该金属材质管体内，两端的管体形成密封，整个冷冻载体密闭性好同时冷冻速率快。同时，提供一种人分裂期胚胎及囊胚深低温保存的方法，该方法利用上述冷冻载体进行，能快速的实现人分裂期胚胎及囊胚的玻璃化冷冻。
Description
技术领域
本发明涉及生殖医学领域，且特别涉及一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体及低温保存方法。
背景技术
目前，如何构建理想的人类分裂期胚胎和囊胚冷冻保存体系，提高冻融分裂期胚胎和囊胚成功率是辅助生殖技术中提高活产率的重要课题之一。
玻璃化冷冻是指使细胞及其保护剂溶液以足够快的降温速度，形成一种高黏度的介于液态和固态之间、非晶体的、透明的玻璃化状态。玻璃化冷冻技术同慢速冷冻法相比，需要更快的冷冻降温速度，因此，对玻璃化冷冻载体提出很高的要求。
目前通用的玻璃化冷冻方法是采用开放式载体或封闭式载体进行，使用开放式载体可以使分裂期胚胎和囊胚直接与液氮接触，从而能够很好地实现冷冻和复苏过程中的迅速降温和复温的目的。但开放式载体使分裂期胚胎和囊胚直接与液氮接触，因而液氮中的病毒(包括乙肝病毒，丙肝病毒、朊病毒或人免疫缺陷病毒等)及其他病原微生物可能会感染分裂期胚胎和囊胚，对后代安全性带来巨大隐患。而封闭式玻璃化冷冻方法由于液氮和分裂期胚胎(囊胚)间有冷冻管壁相隔，阻碍了温度传递，其结果降低了冷冻速率，影响玻璃化冷冻效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，该冷冻载体既能实现人分裂期胚胎及囊胚的快速冻融，同时也能分隔人分裂期胚胎及囊胚与液氮，防止液氮中病原微生物污染人分裂期胚胎及囊胚。
本发明的另一目的在于提供一种人分裂期胚胎及囊胚深低温保存的方法，以提高人分裂期胚胎及囊胚的冻融成功率。
本发明是采用以下技术方案实现的：
一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，包括管体，所述管体包括依次连接的第一管体、第二管体和第三管体，所述第一管体远离第二管体的一端设置第一开口，所述第三管体远离第二管体的一端设置第二开口，所述第一开口设置有用于封堵所述第一开口的第一封堵装置，所述第二开口设置有用于封堵所述第二开口的第二封堵装置，所述第二管体由金属制成。
在本发明较佳实施例中，上述管体由三段不同的管体构成，在使用时，人分裂期胚胎及囊胚是保存于第二管体中，由于第二管体采用金属材料制成，其温度传导速率快，相较于使用普通的塑料制冷冻管，温度传导速率高出数倍。
第一管体和第三管体分别位于第二管体的两端，在将整个管体放入液氮环境中时，通过第一封堵装置和第二封堵装置将液氮与人分裂期胚胎及囊胚分隔，这样液氮不会与人分裂期胚胎及囊胚进行直接接触，也就杜绝了液氮中的病原微生物对人分裂期胚胎及囊胚的污染问题，防止对后代安全性带来隐患。
为了提高冷冻速率，第二管体优选采用热传导效率更高的金属制成。
进一步地，所述第一封堵装置包括封口棉塞，所述封口棉塞卡设于所述第一管体的内壁，所述封口棉塞位于所述第一管体的中部。
封口棉塞在与液态的液氮接触后，会发生膨胀并将第一管体封闭。
使用上述的冷冻载体，本发明同时提出一种人分裂期胚胎及囊胚低温保存的方法，其包括以下步骤：将所述分裂期胚胎及囊胚置于上述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体的所述第二管体中，分别利用所述第一封堵装置封堵所述第一管体的所述第一开口和利用所述第二封堵装置封堵所述第三管体的所述第二开口，将所述人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体置于液氮环境中。
将人分裂期胚胎及囊胚放入第二管体中后，通过第一封堵装置和第二封堵装置封闭第一开口和第二开口，实现整个冷冻载体与外界的隔绝，利用金属材质的第二管体进行热传导，使人分裂期胚胎及囊胚能被迅速冷冻，同时又不会与液氮接触，防止人分裂期胚胎及囊胚被污染。
本发明的有益效果是：(1)通过将冷冻管设置成分段式的结构，将人分裂期胚胎及囊胚置于中间的第二管体中进行保存，利用金属介质良好的热传导效果，实现人分裂期胚胎及囊胚的快速冷冻，避免人分裂期胚胎及囊胚上出现冰晶，造成不可逆损伤。
(2)通过第一管体和第三管体上的第一封堵装置和第二封堵装置将整个管体封闭，隔绝外界液氮，有效的防止了液氮中的病原微生物对人分裂期胚胎及囊胚进行污染，为后代带来安全隐患。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体的结构示意图；
图2是本发明实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体中第一管体的结构示意图；
图3是本发明实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体中第三管体的结构示意图。
图中标记分别为：
冷冻载体100；管体101；第一管体110；第一开口111；第一封堵装置112；第二管体120；第三管体130；第二开口131；第二封堵装置132。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
本实施例提供一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体100，图1是本实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体的结构示意图，冷冻载体100包括管体101，管体101包括依次连接的第一管体110、第二管体120和第三管体130，第一管体110、第二管体120和第三管体130是相互连通的。
第一管体110和第三管体130均使用麦管，麦管是通常用于封闭式冷冻法的冷冻用载体，其由聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(cylclohexylenedimethylene，PETG)制成。PETG塑料制品高度透明，抗冲击性能优异，较适宜成型厚壁透明制品。
图2是本实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体中第一管体的结构示意图，第一管体110远离第二管体120的一端设置第一开口111，第一开口111设置有用于封堵第一开口111的第一封堵装置112，第一封堵装置112采用封口棉塞，封口棉塞在遇有液体时，会发生膨胀并将第一管体110的管壁完全密封，密封性能好，可以在液氮环境下有效的隔绝液氮，防止液氮与人分裂期胚胎及囊胚接触造成污染。使用时，封口棉塞卡设于第一管体110的内壁，并且封口棉塞位于第一管体110的中部。第一管体110长为30mm，管壁厚为0.14mm。
第二管体120位于第一管体110和第三管体130之间，人分裂期胚胎及囊胚在冷冻时即放在第二管体120内，因此第二管体120采用热传导效率更高的金属来制成。
本实施例中，第二管体120是由银制成的，第二管体120的长为35mm，管壁厚为0.15mm。银的热传导速率为429Watt/metre·Kelvin(W/mK)，热传导速率快，效率高，适于作为需要快速升温或降温的介质使用。
第二管体120的内径和管壁厚度对于热传导的速率以及人分裂期胚胎及囊胚的冷冻速率也有着影响。管壁过薄不利于保存，而管壁过厚又会降低人分裂期胚胎及囊胚的冷冻速率。第二管体120的壁厚以0.1mm～0.2mm为宜，内径以1mm～2mm为宜。
在本实施例中，第二管体120的壁厚为0.15mm为宜，内径以1.88mm。
图3是本实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体中第三管体130的结构示意图，第三管体130和第一管体110的结构相同，均采用麦管。并且第三管体130远离第二管体120的一端设置第二开口131，第二开口131设置有用于封堵第二开口131的第二封堵装置132，第二封堵装置132由封口粉制成的，封口粉是通常应用于封闭式冷冻法中封堵麦管的常用药剂，在本实施例中，采用市售的封口粉对第三管体130进行密封。第三管体130长为30mm，管壁厚为0.14mm。
第一管体110和第三管体130的内径相同，两者的内径为1.6mm，第二管体120的内径略大于第一管体110和第三管体130，这样设置的好处在于保存于第二管体120内的人分裂期胚胎及囊胚不易在管体101内来回滑动。
利用上述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体100，本实施例同时提供一种人分裂期胚胎及囊胚低温保存的方法，将分裂期胚胎及囊胚置于人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体100的第二管体120中，分别利用第一封堵装置112封堵第一管体110的第一开口111和利用第二封堵装置132封堵第三管体130的第二开口131，然后将人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体100置于液氮环境中。此处的低温保存是指在液氮环境下进行的保存方法，相应的“低温”是指液氮对应的温度范围，为-196℃以下。
待人分裂期胚胎及囊胚玻璃化后进行保存。具体而言，本实施例中，使用封口棉塞封堵第一开口111，使用封口粉封堵第三管体130的第二开口131端封闭。
试验例
利用本实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体100进行玻璃化冷冻实验，并且与目前行业内的开放式载体以及封闭式载体进行实验对比，比较各实验中的冷冻速率以及验证人分裂期胚胎及囊胚是否受到感染。
试验过程如下：
实验组1：
使用本实施例提供的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，按照本实施例提供的低温保存方法进行，记录冷冻所需时间并测算冷冻速率。
实验组2：
使用市售封闭式麦管进行，具体的实验步骤参照《封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察》2010，50(15)中的实验步骤进行，记录冷冻所需时间并测算冷冻速率。
实验组3：
使用开放式的冷冻麦管(Open-pulled straw，OPS)进行，实验步骤参照《封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察》2010，50(15)中的实验步骤进行，记录冷冻所需时间并测算冷冻速率。
分别对玻璃化后的人早期胚胎进行复苏，并检验其受病原微生物污染情况。
试验结果见表1
表1 玻璃化冷冻实验数据表
由表1数据可以得知，本实施例提供的冷冻载体100的冷冻速率远高于封闭式冷冻载体，虽然冷冻速率比不上开放式载体的冷冻速率，但是在冷冻过程中，不会出现病原微生物污染情况，能有效防止病原微生物污染对胚胎发育造成影响，杜绝对后代产生的安全隐患。
并且由于整个实验过程总花费的时间并不太长，因此该冷冻载体100是作为未来玻璃化冷冻实验中极佳的选择。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (7)
1.一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，包括管体，所述管体包括依次连接的第一管体、第二管体和第三管体，所述第一管体远离第二管体的一端设置第一开口，所述第三管体远离第二管体的一端设置第二开口，所述第一开口设置有用于封堵所述第一开口的第一封堵装置，所述第二开口设置有用于封堵所述第二开口的第二封堵装置，所述第二管体由金属制成；所述第一封堵装置包括封口棉塞，所述封口棉塞卡设于所述第一管体的内壁，所述封口棉塞位于所述第一管体的中部，所述第二封堵装置由封口粉制成，所述第一管体为麦管，所述麦管由PETG材料制成。
2.根据权利要求1所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，所述第二管体由银制成。
3.根据权利要求1或2所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，所述第二管体的壁厚为0.1mm～0.2mm。
4.根据权利要求3所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，所述第二管体的壁厚为0.15mm。
5.根据权利要求1或2所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，所述第二管体的内径为1mm～2mm。
6.根据权利要求5所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体，其特征在于，所述第一管体和所述第三管体的内径相同，所述第三管体的内径为1.5mm～1.8mm。
7.一种人分裂期胚胎及囊胚封闭式低温保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述分裂期胚胎及囊胚置于如权利要求1至6任一项所述的人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体的所述第二管体中，分别利用所述第一封堵装置封堵所述第一管体的所述第一开口和利用所述第二封堵装置封堵所述第三管体的所述第二开口，将所述人分裂期胚胎及囊胚封闭式冷冻载体置于液氮环境中。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998048622A1 (en) * | 1997-04-30 | 1998-11-05 | Haubrich Mark A | Suspended sperm composition and method of artificial insemination |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998048622A1 (en) * | 1997-04-30 | 1998-11-05 | Haubrich Mark A | Suspended sperm composition and method of artificial insemination |
| CN201222947Y (zh) * | 2008-07-15 | 2009-04-22 | 四川大学华西第二医院 | 针刺式组织片玻璃化冷冻载体 |
| CN202588147U (zh) * | 2012-05-30 | 2012-12-12 | 河南省农业科学院 | 哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体 |
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