CN105483280A - 基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其分型方法 - Google Patents

基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其分型方法 Download PDF

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Abstract

基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其分型方法，涉及单核苷酸多态性。试剂盒包括实时荧光定量PCR试剂、阳性对照及阴性对照；所述VKORC1(1173C>T)为NCBI所提供人16号染色体VKORC1基因中的SNP位点。分型方法：1)采用常规方法提取EDTA抗凝全血样本中的DNA；2)采用所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将DNA进行实时荧光定量PCR扩增；3)根据检测到的荧光信号对人VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)进行分型。

Description

基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其分型方法
技术领域
本发明涉及单核苷酸多态性(SNP)，尤其是涉及一种基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其分型方法。
背景技术
单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。SNPs在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。作为第三代遗传标志，SNP与人体许多表型差异、药物易感性与疾病易感性密切相关。SNP在基因组中的大量存在，使其成为一个强有力的工具，在疾病定位与克隆、药物的设计和测试以及生物学的基础研究中起了非常重要的作用。
个体化诊断治疗是未来医学发展的大方向。将个体化的靶点定位于某个基因，甚至是单个核苷酸，发现疾病的遗传标志物，将有助于根据每个患者的不同遗传背景来开展疾病预防、诊断和治疗。基因的SNP是形成个体间差异的重要遗传学基础,通过SNP与疾病和药物治疗的关联性分析，使得医生不仅可以通过所检测出的SNP预测、确定与疾病有关的基因，同时也将能够事先把握患者个体对于某种药物的反应特点，并根据这一特点选择治疗效果最好，不良反应等危险性最小的药物对患者进行精准治疗。
SNP在疾病的预防、诊断、治疗及个体化医学发展中扮演着重要的角色，因此准确快速的进行SNP检测分型具有重大的意义。
目前，SNP分型的方法主要有直接测序技术法、限制性片段长度多态性技术(RFLP)、Tagman荧光探针法、扩增阻滞突变系统(ARMS)、高分辨熔解曲线分析法(HRM)等。其中，直接测序法是目前最直观，准确性相对而言最高的SNP分型方法，但其步骤多而分散，成本较高，工作量大，周期长，价格昂贵，不适合大样本多位点检测；限制性片段长度多态性技术(RFLP)作为一种最早的DNA标记技术，对仪器要求低，只需要一台PCR仪以及电泳仪器即可进行实验，但其实验操作繁琐，检测周期长，不适合大样本检测；Tagman荧光探针法准确度较好，但其设计合成程序复杂，并且不适合多位点少量样本的分型，尤其是频率偏低的位点；扩增阻滞突变系统(ARMS法)快速、简便，但是不能闭管操作，对基因多态性分析难以实现高通量、自动化；高分辨熔解曲线分析法(HRM)具有简单、快速等优点，但该方法特异性不足，仪器选择少。
AllGlo探针作为新一代的荧光探针，在具备TaqMan-MGB探针优点的基础上，大大提高信噪比，减少背景荧光信号。目前，AllGlo探针已经成功应用于检测疱疹病毒、乙型肝炎病毒基因突变(Feng,Z.L.Yu,X.Y.Lu,Z.M.Geng,D.Y.Zhang,L.Chen,S.J.RapiddetectionofthehepatitisBvirusYMDDmutantusingAllGloTMprobes[J].ClinChimActa,2011，412(11-12)：1018-1021)、侵袭性曲霉菌病(Wu,D.S.Shen,J.Z.Zhou,X.Q.Shen,S.F.Wu,X.M.TheestablishmentandevaluationofdiagnosticaccuracyofAllGlo(TM)probe-basedtechniquesforinvasiveaspergillosis[J].ZhonghuaNeiKeZaZhi,2010,49(2):142-145)。
华法林是一类抗维生素K类口服抗凝药，临床上被广泛用于深静脉血栓形成、肺栓塞、房颤等抗凝治疗，其作用机制是通过抑制维生素K氧化还原酶复合体1(VKORC1)起作用。个体间华法林有效剂量的敏感性差异是导致治疗过程中出血和血栓形成的重要因素。研究发现VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)分型为TT的病人仅需低剂量的华法林就能保持安全有效的抗凝效果(D’AndreaG,D’AmbrosioRL,DiPernaP,ChettaPM,R.SantacroceR,BrancaccioV,etal.ApolymorphismintheVKORC1geneisassociatedwithaninterindividualvariabilityinthedose-anticoagulanteffectofwarfarin.Blood.2005；105:645–9)。有报道显示，在中国人群中VKORC1(1173C>T)也是影响华法林敏感性的重要因素(MiaoL,YangJ,HuangC,ShenZ.Contributionofage,bodyweight,andCYP2C9andVKORC1genotypetotheanticoagulantresponsetowarfarin:proposalforanewdosingregimeninChinesepatients.EurJClinPharmacol.2007；63:1135–1141)，因此在用药前对患者进行VKORC1(1173C>T)的检测分型，能够为患者提供合适的治疗剂量，避免给药剂量不足或过度用药，为临床治疗用药提供重要的参考依据。在个体化诊断与治疗快速发展的背景下,VKORC1(1173C>T)与华法林个体剂量差异的紧密联系使其成为了一个极具医学潜力的SNP位点，因此急需一种更快速高效的SNP分型方法来满足精准医学的发展。
发明内容
本发明的目的之一在于针对现有检测SNP方法中使用的试剂盒和检测方法存在的上述缺陷及VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)，提供基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒。
本发明的目的之二在于针对VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)提供基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型方法。
所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，包括实时荧光定量PCR试剂、阳性对照及阴性对照；
所述VKORC1(1173C>T)为美国国家生物技术信息中心(NCBI)所提供人16号染色体VKORC1基因中的SNP位点。
所述实时荧光定量PCR试剂包括以下组份：10×Taq缓冲液、10mmol的MgCl2、5u/μL的TaqHotstartDNA聚合酶、10mmoldNTPs混合液、50×LowROX、100mL无核酶水、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异正向引物、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异反向引物和AllGlo探针；所述10×Taq缓冲液包括100mmolTris-HCl和500mmolKCl。
所述VKORC1(1173C>T)的特异正向引物的核苷酸序列为：
SEQIDNO.1：5＇-AAAGGTGATTTCCAAGAAGCCA-3＇；
所述VKORC1(1173C>T)的特异反向引物的核苷酸序列为：
SEQIDNO.2：5＇-CAGTGACATGGAATCCTGACGT-3＇。
所述AllGlo探针为VKORC1(1173C>T)的特异探针，其核苷酸序列为：
SEQIDNO.3：VKORC1(1173C>T)-A:MAR-AGTCCAAGAGTCGATG-MAR；
SEQIDNO.4：VKORC1(1173C>T)-G:JUP-AGTCCAAGGGTCGAT-JUP。
所述阳性对照包括：阳性纯合对照品1、阳性纯合对照品2、阳性杂合对照品。所述阳性纯合对照品1为VKORC1(1173C>T)分型为AA的DNA样品，所述阳性纯合对照品2为VKORC1(1173C>T)分型为GG的DNA样品，所述阳性杂合对照品为VKORC1(1173C>T)分型AG为的DNA样品。
所述阴性对照为1mL的无核酶水。
所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型方法，其步骤如下：
1)采用常规方法提取EDTA抗凝全血样本中的DNA；
2)采用所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将DNA进行实时荧光定量PCR扩增；
3)根据检测到的荧光信号对人VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)进行分型。
所述AllGlo探针可采用美国A1leLogicBiosciencesCorporation公司的荧光定量探针，它拥有普通Taqman，Taqman-MGB及分子信标(molecularbeacon)探针所有优点，克服了目前这几种探针的最大弊端，它打破了传统Taqman一端报告基团一端淬灭基团的限制，利用了美国A1leLogicBiosciencesCorporation公司研制的几种常见波长的特制荧光染料，标记在寡核苷酸上面互为报告基团和粹灭基团，而且上面含有特殊的可以提高Tm值(退火温度)的化学基团，提高探针特异性，杂交特异性大大提高，在杂交水解之后两端标记的染料又全部变为报告基团，提高荧光增量。
所述AllGlo探针具有以下优势：
①提高Tm值(可达10℃以上)，探针更短可以达到15～16个碱基，可以适用A,T含量比较高的序列设计探针；
②加大了多重荧光定量的选择，因为每种染料即是报告基团又是淬灭基团，打破传统Taqman探针因波长原因标记选择困难，不受淬灭基团波长限制；
③大大提高信噪比，无背景信号，空间距离近，更好的淬灭效果；
④成本较低，价格仅相当于Taqman-MGB探针的一半，具有MGB探针所有优势。
本发明采用了AllGlo探针技术，设计了特异性引物和相应的AllGlo探针，探针分别标记2种特殊荧光基团(MAR、JUP),并对该技术反应条件进行优化，建立了一种AllGlo探针SNP检测分型方法，应用前景广阔。
本发明的有益效果如下：
本发明提供了一种基于AllGlo探针的SNP检测分型试剂盒和检测方法，其特异性和敏感性高，可快速准确进行SNP分型，与现有的常见技术相比具有以下优势：
1.与直接测序法相比，AllGlo探针在保持高特异性和敏感性的前提下，检测价格比直接测序法更低廉，并且过程更简易耗时更短。
2.与taqman-MGB探针相比，AllGlo探针采用相同的荧光基团，互为报告基团和淬灭基团，一方面释放的荧光信号更强，另一方面本底信号更低；而且合成程序简单，价格仅相当于Taqman-MGB的一半。
3.与限制性片段长度多态性技术(RFLP)相比，基于AllGlo探针的SNP分型方法将反应时间大大缩短，通量更大，并且敏感性与特异性要明显高于基于限制性酶切位点的SNP分型方法。
4.与扩增阻滞突变系统(ARMS)相比，基于AllGlo探针SNP分型方法检测灵敏度更强，可以实现“闭管操作”，有效防止外界污染，具有良好的特异性和准确性。
5.与高分辨熔解曲线分析法(HRM)相比，基于AllGlo探针SNP分型方法特异性更高，并且多种仪器可应用AllGlo探针进行SNP检测分型，可用仪器选择多，不需要特定技术人员操作，应用范围更广阔。
6.本发明建立了基于AllGlo探针进行VKORC1基因多态性检测的分型方法，适合人群进行个体化的SNP检测分型，推动了SNP在临床药物研究及个体化用药的发展。
具体实施方式
实施例1
本发明基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒包括以下组份：
实时荧光定量PCR试剂、阳性对照及阴性对照。
①实时荧光定量PCR试剂包括以下组份：10×Taq缓冲液(10×Taq缓冲液包括100mmolTris-HCl和500mmolKCl)、10mmol的MgCl2、5u/μL的TaqHotstartDNA聚合酶、10mmoldNTPs混合液、50×LowROX、100mL无核酶水、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异正向引物、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异反向引物和AllGlo探针。
②阳性对照包括：阳性纯合对照品1、阳性纯合对照品2、阳性杂合对照品。所述阳性纯合对照品1为VKORC1(1173C>T)分型为AA的DNA样品，所述阳性纯合对照品2为VKORC1(1173C>T)分型为GG的DNA样品，所述阳性杂合对照品为VKORC1(1173C>T)分型为AG的DNA样品。
③阴性对照为1mL的无核酶水。
实施例2
外周血VKORC1(1173C>T)的检测分型，包括以下步骤：
1.收集EDTA抗凝外周血：
抽取新鲜血液标本2mL装于EDTA抗凝管并分装多管，每管分装400～500μL，取200μL用于DNA提取，其余全血标本置于-80℃冻存。
2.提取DNA：
采用天根生物科技有限公司的生产的血液基因组DNA提取试剂盒(DP348)，按照操作说明书进行样本(全血)DNA提取，200μLEDTA抗凝全血按照说明书操作进行，最后用50μL的洗脱缓冲液TB溶解DNA，于核酸分光光度仪器NanoDrop2000上分别测定浓度和纯度，取纯度A260/A280比值在1.7～1.9之间，取浓度10～50ng/μL的已提取的DNA用于SNP分型检测，其余的DNA均于-80℃冻存。
3.实时荧光定量PCR扩增：
3.1将荧光定量PCR的各组分置于室温溶解，混匀后置于冰上。
3.2配制PCR反应混合液如表1。
表1
3.3于8联管中分装配制好PCR反应混合液，每管加入1μL的DNA，充分混匀，整个过程在冰上进行，避免气泡的产生。每次实验设置一个阴性对照，设置一个阳性纯合对照品1，一个阳性纯合对照品2和一个阳性杂合对照品；
3.4检测在实时荧光定量PCR仪器上进行，可使用ABI7300，7500(美国AppliedBiosystems公司)等多种仪器。
3.5设置荧光定量PCR反应条件如表2。
表2
4.结果分析与处理：应用ABI仪器自带软件进行结果分析。根据对照扩增结果，分型产生三种基因型：
第一种基因型：AA，与阳性纯合对照品1在同一轴上；
第二种基因型：AG，与阳性杂合对照品在同一轴上；
第三种基因型：GG，与阳性纯合对照品2在同一轴上。
实施例3.组织样本SNP检测分型
1.组织样本处理：
组织(脾组织用量应少10mg)应打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(～11200×g)离心1min，倒尽上清，加200μL缓冲液GA(天根DNA提取试剂盒DP304)，震荡至彻底悬浮；
2.组织样本DNA提取和富集
采用天根生物科技有限公司的生产的DNA提取试剂盒(DP304),按照操作说明书进行组织样本的DNA提取，最后用50μL的洗脱缓冲液TE溶解DNA，于核酸分光光度仪器NanoDrop2000上分别测定浓度和纯度；
3.组织样本的SNP检测分型。
后续步骤参照实施例2的步骤3～4。
可应用范围：
基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒及其检测方法可应用于人类组织样本和血细胞VKORC1(1173C>T)的检测分型，以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。

Claims (8)

1.基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于包括实时荧光定量PCR试剂、阳性对照及阴性对照；
所述VKORC1(1173C>T)为美国国家生物技术信息中心所提供人16号染色体VKORC1基因中的SNP位点。
2.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述实时荧光定量PCR试剂包括以下组份：10×Taq缓冲液、10mmol的MgCl2、5u/μL的TaqHotstartDNA聚合酶、10mmoldNTPs混合液、50×LowROX、100mL无核酶水、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异正向引物、10μmol/LVKORC1(1173C>T)的特异反向引物和AllGlo探针；所述10×Taq缓冲液包括100mmolTris-HCl和500mmolKCl。
3.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述VKORC1(1173C>T)的特异正向引物的核苷酸序列为：
SEQIDNO.1：5＇-AAAGGTGATTTCCAAGAAGCCA-3＇；
所述VKORC1(1173C>T)的特异反向引物的核苷酸序列为：
SEQIDNO.2：5＇-CAGTGACATGGAATCCTGACGT-3＇。
4.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述AllGlo探针为VKORC1(1173C>T)的特异探针，其核苷酸序列为：
SEQIDNO.3：VKORC1(1173C>T)-A:MAR-AGTCCAAGAGTCGATG-MAR；
SEQIDNO.4：VKORC1(1173C>T)-G:JUP-AGTCCAAGGGTCGAT-JUP。
5.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述阳性对照包括：阳性纯合对照品1、阳性纯合对照品2、阳性杂合对照品；所述阳性纯合对照品1为VKORC1(1173C>T)分型为AA的DNA样品，所述阳性纯合对照品2为VKORC1(1173C>T)分型为GG的DNA样品，所述阳性杂合对照品为VKORC1(1173C>T)分型AG为的DNA样品。
6.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述阴性对照为1mL的无核酶水。
7.基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型方法，其特征在于其步骤如下：
1)采用常规方法提取EDTA抗凝全血样本中的DNA；
2)采用如权利要求1～6中任一所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒提供的实时荧光定量PCR试剂将DNA进行实时荧光定量PCR扩增；
3)根据检测到的荧光信号对人VKORC1基因的单核苷酸多态性位点VKORC1(1173C>T)进行分型。
8.如权利要求1所述基于AllGlo探针的VKORC1基因多态性检测分型试剂盒，其特征在于所述AllGlo探针采用美国A1leLogicBiosciencesCorporation公司的荧光定量探针。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101824466A (zh) * 2009-12-29 2010-09-08 广州益善生物技术有限公司 一种cyp2c9和vkorc1基因snp检测特异性引物、液相芯片及方法
CN101928759A (zh) * 2009-06-26 2010-12-29 上海主健生物工程有限公司 华法林抗凝血药物疗效检测
CN102690888A (zh) * 2012-06-15 2012-09-26 向华 用于检测与华法林用药剂量相关的基因snp的引物系统及其用途
CN103074438A (zh) * 2013-01-25 2013-05-01 海尔施生物医药股份有限公司 一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒及其检测方法
CN103146692A (zh) * 2013-02-21 2013-06-12 丁虎 一种用于快速检测华法林个体化用药相关基因snp位点的试剂盒及其检测方法
CN104031978A (zh) * 2013-03-06 2014-09-10 北京宏微特斯生物科技有限公司 一种基于arms荧光定量pcr检测基因突变的试剂盒和方法
CN104293920A (zh) * 2014-09-17 2015-01-21 武汉康录生物技术有限公司 一种用于快速检测人类vkorc1和cyp2c9基因多态性的试剂盒及其使用方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101928759A (zh) * 2009-06-26 2010-12-29 上海主健生物工程有限公司 华法林抗凝血药物疗效检测
CN101824466A (zh) * 2009-12-29 2010-09-08 广州益善生物技术有限公司 一种cyp2c9和vkorc1基因snp检测特异性引物、液相芯片及方法
CN102690888A (zh) * 2012-06-15 2012-09-26 向华 用于检测与华法林用药剂量相关的基因snp的引物系统及其用途
CN103074438A (zh) * 2013-01-25 2013-05-01 海尔施生物医药股份有限公司 一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒及其检测方法
CN103146692A (zh) * 2013-02-21 2013-06-12 丁虎 一种用于快速检测华法林个体化用药相关基因snp位点的试剂盒及其检测方法
CN104031978A (zh) * 2013-03-06 2014-09-10 北京宏微特斯生物科技有限公司 一种基于arms荧光定量pcr检测基因突变的试剂盒和方法
CN104293920A (zh) * 2014-09-17 2015-01-21 武汉康录生物技术有限公司 一种用于快速检测人类vkorc1和cyp2c9基因多态性的试剂盒及其使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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潘云燕: "基于AllgloTM探针检测IL-1核苷酸多态性检测方法的建立", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

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