CN105481861B - 一种血小板聚集抑制剂及其制备方法和用途 - Google Patents
一种血小板聚集抑制剂及其制备方法和用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物，其中：R1为取代或未取代的低级烷基；R2为苯基或由一个或多个卤素原子取代的苯基；R3为O(CH2)nR4，其中n为1～6的整数，R4为OC(O)R5或OP(O)(OH)2，其中R5为取代或未取代的低级烷基或R6NH2，其中R6为取代或未取代的低级烷基。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种血小板聚集抑制剂及其制备方法和用途。
背景技术
对于急性冠状动脉综合征(ACS)和/或接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者来说，抗血小板治疗在预防动脉粥样硬化并发症中扮演了重要的角色。
替格瑞洛是由美国阿斯利康(AstraZeneca)公司研发的一种新型的、具有选择性的可逆的P2Y12腺苷二磷酸受体(ADP)拮抗剂。该药不需要代谢激活，对二磷酸腺苷(ADP)引起的血小板聚集有明显的抑制作用，且口服后起效迅速，能有效改善急性冠脉综合征患者的症状。与噻吩并吡啶类药物不同，替格瑞洛对P2Y12受体是可逆抑制剂，所以对于那些需在先期进行抗凝治疗后再行手术的病人尤为适用。
替格瑞洛的结构式如下：
然而，该化合物抗血小板凝聚的整体治疗效果仍然不能令人满意，其中包括口服剂量及每日的服用次数。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种具有抗血小板聚集的新型化合物、所述化合物的制备方法、包含所述化合物的药物组合物、以及所述化合物在制备抗血小板聚集的药物中的用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的。
一方面，本发明提供一种式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物，
其中：
R1为取代或未取代的低级烷基；
R2为苯基或由一个或多个卤素原子取代的苯基；
R3为O(CH2)nR4，其中n为1～6的整数，R4为OC(O)R5或OP(O)(OH)2，其中R5为取代或未取代的低级烷基或R6NH2，其中R6为取代或未取代的低级烷基。
优选地，在式(I)中，R1为C3-C5的烷基，优选为丙基或异丙基。
优选地，在式(I)中，R2为由一个或多个卤素原子取代的苯基；优选地，所述卤素原子为F。
优选地，在式(I)中，R2为由两个邻位的卤素原子取代的苯基；优选地，所述卤素原子为F。
优选地，在式(I)中，n为2～4的整数，优选为2。
优选地，在式(I)中，R5为C3-C5的烷基，优选为丙基、异丙基、丁基、异丁基，更优选为异丙基。
优选地，在式(I)中，R6为C3-C5的烷基，优选为丙基、异丙基、丁基、异丁基，更优选为异丁基。
优选地，所述化合物如式(Ia)所示：
其中，R2和R3的定义如前所述；
优选地，所述化合物如式(Ib)所示：
其中，R1和R3的定义如前所述。
在一个具体的实施方案中，所述化合物的结构式如下：
另一方面，本发明提供一种式(I)所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物的制备方法，所述制备方法包括：
(1)使式(II)所示化合物与R5C(O)X或P(O)(OR7)3进行反应形成式(III)所示的化合物，
在式(II)和式(III)中，L为氨基保护基，优选为Boc；R1、R2、R3和n的定义如前所述；在R5C(O)X中，X为OH或卤素，R5的定义如前所述，且当R5为R6NH2时，氨基应先被例如Boc保护，然后再用于反应，R6的定义如前所述；在P(O)(OR7)3中，R7为取代或未取代的低级烷基，例如甲基；以及
(2)脱去式(III)上的氨基保护基团，例如Boc。
优选地，在步骤(1)中，式(II)通过如下步骤来制备：
(1)使式(IV)所示的化合物与2,2-二甲氧基丙烷进行反应形成式(V)所示的化合物，
在式(IV)和式(V)中，R1、R2和n的定义如前所述；以及
(2)使式(V)的化合物与氨基保护剂，例如Boc2O反应形成式(II)所示的化合物。
又一方面，本发明提供上述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物在制备抗血小板聚集的药物中的用途；优选地，所述血小板聚集是由二磷酸腺苷(ADP)引起的。
再一方面，本发明提供上述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物在制备治疗、预防或延缓急性冠脉综合征的药物中的用途，其中，所述急性冠脉综合征包括不稳定性心绞痛、非ST段抬高心肌梗死或ST段抬高心肌梗死。
还一方面，本发明提供一种药物组合物，该药物组合物包含上述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型体、对映体或外消旋混合物，以及药学上可接受的辅料。
优选地，所述药物组合物为片剂、栓剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小针、注射用冻干粉针或大输液；
优选地，所述药学上可接受的辅料包括下述的一种或多种：稀释剂、增溶剂、崩解剂、悬浮剂、润滑剂、粘合剂、填充剂、矫味剂、甜味剂、抗氧化剂、表面活性剂、防腐剂、包裹剂、和色素。
与现有的替格瑞洛相比，本发明的化合物，尤其是化合物B的抗血小板凝聚效果更好。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例：
图1本发明的化合物的血小板凝聚率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均可自常规生化试剂商店或药品经营企业购买得到。
实施例1：本发明的化合物A的制备
本发明的化合物A的具体制备方法如下：
步骤1：
在氮气惰性气氛下，向50mL清洗过的三颈圆底烧瓶中放置(1S,2S,3R,5S)-3-(7-[[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-5-(2-羟基乙氧基)环戊烷-1,2-二醇(2g，3.79mmol，1.00当量，99％)和4-甲基苯磺酸(20mg，0.12mmol，0.03当量，99％)的丙酮溶液(50mL)，然后在室温搅拌下逐滴加入2,2-二甲氧基丙烷(800mg，7.68mmol，2.03当量)。形成的溶液在30℃下搅拌12小时。以碳酸氢钠将该溶液的pH值调节至7。形成的混合物过滤，滤液在真空下浓缩。残渣以硅胶色谱柱进行纯化，以乙酸乙酯：石油醚(1：50～1：3)进行洗脱，得到2g(93％)2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基-1-醇白色油状物。
步骤2：
在氮气惰性气氛下，向250mL清洗过的三颈圆底烧瓶中放置2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基-1-醇(2g，3.52mmol，1.00当量，99％)，三乙胺(700mg，6.85mmol，1.95当量，99％)，N,N-二甲基吡啶-4-胺(20mg，0.16mmol，0.05当量，99％)的二氯甲烷溶液(120mL)，然后在搅拌下逐滴加入二叔丁基二碳酸酯(780mg,3.54mmol,1.01当量)的二氯甲烷溶液(20mL)。生成的溶液在-5～0℃下搅拌8小时，添加250mL的水/冰使反应终止，并且以100mL二氯甲烷萃取3次。以100mL浓盐酸洗涤合并的有机层一次，以无水硫酸钠干燥合并的有机层，且在真空下浓缩。在硅胶柱上纯化残渣，以乙酸乙酯：石油醚(1：50～1：2)洗脱，获得600mg(25％)叔丁基N-[3-[(3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-羟基乙氧基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-7-基]-N-[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基甲酸酯的白色固体。
步骤3：
在氮气惰性气氛下，向100mL清洗过的二颈圆底烧瓶中放置叔丁基N-[3-[(3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-羟基乙氧基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-7-基]-N-[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基甲酸酯(300mg，0.45mmol，1.00当量，99％)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)(174mg,0.90mmol,2.01当量,99％)、4-二甲基氨基吡啶(45mg)和(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-甲基丁酸(148mg，0.67mmol，1.50当量)的二氯甲烷溶液(50mL)。形成的溶液在10～15℃下搅拌3小时，以50mL的水使反应终止，以50mL二氯甲烷萃取3次。以50mL浓盐水洗涤合并的有机层1次，并且在真空下浓缩。残渣在硅胶柱上纯化，以PE：EA(50：1～3：1)洗脱，得到150mg(38％)的(2S)-2-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-3-甲基2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基丁酸酯的黄色固体。
步骤4：
向50mL圆底烧瓶中放入(2S)-2-[[(叔丁基)羰基]氨基]-3-甲基2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基丁酸酯150mg，0.17mmol，1.00当量，97％)和2,2,2-三氟乙醛(2mL,99％)的二氯甲烷溶液(20mL)。形成的溶液在10～15℃下搅拌10小时，在真空下浓缩。粗产品(150mg)由通过制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)纯化，色谱条件如下：色谱柱：SunFire Prep C18OBD Column，5um，19*150mm；流动相：含有0.05％TFA和CH3CN(在8分钟内，CH3CN由24.0％升高至38.0％，然后在3分钟内，再升高至45.0％，接着在3分钟内，再升高至100.0％，在1分钟内，下降至24.0％)的水；检测器：Waters 2489 254&220nm，得到50mg的产品。残渣溶解在20mL DCM中。以10mL碳酸氢钠饱和溶液将该溶液的pH值调节至7～8。形成的溶液以30mL二氯甲烷萃取3次。在真空下浓缩合并的有机层，得到25.1mg(23％)的2-[[(1S,2S,3S,4R)-4-(7-[[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,3-二羟基环戊基]氧基]乙基(2S)-2-氨基-3-甲基丁酸酯白色固体。
LC-MS-PH-PLD-1101-MW1301-0(ES,m/z):[M+H]+C28H37F2N7O5S622
H-NMR-PH-PLD-1101-MW1301-0(400 MHz,CD3OD,ppm):7.18-7.2(2H,m),7.10(1H,s),5.12-5.14(1H,m),4.78-4.88(1H,m),4.23-4.26(2H,m),4.13-4.15(1H,m),3.91-3.94(1H,m),3.76-3.80(2H,m),3.07-3.15(2H,m),2.96-3.07(1H,m),2.76-2.79(1H,m),2.58-2.61(1H,m),2.15-2.24(2H,m),1.30-1.67(6H,m),1.16-1.18(6H,m),0.92-0.96(3H,m).
实施例2：本发明的化合物B的制备
本发明的化合物B的具体制备方法如下：
步骤1：
在氮气惰性气氛下，向100mL清洗过的三颈圆底烧瓶中放置叔丁基N-[3-[(3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-羟基乙氧基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-7-基]-N-[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基甲酸酯(110mg，0.16mmol，1.00当量，99％)和三乙胺(Et3N)(35mg,0.34mmol,2.08当量，99％)的二氯甲烷(DCM)溶液(20mL)，然后在搅拌下逐滴加入2-甲基丁酰氯(28mg，0.26mmol，1.58当量)。生成的溶液在0℃下搅拌1.5h，添加50mL的水/冰使反应终止，并且以50mL二氯甲烷萃取3次。以无水硫酸钠干燥合并的有机层，且在真空下浓缩。在硅胶柱上纯化残渣，以乙酸乙酯：石油醚(1：50～1：5)洗脱，获得80mg(66％)2-甲基2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基丙酸酯的黄色油状物。
步骤2：
向50mL的圆底烧瓶中放置2-甲基2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙基丙酸酯(80mg，0.11mmol，1.00当量，99％)和2,2,2-三氟乙醛(2mL，99％)的二氯甲烷(DCM)溶液(20mL)。形成的溶液在10～15℃下搅拌16小时，在真空下浓缩。通过制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)纯化粗产品(200mg)，色谱条件如下：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD Column，5um，19*150mm；流动相：含有0.05％TFA和CH3CN(在7分钟内，CH3CN由70.0％升高至79.0％，然后在3分钟内，再升高至100.0％，在1分钟内，下降至70.0％)的水；检测器：Waters 2489 254&220nm，得到60mg的产品。残渣溶解在20mL DCM中。以10mL碳酸氢钠饱和溶液将该溶液的pH值调节至7～8。形成的溶液以20mL二氯甲烷萃取3次。在真空下浓缩合并的有机层，获得26.7mg(41％)的2-甲基2-[[(1S,2S,3S,4R)-4-(7-[[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,3-二羟基环戊基]氧基]乙基丙酸酯的白色固体。
LC-MS(ES,m/z):[M+H]+593
H-NMR(400MHz,CDCl3,ppm):d7.02-7.16(2H,m),6.79(1H,s),5.83(1H,s),4.89-4.93(1H,m),4.65-4.67(1H,m),4.22-4.27(3H,m),4.01-4.04(1H,m),3.76-3.78(2H,m),2.97-3.14(4H,m),2.55-2.60(2H,m),2.18(1H,m),1.66-1.71(3H,m),1.27-1.45(4H,m),1.16-1.18(6H,m),0.90-0.99(3H,m).
实施例3：本发明的化合物C的制备
本发明的化合物C的具体制备方法如下：
步骤1：
在氮气惰性气氛下，向清洗过的10mL的二颈圆底烧瓶中放入叔丁基N-[3-[(3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-羟基乙氧基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-7-基]-N-[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基甲酸酯(300mg，0.45mmol，1.00当量，99％)的磷酸三甲酯溶液(3mL)，然后逐滴加入三氯氧磷(105mg，0.68mmol，1.51当量，99％)。形成的溶液在10～15℃下搅拌16小时，添加50mL的水/冰使反应终止，以50mL乙酸乙酯萃取3次。在真空下浓缩合并的有机层，获得200mg(48％)的(2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙氧基)磷酸黄色油状物。
步骤2：
向50mL的圆底烧瓶中放入(2-[[(3aR,4S,6R,6aS)-6-(7-[[(叔丁氧基)羰基][(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,2-二甲基-六氢环戊并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基]氧基]乙氧基)磷酸(200mg，0.25mmol，1.00当量，80％)和2,2,2-三氟乙醛(4mL，99％)的二氯甲烷溶液(20mL)。形成的溶液在10～15℃下搅拌3天，在真空下浓缩。粗产品(150mg)由通过制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)纯化，色谱条件如下：色谱柱：SunFire Prep C18 OBD Column，5um，19*150mm；流动相：含有50mL NH4HCO3和CH3CN(在7分钟内，CH3CN由28.0％升高至44.0％，然后在2分钟内，再升高至100.0％，在1分钟内，下降至28.0％)的水；检测器：Waters 2489 254&220nm，得到21.4mg(14％)的(2-[[(1S,2S,3S,4R)-4-(7-[[(2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙基]氨基]-5-(丙基巯基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基)-2,3-二羟基环戊基]氧基]乙氧基)磷酸白色固体。
LC-MS-PH-PLD-1101-MW1303-0(ES,m/z):[M+H]+603
H-NMR-PH-PLD-1101-MW1303-0(400MHz,CD3OD,ppm):6.98-7.12(3H,m),4.99-5.01(1H,m),4.63-4.67(1H,m),4.06-4.07(1H,m),3.85-3.93(3H,m),3.65-3.67(2H,m),2.96-3.03(2H,m),2.84(1H,m),2.65-2.68(1H,m),2.04-2.14(2H,m),1.50-1.55(2H,m),1.27-1.39(2H,m),0.81-0.85(3H,m).
实施例4：大鼠体内药代动力学试验
本实施例检测了本发明的化合物A、化合物B和化合物C以及已知化合物替格瑞洛的体内药代动力学。
具体而言，给大鼠口服或静脉注射化合物A、化合物B和化合物C以及已知化合物替格瑞洛，评价本发明的化合物与替格瑞洛在大鼠体内的药代动力学特征，考察本发明的化合物体内转化成替格瑞洛的转化情况，并通过在一定时间测定大鼠体内的替格瑞洛的血药浓度，比较本发明的化合物与替格瑞洛的生物利用度。
实验动物为雄性SD大鼠，6至8周龄，体重190-215克，购自北京维利通华实验动物技术有限公司。基于SD大鼠体重随机分成4组，每组3只动物。各组大鼠的给药化合物制剂、给药剂量、给药途径以及检测时间点等见表1。
表1.药代动力学试验情况
在药代动力学试验前，将SD大鼠禁食16小时。然后按照表1中所示经静脉或口服单个剂量的化合物或空白溶液。采取颈静脉穿刺的方式在给药后定时收集血液200μL。其中对于经静脉给药的动物组，在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时收集血液；对于口服给药的动物组，在给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时收集血液。将血样收集于具有EDTA的样品管中，立即在4℃下以4000rpm离心血样5分钟，然后将血浆转移到另一个样品管中，储存于-20摄氏度。
对样品进行药代动力学检验，采用的方法和仪器如下：
HPLC：Shimadzu(DGV-20A3,Serial NO:SSI-3-0536；LC-20AD Serial NO:L20104551674 USB和L20104551673 USB；),CTC Analytics HTC PAL System(Serial NO:4353)；
MS：AB API4000 Q Trap LC/MS/MS instrument(Serial NO.AR19020706)
柱子：Phenomenex Luna 5μC18(2.0×50mm)
流动相：95％乙腈(0.1％甲酸)和5％乙腈(0.1％甲酸)
定量方法：内标法
化合物A、化合物B和化合物C以及已知化合物替格瑞洛的药代动力学参数的比较结果见表2。
表2.药代动力学数据比较
NA：数据未得。
实施例5：大鼠体内药效学试验——血小板凝聚抑制试验
1.研究设计
1.1动物
1.1.1供应商：北京维通利华实验动物技术有限公司
1.1.3年龄：6至8周
1.1.4总数：15
1.1.5性别：雄性
1.1.6体重：200-226g
1.2动物维护
1.2.1检疫期：加药前至少7天对动物进行检疫。由兽医来评估动物的总体健康状况。进行完全健康检查。研究前排除不正常的动物。
1.2.2住房：动物保健和住房的一般程序根据国家研究委员会生命科学委员会的标准，标准操作程序为：聚丙烯笼中每笼3只，放置在环境被监控的通风良好的房间中，温度为20-25℃，相对湿度为40％-70％。荧光灯提供照明，每天约12小时。草垫用实验室专用的柳树木屑。每年进行草垫污染物的分析，分析结果记录在设备记录中。
1.2.3动物ID：每个动物分配一个标识号。采用以下的标识方法。每个笼卡上标记有诸如研究编号、组别、性别、剂量、动物编号、开始日期、研究负责人和电话号码。
1.2.4饮食：检疫期期间给所有的动物提供正常饮食。取样前禁食过夜，但是仍然允许喝水。
1.2.5水：在检疫期和研究期间任意供应来自实验室动物饮水机中的瓶装过滤水。使用前瓶和带管的盖均被高压灭菌。分析来自动物设备中的水样，分析结果记录在设备记录中，已经被兽医检查，以确保不存在可能干扰或影响研究结果的已知污染物。过滤水满足中华人民共和国的饮用水标准。
1.3分组及治疗
试验前雄性SD大鼠禁食16小时。基于动物的体重，使用计算机生成的随机化程序将大鼠随机分配给各组。研究组和每组的动物数如表3所示。
表3 分组及治疗
1.4试验化合物
化合物A-C分别由实施例1-3中制备。替格瑞洛购自上海二辰实业有限公司。
1.5溶剂(用于化合物的配制)：30％PEG 400
1.5.1供应商:Sigma
1.5.2产品分类编号：P3265
1.5.3到期日：NA
1.5.4外观：液体
1.5.5储存条件：4℃
1.5.6安全保护措施：采用标准实验室安全程序处理测试物品。具体地，防尘口罩、防护眼镜、橡胶手套和实验室穿的防护衣服。
1.6配制及给药程序
1.6.1给药途径:P.O.
1.6.2体积：5mL/kg
1.6.3频率：单剂量
1.6.4配制：通过将4.2mg测试化合物添加到2.1mL PEG400溶液中来溶解各个化合物，搅拌，超声直到得到均一的悬浮液或溶液。然后向该悬浮液或溶液中添加4.9mL蒸馏水，搅拌。悬浮液或溶液的最终浓度为30％PEG400中0.6mg/mL(3mg/kg)。
在该研究中，得到化合物A、C和替格瑞洛的均一溶液。肉眼观察没有颗粒。然而，得到的化合物B为悬浮液。
2.测量参数和化验方案
2.1体重
随机分配之前监控所有动物的体重。
2.2血小板凝聚抑制试验
向研究的动物口服给予测试的化合物。4小时后给予单剂量药物，从各个大鼠取4.5mL的血样，收集到包含0.5mL3.8％(w/v)柠檬酸钠的溶液的试管中，作为抗凝血剂。在37℃中预热2分钟后，通过Siemens ADVIA 2120测量血小板数，这可以被视为添加前的血小板数，然后将1.8mL的血样添加到两个EP试管中，每个试管中混有0.1mL的0.05M的二磷酸腺苷(ADP)，添加ADP后1分钟测量一个血样的血小板数，添加后5分钟测试其他样品。根据以下方程式计算血小板凝聚率。
血小板凝聚率＝100x(添加前的血小板数–添加后的血小板数)/添加前的血小板数
2.3数据分析
组间应用Dunnett的多重比较测试后的单因素方差分析；p<0.05表示显著差异。
3.结果
3.1体重
各个动物的体重如下表4所示：
表4 大鼠的体重和血小板数
3.2血小板凝聚
所有测试大鼠的血小板凝聚如上表4所示:
每组的平均值如表5和图1所示:
表5 研究组的血小板凝聚率(平均值±SD)
*相对于溶剂组，p<0.05,
实施例6：片剂
单片含：
实施例1制备的化合物A:90mg；
甘露醇：126mg；
二水合磷酸氢钙：63mg；
羟丙基纤维素：9mg；
淀粉羟基乙酸钠：9mg；
硬脂酸镁：3mg。
实施例7：片剂
单片含：
实施例2制备的化合物B:90mg；
甘露醇：126mg；
二水合磷酸氢钙：63mg；
羟丙基纤维素：9mg；
淀粉羟基乙酸钠：9mg；
硬脂酸镁：3mg。
实施例8：片剂
单片含：
实施例3制备的化合物C:90mg；
甘露醇：126mg；
二水合磷酸氢钙：63mg；
羟丙基纤维素：9mg；
淀粉羟基乙酸钠：9mg；
硬脂酸镁：3mg。
Claims (9)
1.选自下式所示的化合物或其药学上可接受的盐：
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗血小板聚集的药物中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述血小板聚集是由二磷酸腺苷(ADP)引起的。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗、预防或延缓急性冠脉综合征的药物中的用途，其中，所述急性冠脉综合征为不稳定性心绞痛、非ST段抬高心肌梗死或ST段抬高心肌梗死。
5.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅料。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂、栓剂、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小针、注射用冻干粉针或大输液。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述片剂为分散片、肠溶片、咀嚼片或口崩片。
8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括下述的一种或多种：稀释剂、增溶剂、崩解剂、悬浮剂、润滑剂、粘合剂、填充剂、矫味剂、抗氧化剂、表面活性剂、防腐剂、包裹剂和色素。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述矫味剂为甜味剂。
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