CN105462905A - 一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 - Google Patents
一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105462905A CN105462905A CN201410443976.6A CN201410443976A CN105462905A CN 105462905 A CN105462905 A CN 105462905A CN 201410443976 A CN201410443976 A CN 201410443976A CN 105462905 A CN105462905 A CN 105462905A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tesc
- genetic engineering
- higher aliphatic
- engineering bacterium
- thioesterase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及用于一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用。本发明的微生物基因改造方法，包括删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径以减少胞质内自由脂肪酸生成的步骤；其中，所述删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径的方法为将微生物中的硫酯酶TesC编码基因敲除。本发明的微生物改造方法、基因工程菌株能够提高原始大肠杆菌的高级脂肪醇和高级烃类产量，是具有更高高级脂肪醇和高级烃类产量的重组基因工程菌。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用。
背景技术
当今世界能源问题成为世界经济发展的瓶颈，利用生物质等可再生资源进行物质的生产成为当今科学研究的热点。
高级脂肪醇不仅是高效的生物柴油，而且在医学和日化用品中也有重要的用途。随着石油资源的枯竭，脂肪醇的生物法生产受到越来越多的关注。长链的烷类和烯类是最具前景的生物燃料。其物理性状熔点较低，在生物燃料中最适于用作能源物质。因此发酵法生产的高级脂肪醇和高级烃类将是一种绿色平台化学品。综合已有文献来看，菌种研究方面，比较有应用前景的包括能够积累高级脂肪醇和高级烃类的藻类、用于表面活性剂生产的假单胞菌、遗传和操作背景都很清楚的大肠杆菌等。其中大肠杆菌的培养条件简单，菌种本身有高级脂肪醇和高级烃类代谢途径，具有代谢灵活性，易于基因工程改造。对大肠杆菌高级脂肪醇和高级烃类代谢的研究表明，在以葡萄糖为底物的高级烃的发酵中，高级脂肪醇和高级烃类生成过程如下：(1)通过糖酵解形成乙酰-CoA；(2)乙酰-CoA进入脂肪酸合成路径形成脂酰-ACP(3)脂酰-ACP经由脂肪酸形成脂酰-CoA；(4)脂酰-CoA被还原为脂肪醇或经由脂肪醛还原为高烷类或烯类。
目前国内外对大肠杆菌生产高级脂肪醇和高级烃类的代谢网络途径改造有以下两种：1、过量表达内源的TesA’(硫酯酶I，ThioesteraseI)和FadD(脂酰-CoA合成酶，fattyacyl-CoAsynthetase)，与此同时过量表达异源的FAR(脂酰-CoA还原酶，fattyacyl-CoAreductase)。这种改造的出发点是将脂肪酸合成路径的中间产物脂酰-ACP经由脂酰-CoA转化为脂肪醇。2、过量表达内源的TesA’和FadD，与此同时过量表达异源的Acyl-ACP还原酶和脂肪醛还原酶。以上改造的出发点是将脂肪酸合成路径的中间产物脂酰-ACP经由脂酰-CoA、脂肪醛转化为烷类和烯类。这两种改造方法的缺陷是产物烃类的合成都要经由脂肪酸和脂酰-CoA，由于脂肪酸合成、β氧化都是在胞质内完成的，且脂肪酸的积累对细胞毒性较大，不会高浓度积累，这限制了这类途径可能达到的最高产量。此外，脂酰-CoA极易被TesA和TesB(硫酯酶II，ThioesteraseII)酯解为脂肪酸，这样便阻断了其进一步还原为脂肪醇和脂肪醛进而形成烷类和烯类的可能性。因此急需一种具有开发潜力的高级脂肪醇和高级烃类的合成路径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生物基因改造方法用于生产高级脂肪醇和高级脂肪烃。本发明的目的还在于提供基因工程菌以及使用本发明的基因工程菌发酵多种碳源生产高级脂肪醇和高级烃类的方法。
本发明的微生物基因改造方法，包括删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径以减少胞质内自由脂肪酸生成的步骤；其中，所述删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径的方法为将微生物中的硫酯酶TesC编码基因敲除。
优选地，本发明所述微生物为大肠杆菌。
本发明的用于生产高级脂肪醇的基因工程菌，体内不含硫酯酶TESC，且含有包含编码外源脂酰-CoA还原酶FAR的基因片段的重组质粒。
上述基因工程菌体内的硫酯酶TESC通过将硫酯酶TESC编码基因TesC敲除的方法删除。
本发明所述包含外源脂酰-CoA还原酶FAR的编码基因片段的重组质粒，优选地，所述重组质粒为pTr-FAR，即将外源脂酰-CoA还原酶FAR的编码基因序列连接于质粒pTrcHisA上。
本发明所述外源脂-CoA还原酶FAR的编码基因片段，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示：
本发明的制备上述用于生产高级脂肪醇的重组质粒的方法，包括以下步骤：
1)克隆获得两端分别带有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRI酶切位点的包含脂酰-CoA还原酶FAR的编码基因序列的DNA片段；
2)将上述DNA片段与空质粒经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRI酶切并连接，获得重组质粒。
上述制备重组质粒的方法中，优选以海洋杆菌(MarinobacteraquaeoleiVT8)为模板克隆包含编码脂酰-CoA还原酶FAR的基因序列的DNA片段，将所述DNA片段和pTrcHisA质粒经所述限制性内切酶BamHⅠ和EcoRI酶切并连接，获得重组质粒pTr-FAR。优选地，所述引物为：FARF:CGGGATCCATGGCAATACAGCAGGTACATCACG，划线处为BamHⅠ酶切位点；FARR:CGGAATTCTCAGGCAGCTTTTTTGCGCTG划线处为EcoRI酶切位点。
本发明的用于生产高级脂肪醇的基因工程菌，为大肠杆菌MGKFPF，其包含上述用于生产高级脂肪醇的的重组质粒。
本发明的制备上述用于生产高级脂肪醇的基因工程菌的方法，包括以下步骤：
1)将大肠杆菌中的硫酯酶TesC编码基因敲除，获得大肠杆菌MGKFM；
2)将上述用于生产高级脂肪醇的重组质粒转入步骤1)的大肠杆菌MGKFM中，获得基因工程菌。
本发明的用于生产高级脂肪烃的基因工程菌，体内不含硫酯酶TESC，且同时含有包含编码外源酰基ACP还原酶PCC7942_orf1594和脂肪醛还原酶PCC7942_orf1593的编码基因片段的重组质粒。
优选地，本发明所述微生物为大肠杆菌。
上述基因工程菌体内的硫酯酶TESC通过将硫酯酶TESC编码基因TesC敲除的方法删除。
本发明的用于生产高级脂肪烃的重组质粒，包含酰基ACP还原酶PCC7942_orf1594和脂肪醛还原酶PCC7942_orf1593的编码基因序列。优选地，所述重组质粒为pTr-1593-1594，即将外源的酰基ACP还原酶(PCC7942_orf1594)和脂肪醛还原酶(PCC7942_orf1593)的编码基因片段连接于质粒pTrcHisA上。
本发明的制备上述用于生产高级脂肪烃的重组质粒的方法，包括以下步骤：
1)克隆获得两端分别带有限制性内切酶BamHⅠ和EcoRI酶切位点的、同时包含酰基ACP还原酶PCC7942_orf1594和脂肪醛还原酶PCC7942_orf1593的编码基因序列的DNA片段；
2)将上述两段DNA片段与空质粒经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRI酶切并连接，获得重组质粒。
上述制备重组质粒的方法中，优选以细长聚球藻(SynechococcuselongatusPCC7942)基因组为模板克隆获得两端带有不同限制性酶切位点的含有Acyl-ACP还原酶(PCC7942_orf1594)和脂肪醛还原酶(PCC7942_orf1593)的DNA片段。将所述的DNA片段和pTrcHisA质粒经所述限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ酶切并连接，获得重组质粒pTr-1593-1594。其中优选地，所述引物为：1593F:CGGGATCCATGCCGCAGCTTGAAGCCAGC划线处为BamHⅠ酶切位点，1594R:CGGAATTCTCAAATTGCCAATGCCAAGGGTTG划线处为EcoRⅠ酶切位点。
本发明所述酰基ACP还原酶PCC7942_orf1594的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNo.2所示：
本发明所述脂肪醛还原酶PCC7942_orf1593的编码基因，其核苷酸序列如SEQIDNo.3所示：
本发明的用于生产高级脂肪烃的基因工程菌，为大肠杆菌MGKFP34，包含上述用于生产高级脂肪烃的的重组质粒。
本发明的制备上述用于生产高级脂肪烃的基因工程菌的方法，包括以下步骤：
1)将大肠杆菌中的硫酯酶TesC编码基因敲除，获得大肠杆菌MGKFM；
2)将上述用于生产高级脂肪烃的重组质粒转入步骤1)的大肠杆菌MGKFM中，获得基因工程菌。
在本发明的制备基因工程菌的方法中，将大肠杆菌中的硫酯酶TesC编码基因敲除的步骤中，包括设计带有TesC上下游同源臂的引物扩增catA-sacB的步骤。具体为，设计带有TesC上下游同源臂的引物扩增catA-sacB，其中优选的所述引物为：
KtesCF:CGTAATCTGGCGGTATTAACCCTGTAATTAATTTGC ATAGTGGCAATTTTGTGACGGAAGATCACTTCGCAG，KtesCR:TATTCCGGG TGTCGCCGGATGCGGCTTGAGCATCCGGCACCACAAAACGTATCAAAGGGAAAACTGTCCATATGCACAGATG，将扩增后的catA-sacB转化至大肠杆菌感受态内。
本发明还提供了上述用于生产高级脂肪醇的重组质粒和基因工程菌在生产高级脂肪醇中的应用。
本发明还提供了上述用于生产高级脂肪烃的重组质粒和基因工程菌在生产高级脂肪烃中的应用。
上述应用具体地为，使用本发明的基因工程菌发酵多种碳源生产高级脂肪醇或高级脂肪烃类的方法，所述方法包括在基因工程菌生长过程中生物量的积累及加入不同量的诱导剂时产物的积累。
在上述应用中，所述碳源优选为甘油，所述诱导剂优选的为乳糖。
本研究通过敲除TesC阻断了脂酰-ACP走向脂肪酸，同时过量表达脂酰-CoA还原酶FAR，使得细胞内合成脂酰-ACP尽可能多的走向脂肪醇。现有研究不采取这一路径的主要原因可能是有以下三个方面：第一，TesC这一基因的敲除较普通基因难于操作，敲除后菌株生长缓慢。第二，负责这一步骤的有三个同工酶操作繁琐，且定位分工还不足够明确，我们的实验是建立在一系列合成生物学的软件和预测分析上的。第三，普遍认为脂肪酸对于细菌是必需的，因此不会完全阻断这里路径，又不易选择合适的弱化途径。
本发明产生如下的技术效果：
本发明的微生物改造方法、基因工程菌株和质粒能够提高原始大肠杆菌的高级脂肪醇和高级烃类产量，是具有更高高级脂肪醇和高级烃类产量的重组基因工程菌。
通过对比实验证明，构建出来的基因工程菌相对于原始菌来说，高级脂肪醇和高级烃类的积累速度和产量都有极大提高。表明这类基因工程菌存在着较大的应用潜力。
附图说明
图1为本发明大肠杆菌TESC酶敲除示意图；其中，H1为TesC基因上游50bp序列，H2为TesC基因下游50bp序列，P1为与CatA-sacB同源的上游引物，P2为与CatA-sacB同源的上游引物，ybaV为基因组上位于TesC上游的基因，queC为基因组上位于TesC下游的基因。
图2为本发明基因工程菌产高级脂肪醇的代谢途径。
图3为本发明基因工程菌产高级脂肪烃的代谢途径。
图4为本发明重组质粒pTr-FAR构建过程示意图。
图5为本发明重组质粒pTr-1593-1594构建过程示意图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，具体可参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1培养基的配制
LB培养基成份为每升水中含有5g酵母粉，10g胰蛋白胨和10gNaCl。固体培养基为液体基中加入1.5％的琼脂粉。为了增加培养基的选择性，氨苄青霉素(Amp)的使用浓度是50μg/mL。
实施例2海洋杆菌VT8和细长聚球藻PCC7942的总DNA的提取
用SDS-蛋白酶K裂解菌体十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀细胞碎片和多糖，再用异丙醇沉淀来提取总DNA。
1)海洋杆菌取单菌落接种于100mLDSMZ514培养基在合适的温度下培养2天；细长聚球藻培养于培养基BG11100mL中，在合适的温度下培养8天。
2)取20mL菌液于离心管中，13,000rpm离心2min，弃上清。
3)沉淀重悬于1.0mL0.85％NaCl中。
4)室温13,000rpm离心2min，弃上清。
5)沉淀重悬于550μL1×TE中。
6)加17μL溶菌酶(35mg/mL)，37℃温育30min。
7)加3μL蛋白酶K(20mg/mL)，37℃温育30min。
8)加30μL10％十二烷基磺酸钠SDS，37℃温育30min。
9)加100μL5MNaCl充分混匀。
10)加80μLCTAB/NaCl溶液，混匀，65℃水浴10min。
11)加等体积(0.7-0.8mL)氯仿/异戊醇(24:1)，轻轻振荡混匀。
12)室温，13,000rpm离心10min。
13)将上清液转移到一新1.5mL离心管中，加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)轻轻振荡混匀。
14)重复第12)步。
15)将上清液转移到一新1.5mL离心管中，加入等体积氯仿/异戊醇(24:1)轻轻振荡混匀。
16)重复第12)步。
17)将上清液转移到一新1.5mL离心管中，加入0.6体积异丙醇，混匀后室温静置60min。
18)20℃13,000rpm离心20min。
19)弃上清，加500μL70％乙醇，轻轻颠倒数次(洗盐)。
20)4℃15,000rpm离心20min。
21)重复洗盐两次。
22)倒置离心管，干燥DNA沉淀10-15min。
DNA沉淀溶于30μL1×TE缓冲液，-20℃保存备用。
实施例3重组质粒pTr-FAR的构建
FAR基因的克隆
以提取海洋杆菌MarinobacteraquaeoleiVT总DNA为模板进行PCR反应
PCR反应体系为：
PCR反应程序为：94℃4min
94℃30s，64℃30s，72℃1min35cycles，
72℃5min
包含FAR酶基因的DNA片段的酶切体系按如下配比组成：
酶切反应过夜进行，电泳检验酶切程度。用DNA回收试剂盒回收酶切后的核酸。
pTrcHisA质粒的酶切体系按如下配比组成：
酶切反应过夜进行后，电泳检验酶切程度。回收酶切后的质粒。
酶切后的质粒与包含FAR酶基因的DNA片段按如下的方法混和后进行连接反应。
连接反应在16℃进行4小时，之后将反应混合物用于转化反应获得重组质粒pTr-FAR(质粒构建情况可参见图4)。
实施例4重组质粒pTr-1593-1594的构建
Orf1593-1594基因的克隆
细长聚球藻的基因组为模板进行PCR反应
PCR反应体系为：
PCR反应程序为：94℃4min
94℃30s，64℃30s，72℃2min35cycles，
72℃8min
包含Orf1593-1594酶基因的DNA片段酶切体系按如下配比组成：
酶切反应过夜进行，电泳检验酶切程度。用DNA回收试剂盒回收酶切后的核酸。
pTrcHisA质粒的酶切体系按如下配比组成：
酶切反应过夜进行后，电泳检验酶切程度。回收酶切后的质粒。
酶切后的质粒与包含orf-1593-1594酶基因的DNA片段按如下的方法混和后进行连接反应。
连接反应在16℃进行4小时，之后将反应混合物用于转化反应获得重组质粒pTr-1593-1594(质粒构建情况可参见图5)。
实施例5大肠杆菌菌株MGKF的构建
pKD46质粒转入E.coliMG1655，30℃筛选氨苄100mg/L筛选后，制备感受态；
设计引物：
KtesCF:
CGTAATCTGGCGGTATTAACCCTGTAATTAATTTGCATAGTGGCAATTTT
KtesCR:
实线处为TesC的同源序列，虚线处为pEASY-cata-sacb的同源序列。pEASY-cata-sacb为模板扩增，PCR产物纯化后电转化上一步制备的感受态，37℃培养1h，涂布氯霉素抗性平板，挑选缺失菌株，42℃1h消除质粒pKD46。获得大肠杆菌菌株MGKF(请参见图1)。
实施例6基因工程菌MGKFPF的构建
感受态细胞用CaCl2法制备。选取大肠杆菌MGKF制成感受态细胞，用热击法将质粒pTr-FAR转入上述感受态，热击的反应条件是42℃热击90秒。热击后加入800μL的LB培养基，37℃活化45分钟后涂于含100μg/mL氨苄和34μg/mL氯霉素的LB平板上37℃过夜培养，获得基因工程菌MGKFPF。
实施例7基因工程菌MGKFP34的构建
感受态细胞用CaCl2法制备。选取大肠杆菌MGKF制成感受态细胞，用热击法将质粒pTr-1593-1594转入上述感受态，热击的反应条件是42℃热击90秒。热击后加入800μL的LB培养基,37℃活化45分钟后涂于含100μg/mL氨苄和34μg/mL氯霉素的LB平板上37℃过夜培养，获得基因工程菌MGKFP34。
实施例8重组菌的生长特征及稳定性分析
原始菌E.coliMG1655不具有氨苄和氯霉素抗性，质粒载体上有氨苄抗性，TesC基因敲除菌株具有氯霉素抗性。本基因工程菌能在浓度为100μg/mL氨苄和34μg/mL氯霉素的LB平板上正常生长，表明重组质粒已经转入于MGKF。挑取30个这样的菌落接种于含有100μg/mL和34μg/mL氯霉素的氨苄平板上，结果经过24h的培养，平板上长出了29个菌落，说明该菌在没有任何的选择性压力的条件下仍十分稳定，稳定性达95％以上。
实施例9基因工程菌MGKFPF，连续发酵条件下的高级脂肪醇产量
将构建的基因工程菌MGKFPF，37℃培养至对数生长期后加入诱导剂乳糖或IPTG诱导FAR表达(代谢途径见图2)；培养过程中保持甘油浓度20g/L，连续通气好氧发酵。其间用NaOH调节发酵液的pH值使其保持在pH7.5处，并间或补加Amp，以防止质粒丢失。至发酵终点，高级脂肪醇产量为10g/L，比起原始菌株产量0.10g/L提高了100倍多。
实施例10基因工程菌MGKFP34连续发酵条件下的高级烃类产量
将构建的基因工程菌MGKFP34，37℃培养至对数生长期后加入诱导剂乳糖或IPTG诱导pTr-1593-1594表达(代谢途径见图3)；培养过程中保持甘油浓度20g/L，连续通气好氧发酵。其间用NaOH调节发酵液的pH值使其保持在pH7.5处，并间或补加Amp，以防止质粒丢失。至发酵终点，高级脂肪烃的产量为8g/L，而原始菌株不积累高级脂肪烃。
Claims (9)
1.一种微生物基因改造方法，包括删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径以减少胞质内自由脂肪酸生成的步骤；其中，所述删除微生物细胞内由脂酰-ACP生成脂肪酸的路径的方法为将微生物中的硫酯酶TESC编码基因TesC敲除。
2.根据权利要求1所述的微生物基因改造方法，其特征在于，所述微生物为大肠杆菌。
3.一种用于生产高级脂肪醇的基因工程菌，其特征在于，体内不含硫酯酶TESC，且含有包含编码外源脂酰-CoA还原酶FAR的基因片段的重组质粒。
4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，其体内的硫酯酶TESC通过将硫酯酶TESC编码基因TesC敲除的方法删除。
5.一种用于生产高级脂肪烃的基因工程菌，其特征在于，体内不含硫酯酶TESC，且同时含有包含编码外源酰基ACP还原酶PCC7942_orf1594和脂肪醛还原酶PCC7942_orf1593的编码基因片段的重组质粒。
6.根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于，其体内的硫酯酶TESC通过将硫酯酶TESC编码基因TesC敲除的方法删除。
7.根据权利要求3或5所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为大肠杆菌。
8.权利要求3所述基因工程菌在生产高级脂肪醇中的应用。
9.权利要求5所述基因工程菌在生产高级脂肪烃中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410443976.6A CN105462905A (zh) | 2014-09-02 | 2014-09-02 | 一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410443976.6A CN105462905A (zh) | 2014-09-02 | 2014-09-02 | 一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105462905A true CN105462905A (zh) | 2016-04-06 |
Family
ID=55601067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410443976.6A Pending CN105462905A (zh) | 2014-09-02 | 2014-09-02 | 一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105462905A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102471781A (zh) * | 2009-06-30 | 2012-05-23 | 科德克希思公司 | 以脂肪醇形成酰基CoA还原酶(FAR)产生脂肪醇 |
| CN102597248A (zh) * | 2009-07-09 | 2012-07-18 | 焦耳无限科技公司 | 用于正烷烃重组生物合成的方法和组合物 |
-
2014
- 2014-09-02 CN CN201410443976.6A patent/CN105462905A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102471781A (zh) * | 2009-06-30 | 2012-05-23 | 科德克希思公司 | 以脂肪醇形成酰基CoA还原酶(FAR)产生脂肪醇 |
| CN102597248A (zh) * | 2009-07-09 | 2012-07-18 | 焦耳无限科技公司 | 用于正烷烃重组生物合成的方法和组合物 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| M.KALIM AKHTAR ET AL.: "Carboxylic acid reductase is a versatile enzyme for the conversion of fatty acids into fuels and chemical commodities", 《PNAS》 * |
| 尹芳等: "小链霉菌HCCB10043敲除硫酯酶基因的工程菌株构建及其代谢产物的研究", 《上海师范大学学报（自然科学版）》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wen et al. | Improved n-butanol production from Clostridium cellulovorans by integrated metabolic and evolutionary engineering | |
| Shanmugam et al. | High-efficient production of biobutanol by a novel Clostridium sp. strain WST with uncontrolled pH strategy | |
| Abdelaal et al. | CRISPR/Cas9-mediated engineering of Escherichia coli for n-butanol production from xylose in defined medium | |
| RU2461627C2 (ru) | СПОСОБ БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРОИЗВОДСТВА н-БУТАНОЛА | |
| CN110438056B (zh) | 一株产正丁酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用 | |
| EP2331683A1 (en) | Enhanced dihydroxy-acid dehydratase activity in lactic acid bacteria | |
| KR100971792B1 (ko) | Butyryl-CoA를 중간체로 하여 부탄올을 생합성하는 능력을가지는 효모를 이용하여 부탄올을 제조하는 방법 | |
| CN101565709B (zh) | 3-甾酮-9α-羟基化酶基因、3-甾酮-9α羟基化酶还原酶基因、相关载体和工程菌及应用 | |
| CN103497922B (zh) | 一种联产3-hp和p3hp的重组肺炎克雷伯氏菌及其制备方法和应用 | |
| CN101748069A (zh) | 一种重组蓝藻 | |
| Xiao et al. | 3-Methyl-1-butanol biosynthesis in an engineered Corynebacterium glutamicum | |
| CN104789487B (zh) | 分别可生产丁酸和正丁醇的菌株、及生成正丁醇的方法 | |
| CN105274041B (zh) | 一株重组大肠杆菌及其在生产2-丁醇中的应用 | |
| CN102618479B (zh) | 一种能耐受高浓度丁醇的梭菌及其构建方法与应用 | |
| CN105462905A (zh) | 一种微生物基因改造方法、用于生产高级脂肪醇、高级脂肪烃的基因工程菌及其应用 | |
| Lee et al. | Production of mixed acids from non-pretreated red algae Gelidium amansii | |
| CN115261292A (zh) | 改造的克雷伯氏菌属细菌及其生产1,2-丙二醇的应用和方法 | |
| CN112280725A (zh) | 一种高效生产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法 | |
| CN106957853B (zh) | 一种提高酵母细胞对复合抑制剂耐受能力的方法 | |
| CN109486835A (zh) | 一种源于蓝藻的产烷烃关键基因突变子及其应用 | |
| CN114015634B (zh) | 高产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用 | |
| CN101633690B (zh) | 一种产氢相关蛋白及其编码基因与应用 | |
| CN105586365B (zh) | 一种发酵生产混合醇的方法 | |
| CN113234653B (zh) | 一种提高合成气发酵产乙醇含量的突变株和利用突变株的应用 | |
| CN105586280B (zh) | 肌醇用于增强菌株耐受性的用途、基因的用途、表达载体及其用途、菌株及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20160406 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |