CN105461822B

CN105461822B - 一种提取蚕沙中有效成分的方法

Info

Publication number: CN105461822B
Application number: CN201510988020.9A
Authority: CN
Inventors: 齐明; 赵雪章; 熊英; 付博; 谭显波; 陈嘉盛; 林曼纯; 卿前海
Original assignee: Foshan Polytechnic
Current assignee: Foshan Polytechnic
Priority date: 2015-12-24
Filing date: 2015-12-24
Publication date: 2018-02-23
Anticipated expiration: 2035-12-24
Also published as: CN105461822A

Abstract

本发明公开一种提取蚕沙中有效成分的方法，包括步骤：称取粉碎后的蚕沙4.5~5.0g，加入破壁助剂5.00~10.00mL，得到蚕沙预处理液；然后对蚕沙预处理液微波辐射处理60~80s，接着用有机溶剂在60~80℃下提取20~40min，得到提取液；通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶，得到果胶和果胶滤液；通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白，得到叶蛋白和叶蛋白滤液；通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素，得到叶绿素。采用3级膜分离技术，有效地将大分子物质从提取液中分离出来，明显提高了产品的纯度。

Description

一种提取蚕沙中有效成分的方法

技术领域

本发明涉及萃取技术领域，尤其涉及一种提取蚕沙中有效成分的方法。

背景技术

蚕沙是桑蚕采食桑叶后的排泄物，颜色墨绿，呈六菱形颗粒状，颗粒大小根据蚕眠期不同而不同，小则如细沙，大则似绿豆，直径2～5mm。蚕沙含有丰富的营养成分和活性成分，具有祛风除湿、清热明目、活血定痛、镇静安神等功能。

中国养蚕历史悠久，不仅是世界蚕业的发源地，还是蚕业资源的主产国，一直以“丝绸之路”而闻名世界。蚕沙是养蚕过程中的副产物，产量相当丰富，仅全国五大蚕区干蚕沙的年产量就达100万t以上。蚕沙主要被用作农田肥料或直接被丢弃，未能得到充分开发利用，造成环境污染和资源浪费。

随着科技的快速发展，国内外学者对蚕沙的研究不断深入，人们越来越认识到蚕沙的巨大开发价值。蚕在生长过程中会大量采食桑叶并快速排空，桑叶中的诸多营养、活性成分未经完全吸收而被排泄，致使蚕沙中蓄积有丰富的营养活性物质。蚕沙中含粗蛋白13.03 %～13.6 %，粗脂肪1.84 %～3.7 %，钙2.78 %～3.2 %，磷0.24 %～0.82 %，粗纤维12.5 %～17.37 %，可溶性无氮物36.2 %～48.7 %，灰分12.6 %～17.75 %。除此之外，蚕沙中还含有丰富的铜、铁、锌等微量元素，以及类肾上腺皮质激素，VA、VB、VC、VD、VE，烟酸、生物碱、叶黄素、叶绿素、类胡萝卜素、叶蛋白、果胶、植物醇等活性成分。蚕沙可以作为活性成分提取较为经济的原料来源。目前，蚕沙活性提取物已广泛应用于食品、饮料、化妆品、医药等行业，具有巨大的开发价值。蚕沙与畜牧业中苜蓿、米糠、麦麸等重要的饲料原料比较，营养价值均高于后者，可作为新型饲料原料进行替代。

提高蚕沙经济价值的方法有很多，提取叶绿素就是其中之一。而目前有关从蚕沙中提取叶绿素的工艺研究有很多，但不沦是哪种工艺，对开发蚕沙来说提取效率、适合工业化大规模生产是关键。传统“索氏提取法”，虽然技术成熟，适合大规模生产，但能耗大、效率低、污染大，不符合当前的“绿色环保，可持续发展”理念。科研人员以该工艺方案为基础进行了大量的研究，进行了改进也根据科技的进步提出许多新技术。但超临界流体提取工艺虽然产品提取纯度好，但对设备要求较高，规模小不适用于大规模开发蚕沙资源。超声波技术提取速度快，操作条件简单，易于实现但是在大规模生产上，没有优势可言，并且声音污染严重。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种提取蚕沙中有效成分的方法，旨在解决现有提取方法工艺复杂、生产周期长、使用溶剂多及存在环境污染等问题。

本发明的技术方案如下：

一种提取蚕沙中有效成分的方法，其中，包括步骤：

A、称取粉碎后的蚕沙4.5~5.0g，加入破壁助剂5.00~10.00mL，得到蚕沙预处理液；

B、然后对蚕沙预处理液微波辐射处理60~80s，接着用有机溶剂在60~80℃下提取20~40min，得到提取液；

C、通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶，得到果胶和果胶滤液；通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白，得到叶蛋白和叶蛋白滤液；通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素，得到叶绿素。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，所述步骤A之前还包括步骤：对蚕沙进行软化处理，所述软化处理的方法为：

除杂：将蚕沙经筛分，除去蚕沙中的泥沙和石灰，筛分后再经水洗除去水溶性杂质，然后在阴凉处晾干，待用；

软化：称取所需蚕沙，按100g蚕沙喷洒30mL蒸馏水的量喷洒蒸馏水，并不断翻动搅拌，使蚕沙软化。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，所述步骤C中，通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为30万D的膜组件，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将提取液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于30万D的果胶溶液；再将分子量小于30万D的果胶溶液经截留分子量为3万D的超滤膜处理，得到分子量为3万～30万D的果胶溶液和分子量小于3万D的果胶滤液，将得到的分子量为3万～30万D的果胶溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到果胶。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，所述步骤C中，通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为1万D的膜组件，在25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将果胶滤液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于1万D的叶蛋白溶液；将分子量小于1万D的叶蛋白溶液经截留分子量为0.5万D的超滤膜处理，得到分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液和分子量小于0.5万D的叶蛋白滤液，将得到的分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到叶蛋白。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，所述步骤C中，通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素的过程包括步骤：选用截留分子量为30 kDa的再生纤维素膜，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将叶蛋白滤液输入到再生纤维素膜上，透过再生纤维素膜的叶绿素溶液，经浓缩和真空干燥，得到叶绿素。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，还包括步骤：对得到的果胶进行鉴定，所述鉴定的方法包括如下：

称取果胶1g加水40mL，不断搅拌，呈粘稠状液体时，证明得到的是果胶；

称取果胶1g加水50mL，再加乙醇20mL，不断搅拌，出现悬浮絮状沉淀时，证明得到的是果胶；

在果胶质量占比为1%的果胶水溶液中加等体积的乙醇，出现半透明的凝胶沉淀时，证明得到的是果胶；

在果胶质量占比为1%的果胶水溶液5mL中加2mol/L的氢氧化钠1mL，在室温下放置15min，形成透明的凝胶时，证明得到的是果胶。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，还包括步骤：采用凯氏半微量定氮法测定叶蛋白中蛋白质的含量。

所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其中，还包括步骤：利用紫外-可见分光光度计对得到的叶绿素进行定性鉴定。

有益效果：本发明利用各有效成分分子量的不同，采用3级膜分离技术，可有效地将大分子物质从提取液中分离出来，超滤纯化后制备的提取液，避免了后续过程中各成分的相互干扰，明显提高了产品的纯度。且本发明膜分离技术操作简便、省时，又节约了处理成本，而且纯化过程操作简单，极具工业应用前景。

附图说明

图1为本发明一种提取蚕沙中有效成分的方法较佳实施例的流程图。

图2为本发明一种提取蚕沙中有效成分的方法另一较佳实施例的流程图。

图3为本发明叶绿素在紫外-可见分光光度计下扫描得到的光吸收谱图。

具体实施方式

本发明提供一种提取蚕沙中有效成分的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

请参阅图1，图1为本发明一种提取蚕沙中有效成分的方法较佳实施例的流程图，如图所示，其包括步骤：

S100、称取粉碎后的蚕沙4.5~5.0g，加入破壁助剂5.00~10.00mL，得到蚕沙预处理液；

S200、然后对蚕沙预处理液微波辐射处理60~80s，接着用有机溶剂在60~80℃下提取20~40min，得到提取液；

S300、通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶，得到果胶和果胶滤液；通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白，得到叶蛋白和叶蛋白滤液；通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素，得到叶绿素。

本发明最后还可测定果胶、叶蛋白及叶绿素的含量。

本发明的主要改进之处在于：采用3级膜分离法提取蚕沙中的有效成分，所述有效成分包括：果胶、叶蛋白和叶绿素等产品。本发明提取方法克服现有工艺中产品单一，工艺复杂，且生产周期长，使用溶剂多，存在环境污染等问题；另外，本发明提取时使用微波协同，使用混合溶剂，其用量可以减少80%，提取时间也由原来的3-5小时，减少到10-20分钟，提取后的提取液采用现代的膜分离技术，根据果胶、叶蛋白和叶绿素分子量不同，进行分离、纯化、浓缩和干燥处理，从而建立合理的综合利用蚕沙资源的工艺流程，对进行工业化生产具有实际的指导作用。

请结合图2，图2为本发明一种提取蚕沙中有效成分的方法另一较佳实施例的流程图，如图所示，其包括步骤：蚕沙原料预处理，微波协同萃取，得到滤液和滤渣，滤渣经发酵可得到有机肥；滤液经一级膜分离、脱色、浓缩、干燥后，得到果胶成品和果胶的滤液；果胶的滤液经二级膜分离、等电沉淀、浓缩、干燥，得到叶蛋白成品和叶蛋白的滤液；叶蛋白的滤液经三级膜分离、纯化、浓缩、干燥，得到叶绿素成品。

具体地，所述步骤S100之前还包括步骤：对蚕沙进行软化处理，所述软化处理的方法为：

除杂：将蚕沙经筛分，除去蚕沙中的泥沙和大部分的石灰，筛分后再经水洗除去糖类、有机酸等水溶性杂质，然后在阴凉处晾干，待用；

软化：称取所需蚕沙，按100g蚕沙喷洒30mL蒸馏水的量喷洒蒸馏水，并不断翻动搅拌，以使蚕沙软化充分。软化后蚕沙体积膨胀约1.5倍，蚕沙松散良好。

本发明蚕沙的软化度很关键，这是由于叶绿素分子在叶子中与蛋白质、脂质、脂蛋白紧密结合。桑叶经蚕消化后，脂溶性叶绿素分子已游离，代之以蚕消化道分泌物等“粘合剂”及残存固形物与之的相互作用而构成蚕沙。蚕沙软化过程中，这些相互作用被让位于水分子，叶绿素分子再度游离。吸水越多，相互作用“取代”越完全，叶绿素分子游离越彻底。

所述步骤S100具体为：称取粉碎后的蚕沙4.5~5.0g于烧杯中，往烧杯中加入乙醇体积量占50%~70%的破壁助剂5.00~10.00mL，得到蚕沙预处理液。例如所述步骤S100可以为：称取粉碎后的蚕沙5.0g于烧杯中，往烧杯中加入乙醇体积量占60%的破壁助剂10.00mL，得到蚕沙预处理液。

所述步骤S200具体为：然后在微波炉中对蚕沙预处理液微波辐射处理60~80s，接着用有机溶剂（如，95%乙醇）在60~80℃下提取20~40min，得到提取液。例如，所述步骤S200可以为：然后在微波炉中对蚕沙预处理液辐射处理70s，接着用95%乙醇在60℃下提取30min，得到提取液。

本发明的另一主要改进之处在于：微波协同提取蚕沙中有效成分。微波是指波长从1mm到1000mm之间，频率为3×10⁶-3×10⁹HZ的电磁波，它介于红外线和无线电波之间。微波在传输过程中遇到不同的介质，依介质性质不同，会产生反射、吸收和穿透现象，这取决于材料本身的几个主要特性介电常数、介质损耗系数、比热、形状和含水量等。因此在微波辅助提取领域中，被处理的物料通常是能够不同程度吸收微波能量的介质，整个加热过程是利用离子传导和偶极子转动的机理。因此微波辅助提取具有反应灵敏、升温快速均匀、热效率高等优点。极性分子接受微波辐射的能量后，通过分子偶极的每秒数十亿次的高速旋转产生热效应，这种加热方式称为内加热，相对地，把普通热传导和热对流的加热过程称为外加热。与外加热方式相比，本发明内加热具有加热速度快、受热体系温度均匀等特点。

所述步骤S300中，通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为30万D的膜组件，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将提取液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于30万D的果胶溶液；再将分子量小于30万D的果胶溶液经截留分子量为3万D的超滤膜处理，得到分子量为3万～30万D的果胶溶液和分子量小于3万D的果胶滤液，将得到的分子量为3万～30万D的果胶溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到果胶。

果胶类物质是高等植物初级细胞壁和相邻细胞间紧密联合的一组多糖，也是从植物材料制备的一群复杂胶状多聚体。在植物体中，果胶存在于相邻细胞壁的中胶层，其作用既把相邻细胞连接起来，形成一个整体，又有缓冲作用不阻碍细胞生长，同时还成为病原微生物入侵的天然屏障。在食品工业中，果胶一直是人类食品的天然成分，世界上所有国家都允许使用果胶作为食品添加剂。联合粮农组织及世界卫生组织规定，果胶作为食品添加剂，其添加量不受限制。果胶在食品中用作凝胶剂、增稠剂、组织成型剂、乳化剂和稳定剂。近年来，在低热量食品中果胶用作脂肪或糖的代用品。

本发明还包括步骤：对得到的果胶进行鉴定，所述鉴定的方法包括如下：

在通过一级膜分离方法从提取液中提取出果胶后，通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白。具体地，通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为1万D的膜组件，在25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将果胶滤液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于1万D的叶蛋白溶液；将分子量小于1万D的叶蛋白溶液经截留分子量为0.5万D的超滤膜处理，得到分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液和分子量小于0.5万D的叶蛋白滤液，将得到的分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到叶蛋白。

叶蛋白又称青草胶，它是从绿色植物中提取出来的一种蛋白质，因来源于植物的茎叶，故称其为叶蛋白。桑叶经桑蚕蚕食后，消化吸收的主要为叶肉蛋白，而叶绿体蛋白被消化吸收极少，因此蚕沙中所含丰富的蛋白质，主要为叶绿体蛋白。利用脱绿和果胶后的蚕沙提取的叶蛋白可做为饲料添加剂代替鱼粉以及豆饼等，广泛应用于牲畜的精饲料，国内外许多试验证明，用叶蛋白取代猪、家禽日粮中的部分乃至全部蛋白质饲料，或取代哺乳犊牛的部分全乳代用品时，都能取得良好的饲养效果。

优选地，本发明还包括步骤：采用凯氏半微量定氮法测定叶蛋白中蛋白质的含量。下面以具体实施例对本发明的凯氏半微量定氮法测定叶蛋白中蛋白质的含量的测定步骤进行说明。

本发明的具体测定步骤如下：

（1）、叶蛋白消化：准确称取叶蛋白0.05g，移入干燥的凯氏烧瓶中，加入质量浓度10%硫酸铜溶液2mL，浓硫酸3mL和约0.3g无水硫酸钾，轻轻摇匀后进行加热消化，加热消化至溶液澄清并呈淡蓝或绿色为止。再继续加热0.5h，然后停火冷却得到消化液，将消化液移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，得到消化稀释液。按上述同样方法作试剂空白试验。

（2）、碱化蒸馏：向接收瓶内加入硼酸及5-6滴混合指示剂并使冷凝管下端插入消化稀释液的液面下，吸取25.0mL消化稀释液注入凯氏定氮仪的反应室中，用10mL蒸馏水冲洗进样入口，再加质量百分比5%氢氧化钠溶液4mL，打开水蒸汽发生器与反应室之间的夹子，蒸汽通入反应室，氨气被蒸发出来，并通过冷凝管而进入接收瓶内。蒸出50mL左右(连吸收液共60mL左右)即可。松开水蒸汽发生器瓶上的夹子，迅速夹紧水蒸汽发生器和反应室之间的夹子，将废液排出。

（3）、滴定：以0.05mol/L盐酸标准溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为蓝紫色为终点。

（4）、空白试验，按照同样步骤，同时取空白消化稀释液。

（5）、测试结果按下式计算：

式中：N为标准酸溶液的当量浓度；V₁为空白滴定消耗的标准酸溶液的量；V₂为叶蛋白滴定消耗的标准酸溶液的量；W为叶蛋白的重量；0.014为氮的毫克当量数。

蛋白质(%)=总氮×k

式中：K为换算系数，一般情况下k=6.25(蛋白质含氮16%)。

测试结果：叶蛋白提取率可达7.9%-8.1%，蛋白质含量可达25.3。蛋白质含量达到25%以上就可以用作动物饲料，测试所得到的叶蛋白符合要求。

在通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取出叶蛋白后，通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素。具体地，通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素的过程包括步骤：选用截留分子量为30 kDa的再生纤维素膜，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将叶蛋白滤液输入到再生纤维素膜上，透过再生纤维素膜的叶绿素溶液，经浓缩和真空干燥，得到叶绿素。

经过上述2级膜分离，叶蛋白滤液中除了叶绿素外，还有很多的杂质，因此需要进行进一步的纯化操作，在本发明中通过对用不同孔径、不同材料的膜过滤叶蛋白滤液。本发明经上述膜分离技术处理后的叶蛋白滤液，杂质截留率平均在60％以上，而色素损失率在10％以内。纯化后的叶绿素溶液，经浓缩和真空干燥，可得到叶绿素产品或进一步加工制成叶绿素铜钠盐。

叶绿素存在于植物叶子的海绵组织和栅栏组织的叶绿体中。蚕儿摄食桑叶后，在排出的蚕粪中，仍含有较多的叶绿素，约占蚕粪的0.8%-1.0%。

叶绿素，为黑绿、浓绿色的油或者膏状物，易溶于醚、丙酮等有机溶剂和油脂类，微溶于乙醇，不溶于水是植物进行光合作用的主要色素，包括叶绿素a，b，c等以及光合细菌中类似的化合物细菌叶绿素，绿硫细菌叶绿素等。叶绿素的分子结构与人体内的血红蛋白红细胞的主要成分分子结构十分相似，除了叶绿素的中心离子为Mg，而血红蛋白的中心离子为Fe，不一样外，其它部分相同。因此，叶绿素被称为绿色的血液。一些科学家利用叶绿素来治疗贫血，即便是没有贫血症状，叶绿素也可以增加正常红细胞，增加机体血液的含氧量红细胞是氧气的输送者，加速体内细胞新陈代谢的速度，加快体内净化的过程。细胞活力增加了，自然会刺激人体免疫系统，则抵抗疾病与自我康复能力随之增加。叶绿素的多种药理效果已引起食品界的注目。具体说，叶绿素有下列重要药理功能：

创伤治愈作用，叶绿素能促进切伤、火伤、溃疡等伤口的肉芽新生、加快治愈作用。对创伤、溃疡局部涂布能使创伤面干燥，加快肉芽及上皮细胞的产生，明显促进创伤治愈

脱臭作用，叶绿素能除去饮食、香烟及新陈代谢产生的口臭、脚臭、腋下恶臭、饮酒后酒气臭等

抗溃疡作用据国外对鼠试验，对幽门结扎溃疡的小鼠同时投服叶绿酸作制酸剂和抗胆碱药有明显抗溃疡效果

肠蠕动功能亢进作用，叶绿素能使肠道蠕动轻度亢进，解消便秘抗变异原性叶绿酸、叶绿素能和发癌物质一一的活性体形成复合体，使其不活化，还能抑制黄曲霉素、苯并花等变异原物质

降血清胆固醇作用，叶绿素的分解物脱镁叶绿素以及叶绿酸均有降低胆固醇的效果。

另外，叶绿素是体内二恶英的优良清洗剂。日本有研究发现，叶绿素有吸纳二恶英的独特功能，然后随着大便排出体外，从而起到解毒的效果。

优选地，本发明还包括步骤：利用紫外-可见分光光度计对得到的叶绿素进行定性鉴定。

定性分析：用紫外-可见分光光度计在400nm～700nm波段，对本发明条件下得到的叶绿素进行扫描，得到光吸收谱图，选择合适的吸收峰波长作为定性鉴定的波长。如图3所示，叶绿素在429nm、453nm、663nm附近均有相对应的吸收峰。因蓝紫区吸收峰附近容易受到其他成分的干扰，故本发明利用665nm处的强吸收峰定性检测叶绿素。

进一步地，本发明还对叶绿素进行定量分析。具体地，读取叶绿素中的663 nm、645nm的吸光度，用于定量分析。定量分析：吸取0.50mL叶绿素提取液，用对应的提取剂稀释到25.00mL。按Arnon经验公式计算叶绿素a、b的含量及提取的总含量。

叶绿素a的浓度（mg/L）：Ca=12.7A₆₆₃－2.69A₆₄₅ ；

叶绿素b的浓度（mg/L）：Cb =22.9A₆₄₅－4.68A₆₆₃；

叶绿素总浓度（mg/L）：C总= Ca+Cb ；

提取出的叶绿素总含量（mg/g）= 50C_总×V_总/m_总。

叶绿素提取率的计算：一般情况下，浸出率η的计算可用下式表示:

；

但在实际应用时，在计算浸出率η时可用吸光度A值来代表浓度C₀；根据朗伯一比耳定律：A=abC，式中，a为吸光系数，b为液层厚度，a和b都是常数。

综上所述，本发明提供的一种提取蚕沙中有效成分的方法，采用一步法提取蚕沙中的有效成分，简化原有的生产工艺，减少了大量溶剂的使用。利用各有效成分分子量的不同，采用3级膜分离技术，可有效地将大分子物质从提取液中分离出来，超滤纯化后制备的叶绿素提取液，避免了后续过程中各成分的相互干扰，明显提高了产品的纯度。膜纯化技术操作简便、省时，又节约了处理成本，而且纯化过程操作简单，极具工业应用前景。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.一种提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，包括步骤：

2.根据权利要求1所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，所述步骤A之前还包括步骤：对蚕沙进行软化处理，所述软化处理的方法为：

3.根据权利要求1所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，所述步骤C中，通过一级膜分离方法从提取液中提取果胶的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为30万D的膜组件，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将提取液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于30万D的果胶溶液；再将分子量小于30万D的果胶溶液经截留分子量为3万D的超滤膜处理，得到分子量为3万～30万D的果胶溶液和分子量小于3万D的果胶滤液，将得到的分子量为3万～30万D的果胶溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到果胶。

4.根据权利要求3所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，所述步骤C中，通过二级膜分离方法从果胶滤液中提取叶蛋白的过程包括步骤：首先组装好截留分子量为1万D的膜组件，在25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将果胶滤液输入到膜组件中，透过膜组件的透过液从膜组件外侧的出口端流出，得到分子量小于1万D的叶蛋白溶液；将分子量小于1万D的叶蛋白溶液经截留分子量为0.5万D的超滤膜处理，得到分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液和分子量小于0.5万D的叶蛋白滤液，将得到的分子量为0.5万～1万D的叶蛋白溶液放入旋转蒸发仪中进行浓缩，再经过真空干燥，得到叶蛋白。

5.根据权利要求4所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，所述步骤C中，通过三级膜分离方法从叶蛋白滤液中提取叶绿素的过程包括步骤：选用截留分子量为3 万D的再生纤维素膜，在温度25℃、入口压力70kPa、出口压力30kPa条件下，将叶蛋白滤液输入到再生纤维素膜上，透过再生纤维素膜的叶绿素溶液，经浓缩和真空干燥，得到叶绿素。

6.根据权利要求3所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，还包括步骤：对得到的果胶进行鉴定，所述鉴定的方法包括如下：

7.根据权利要求4所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，还包括步骤：采用凯氏半微量定氮法测定叶蛋白中蛋白质的含量。

8.根据权利要求5所述的提取蚕沙中有效成分的方法，其特征在于，还包括步骤：利用紫外-可见分光光度计对得到的叶绿素进行定性鉴定。