CN105461731A

CN105461731A - 连翘脂素布洛芬酯、其制备及其应用

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Publication number: CN105461731A
Application number: CN201410387045.9A
Authority: CN
Inventors: 樊宏宇; 富力; 王硕
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-08-07
Filing date: 2014-08-07
Publication date: 2016-04-06
Anticipated expiration: 2034-08-07
Also published as: JP6310612B2; RU2659072C1; AU2014402937B2; EP3178822A1; KR20170038914A; WO2016019683A1; KR101925133B1; CN105461731B; ES2736604T3; CA2956982A1; AU2014402937A1; US20170233403A1; EP3178822A4; CA2956982C; JP2017523973A; US9963461B2; EP3178822B1

Abstract

本发明提供了如式(I)所示的连翘脂素布洛芬酯药用化合物、制备方法及其抗病毒、解热、抗炎镇痛等应用：

Description

连翘脂素布洛芬酯、其制备及其应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体而言，本发明涉及连翘脂素布洛芬酯的制备方法，以及这一类化合物在抗病毒、解热、抗炎、镇痛的药理作用。

背景技术

连翘脂素，为连翘苷的糖配基部分，又称作连翘苷元，为木犀科连翘属植物连翘的主要活性成分，其结构如式(II)所示，现代药理研究表明，连翘脂素有抗病毒、抗氧化、降低血脂、清楚自由基、抑菌、抗肿瘤、抗炎等作用。

连翘脂素分子不稳定，易被氧化，且在酸性环境下分子构型容易发生改变。通过大鼠肠内菌模拟连翘苷的代谢研究发现，极易被肠道内菌群代谢为新的代谢物。

布洛芬是非甾体消炎镇痛良药，其结构如式(III)所示，但长期服药会引起消化不良、胃溃疡、肝脏毒性等副作用。1989年，意大利Angelini公司研发上市了一种由布洛芬与愈创木酚合成布洛芬愈创木酚酯，在人体胃肠中不降解，而是进入血液后分解为布洛芬和愈创木酚，在体内仍然发挥布洛芬的解热、镇痛、消炎作用，同时降低其对胃肠刺激及减少了肝脏毒性。2004年，沈阳药科大学赵秀丽将布洛芬与丁香酚进行酯化得到了丁香酚布洛芬酯药用化合物，同样在体内具有抗病毒、解热、镇痛、消炎作用。而且提高了丁香酚的稳定性(中国专利公开号CN1597656A)。

目前尚未见有关连翘脂素合成为酯类化合物及其药理活性报道和记载，因此，我们通过酯化反应将连翘脂素与布洛芬进行酯化反应得到连翘脂素布洛芬酯，希望得到更稳定且具有抗病毒、解热、抗炎、镇痛等多种药理作用的新化合物。

发明内容

本发明的目的是针对以上现有技术中存在的问题而提供一种新的抗病毒化合物连翘脂素布洛芬酯，其制备方法及其应用，本发明提供的连翘脂素布洛芬酯具有抗病毒、解热镇痛、抗炎的作用，可用于制备用于治疗抗病毒、解热镇痛的药物或保健品；连翘脂素布洛芬酯的制备方法工艺简单，操作方便，适合工业化放大生产。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种结构通式如式(I)所示的连翘脂素布洛芬酯化合物：

本发明另一方面提供一种连翘脂素布洛芬酯化合物的制备方法，包括如下顺序进行的步骤：

A)将布洛芬和酰基化试剂进行酰基化反应，制得布洛芬酰氯；

B)连翘脂素与布洛芬酰氯在催化剂作用下，进行酯化反应，即得。

其中，步骤A)中所述酰基化试剂选择氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷、三氯氧磷或五氯氧磷。

特别是，所述酰基化反应的反应温度为10-30℃。

尤其是，所述布洛芬与酰基化试剂的摩尔配比为1：10-12，优选为1：10。

特别是，反应时间为12-24小时，优选为15-24h。

尤其是，首先将布洛芬溶于有机溶剂后，再与酰基化试剂混合后进行所述的酰基化反应。

其中，所述有机溶剂的用量为每1mol布洛芬溶于3-4L有机溶剂中，优选为4L有机溶剂。

特别是，所述有机溶剂选择甲苯、苯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷，优选为二氯甲烷、丙酮，进一步优选为二氯甲烷。

特别是，还包括将酰基化反应后的混合物在真空状态下进行浓缩处理，去除有机溶剂，获得所述的布洛芬酰氯。

尤其是，在减压状态下进行蒸发处理，去除所述的有机溶剂。

其中，步骤B)中所述的催化剂选择有机碱或无机碱。

特别是，所述连翘脂素与催化剂的摩尔之比为1-1.2：1，优选为1：1。

其中，所述无机碱选择碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾；所述有机碱选择吡啶、三乙胺、N,N-二甲基甲酰胺或金属醇盐。

特别是，所述金属醇盐选择甲醇钠或叔丁醇钾。

其中，步骤B)中所述的连翘脂素与步骤A)中所述的布洛芬的摩尔之比为0.8-1.2：1，优选为1：1。

特别是，酯化反应温度为30-70℃，优选为40-60℃；酯化反应时间为12-24小时，优选为15-20小时。

其中，步骤B)中所述的酯化反应是将连翘脂素与布洛芬酰氯加入到有机溶剂中，在加热状态下进行所述酯化反应。

特别是，所述有机溶剂选择甲苯、苯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷，优选为二氯甲烷或丙酮。

特别是，首先将连翘脂素溶于有机溶剂；接着加入催化剂并混合均匀；然后向混合均匀的混合物中加入步骤A)制备的布洛芬酰氯，在搅拌、加热状态下进行所述的酯化反应。

尤其是，所述有机溶剂选择甲苯、苯、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷，优选为二氯甲烷或丙酮。

特别是，所述有机溶剂的用量为每1mol连翘脂素溶于15-25L的有机溶剂，优选为20L的有机溶剂。

特别是，还包括步骤C)，对酯化反应后的产物进行分离、纯化处理：C-1)将酯化反应后的混合物冷却降温；C-2)接着进行过滤处理，滤液进行浓缩处理，去除有机溶剂；C-3)然后对去除有机溶剂后的固体物质进行重结晶处理，即得连翘脂素布洛芬酯。

其中，步骤C-1)中将酯化反应后的混合物冷却降温至20-30℃；C-2)中所述浓缩处理是对降温后的混合物在真空状态下进行蒸发，去除所述的有机溶剂；C-3)中所述重结晶处理的溶剂为石油醚或正己烷。

通过上述方法制备得到的本发明化合物为连翘脂素布洛芬酯，该化合物在常温下为白色固体。连翘脂素布洛芬酯的结构确认分析如下：

高分辨质谱：583.26663；C₃₄H₄₀O₇Na⁺¹；

红外吸收光谱：特征吸收峰(cm^-1)2953.73(-CH₃)；2867.21(-CH₂-)；29835.45(Ar-OCH₃)；1760.11(C＝O)；1606.25，1591.38，1514.46(Ar-CH)；1270.57，1042.86(Ar-O-C)。

核磁共振氢谱：(CDCl3、600MHz)δppm：6.856-6.961(m,6H)、7.135-7.145(m,2H),7.322-7.335(d,2H,J＝7.8Hz),4.860-4.853(d,1H,J＝4.2Hz),4.494-4.484(d,1H,J＝6Hz),4.145-4.129(d,1H,J＝9.6Hz),3.988-3.976(d,1H,J＝7.2Hz),3.900-3.843(s,8H),3.720-3.713(s,3H),3.346-3.323(s,2H),2.891-2.881(d,1H,J＝6Hz),2.481-2.470(d,2H,J＝6.6Hz)，1.882-1.860(s,1H),1.620-1.609(d,3H,J＝6.6Hz),0.920-0.910(s,6H)。

核磁共振碳谱：(CDCl3、125MHz)δppm：172.901(C-28)、151.374(C-12)、148.880(C-18)、148.056(C-13)、140.635(C-35)、140.203(C-17)、139.486(C-10)、137.436(C-9)、130.971(C-31)、129.328(C-33)、127.445(C-36)、127.445(C-37)、122.578(C-34)、118.045(C-20)、117.767(C-16)、111.097(C-15)、110.035(C-14)、110.015(C-19)、109.020(C-11)、87.345(C-6)、82.043(C-4)、71.107(C-1)、69.830(C-8)、55.958(C-OMe)、55.933(C-OMe)、55.851(C-OMe)、54.694(C-2)、50.101(C-3)、45.107(C-38)、45.040(C-30)、30.252(C-39)、22.448(C-40，41)、18.803(C-32)。

本发明再一方面提供连翘脂素布洛芬酯的抗病毒应用。

本发明又一方面提供连翘脂素布洛芬酯在制备抗病毒药物或保健品中的应用。

连翘脂素布洛芬酯在制备解热、镇痛、抗炎药物或保健品中的应用。

其中，本发明提供含连翘脂素布洛芬酯的具有抗病毒、解热、镇痛、抗炎功效的药物或保健品组合物。

特别是，所述药物组合物，其包括本发明连翘脂素布洛芬酯，以及药学上可接受的辅料。

在本文中，药学上可接受的辅料指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀释剂、载体、pH调节剂、离子强度调节剂、缓释或控释剂、包裹材料或其他制剂辅料。所用载体可与相应的给药形式相适应，可使用本领域技术人员所知晓的辅料配成注射剂、(注射用)冻干粉、喷雾剂、口服溶液、口服混悬液、片剂、胶囊、肠溶片、丸剂、粉剂、颗粒剂、持续释放或延迟释释放等制剂。优选本发明第一方面的连翘脂素布洛芬酯通过注射或经消化道方式给药，因此，本发明的药物组合物优选为注射剂或经消化道给药的制剂，即适于配制成注射和经消化道方式给药的辅料特别优选的。其中，“经消化道给药”在本文中指药物制剂通过患者消化道的给药方式，包括口服、灌胃给药和灌肠给药等，优选是口服，如可使用本领域技术人员所知晓的辅料配成口服溶液、口服混悬液、片剂、胶囊、肠溶片、丸剂、粉剂、颗粒剂、持续释放或延迟释释放等制剂；其中，注射给药的制剂主要是针剂和粉针剂。

本发明的新的化合物连翘脂素布洛芬酯具有抗病毒、解热、镇痛、抗炎的功效，可用于制备抗病毒、解热、镇痛、抗炎药物或保健品，连翘脂素布洛芬酯通过酯化反应制备而成，该制备方法反应条件温和、得率高，耗能低，环保，操作工艺条件容易控制，质量可控性强，适宜工业化大规模生产。

在上述酯化反应中，连翘脂素溶于适宜的有机溶剂，向反应体系中加入布洛芬酰氯进行酯化反应10-24小时。停止反应后，将反应液用水洗涤至中性，最后加入干燥剂除水，减压蒸去有机溶剂，得到白色固体，所得固体进行重结晶得到连翘脂素布洛芬酯。

附图说明

图1本发明连翘脂素布洛芬酯的核磁共振氢谱；

图2本发明连翘脂素布洛芬酯的核磁共振碳谱；

图3本发明连翘脂素布洛芬酯的红外吸收光谱；

图4为流感病毒肺炎模型小鼠肺组织病理切片，其中

A为正常小鼠肺组织；B为流感病毒肺炎小鼠肺组织；C为连翘脂素布洛芬酯高剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；D为连翘脂素布洛芬酯中剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；E为连翘脂素布洛芬酯低剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；F为达菲治疗流流感病毒肺炎后的小鼠肺组织。

具体实施方式

以下通过实施例进一步描述本发明，但这些实施例仅是说明本发明，而不应理解为对本发明范围的任何限制。另外，实施例中的试剂、原料都可以通过商业渠道获得，如有未尽之处，可以参考有机合成指南、药品监管机构的指引以及相应仪器、试剂的厂商说明书等。

实施例1

1、酰基化反应

称取布洛芬(2.06g，0.01mol)，置于三口瓶内，溶于40mL二氯甲烷，向三口瓶内加入酰基化试剂氯化亚砜(11.9g，0.1mol)，室温(20℃)下反应15个小时，减压蒸发掉二氯甲烷，制得布洛芬酰氯，其中布洛芬与酰基化试剂的摩尔之比为1：10；

2、酯化反应

称取连翘脂素(3.72g，0.01mol)于装有200ml丙酮溶剂的三口瓶中，混均匀；接着加入催化剂碳酸钾(1.5g，0.01mol)，并搅拌均匀；然后向三口瓶中滴加步骤1)制备的布洛芬酰氯(2.24g，0.01mol)；在搅拌状态下加热至60℃，并在保持温度为60℃的条件下进行酯化反应15h；

3、分离、纯化处理

将酯化反应后的反应混合物降温至室温(20-25℃)，过滤，去除固体残渣，滤液进行减压回收丙酮溶剂；

将回收溶剂后得到的固体溶于二氯甲烷，用水洗涤溶液至中性，无水硫酸钠干燥，减压蒸发去二氯甲烷溶剂，得到白色固体。

所得固体采用石油醚进行重结晶处理，即得连翘脂素布洛芬酯纯品5.49g，得率为98％。

连翘脂素布洛芬酯为白色固体，熔点：110℃；溶解性：溶于甲醇；氯仿，二氯甲烷等。

高分辨质谱：583.26663C₃₄H₄₀O₇Na⁺¹；分子量为561。

红外吸收光谱：特征吸收峰(cm^-1)2953.73(-CH₃)；2867.21(-CH₂-)；29835.45(Ar-OCH₃)；1760.11(C＝O)；1606.25，1591.38，1514.46(Ar-CH)；1270.57，1042.86(Ar-O-C)，如图3所示。

核磁共振氢谱：(CDCl3、600MHz)δppm：6.856-6.961(m,6H)、7.135-7.145(m,2H),7.322-7.335(d,2H,J＝7.8Hz),4.860-4.853(d,1H,J＝4.2Hz),4.494-4.484(d,1H,J＝6Hz),4.145-4.129(d,1H,J＝9.6Hz),3.988-3.976(d,1H,J＝7.2Hz),3.900-3.843(s,8H),3.720-3.713(s,3H),3.346-3.323(s,2H),2.891-2.881(d,1H,J＝6Hz),2.481-2.470(d,2H,J＝6.6Hz)，1.882-1.860(s,1H),1.620-1.609(d,3H,J＝6.6Hz),0.920-0.910(s,6H)。如图1。

核磁共振碳谱：(CDCl3、125MHz)δppm：172.901(C-28)、151.374(C-12)、148.880(C-18)、148.056(C-13)、140.635(C-35)、140.203(C-17)、139.486(C-10)、137.436(C-9)、130.971(C-31)、129.328(C-33)、127.445(C-36)、127.445(C-37)、122.578(C-34)、118.045(C-20)、117.767(C-16)、111.097(C-15)、110.035(C-14)、110.015(C-19)、109.020(C-11)、87.345(C-6)、82.043(C-4)、71.107(C-1)、69.830(C-8)、55.958(C-OMe)、55.933(C-OMe)、55.851(C-OMe)、54.694(C-2)、50.101(C-3)、45.107(C-38)、45.040(C-30)、30.252(C-39)、22.448(C-41)、22.448(C-40)、18.803(C-32)。如图2。

实施例2

1、酰基化反应

称取布洛芬(2.06g，0.01mol)，置于三口瓶内，溶于40mL二氯甲烷，向三口瓶内加入酰基化试剂三氯氧磷(15.3g，0.1mol)，室温(30℃)下反应15个小时，减压蒸发掉二氯甲烷，制得布洛芬酰氯，其中布洛芬与酰基化试剂的摩尔之比为1：10；

2、酯化反应

称取连翘脂素(3.72g，0.01mol)于装有200ml二氯甲烷溶剂的三口瓶中，混均匀；接着加入催化剂三乙胺(1.5ml，0.01mol)，并搅拌均匀；然后向三口瓶中滴加步骤1)制备的布洛芬酰氯(2.24g，0.01mol)；在搅拌状态下加热至40℃，并在保持温度为40℃的条件下进行酯化反应20h；

3、分离、纯化处理

将酯化反应后的反应混合物降温至室温(20-25℃)，过滤，去除固体残渣，滤液进行减压回收二氯甲烷溶剂；

所得固体采用石油醚进行重结晶处理，即得连翘脂素布洛芬酯纯品5.44g，得率为97％。

重结晶获得的白色固体的理化特性、光谱数据、质谱数据与实施例1制备的连翘脂素布洛芬酯一致。

实施例3

1、酰基化反应制备布洛芬酰氯

称取布洛芬(2.06g，0.01mol)，置于三口瓶内，溶于40mL二氯甲烷，向三口瓶内加入酰基化试剂五氯氧磷(20.8g，0.1mol)，室温(10℃)下反应15个小时，减压蒸发掉二氯甲烷，制得布洛芬酰氯，其中布洛芬与酰基化试剂的摩尔之比为1：10；

2、酯化反应

称取连翘脂素(3.72g，0.01mol)于装有200ml三氯甲烷溶剂的三口瓶中，混均匀；接着加入催化剂甲醇钠(0.54g，0.01mol)，并搅拌均匀；然后向三口瓶中滴加步骤1)制备的布洛芬酰氯(2.24g，0.01mol)；在搅拌状态下加热至50℃，并在保持温度为50℃的条件下进行酯化反应17h；

3、分离、纯化处理

将酯化反应后的反应混合物降温至室温(20-30℃)，过滤，去除固体残渣，滤液进行减压回收三氯甲烷溶剂；

试验例1连翘脂素布洛芬酯抗病毒试验

1体外抗病毒试验

1.1试验材料

(1)药物

①连翘脂素布洛芬酯：白色固体(实施例1制备)，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.1％；②利巴韦林注射液，无色透明液体，由河南润弘股份有限公司生产，产品批号：1206261，国药准字：H19993553，100mg/ml，作为本次试验阳性对照药物；③磷酸奥司他韦，中国药品生物制品检定所，产品批号：101096-200901，100mg/支作为本次试验阳性对照药物；④连翘脂素，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.1％；⑤布洛芬，购于中国药品生物制品检定所，批号：0179-9702。上述药品均用纯净水溶解，滤过，除菌分装，4℃备用，为本次试验待测药物。

(2)细胞株

Vero(非洲绿猴肾细胞细胞)由吉林大学基础医学院保存细胞株。

(3)病毒株

①流感病毒株、副流感病毒株、呼吸道合胞病毒(RSV)株：购于中国预防医学科学院病毒研究所；②柯萨奇病毒B₃(CVB₃)株：购自中科院武汉病毒所；③柯萨奇病毒A16(CoxA16)株、肠道病毒EV71株：购自日本仙台国立医院；④腺病毒(AdV)：购于白求恩医科大学一院儿科研究室；⑤单纯疱疹病毒I型(HSV-1)：购于中国药品生物制品检定所。

(4)主要设备与试剂

生物安全柜：BHC-1300ⅡA/B3，AIRTECH；CO₂培养箱：MCO-18AIC，SANYO；倒置显微镜：CKX41，OLYMPUS；

电子分析天平：AR1140/C，DHAUS；培养基：DMEM，HyClone；胎牛血清：HyClone；胰蛋白酶：Gibco；MTT：Sigma；DMSO：天津市北联精细化学品开发有限公司。

1.2试验方法

(1)细胞准备

Vero细胞传代培养1-2d，使之成片，界线清晰，立体感及折光度强时，用胰酶消化，待细胞面出现针尖样小孔，吸尽消化液，取数毫升培养液吹散细胞，计数，用培养液(含10％胎牛血清的DMEM)稀释至约5×10⁷个/L后，接种于96孔培养板内，待细胞长成单层。

(2)药物毒性测定

细胞毒性试验：将药物按表1-1所示浓度进行稀释，用于细胞毒性测定。

表1-1药物稀释参照表(单位：g/L)

将上述用维持液(含2％胎牛血清的DMEM)稀释好的不同浓度的药品滴加于Vero单层细胞上，每孔0.2ml，每个浓度6个复孔，另设6孔正常对照(不加药物的正常对照组)和6孔空白对照(培养液)，置37℃，5％CO₂培养箱中培养，每日置倒置显微镜观察CPE并记录。72h后，每孔加入MTT溶液20μL(5mg·mL^－1)，继续孵育4h，吸弃各孔培养液，每孔加入100μLDMSO，振荡5min，492nm测定OD值，计算细胞存活率。在SPSS18.0统计软件中，将细胞存活率进行Probit回归分析，计算药物对Vero细胞的最大无毒浓度(TC₀)和半数毒性浓度(TC₅₀)。

(3)各种病毒TCID₅₀的测定

将各种病毒进行10倍递减稀释为10^-1,10^-2,10^-3，10^-4，10^-5，10^-6不同稀释度，按序接种于单层的Vero细胞96孔培养板上，每孔100μL，每个稀释度6孔，同时设正常细胞对照组。置37℃，5％CO₂中孵育2h，弃病毒液，随即每孔加细胞维持液100μL，置37℃，5％CO₂中培养。第3天开始在显微镜下观察细胞病变结果，第7-8天判定结果并做好记录，以能使50％细胞孔发生阳性病变的最高稀释度作为终点，用karber法计算病毒滴度。

公式

{LogTCID}_{50} = XM + \frac{1}{2} d - d \frac{ΣPi}{100}

TCID₅₀：50％组织细胞感染量

XM：病毒最高浓度稀释度的对数

d：稀释度系数(倍数)的对数

Σpi：每个稀释度病变百分数的总和

(4)药物对病毒致细胞病变作用的影响

取已长满单层细胞的培养板，吸弃培养液，以100TCID₅₀对应的病毒攻击量接种细胞，37℃，5％CO₂培养箱吸附2h，加入特定浓度(最大无毒浓度左右)的各药液，每浓度6个复孔培养，200μL/孔。设利巴韦林注射液和磷酸奥司他韦为阳性药物对照组，同时设正常对照组(不加病毒不加药)和病毒对照组(加病毒但不加药物的对照组)，观察药物对病毒致CPE的影响。72h后，用MTT比色法，在492nm波长下测定OD值，计算药物抗病毒有效率(ER％)。在SPSS18.0统计软件中用ANOVA法比较各药物抗病毒有效率之间的显著性差异。

ER％＝(药物处理组平均OD值－病毒对照组平均OD值)/(细胞对照组平均OD值－病毒对照组平均OD值)×100％

1.3试验结果

(1)各种病毒的TCID₅₀

副流感病毒：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 50}{100} = - 4

流感病毒：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 50}{100} = - 4

CVB₃：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 100 + 50}{100} = - 5

HSV-1：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 100 + 30}{100} = - 4.8

AdV：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 50}{100} = - 4

RSV：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 100 + 50}{100} = - 5

CoxA16：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 100 + 50}{100} = - 5

EV71：

{LogTCID}_{50} = - 2 + 0.5 - \frac{100 + 100 + 100 + 50}{100} = - 5

(2)药物毒性测定

1)药物对细胞毒性的测定

各药物对Vero细胞的最大无毒浓度(TC₀)、半数毒性浓度(TC₅₀)及药物抗病毒实验用浓度见表1-2。

表1-2药物细胞毒性实验结果(单位：g/L)

2)药物对病毒致细胞病变保护作用结果

药物抗各种病毒的有效率及ANOVA法单因素方差分析结果，详见表1-3。

表1-3药物抗病毒有效率(ER％)统计表

注：与病毒对照组相比，^*P<0.05，^**P<0.01；与连翘脂素比，^#P<0.05，^##P<0.01。

表1-3结果显示，连翘脂素布洛芬酯对流感病毒、副流感病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-I)、肠道病毒EV71的抑制率及有效率均超过99％，与病毒对照组相比差异明显，具有统计学意义。连翘脂素布洛芬酯对多种病毒的抗病毒疗效表现优于连翘脂素、利巴韦林和磷酸奥司他韦的优势。

2.体内抗病毒试验

2.1实验材料

(1)实验动物

昆明种小鼠由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供，医动字第10-5219号。

(2)检测仪器、试剂

2.2实验方法

(1)流感病毒和副流感病毒对小鼠半数致死量的测定

将流感病毒和副流感病毒(细胞裂解液)10倍递比稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5浓度的病毒液。取昆明种小鼠120只，流感病毒和副流感病毒组各60只，分别随机分成6组，乙醚轻度麻醉小鼠，滴鼻感染不同稀释度病毒液0.03mL/只。同时设空白对照，用生理盐水代替病毒悬液。以死亡和生存为观察指标，每天观察，直至感染后的14天。感染24h内死亡的为非特异死亡，不予统计，Karber法计算病毒液LD50。计算公式：[其中：LD₅₀：半数致死量；XM：病毒最高浓度稀释度的对数；d：稀释度系数(倍数)的对数；Σpi：每个稀释度病变百分数的总和]。

(2)连翘脂素布洛芬酯抗流感病毒和副流感病毒感染所致肺炎的研究

1)试验动物及分组

取四周龄的昆明小鼠840只，进行2项试验。取小鼠420只，随机分成21组，每组10只，用于连翘脂素布洛芬酯对流感病毒感染小鼠肺指数和肺指数抑制率的测定试验,3次重复试验，每次取小鼠70只。另取小鼠420只，随机分成21组，每组10只，用于连翘脂素布洛芬酯对肺悬液病毒血凝滴度的测定试验，3次重复试验，每次取小鼠70只。

2)感染方法

在200～300mL大小的烧杯内放入一团脱脂棉，然后倒入适量的乙醚(使脱脂棉变湿即可)，把装有脱脂棉的烧杯倒扣过来，把小鼠放入进行麻醉，见小鼠极度兴奋，明显呈无力样时，将小鼠仰卧，滴鼻感染15LD₅₀流感病毒和副流感病毒0.03ml/鼻孔，正常对照组用生理盐水代替病毒悬液。

3)给药方法及给药剂量

连翘脂素布洛芬酯组、利巴韦林和磷酸奥司他韦对照组，分别于感染前一天开始常规灌胃给药，连翘脂素布洛芬酯高、中、低给药剂量分别为13.0、8.0、4.0mg/kg，利巴韦林阳性药给药剂量为58.5mg/kg，每天一次，连续给药5d，病毒对照组灌服相同体积的生理盐水。

4)观察指标

①肺指数测定

小鼠用药后第5天，先禁食水8小时，称体重后摘眼球放血处死动物，打开胸腔摘出全肺，以生理盐水洗涤两次，用滤纸吸干表面水份，电子天平称肺重，按下列公式计算计算肺指数和肺指数抑制率：

肺指数＝(小鼠肺重/小鼠体重)×100％；肺指数抑制率＝(感染模型组平均肺指数-实验组平均肺指数)/感染模型组平均肺指数×100％。

②肺悬液病毒血凝滴度测定

分别取治疗后第5天的各组小鼠肺，低温下置匀浆器研磨成匀浆，生理盐水稀释为10％的肺组织悬液，离心取上清，倍比稀释，按0.2ml/孔滴于滴定板上,每孔加入0.2ml1％鸡红细胞悬液,混匀,置室温30min,观察记录血凝滴度。以红细胞凝集(++)时为終点，以悬液稀释倍数表示其滴度。

③肺组织形态学观察

分别取治疗后第5天的各组小鼠肺，肉眼观察记录脏大体病变情况。生理盐水中漂洗干净，用滤纸吸干，取一部分10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察并拍照。

2.3实验结果及分析

(1)流感病毒和副流感病毒对小鼠半数致死量的测定结果

实验组昆明种小鼠分别被滴鼻感染不同浓度流感病毒、副流感病毒液30μL，感染第3天前3组(病毒浓度为10^-1组、10^-2组、10^-3组)小鼠均出现不同程度的发病症状：耸毛、发抖、饮食减少等；第5天小鼠出现走路摇摆不定；第6天最高病毒浓度组小鼠开始出现死亡，其余各组于感染后第7天陆续出现死亡现象。观察14天结束后，统计各组小鼠死亡数目，结果见下表1-4、1-5。计算该流感病毒的LD₅₀为稀释度10^-2.9，副流感病毒的LD₅₀为稀释度10^-2.5。

表1-4流感病毒半数致死量试验结果统计

Karber法计算病毒的LD₅₀。流感病毒的LogLD₅₀如下：

{LogLD}_{50} = XM + \frac{1}{2} d - d \frac{ΣPi}{100} = - 1 + 0.5 - (80 % + 60 % + 40 % + 20 % + 0 % + 0 %) = - 2.9

表1-5副流感病毒半数致死量试验结果统计

Karber法计算病毒的LD ₅₀ 。副流感病毒的LogLD₅₀如下：

{LogLD}_{50} = XM + \frac{1}{2} d - d \frac{ΣPi}{100} = - 1 + 0.5 - (90 % + 70 % + 40 % + 30 % + 10 % + 0 %) = - 2.5

(2)连翘脂素布洛芬酯抗流感病毒和副流感病毒感染所致肺炎的作用结果

①肺指数测定

流感病毒和副流感病毒感染小鼠后，平均肺指数测定结果显示：与感染模型组比较，连翘脂素布洛芬酯浓度在3.25～13.0mg/kg/d范围内有一定保护作用,肺指数均明显降低；连翘脂素布洛芬酯高剂量组对流感病毒和副流感病毒的疗效优于连翘脂素组(P<0.05)。试验结果见表1-6、1-7。

表1-6连翘脂素布洛芬酯对流感病毒感染小鼠肺指数和肺指数的抑制率(n＝3)

与病毒对照组比较,^*P<0.05，^**P0.01；与连翘脂素组比较，^#P<0.05，^##P0.01。

表1-7连翘脂素布洛芬酯对副流感病毒感染小鼠肺指数和肺指数抑制率的影(n＝3)

②肺悬液病毒血凝滴度测定

流感病毒和副流感病毒感染小鼠后，感染模型组肺组织病毒血凝滴度(InX)分别为32.40和33.11，不同浓度连翘脂素布洛芬酯治疗5天后，肺组织病毒血凝滴度均有所下降，与感染模型组比较，差异有显著性,(P<0.01)；其中，连翘脂素布洛芬酯中、高剂量组对流感、副流感病毒血凝滴度均明显低于模型组，抑制率均高于连翘脂素组，差异显著(P<0.05，p<0.01)。试验结果见表1-8、1-9。

表1-8连翘脂素布洛芬酯对流感病毒感染小鼠肺悬液血凝滴度的影响(n＝3)

表1-9连翘脂素布洛芬酯对副流感病毒感染小鼠肺悬液血凝滴度的影响(n＝3)

③肺组织学检测结果

病毒性肺炎模型组镜下可见：流感病毒和副流感病毒肺炎模型组小鼠支气管、细支气管壁、肺泡壁等肺间质充血、水肿以及淋巴细胞、单核细胞浸润，肺泡壁增宽，肺泡呈炎症反应。连翘脂素布洛芬酯药高、中剂量组给药组流感病毒小鼠肺病变明显减轻，部分肺组织形态结构正常。病理照片详见附图。

流感病毒肺炎模型小鼠肺组织病理切片镜检检测结果如图4所示，其中图A为正常小鼠肺组织；图B为流感病毒肺炎小鼠肺组织；图C为连翘脂素布洛芬酯高剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；图D为连翘脂素布洛芬酯中剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；图E为连翘脂素布洛芬酯低剂量组治疗流感病毒肺炎后的小鼠肺组织；图F为达菲治疗流流感病毒肺炎后的小鼠肺组织。

2.4结论

体内抗病毒试验结果显示，连翘脂素布洛芬酯在3.25～13mg/kg/d的剂量范围对流感病毒和副流感病毒及所引起的小鼠病毒性肺炎具有较明显的抑制作用，能明显降低其肺指数和血凝滴度，肺组织病理学也有明显改善，与病毒模型对照组比较差异显著；且连翘脂素布洛芬酯中、高剂量组疗效明显优于连翘脂素(^*P<0.05或^**P<0.01)，同时表现出优于利巴韦林和磷酸奥司他韦的趋势。

试验例2连翘脂素布洛芬酯解热、镇痛、抗炎试验

1.1试验材料

(1)试验动物Wistar大鼠，体重120～250g，雌雄兼用，合格证号：医动字第13-1225；日本大耳白兔，雄性，体重1.5～2.0kg。合格证号：医动字第10-5115，均由长春高新医学动物实验中心供给，动物饲料由吉林大学实验动物部供给。

(2)试验药品连翘脂素布洛芬酯：白色固体(实施例1制备)，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.1％。用试验时以0.5％羧甲基纤维素钠配制成所需浓度。

1.2主要仪器与试剂

YLS-7A大鼠足趾肿胀测量仪：山东省医学科学院设备站；722可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司生产；便携式数字测温仪：型号WSC-411P，上海浦东三厂；毛果芸香碱：天津市人民制药厂，批号:20130112；组胺：上海生化所，批号：20130115；5-羟色胺：上海生化所，批号:20130623；伊文思蓝：上海化学试剂采购供应站，批号：20130217；扑尔敏片：长春经济开发区药业有限公司，批号：20130801；角叉菜胶：吉林省药物研究所，批号：20130502；扑热息痛片：辽源市百康药业有限责任公司，批号：20130512；阿司匹林片：白城万达药业有限公司，批号：20130305；啤酒酵母：北京奥博星生物技术责任有限公司，批号：2013020；伤寒、副伤寒疫苗：长春生物制品研究所，批号：20130216。

1.3统计处理

统计分析采用两样本比较的秩和检验、X²检验及t检验。

2.1连翘脂素布洛芬酯对大鼠足跖部汗液分泌影响的试验(着色法)

(1)材料与方法

本试验根据大鼠足跖部肉垫上有汗腺分布，其汗液分泌的多少可利用碘与淀粉遇汗液即可产生紫色反应的机理，观测汗液分泌的变化。

试验取Wistar大鼠350只，雌雄各半，体重120～150g。按体重、性别随机分为35组，即：对照(0.5％羧甲基纤维素)组，连翘脂素布洛芬酯2.5、5、10mg/kg各5组、前体药物布洛芬组(300mg/kg)5组和连翘脂素组(10mg/kg)5组及阳性药毛果芸香碱(35mg/kg)组5组，每组10只。将大鼠置入自制的大鼠固定袋内，暴露双后肢。用棉签蘸取无水乙醇将其右足跖部污物轻轻擦洗干净。除毛果芸香碱溶液皮下注射外，其余各组均采用灌胃方式给药。给药后1h(毛果芸香碱组于给药后30min)，先将各组大鼠右足跖原有的和由于挣扎时所致的汗液用干棉签轻轻拭干，涂上和田-高垣氏试剂A液(取碘2g溶于100ml无水乙醇)，待充分干燥后，再薄薄涂上和田-高垣氏试剂B液(取可溶性淀粉50g、蓖麻油100ml均匀混合)。分别于涂B液后1、5、10、15及20min用放大镜仔细观察深紫色着色点(即汗点)出现的颜色和数量。试验结束后，按两样本比较的秩和检验进行统计学处理，比较各组间的差异。

(2)结果

与对照组比较，连翘脂素布洛芬酯10mg/kg组于涂B液后5、10、15及20min对大鼠足跖部汗液分泌均有明显促进作用(^*P<0.05)，且具有缓缓促进大鼠足跖部汗液分泌的作用特点、与阳性药毛果芸香碱相当；其中，高、中、低剂量分别于给药后5至20分钟、10至20分钟、20分钟均表现明显促进大鼠足跖部汗液分泌的作用，且高、中剂量分别于给药后5至20分钟、10至15分钟促进发汗作用的疗效明显优于连翘脂素(^#P<0.05)，高剂量组给药后20分钟促进发汗作用的疗效明显优于布洛芬，见表2-1、2-2、2-3、2-4、2-5。

表2-1连翘脂素布洛芬酯对正常大鼠足跖部汗液分泌的影响(着色法)

表2-2连翘脂素布洛芬酯对正常大鼠足跖部汗液分泌的影响(着色法)

表2-3连翘脂素布洛芬酯对正常大鼠足跖部汗液分泌的影响(着色法)

表2-4连翘脂素布洛芬酯对正常大鼠足跖部汗液分泌的影响(着色法)

表2-5连翘脂素布洛芬酯对正常大鼠足跖部汗液分泌的影响(着色法)

汗点等级评定标准：

“-”大鼠足跖肉垫表面无汗点；

“+”大鼠足跖肉垫表面偶见汗点，汗点面积约占足跖表面的10％以下；

“++”大鼠足跖肉垫表面散在分布汗点，汗点面积约占足跖表面的11-40％；

“+++”大鼠足跖肉垫表面多处分布汗点，汗点面积约占足跖表面的41-70％；

“++++”大鼠足跖肉垫表面均匀分布汗点，汗点面积约占足跖表面的71％以上。

各试验组与对照组比较，^*P<0.05；连翘苷和连翘脂素的组合物与连翘脂素比较，^#P<0.05。连翘苷和连翘脂素的组合物与布洛芬比较，^▲P<0.05。

2.2连翘脂素布洛芬酯对大鼠足跖部汗液分泌的影响(组织形态观察法)

(1)材料与方法

本试验根据大鼠汗腺兴奋时，除汗液分泌增加外，汗腺上皮细胞内的形态也随之改变。光学显微镜下可见汗腺上皮细胞空胞数目增多、扩大。这种扩大的空泡在电子显微镜下则是汗腺上皮细胞内线粒体肿胀、破裂，融合和分泌小泡扩大，通过对大鼠足跖部汗腺上皮组织形态学观察，即可了解汗腺的分泌活动。

试验取Wistar大鼠70只，雌雄各半，体重120～160g。按体重、性别随机分为7组，即：对照(0.5％羧甲基纤维素)组，连翘脂素布洛芬酯2.5、5、10mg/kg组、前体药物布洛芬组(300mg/kg)和连翘脂素组(10mg/kg)及阳性药毛果芸香碱(35mg/kg)组，每组10只。除毛果芸香碱溶液皮下注射给药外，其余各组均采用灌胃方式给药。连翘脂素布洛芬酯于给药后1h(毛果芸香碱于给药后30min)，齐踝关节处瞬时截断右后肢，随即取下右足跖部肉垫，置10％甲醛溶液中，按常规方法固定、脱水、包埋、切片、HE染色，光学显微镜下观察各组大鼠足跖部汗腺上皮细胞内变化，主要观察空泡发生率(空泡发生百分率＝空泡汗腺数/观察汗腺数×100％)，并通过X²检验进行统计学处理，比较各组间的差异。

(2)结果

与对照组比较，连翘脂素布洛芬酯5、10mg/kg组对大鼠足跖部汗液分泌均有明显的促进作用(p<0.01或p<0.001)见表2-6。

表2-6连翘脂素布洛芬酯对大鼠足跖部汗液分泌的影响(组织形态观察法)

与对照组比较，^**p<0.01，^***p<0.001；与连翘脂素组比较^#p<0.05，^##p<0.01。

2.3连翘脂素布洛芬酯对啤酒酵母致大鼠发热的影响

(1)材料与方法

雄性Wistar大鼠，体重180～200g。试验前分别用WSC-411P型便携式数字测温仪测量正常肛温2次(每次间隔一定时间)，取两次测量的平均值作为大鼠的正常体温。然后选体温在36.5～38℃的大鼠70只，按体重随机分为7组：模型(0.5％羧甲基纤维素)组，连翘脂素布洛芬酯2.5、5、10mg/kg组及阳性药扑热息痛(100mg/kg)组，前体药物对照组布洛芬组(300mg/kg)和连翘脂素组(100mg/kg)每组10只。各组大鼠均背部皮下注射10％鲜啤酒酵母混悬液10ml/kg致热。给10％鲜啤酒酵母混悬液6.0h后，连翘脂素布洛芬酯及扑热息痛均灌胃给药，模型组灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素。分别于给药后1、2、3及4h测量肛温。观察体温变化情况，并通过解热百分率进行组间t检验处理，比较各组间的差异。

(2)结果

各组大鼠皮下注射10％鲜啤酒酵母混悬液6h后，体温升高均在1.5℃左右，与致热前比较差异显著(p<0.001)，表明啤酒酵母致大鼠发热模型建立成功。与模型组比较，连翘脂素布洛芬酯中、高剂量组(5、10mg/kg)于药后1、2、3及4h对啤酒酵母混悬液所致大鼠发热均有明显的降温作用(p<0.05，或p<0.01、P<0.001)；与连翘脂素组和布洛芬组比较，连翘脂素布洛芬酯高剂量组(10mg/kg)于药后1、2、3及4h对啤酒酵母混悬液所致大鼠发热均有明显的降温作用均显著优于连翘脂素(p<0.01或p<0.001)和布洛芬(p<0.05或p<0.01)；连翘脂素布洛芬酯中剂量组(5mg/kg)于药后1、2、3及4h对啤酒酵母混悬液所致大鼠发热均有明显的降温作用均显著优于连翘脂素(p<0.05或p<0.01)，于药后2、3及4h对啤酒酵母混悬液所致大鼠发热均有明显的降温作用亦显著优于布洛芬组(p<0.05)。上述实验结果表明，连翘脂素布洛芬酯化合物降温解热疗效明显优于其前体化合物连翘脂素和布洛芬，；上述试验结果见表2-7。

2.4连翘脂素布洛芬酯对伤寒、副伤寒疫苗致家兔发热的影响

(1)材料与方法

雄性日本大耳白兔，体重1.5～2.0kg。试验前分别用WSC-411P型便携式数字测温仪测量正常肛温2次，取均值作为正常体温。然后选体温在38～39.6℃的日本大耳白兔48只，按体重随机分为8组，即：空白对照(生理盐水)组，模型对照(0.5％羧甲基纤维素)组，前体药物布洛芬组(300mg/kg)、连翘脂素组(10mg/kg)、连翘脂素布洛芬酯1.25、2.5、5mg/kg组及阳性药扑热息痛(50mg/kg)组。将兔置固定器内固定。空白对照组由耳缘静脉注射生理盐水1ml/kg；模型对照组和各药物组耳缘静脉注射伤寒、副伤寒疫苗0.8ml/kg。待兔体温升高超过1℃时(约需1～1.5h，本实验限定在1h)，空白对照组和模型组灌胃0.5％羧甲基纤维素1ml/kg，给药组灌胃连翘脂素布洛芬酯和扑热息痛。于药后30、60、90、120、180及240min测量肛温，观察体温变化情况，并通过解热百分率进行组间t检验处理，比较各组间的差异。

(2)结果

家兔耳缘静脉注射伤寒、副伤寒疫苗1h后，体温升高在1℃左右，表明伤寒、副伤寒疫苗可制备家兔发热模型。与空白对照组比较，模型组的体温在300min观察期内持续升高(p<0.05～p<0.001)；与模型组比较，连翘脂素布洛芬酯高、中剂量组(5、10mg/kg)于药后30～240min、低剂量组(5mg/kg)于药后60～240min对伤寒、副伤寒疫苗所致家兔发热均有明显的解热作用(p<0.05～p<0.001)；连翘脂素布洛芬酯高、中剂量组(5、10mg/kg)于药后30～240min、低剂量组(5mg/kg)于药后60～240min对伤寒、副伤寒疫苗所致家兔发热的解热作用，明显优于前体化合物连翘脂素组(p<0.05～p<0.001)；连翘脂素布洛芬酯高、中剂量组(10mg/kg)于药后60～240min对伤寒、副伤寒疫苗所致家兔发热的解热作用，明显优于布洛芬组(p<0.05或p<0.01)；上述试验结果见表2-8。

2.5连翘脂素布洛芬酯的镇痛作痛试验

(1)材料与方法

72只昆明小鼠，随机分为6组,每组12只。①生理盐水对照组(10mg/kg)；②阳性药阿司匹林组(200mg/kg)；③前体药物布洛芬组(300mg/kg)；④连翘脂素布洛芬酯高剂量组(300mg/kg)；⑤连翘脂素布洛芬酯中剂量组(150mg/kg)；⑥连翘脂素布洛芬酯低剂量组(75mg/kg)。各组药物灌胃1h后，于小鼠腹腔注射0.7％醋酸溶液(10ml/kg)。记录给药后15min内小鼠扭体次数。以扭体次数为评价指标，评价其镇痛作用。

(2)结果

连翘脂素布洛芬酯对醋酸所致小鼠疼痛的镇痛作用结果见表5。连翘脂素布洛芬酯低、中、高剂量组与空白对照组(生理盐水)比较，均有显著差异(P<0.01)，表明连翘脂素布洛芬酯不同剂量组均有镇痛作用。其中，连翘脂素布洛芬酯高剂量镇痛疗效显著，优于阳性药阿司匹林及前体药物布洛芬，详见表2-9。

表2-9连翘脂素布洛芬酯对错算所致小鼠疼痛作用的影响

与空白对照组比较，^*P<0.01；与布洛芬各剂量组之间比较，^#P<0.01。

2.6连翘脂素布洛芬酯对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀影响

(1)材料与方法

取体重120～150g的雄性Wistar大鼠70只，按体重随机分为7组，即：空白对照(0.5％羧甲基纤维素钠)组，连翘脂素布洛芬酯2.5、5及10mg/kg组、前体药物布洛芬组(300mg/kg)和连翘脂素组(10mg/kg)及阳性药阿司匹林(200mg/kg)组，每组10只。实验各组均采用舌下静脉注射方式给药。实验前用毛细管放大测量法测定各组大鼠右后足的正常体积。为避免误差，应固定测量位置，给药前后均由1人操作。取两次测量的平均值作为给药前大鼠右后足的正常体积。给药后立即在大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜胶0.1ml致炎。测定致炎后15、30、60、120、180、240、300及360min的右后足跖体积。并通过大鼠致炎前后足跖体积的差值百分率(肿胀率)进行组间t检验处理，比较各组间的差异。

结果

与空白对照组比较，连翘脂素布洛芬酯高剂量组给药后30min至360min内对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀均有明显的抑制作用(p<0.05～p<0.001)，其疗效明显优于前体药物连翘脂素(p<0.05～p<0.001)，且药后30min疗效明显优于前体药物布洛芬(p<0.05)；连翘脂素布洛芬酯中剂量组给药后30min至240min内，对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀亦有明显抑制作用(p<0.05～p<0.01)，其疗效药后30～120min明显优于前体药物连翘脂素，药后240min疗效优于前体药物布洛芬。本试验结果说明，连翘脂素布洛芬酯具有较明显的抗炎作用，其疗效优于前体药物连翘脂素和布洛芬。见表2-10。

Claims

1.一种结构通式如式(I)所示的连翘脂素布洛芬酯化合物：

。

2.一种制备如权利要求1所述连翘脂素布洛芬酯化合物的制备方法，包括如下顺序进行的步骤：

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤A)中所述酰基化试剂选择氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷、三氯氧磷或五氯氧磷。

4.权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：步骤B)中所述的催化剂选择有机碱或无机碱。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述无机碱选择碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾；所述有机碱选择吡啶、三乙胺、N,N-二甲基甲酰胺或金属醇盐。

6.权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：步骤B)中所述的连翘脂素与步骤A)中所述的布洛芬的摩尔之比为0.8-1.2：1。

7.权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：步骤B)中所述的酯化反应是将连翘脂素与布洛芬酰氯加入到有机溶剂中，在搅拌状态下进行酯化反应。

8.权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于：还包括步骤C)，对酯化反应后的产物进行分离纯化处理，将酯化反应后的产物去除反应有机溶剂后，对固体进行重结晶处理。

9.如权利要求1所述连翘脂素布洛芬酯的抗病毒应用。

10.如权利要求1所述连翘脂素布洛芬酯在制备抗病毒药物或保健品中的应用。