CN105452862B - 肝损伤类型的检查方法 - Google Patents

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Abstract

本申请发明提供一种将受试者来源的生物学试样中的石胆酸(以下简写为LCA)浓度作为指标判断肝损伤类型的检查方法。即，本申请发明提供一种对从受试者采取的生物学试样中的LCA浓度进行测定，将测定的LCA浓度作为指标，对肝细胞损伤型、胆汁淤积型和它们的混合型肝损伤类型进行判断的检查方法。

Description

肝损伤类型的检查方法
技术领域
本发明涉及一种肝损伤的检查方法，详细而言涉及一种判断肝损伤类型的检查方法。更详细而言，本发明涉及一种判断肝损伤类型的检查方法，其中测定从受试者采取的生物学试样中的LCA浓度，将测定的LCA浓度作为指标。
背景技术
肝脏是附属于消化道的腺组织，其具有胆汁的生成分泌、解毒作用、糖代谢、蛋白质代谢、血液凝固因子的生成、激素调节作用以及脂肪、糖原、蛋白质和维生素等各种生体构成要素的储存等对生体重要的多种功能。因此，这些功能在受到病毒感染、药物或毒物、酒精的过量摄入等原因引起的急性的或慢性的损伤时，肝脏功能稳态的保持被破坏，产生重大的健康损伤。人体检查等中发现的疾病中肝功能损伤占据的比例高，据说日本成人约30％具有肝功能损伤。
肝疾病所包含的疾病，根据其原因或临床症候进行分类。例如，根据其原因，能够分类为病毒性肝炎、药剂性肝损伤、酒精性肝损伤、自身免疫性肝损伤、代谢损伤性肝损伤等。另外，根据其临床症候不同，能够分类为肝细胞损伤型和胆汁淤积型。肝细胞损伤见于病毒性肝炎、中毒性肝损伤、脂肪肝、肝硬化等。肝细胞损伤因肝细胞的坏死、脂肪化、多核细胞化、核的液泡变性化等而发生。肝细胞也称为肝实质细胞，其是构成肝脏的细胞之一，占肝脏的绝大多数。肝细胞是分泌胆汁的外分泌细胞，同时也是将血浆蛋白分泌至顶膜侧，积累糖原调节血糖的内分泌细胞。因此，肝细胞受到损伤时会引起肝功能的显著的降低。胆汁淤积是因来自肝脏的胆汁的排泄因某些原因受到阻碍而产生的，最终，导致肝内或肝外的胆道系统的一部分或整体上胆汁的流出变异常，在肝脏和血中胆汁潴留，引起黄疸或肝炎等诸症状。
现在，肝疾病的诊断和治疗使用将患者的症状和血清生化学参数的值作为指标，医师根据经验诊断肝损伤类型开始治疗的手法(非专利文献1)。作为生化学参数，使用因肝细胞损伤而从肝细胞释放的酶，具体而言，谷草转氨酶(以下简写为AST；也称为谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(GOT))、谷丙转氨酶(以下简写为ALT；也称为谷氨酸-丙酮酸转氨酶(GPT))、γ-谷氨酰转肽酶(以下简写为γ-GTP)、碱性磷酸酶(以下简写为ALP)等。
此外，通常在非临床以及临床上，进行总胆汁酸(total bile acids；以下简写为TBA)的测定。胆汁酸是在哺乳动物的胆汁中广泛发现的甾体衍生物中具有胆酸骨架的化合物的总称，是在脂肪的消化吸收发挥重要作用的胆汁的主要成分。胆汁酸由肝脏的肝细胞通过胆固醇(Cholesterol)代谢而生成(图1)，在与甘氨酸或牛磺酸(氨基酸乙磺酸)等结合后，作为胆汁被分泌。胆汁酸分为初级胆汁酸和次级胆汁酸。初级胆汁酸是由肝脏合成的胆汁酸，能够例示胆酸(以下有时简写为CA)、鹅去氧胆酸(以下有时简写为CDCA)和与CDCA具有异构体关系的熊去氧胆酸(以下有时简写为UDCA)等。次级胆汁酸是初级胆汁酸经由胆管排出至肠管通过由肠内细菌引起的脱羟化反应、脱氢反应、氢化反应和去耦反应而生成的胆汁酸，能够例示去氧胆酸(以下有时简写为DCA)或LCA等。这些例示的5种胆汁酸成分，分别以游离型、甘氨酸结合型、牛磺酸结合型这3种类型存在。此外，在一部分胆汁酸成分中，存在硫酸结合型或葡萄糖醛酸结合型。在包括人在内的多个动物种类中，作为初级胆汁酸，生成在胆酸骨架的3、7、12位具有羟基的CA和CDCA。另一方面，部分动物生成该品种特有的胆汁酸。发现了小鼠体内的α-鼠胆酸(以下有时简写为αMCA)或β-鼠胆酸(以下有时简写为βMCA)以及猪体内的猪胆酸(以下有时简写为HCA)等在人体内非常少的各动物品种特征性的胆汁酸。αMCA和βMCA是初级胆汁酸，已知其也是牛磺酸结合型。HCA是初级胆汁酸，在肠内通过其的7α-脱羟化生成猪去氧胆酸(以下HDCA)。这些胆汁酸成分也存在甘氨酸结合型或牛磺酸结合型。
肝疾病的治疗中为了选择适用于肝损伤各类型的治疗，其类型的判断是重要的。以往，以生化学参数为标准判断肝损伤类型。例如，肝细胞损伤型中将ALT或AST的上升，胆汁淤积型中将ALP或γ-GTP的上升作为一个指标，判定肝损伤类型。但是，在将生化学参数作为标准的判定方法中，也存在错误进行肝损伤类型的判断的情形。因此，测定构成胆汁酸的多个成分的血清中的各浓度，基于该结果判断肝损伤类型，进一步确定治疗方针的尝试正在进行。
目前为止，报告了肝损伤原因不同的分类和胆汁酸成分浓度之间具有多种关系(非专利文献2～6)，但是并没有得出一致的见解，没有实现临床应用。
此外，也有一些关于肝损伤的临床症候不同的分类和胆汁酸成分浓度之间的关系的报告(非专利文献6～8)，但是与原因不同的分类同样，得到多个结果，没有得出一致的见解。另一方面，提倡药剂性肝损伤的临床症候不同的分类，不是利用胆汁酸成分而是利用生化学参数的评价方法(非专利文献9)，基于此日本肝脏学会也提倡药物性肝损伤的评分(非专利文献10)。此外，本发明人等报告了将针对大鼠的药剂给药中产生的肝疾病与通过胆管结扎处理或1-萘基硫代异氰酸酯(ANIT)给药等制成的代表性的胆汁淤积模型进行比较，通过胆汁酸成分浓度的测定能够判断肝疾病损伤类型的可能性(非专利文献11)。但是，在临床上，早期诊断毛细胆管水平的肝内胆汁淤积的明确的生物标记物到目前为止没有报告，治疗方针的确定困难的情形仍不少。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:严重副作用疾病不同对应手册药物性肝损伤:10-30(平成20年4月，日本厚生劳动省)
非专利文献2:IA Bouchier,CR Pennington,Serumbile acids inhepatobiliary disease.Gut.Jun；19(6):492-6(1978).
非专利文献3:Fischer,S,Beuers,U,Spengler,U,Zwiebel,FM,Koebe,H-G,Hepatic levels of bile acids in end-stage chroniccholestatic liverdisease.Clinica Chimica Acta.251(2):173-86(1993).
非专利文献4:Williams CN,Bile-acid metabolismand the liver.ClinBiochem.9(3):149-52(1976).
非专利文献5:Berr F,Pratschke E,Fischer S,Paumgartner G.Disorders ofbile acid metabolism in cholesterol gallstonedisease.J Clin Invest.90(3):859-68(1992).
非专利文献6:Ostrow JD,Metabolism of bilesalts in cholestasis inhumans.In:Tavoloni,N,Berk,PD(Eds),Hepatictransport and bile secretion.Raven,New York,pp.673-712(1993).
非专利文献7:Burkard I,von Eckardstein A,Rentsch KM,Differentiatedquantification of human bile acids in serum byhigh-performance liquidchromatography-tandem mass spectrometry.J Chromatogr BAnalyt Technol BiomedLife Sci.826(1-2):147-59(2005).
非专利文献8:Palmeira CM,Rolo AP,Mitochondrially-mediated toxicity ofbile acids.Toxicology.203(1-3):1-15(2004).
非专利文献9:Danan G,Benichou C.Causalityassessment of adversereactions to drugs--I.A novel method based on theconclusions of internationalconsensus meetings:application to drug-inducedliver injuries.J ClinEpidemiol.46(11):1323-30(1993).
非专利文献10:泷川一，DDW-J 2004Workshop药物性肝损伤诊断标准的提案肝脏46(2):85-90(2005)
非专利文献11:桝渕纪子(Noriko Masubuchi)等，日本药物动态学会第24次年会，第305页，第2-P-43号，2009年。
非专利文献12:A.Stiehl,Bile Salt Sulphatesin Cholestasis.EuropeanJournal of Clinical Investigation.4(1):59-63(1974).
发明内容
肝损伤根据临床症候不同能够分类为肝细胞损伤型和胆汁淤积型，为了选择适用于各类型的治疗尽管其类型的判断是重要的，但是仍然没有确立能够判定这些类型的技术。因此，目前边进行治疗边通过基于医师等的经验的综合判断，实施给药等治疗。以往，将生化学参数作为标准判断肝损伤类型时，肝细胞损伤型中将ALT或AST的上升，胆汁淤积型中将ALP或γ-GTP的上升能够作为一个指标，然而仅凭此则存在错误进行判断的情形。因此，在肝疾病发病的初期阶段如果存在能够更明确判断肝损伤类型的标记物则在早期就能够确定治疗方针。
本发明的课题在于开发对肝损伤类型能够进行早期诊断有用的生物标记物，提供一种将该生物标记物作为指标的肝损伤类型的判断方法或辅助肝损伤类型的判断的方法。
本发明人等为解决上述课题进行深入研究，使用临床血清样本测定24种胆汁酸成分、肝纤维化标记物、氧化应激标记物浓度，通过对得到的测定数据的多变量解析，发现石胆酸浓度与肝损伤类型相关。具体地，发现石胆酸浓度，在肝损伤患者群中，在肝细胞损伤型肝损伤中显示高的倾向，相反在胆汁淤积型肝损伤中显示低的倾向。而且，在肝细胞损伤型肝损伤中，熊去氧胆酸浓度显示低的倾向，此外作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白浓度显示高的倾向。另一方面，在胆汁淤积型肝损伤中，去氧胆酸浓度显示低的倾向，血清硫酸结合型胆汁酸(serum sulfated bile acids；以下简写为SSBA)、作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白和透明质酸(以下简写为HA)以及作为氧化应激标记物的活性氧类(reactiveoxygen species；以下简写为ROS)显示高的倾向。此外，各种胆汁酸的牛磺酸结合体和甘氨酸结合体也显示与其游离型成分浓度相同的倾向。这表明通过利用含有具有因肝损伤类型而具有特征性倾向的这些胆汁酸成分的生物标记物，能够判断肝损伤类型，从而完成了本发明。
即，本发明涉及以下内容：
1.一种判断肝损伤类型的检查方法，其包括测定从受试者采取的生物学试样中的LCA浓度的工序，其将LCA浓度作为指标。
2.根据上述1.记载的检查方法，其进一步包括将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序。
3.根据上述1.记载的检查方法，其进一步包括测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型的工序。
4.根据上述1.记载的检查方法，其进一步包括测定的LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型的工序。
5.根据上述1.记载的检查方法，其进一步包括测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型的工序。
6.根据上述1.记载的检查方法，其包括测定UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或两个的浓度，除LCA浓度之外还将UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或两个的浓度作为指标的工序，
进一步包括测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上且测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度为下述任意1个时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型的工序：
(1)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下；
(2)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(3)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下且IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上。
7.根据上述1.记载的检查方法，其包括测定DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS中任意1个以上的浓度，除LCA浓度之外还将DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA、和ROS浓度作为指标的工序，
进一步包括测定的LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下且测定的DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS浓度为下述任意1个或2个以上时，判定肝损伤类型为胆汁淤积的工序：
(4)DCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值以下；
(5)SSBA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值以上；
(6)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(7)HA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值以上；
(8)ROS浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值以上。
8.根据上述1.记载的检查方法，包括测定IV型胶原蛋白浓度，除LCA浓度之外还将IV型胶原蛋白浓度作为指标的工序，
进一步包括测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的临界值，
而且测定的IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型的工序。
9.根据上述2.的检查方法，其中，预设定的LCA浓度的临界值为由LCA浓度的受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic Curve；以下称为ROC曲线)算出的值。
10.根据上述3.、5.、6.或8.记载的检查方法，其中，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值为由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值。
11.根据上述4.、5.、6.或8.记载的检查方法，其中，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值，是由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值。
12.根据上述6.记载的检查方法，其中，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值、预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值和预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值，分别是由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的UDCA浓度的ROC曲线算出的值和由预先确定的与肝细胞损伤型肝疾病相关的IV型胶原蛋白浓度的ROC曲线算出的值。
13.根据上述7.记载的检查方法，其中，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值和预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值，分别是由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的DCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的SSBA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的IV型胶原蛋白浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的HA浓度的ROC曲线算出的值和由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的ROS浓度的ROC曲线算出的值。
14.根据上述1.～13.中任意1项记载的检查方法，其中，上述生物学试样是血液试样。
15.根据上述1.～14.中任意1项记载的检查方法，其中，上述生物学试样是血清试样。
16.一种针对上述1.～15.中任意1项记载的检查方法判定肝损伤类型的受试者，根据其肝损伤类型选择肝损伤治疗剂的方法。
根据本发明能够提供一种判断肝损伤类型的检查方法，其中，对从受试者采取的生物学试样中的LCA浓度进行测定，将测定的LCA浓度作为指标。
本发明涉及的检查方法，通过单独或与以往实施的生化学参数的测定联合使用，能够进行根据临床症候的肝损伤类型，具体而言肝细胞损伤型、胆汁淤积型和它们的混合型的早期诊断和治疗方针的早期确定。本发明涉及的检查方法，能够使用于肝疾病的检查，其作为辅助肝疾病的诊断和治疗的方法非常有用。
附图说明
图1是表示胆汁酸代谢通路的图。
图2是利用LCA浓度的临界值说明肝损伤类型的判断方法的图。
图3是说明在肝细胞损伤型肝损伤中，胆汁酸成分中LCA浓度具有显著上升的倾向，UDCA浓度具有显著降低的倾向的模式图。与CA或UDCA具有异构体关系的CDCA浓度虽然没有显著差异，但是显示降低倾向，DCA浓度虽然没有显著差异但是显示上升倾向。
图4是说明在胆汁淤积型肝损伤中，胆汁酸成分中LCA和DCA浓度均具有显著上升倾向的模式图。CDCA、UDCA、和CA浓度虽然具有显著差异但均具有降低倾向。
具体实施方式
本说明书中使用的胆汁酸成分的各简称如表1所示。本说明书中，有时胆汁酸成分的名称以表1所示的简称进行记载。
[表1]
本发明涉及一种肝损伤的检查方法，更详细而言涉及判断肝损伤类型的检查方法。本发明涉及的检查方法是测定从受试者采取的生物学试样中LCA浓度，将测定的LCA浓度作为指标判断肝损伤类型的方法。通过将LCA浓度作为指标判断肝损伤类型，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较来能够实施。作为本发明涉及的检查方法，能够例示如下的判断肝损伤类型的检查方法，其包括测定从受试者采取的生物学试样中LCA浓度和将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序。
本发明涉及的检查方法中，除了LCA浓度之外，可以测定与LCA不同的生物标记物，即，与肝损伤类型相关的生物标记物浓度，并将LCA浓度和该生物标记物浓度作为指标，从而判断肝损伤类型。
作为与LCA不同的生物标记物，即，作为与肝损伤类型相关的生物标记物，能够例示与肝细胞损伤型肝损伤相关的UDCA和IV型胶原蛋白。此外，作为与胆汁淤积型肝损伤相关的生物标记物，能够例示DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS。
本发明涉及的检查方法，能够单独实施，也可以与以往实施的生化学参数的测定等各种检查方法联合实施。
本说明书中“肝损伤类型”意指根据肝损伤的症候而分类的类型。肝损伤的症候是指肝损伤患者所表现的各种表现或检查所见。具体地作为“肝损伤类型”，能够举出肝细胞损伤型和胆汁淤积型。在肝细胞损伤型中，构成肝脏的细胞之一，即占肝脏绝大多数的肝实质细胞受到损伤，引起肝功能的显著降低。胆汁淤积型是因来自肝脏的胆汁的排泄因某些原因受到阻碍而产生，最终，导致肝内或肝外的胆道系统的一部分或整体上胆汁的流出变得异常，在肝脏和血中胆汁潴留，引起黄疸或肝炎等诸症状。
本发明涉及的检查方法中，能够判断肝细胞损伤型和胆汁淤积型，此外，能够判断分类为肝细胞损伤型和胆汁淤积型这两者的类型，即，混合型。
作为本发明涉及的检查方法的对象的“受试者”意指被诊断为有肝功能损伤的人或/和根据任意的检查结果被怀疑为有肝功能损伤的人，包括具有分类为病毒性肝炎、药剂性肝损伤、酒精性肝损伤、自身免疫性肝损伤、代谢损伤性肝损伤等肝疾病的或/和被怀疑为具有该肝疾病的人。优选为被诊断为具有肝功能损伤的人。
本说明书中“生物学试样”只要含有胆汁酸成分即可，没有特别限制，除了胆汁酸成分外，能够优选举出可含有肝纤维化标记物和/或氧化应激标记物的试样。具体地，能够例示从受试者分离的血液、由该血液调制的血清或血浆，优选血清。
作为本说明书中的“肝损伤治疗剂”、“肝损伤的治疗方法”，例如可举出“严重副作用疾病不同对应手册药物性肝损伤”中记载的肝损伤治疗剂和肝损伤的治疗方法、各医疗设施中进行的给药方法和治疗方法等。肝细胞损伤型时，例如，进行作为甘草甜素制剂的具有抗过敏作用的强力新C制剂的静注、具有肝细胞膜保护作用的UDCA的经口给药。肝细胞损伤重症化，患有爆发性肝炎时，例如，使用中心静脉营养法(IVH)或人工肝辅助疗法。胆汁淤积型时，例如，为了补充脂溶性维生素的不足，给药维生素A或维生素K，接下来作为药物治疗使用UDCA、泼尼松龙、苯巴比妥、牛磺酸、考来替兰等。
LCA是胆汁酸的一种。胆汁酸在肝脏的肝细胞内通过胆固醇代谢生成，在与甘氨酸或牛磺酸(氨基酸乙磺酸)等结合后，作为胆汁被分泌，对脂肪的消化吸收发挥重要作用。LCA是肝脏内合成的初级胆汁酸之一的CDCA经由胆管排出至肠管并经7-α脱羟基酶引起的脱羟化反应而生成的次级胆汁酸。
肝损伤患者群中，在肝细胞损伤型肝损伤患者和胆汁淤积型肝损伤患者之间进行血清中的LCA浓度的比较之后，LCA浓度在肝细胞损伤型肝损伤患者中具有高的倾向，相反在胆汁淤积型肝损伤患者中具有低的倾向。而且，在胆汁淤积型肝损伤中，血清中的DCA浓度具有低的倾向，SSBA浓度具有高的倾向。另一方面，在肝细胞损伤型肝损伤中，血清中的UDCA浓度具有低的倾向。此外，各种胆汁酸的牛磺酸结合体和甘氨酸结合体具有与其游离型成分浓度相同的倾向。可以认为在胆汁淤积型肝损伤中，由于胆汁淤积，DCA或LCA的生成被抑制，与之相伴，CA、CDCA和UDCA浓度上升，与此相反在肝细胞损伤型肝损伤中，脂溶性高的DCA或LCA的生成亢进，CA、CDCA和UDCA的生成被抑制。
此外，除了LCA以外，在胆汁淤积型肝损伤中，作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白和HA以及作为氧化应激标记物的ROS血清中浓度具有高的倾向。另一方面，在肝细胞损伤型肝损伤中，IV型胶原蛋白血清中的浓度具有高的倾向。
肝损伤类型的判断可通过对各测定项目将其与预设定的临界值进行比较来实施。“临界值”意指区分阳性和阴性的范围的值。各测定项目的临界值能够根据肝损伤类型分别设定。临界值的设定能够利用自身公知的方法实施。例如，作为考察诊断检查有用性的方法，能够通过通常使用的ROC解析来进行临界值的设定。ROC解析中，将改变阈值时的各自的阈值的灵敏度(Sensitivity)作为纵轴，FPF(False Positive Fraction、假阳性率：1-特异性(Specificity))作为横轴绘制ROC曲线。在ROC曲线中，完全没有诊断能力的检查成为对角线上的直线，而随着诊断能力提高，对角线变为在左上方描绘出圆弧状的曲线，诊断能力100％的检查，变为贯通左边-上边上的曲线。作为临界值的设定，例如有根据包括灵敏度和特异性优异的独立变量的ROC曲线靠近左上角的事实，将与该左上角的距离变为最小的点作为临界值的方法。此外，也有将离ROC曲线中的曲线下面积(area under the curve，简写为AUC)变为0.500的斜虚线最远的点作为临界值的方法，即，计算(灵敏度+特异性-1)，将成为其最大值的点的约登指数(Youden index)设定为临界值。此处，灵敏度意指真的阳性率。此外，特异性意指真的阴性率。而且，作为其他方法，由于各测定项目与肝损伤类型的频率的关系，也能够定量地设定临界值。
对利用本发明涉及的检查方法的肝损伤类型的判断，使用图2进行说明。LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型。LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型。此外，LCA浓度为超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值的浓度且识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度小于临界值时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的两种类型，即混合型。另外，如果更详细判断，LCA浓度为超过预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值的浓度时，判定肝损伤类型为不包括混合型的肝细胞损伤型。此外，LCA浓度小于预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值时，判定肝损伤类型为不包括混合型的胆汁淤积型。
本发明涉及的检查方法中，除了LCA浓度的测定之外，可以测定UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或2个的浓度，将测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度与预设定的各自的临界值进行比较，测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上且测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度为下述任意1个时，能够判定肝损伤类型为肝细胞损伤型：(1)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下；(2)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；和(3)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下且IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上。
本发明涉及的检查方法中，除了LCA浓度的测定之外，可以测定DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS中任意1个以上的浓度，将各测定值与预设定的各自的临界值进行比较，测定的LCA浓度为预设定的LCA浓度的临界值以下且测定的DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS浓度为下述任意1个或2以上时，能够判定肝损伤类型为胆汁淤积型：(4)DCA浓度为预设定的DCA浓度的临界值以下；(5)SSBA浓度为预设定的SSBA浓度的临界值以上；(6)IV型胶原蛋白浓度为预设定的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；(7)HA浓度为预设定的HA浓度的临界值以上；和(8)ROS浓度为预设定的ROS浓度的临界值以上。
本发明涉及的检查方法中，此外，除了LCA浓度的测定之外，测定IV型胶原蛋白浓度，将各测定值与预设定的各自的临界值进行比较，测定的LCA浓度为超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值的浓度且小于识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值，而且测定的IV型胶原蛋白浓度为预设定的IV型胶原蛋白的临界值以上时，能够判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型。
本发明涉及的检查方法中使用的各测定项目的临界值的具体例如表2-1和表2-2所示。表2-1是识别肝细胞损伤型肝损伤的生物标记物的临界值的具体例。表2-2是识别胆汁淤积型肝损伤的生物标记物的临界值的具体例。例示的临界值是在后述的实施例中，将没有应用肝损伤治疗药的肝损伤患者作为对象，将从该肝损伤患者采取的血清试样作为生物学试样使用而测定各生物标记物浓度，关于测定的各生物标记物浓度，使用ROC解析对于肝损伤患者群和肝细胞损伤型肝损伤患者或胆汁淤积型肝损伤患者进行比较，求出约登指数而作为预先确定的临界值的。临界值也能够对每个测定设施或测定的母群进行设定。将上述同样的试样作为对象，积累目的生物标记物浓度的测定数据，通过利用与上述同样的解析手法进行解析，也能够适当变更该设定。此外，使用与血清试样不同的试样进行生物标记物浓度的测定时，对于将该使用的试样作为对象的各生物标记物浓度的测定数据，通过利用与上述同样的解析手法进行解析来能够适当设定临界值。
[表2-1]
[表2-2]
对本发明涉及的检查方法，通过使用上述表2-1和表2-2例示的具体的临界值实施时的具体例来进行说明。
作为本发明涉及的检查方法的具体例，可举出判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中的LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序和测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型的工序，此处、该临界值为0.0195nmol/L。
此外，作为其他具体例，可举出如下判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序，和测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以下时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型的工序，此处，该临界值为0.0241nmol/L。
进一步作为其他具体例，可举出如下判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中的LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序，和测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型的工序，此处，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值为0.0195nmol/L，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值为0.0241nmol/L。
此外，作为其他具体例，可举出如下判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中的LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序，并且测定UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或2个的浓度的工序，将测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度与预设定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度的临界值进行比较的工序，和测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上且测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度为下述任意1个时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型的工序：
(1)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下；
(2)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(3)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下，且IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
此处，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值为0.0195nmol/L，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值为0.903nmol/L，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值为128ng/ml。
进一步作为其他具体例，可举出如下判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中的LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序，进一步测定DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS中任意1个以上的浓度的工序，将通过上述进一步的测定得到的各测定值与预设定的各自的临界值进行比较的工序，和测定的LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下且测定的DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS浓度为下述任意1个或2以上时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型的工序：
(4)DCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值以下；
(5)SSBA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值以上；
(6)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(7)HA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值以上；
(8)ROS浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值以上。
此处，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值为0.0241nmol/L，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值为0.175nmol/L，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值为21.1nmol/L，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值为288ng/ml，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值为47ng/ml，且预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值为216U。
此外作为其他具体例，可举出如下判断肝损伤类型的检查方法，其包括以下工序：测定从受试者采取的血清试样中的LCA浓度的工序，将测定的LCA浓度与预设定的LCA浓度的临界值进行比较的工序，进一步测定该血清试样中IV型胶原蛋白浓度的工序，将IV型胶原蛋白的测定值与预设定的IV型胶原蛋白的临界值进行比较的工序，和测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的临界值，进一步测定的IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型的工序。此处，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值和预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值各自为0.0195nmol/L和0.0241nmol/L，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白的临界值为288ng/ml。
胆汁酸成分浓度的测定可通过该测定中使用的以往的方法来实施。例如，能够举出液体色谱/串联质谱(LC-MS/MS)法或气相色谱质谱(GC/MS)法。此外，胆汁酸或硫酸结合型胆汁酸浓度可使用市售的胆汁酸测定试剂盒来实施该测定。例如，硫酸结合型胆汁酸浓度的测定能够使用UBASTEC-AUTO、胆汁酸(USBA)试剂盒(LBS公司)实施。测定方法不局限于此，能够进行胆汁酸或其成分的测定就可使用任意的方法。
IV型胶原蛋白浓度的测定能够通过该测定中使用的以往的方法来实施。例如，使用市售的IV型胶原蛋白测定用试剂盒，能够测定IV型胶原蛋白浓度。作为上述方法，能够例示使用针对IV型胶原蛋白的抗体的酶免疫法(EIA)或酶免疫固相法(ELISA)。具体地，在生物学试样中添加抗人IV型胶原蛋白兔多克隆抗体，形成IV型胶原蛋白·7S-抗人IV型胶原蛋白兔多克隆抗体结合物(结合物1)，然后，添加利用碘125(125I)等放射性同位素标记的IV型胶原蛋白·7S(标记抗原)，形成该试样中的不与IV型胶原蛋白·7S结合的抗人IV型胶原蛋白·7S兔多克隆抗体和结合物(结合物2)，进一步添加抗兔γ-球蛋白山羊血清(山羊抗体)时，山羊抗体与结合物2反应，形成标记抗原-抗人IV型胶原蛋白·7S兔多克隆抗体-山羊抗体结合物，回收生成的沉淀，通过测定沉淀物的放射活性能够测定IV型胶原蛋白·7S浓度。
HA浓度的测定可通过该测定中使用的以往的方法实施。例如，使用市售的HA测定用试剂盒，能够测定HA浓度。作为上述方法，能够例示使用针对HA的抗体的酶免疫固相法(ELISA)。
ROS浓度的测定可通过该测定中使用的以往的方法实施。例如，能够使用市售的ROS测定用试剂盒来测定ROS浓度。具体地，利用将铁等金属离子作为催化剂的Fenton反应，由过氧化物(ROOH)产生自由基(ROO·或RO·)，与N，N-二甲基-1，4-苯二胺硫酸盐(简写为DEPPD)反应，对由该反应生成的DEPPD·+通过测定波长505nm处的吸收，能够测定生成自由基的物质的总量。
本发明包含针对利用本发明涉及的检查方法判定肝损伤类型的受试者，根据该肝损伤类型选择肝损伤治疗剂的方法。
此外，本发明包含针对利用本发明涉及的检查方法判定肝损伤类型的受试者，根据该肝损伤类型进行治疗的治疗方法。
作为根据肝损伤类型的肝损伤治疗剂或肝损伤的治疗方法，例如，可举出“严重副作用疾病不同对应手册药物性肝损伤”中记载的肝损伤治疗剂和肝损伤的治疗方法，在各医疗设施进行的给药方法和治疗方法等。肝细胞损伤型时，例如，进行作为甘草甜素制剂的具有抗过敏作用的强力新C制剂的静注或UDCA的经口给药。肝细胞损伤重症化，患有爆发性肝炎时，例如，使用中心静脉营养法(IVH)或人工肝辅助疗法。胆汁淤积型时，例如，为了补充脂溶性维生素的不足，给药维生素A或维生素K，接下来作为药物治疗使用UDCA、泼尼松龙、苯巴比妥、牛磺酸、考来替兰等。
以下，基于实施例对本发明进行具体说明，但本发明不被解释为局限于这些实施例。
实施例1
以开发对肝损伤类型的早期诊断有用的生物标记物作为目的，使用从肝损伤患者和健常志愿者得到的血清试样，进行胆汁酸成分浓度以及氧化应激标记物和肝纤维标记物的测定。血清试样的采取和一系列实验是征得作为试样提供者的患者和健康志愿者的同意而进行的。
1.对象试样
基于第一三共株式会社和慈惠医科大学内的伦理委员会的批准，在约2年时间内，从疑似具有病毒性、自身免疫性、酒精性、遗传性等肝损伤的患者150例采取血清样品304样本。此外，从志愿者采血作为健康人来源的血清试样使用。血清试样在生物标记物测定前-80℃下保存。
2.评价项目
测定各胆汁酸成分，具体为CA、DCA、CDCA、UDCA、LCA、12＿KLCA、αMCA、βMCA、HDCA、GCA、GDCA、GCDCA、GUDCA、GLCA、GHCA、GHDCA、TCA、TDCA、TCDCA、TUDCA、TLCA、TβMCA、THCA和THDCA的24种胆汁酸成分以及硫酸结合型胆汁酸SSBA的浓度。
此外，测定作为生化学参数的ALT、AST、ALP、γ-GTP、总胆红素(以下简写为T.BIL)、直接胆红素(以下简写为D.BIL)、TBA、白蛋白(以下简写为ALB)、凝血酶原时间(以下简写为PT)的浓度。进一步测定作为氧化应激标记物的8-OHdG和ROS以及作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白和HA浓度。
3.测定方法
利用LC-MS/MS法测定全部24种胆汁酸成分。定量下限是仅将12-KLCA设置为0.03nmol/m，其他的测定对象物质设置为0.01nmol/mL。定量上限是仅将12-KLCA和CA设置为10nmol/mL，其他的测定对象物质设置为30nmol/mL。内标(IS)使用萘草胺。柱使用ACQUITY UPLC BEH C18、1.7m、2.1×50mm(Waters公司制)、流动相使用0.1％甲酸和乙腈，将它们的比例根据测定时间进行变化。离子化法选择电喷雾离子化(简写为ESI)法Negative，检测方法选择选择离子检测(Selected Ion Recording；简写为SIR)。前处理方法设置为除蛋白法。硫酸结合型胆汁酸浓度使用300μL血清和UBASTEC-AUTO、胆汁酸(USBA)试剂盒(LBS公司)，利用BioMajesty JCA-BM2250(JEOL)测定。
作为氧化应激标记物的8-OHdG和ROS的测定按照以下方式实施。8-OHdG使用日本老化控制研究所贩卖的试剂盒测定。ROS利用将铁等金属离子作为催化剂的Fenton反应，由过氧化物(ROOH)产生自由基(ROO·或RO·)，与N，N-二甲基-1，4-苯二胺硫酸盐(简写为DEPPD)反应。生成的DEPPD·+在波长505nm处具有吸收，通过测定该吸光度测定生成自由基的物质的总量。
生化学参数利用临床检查中通常实施的方法测定。
作为肝纤维化标记物的IV型胶原蛋白·7S和HA的测定按照以下方式实施。IV型胶原蛋白·7S与抗人IV型胶原蛋白兔多克隆抗体反应，形成IV型胶原蛋白·7S-抗人IV型胶原蛋白兔多克隆抗体结合物(结合物1)。添加碘125(125I)标记人IV型胶原蛋白·7S(标记抗原)时，不与样本中IV型胶原蛋白·7S结合的抗人IV型胶原蛋白·7S兔多克隆抗体与标记抗原反应，形成标记抗原-抗人IV型胶原蛋白·7S兔多克隆抗体结合物(结合物2)，进一步，添加抗兔γ-球蛋白山羊血清(山羊抗体)时，山羊抗体与结合物2反应，形成标记抗原-抗人IV型胶原蛋白·7S兔多克隆抗体-山羊抗体结合物，沉淀。将未反应的标记抗原除去后，测定沉淀物的放射能力，求出IV型胶原蛋白·7S浓度。HA使用HA ELISA试剂盒(CosmoBio株式会社制)测定。
4.数据解析方法
解析各种生物标记物的变动与综合判断的肝损伤的症候的相关性。将从肝损伤患者150例得到的血清样品304样本作为解析对象，算出背景资料的基本统计量。不考虑同一病例的样本间的相关实施解析。
为了考察与肝损伤的症候不同类型识别相关的生物标记物，使用将患者背景因子作为调整因子的多变量Logistic回归模型，算出相对于生物标记物候选因子的综合判断的肝损伤症候(肝细胞损伤或胆汁淤积)的比值比和其95％置信区间。生物标记物候选因子，设置为胆汁酸成分浓度、氧化应激标记物、肝纤维化标记物。患者背景因子设置为性别、年龄、BMI、饮酒、肝损伤治疗药(抗病毒剂、肝庇护剂、胆汁酸制剂、氨基酸制剂·低白蛋白血浆改善药、维生素K制剂)、并发症(脂质异常症、糖尿病、闭塞性黄疸、胆结石)。
对于肝损伤症候的有无，基于独立的3个评价人的判定结果，采用2人以上判定的结果。综合分析单元作为样本，同一病例样本间的相关作为不考虑的情形。进行统计学检验时的显著水平设置为两侧5％。
上述生物标记物解析中，关于没有标准值的指标，将健康人的测定值的97.5％点(如果是正态分布相当于平均+2SD)作为标准值进行设定，将超过标准值的值区分为高值，将标准值以下的值区分为低值。
接下来，对于确认了与肝损伤的症候相关的生物标记物，为了寻求客观的评价尺度，将没有应用肝损伤治疗药的患者来源的血清试样作为对象，算出识别各生物标记物的肝损伤症候的有无的临界值。临界值的算出包括多种手法，在此基于针对肝损伤症候的有无的ROC解析，设置为灵敏度和特异性之和成为最大的值。
5.结果
获得血清样品的患者的背景资料如表3所示。[表3]
数值表示人数(％)或中位数(四分位距)。
对于规定类型识别的肝损伤症候的生物标记物进行利用共变量调整的多变量解析的结果如表4和表5所示。
[表4]
调整因子:性别、年龄、BMI、饮酒、肝损伤治疗药(抗病毒剂、肝庇护剂、胆汁酸制剂、氨基酸制剂·低白蛋白血浆改善药、Vit K制剂)、并发症(脂质异常症、糖尿病、闭塞性黄疸、胆结石)
[表5]
调整因子:性别、年龄、BMI、饮酒、肝损伤治疗药(抗病毒剂、肝庇护剂、胆汁酸制剂、氨基酸制剂·低白蛋白血浆改善药、Vit K制剂)、并发症.(脂质异常症、糖尿病、闭塞性黄疸、胆结石)
肝细胞损伤型中被确认为显著具有关联的因子是LCA(OR＝2.06、P＝0.0140)、UDCA(OR＝0.31、P＝0.0112)和IV型胶原蛋白(OR＝2.19、P＝0.0357)。LCA和IV型胶原蛋白浓度具有高的倾向，UDCA浓度具有低的倾向(表4)。与UDCA具有异构体关系的CDCA(OR＝0.50、P＝0.0950)或同样作为初级胆汁酸的CA(OR＝0.75、P＝0.4702)的浓度的关联性弱，但具有低的倾向(图3)。考虑胆汁酸的牛磺酸结合体和甘氨酸结合体，则TCDCA(OR＝2.31、P＝0.0152)、GDCA(OR＝7.34、P＝0.0017)、TDCA(OR＝3.60、P＝0.0131)、GLCA(OR＝2.17、P＝0.0195)和TLCA(OR＝4.68、P＝0.0003)浓度具有显著高的倾向，GUDCA(OR＝0.16、P＝0.0009)具有显著低的倾向。
另一方面，胆汁淤积型中被确认为显著具有关联的因子是LCA(OR＝0.29、P＜0.0001)、DCA(OR＝0.26、P＝0.0010)、SSBA(OR＝5.05、P＜0.0001)、IV型胶原蛋白(OR＝3.54、P＝0.0015)、HA(OR＝3.66、P＝0.0024)和ROS(OR＝2.68、P＝0.0010)。LCA和DCA浓度具有低的倾向，这些以外的因子浓度具有高的倾向(表4)。另一方面，发现虽然关联弱但CDCA(OR＝1.98、P＝0.0991)、UDCA(OR＝1.69、P＝0.2353)和CA(OR＝1.36、P＝0.4269)浓度具有高的倾向，得到与肝细胞损伤型对照的结果(图4)。考虑胆汁酸的牛磺酸结合体和甘氨酸结合体，则GCDCA(OR＝4.25、P＜0.0001)、TCDCA(OR＝3.32、P＝0.0002)、GCA(OR＝6.11、P＜0.0001)、TCA(OR＝7.54、P＜0.0001)、和TUDCA(OR＝3.20、P＝0.0221)浓度具有显著高的倾向、GDCA(OR＝0.35、P＝0.0182)具有低的倾向。IV型胶原蛋白是肝纤维化的指标，但即便是胆汁淤积型中也确认了与肝细胞损伤型同样的浓度变高的倾向。
对于被确认为与肝损伤症候关联的生物标记物，将没有肝损伤治疗药的适用的患者来源的血清试样作为对象，算出作为肝损伤类型判定的标准能够使用的临界值的结果，如表2-1和表2-2所示。表2-1是识别肝细胞损伤型肝损伤的生物标记物的临界值。表2-2是识别胆汁淤积型肝损伤的生物标记物的临界值。
将上述多变量解析结果与肝细胞损伤型和胆汁淤积型之间进行比较时，得到LCA在前者增加，在后者降低这一相对的结果。根据该结果，可知LCA成为对肝损伤症候的判断有用的标记物。可以认为肝细胞损伤型中，作为次级胆汁酸的LCA显示高值，伴随该代谢亢进，作为LCA的母体化合物的CDCA的异构体UDCA显示低值。与此相对，可以认为胆汁淤积中，虽然由于淤积导致初级胆汁酸的CDCA或CA关联弱但是有上升倾向，与之相伴，胆汁酸向肠管的排出被抑制，DCA或LCA浓度降低。此外，肝细胞损伤型中，TCDCA、GDCA、TDCA、GLCA和TLCA显著上升，GUDCA显著降低。这样可以认为虽然LCA的显著上升或没有显著差异，但是伴随发现上升倾向的DCA的变化，其结合体的生成也是亢进的。GUDCA具有与UDCA的降低一起减少的倾向，但作为CDCA的牛磺酸结合体的TCDCA具有上升倾向。根据上述结果，可知肝细胞损伤型中由初级胆汁酸到脂溶性高的次级胆汁酸的代谢亢进。胆汁淤积型中，发现GCDCA、TCDCA、GCA、TCA和TUDCA显著上升，GDCA降低。因此，可以认为胆汁淤积引起的CDCA和CA的两结合反应亢进。报告SSBA在胆道性疾病中上升(非专利文献12)、本试验中也显示高值，但肝细胞损伤型中未发现显著的变动。
确认了测定的肝纤维化标记物在肝细胞损伤型和胆汁淤积型中均显著上升。测定的氧化应激标记物中，8-OHdG在肝细胞损伤型具有显著降低倾向，但与健康人群相比该值没有大的变化，由于超过临界值的患者群的例数少，因此，对于与肝细胞损伤型的关联不能进行明确的判断。此外，活性氧ROS在胆汁淤积型中显示高值，但在肝细胞损伤型中没有发现显著变化。
以往肝疾病检查所使用的生化学参数，与本次测定的生物标记物的相关性低，仅利用这些生化学参数难移确切进行肝损伤症候的判断。
根据以上结果可知，LCA浓度是对肝细胞损伤型和胆汁淤积型各自表现特有且显著的变化，因此其作为判断肝损伤症候不同类型的标记物是有用的。此外，对于初级胆汁酸或SSBA而言，其作为可对利用LCA浓度的肝损伤症候不同类型的判断进行补充的标记物，对于肝细胞损伤型、胆汁淤积型混合型和这些的混合型的判定也是有效的。
如以上说明所示，本发明提供一种判断肝损伤类型的检查方法，通过本发明使得根据临床症候的肝损伤类型，具体而言肝细胞损伤型、胆汁淤积型和它们的混合型的早期诊断和治疗方针的早期确定成为可能。因此，本发明在肝疾病的检查领域非常有用。

Claims (11)

1.测定从受试者采取的生物学试样中的石胆酸LCA浓度的装置在制造判断肝损伤类型的检查装置中的应用，该检查装置包括选择对判定的肝损伤类型适合的肝损伤治疗剂的装置，所述检查装置以LCA浓度作为指标判定肝损伤类型，所述生物学试样是血清试样，测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型。
2.测定从受试者采取的生物学试样中的石胆酸LCA浓度的装置在制造判断肝损伤类型的检查装置中的应用，该检查装置包括选择对判定的肝损伤类型适合的肝损伤治疗剂的装置，所述检查装置以LCA浓度作为指标判定肝损伤类型，所述生物学试样是血清试样，测定的LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型。
3.测定从受试者采取的生物学试样中的石胆酸LCA浓度的装置在制造判断肝损伤类型的检查装置中的应用，该检查装置包括选择对判定的肝损伤类型适合的肝损伤治疗剂的装置，所述检查装置以LCA浓度作为指标判定肝损伤类型，所述生物学试样是血清试样，测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的临界值时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型。
4.根据权利要求1～3中任意1项所述的应用，其中，所述检查装置包括测定熊去氧胆酸UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或两个的浓度的装置，在LCA浓度之外还将UDCA和IV型胶原蛋白中任意1个或两个的浓度作为指标，
测定的LCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值以上且测定的UDCA和/或IV型胶原蛋白浓度为下述任意1个时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型：
(1)UDCA浓度为预设定的UDCA浓度的临界值以下；
(2)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(3)UDCA浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值以下且IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上。
5.根据权利要求1～3中任意1项所述的应用，其中，所述检查装置包括测定去氧胆酸DCA、血清硫酸结合型胆汁酸SSBA、IV型胶原蛋白、透明质酸HA和活性氧类ROS中任意1个以上的浓度的装置，在LCA浓度之外还将DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS浓度作为指标，
测定的LCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值以下且测定的DCA、SSBA、IV型胶原蛋白、HA和ROS浓度为下述任意1个或2个以上时，判定肝损伤类型为胆汁淤积型：
(4)DCA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值以下；
(5)SSBA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值以上；
(6)IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值以上；
(7)HA浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值以上；
(8)ROS浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值以上。
6.根据权利要求1～3中任意1项所述的应用，其中，所述检查装置包括测定IV型胶原蛋白浓度的装置，在LCA浓度之外还将IV型胶原蛋白浓度作为指标，
测定的LCA浓度超过预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值且小于预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的临界值，并且测定的IV型胶原蛋白浓度为预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白的临界值以上时，判定肝损伤类型为肝细胞损伤型和胆汁淤积型的混合型。
7.根据权利要求1～3中任意1项所述的应用，其中，预设定的LCA浓度的临界值为由LCA浓度的受试者工作特征曲线ROC曲线算出的值。
8.根据权利要求1、3～6中任意1项所述的应用，其中，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值为由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值。
9.根据权利要求2～6中任意1项所述的应用，其中，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值是由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值。
10.根据权利要求4所述的应用，其中，预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的LCA浓度的临界值、预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的UDCA浓度的临界值和预设定的识别肝细胞损伤型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值，分别是由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与肝细胞损伤型肝损伤相关的UDCA浓度的ROC曲线算出的值和由预先确定的与肝细胞损伤型肝疾病相关的IV型胶原蛋白浓度的ROC曲线算出的值。
11.根据权利要求5所述的应用，其中，预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的LCA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的DCA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的SSBA浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的IV型胶原蛋白浓度的临界值、预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的HA浓度的临界值和预设定的识别胆汁淤积型肝损伤的ROS浓度的临界值，分别是由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的LCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的DCA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的SSBA浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的IV型胶原蛋白浓度的ROC曲线算出的值、由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的HA浓度的ROC曲线算出的值和由预先确定的与胆汁淤积型肝损伤相关的ROS浓度的ROC曲线算出的值。
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