CN105424939A - 一种检测多菌灵的试纸条及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测多菌灵的试纸条及其制备方法和应用，试纸条包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），其特征在于：所述反应膜上具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物。本发明还提供了一种应用上述多菌灵试纸条检测烟叶中多菌灵残留的方法。本发明所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

Description

一种检测多菌灵的试纸条及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及多菌灵的检测，具体是一种用于检测多菌灵的胶体金试纸条，其特别适用于烟叶中多菌灵残留的检测。

背景技术

我国是生产和使用化学农药的大国，长期使用农药对生态环境以及人体健康的危害和影响已经引起人们的高度关注。多菌灵[carbendazim，N-(2-苯并吡唑基)氨基甲酸甲酯]为苯并吡唑类，是一种良好的广谱、内吸性杀菌剂，对子囊菌、担子菌以及半知菌类中的大多数病原菌都有效，广泛应用于农作物以及中草药的病害防治工作中。多菌灵化学性质稳定，能被植物的种子、根和叶吸收，残效期较长，对人、畜均有一定毒性，可引起抽搐、精神恍惚、恶心呕吐、胸闷、头晕等中毒症状。因此，有关多菌灵残留量的分析已经越来越受到重视。

由于多菌灵在农作物病害的防治方面有着广泛的应用，但其对人体又有一定的毒害性，目前世界许多国家都制定了多菌灵在不同种(类)农副产品中残留量的最高限量标准。加拿大国家标准规定黄瓜、西葫芦等蔬菜中多菌灵残留量每公斤不得超过0.5mg；马来西亚规定蔬菜类中多菌灵残留量每公斤不得超过1mg；我国卫生标准GB14870294中规定蔬菜、水果中多菌灵残留量每公斤不得超过0.5mg。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况而提供一种检测多菌灵的试纸条及其制备方法和应用，具体是一种用胶体金免疫层析技术检测烟叶中多菌灵的方法，该方法特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测，是理想的快速筛选手段，能够更好地满足我国烟草企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种检测多菌灵的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物。

所述多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物是由多菌灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述多菌灵半抗原是由多菌灵和三氟乙酸酐、硝酸铵反应得到，其分子结构式为：

。

所述多菌灵单克隆抗体是以多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由多菌灵单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

一种制备上述试纸条的方法，包括步骤：

1）制备喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1）半抗原制备：将多菌灵和三氟乙酸酐、硝酸铵反应得到多菌灵半抗原；

2）将多菌灵半抗原与载体蛋白偶联，得到多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到多菌灵单克隆杂交瘤细胞株；

4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

6）将步骤3）制备的多菌灵单克隆抗体加入步骤5）制备的胶体金中，得到多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物；

7）将多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；

8）将多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；

9）将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（体积分数）、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

10）在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4~30℃条件下可保存12个月。

应用上述试纸条检测烟叶中多菌灵残留的方法，包括步骤：

（1）样品前处理；

（2）用试纸条进行检测；

（3）分析检测结果。

本发明的多菌灵快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及竞争抑制免疫层析分析技术，将多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的多菌灵在流动过程中，与结合物释放垫上的多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有多菌灵残留。

检测时，样品经处理后滴入样品吸收垫，当多菌灵在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线（T）和质控线（C）内各出现一条红色条带，且T线显色比C线显色深或显色深浅一致；如果多菌灵在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与多菌灵结合，从而在T线处因为竞争反应不会或者部分与多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带或T线的显色的颜色比C线浅。如图2所示。

阴性：T线显色比C线显色深或显色一致，均表示组织样本中多菌灵药物浓度低于检测限。

阳性：T线显色比C线显色浅或T线不显色，表示组织样本中多菌灵药物浓度等于或高于检测限。

无效：当质控线（C）不显示出红色条带，则无论检测线（T）显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效。

本发明的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本发明试纸条检测多菌灵残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

附图说明

图1为试纸条剖面结构示意图，

图1中：1为样品吸收垫，2为结合物释放垫，3为反应膜，4为吸水垫，5为检测线，6为质控线，7为底板。

图2为试纸条检测结果判定图。

图3为多菌灵半抗原合成图。

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1多菌灵检测试纸条的制备

该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：

1）制备喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸条。

下面分步详细叙述：

1、多菌灵半抗原的制备

多菌灵原料药经硝化反应，在苯环上引入硝基，经还原后得到带有芳香胺的半抗原产物。

三氟乙酸20mL加三氟乙酸酐2mL，冰水浴，降至0℃，加硝酸铵0.5g，搅拌1h，加入含多菌灵1.0g的三氟乙酸溶液，继续搅拌，反应2h。停止反应，就稀氢氧化钠溶液中和到中性，二氯甲烷萃取，水洗，蒸干，乙醚洗涤结晶，得到化合物a0.76g，收率67%。1HNMR（CDCl3,300MHZ）δ:8.31(1H,dd,J=1.616,J=1.239),7.69(1H,dd,J=8.716,J=1.616),7.64(1H,dd,J=8.716,J=1.239),3.85(3H,s)。

化合物a0.7g加乙醇溶解，加0.43g氯化锡水溶液10mL，通入氮气，加入回流反应3h。停止反应，旋蒸除去乙醇，加乙酸乙酯萃取，浓缩上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯（1：1，v/v）洗脱分离，得到半抗原化合物b产物0.54g，收率，83%。1HNMR（CDCl3,300MHZ）δ：3.79(3H，s),6.27(2H,s),6.90(1H,dd,J=2.225,J=1.850),6.46(1H,dd,J=8.422,J=2.225),7.34(1H,dd,J=8.422,J=1.850),5.00(1H,s),9.15(1H,s)。

图谱中化学位移δ=6.27的为苯环上芳香胺的共振吸收峰，该吸收峰的存在证明，半抗原合成成功。

2、免疫原的制备

多菌灵半抗原与牛血清蛋白偶联得到免疫原。

称取牛血清蛋白（BSA）50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1M的磷酸缓冲液PBS（PH7.2）中，得到溶液A；取30mg碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）用0.2mL水充分溶解后于加入溶液A中，室温下搅拌30min。取15mg半抗原，溶解于1mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24小时。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

多菌灵半抗原与血蓝蛋白偶联得到免疫原。

称取血蓝蛋白50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1M的磷酸盐缓冲液PBS（PH7.2）中，得到溶液A；取30mg碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）用0.2mL水充分溶解后于加入溶液A中，室温下搅拌30min。取5mg半抗原，溶解于1mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24h。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

多菌灵半抗原与甲状腺蛋白偶联得到免疫原。

称取甲状腺蛋白50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1M的磷酸盐缓冲液PBS（PH7.2）中，得到溶液A；取30mg碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）用0.2mL水充分溶解后于加入溶液A中，室温下搅拌30min。取3mg半抗原，溶解于1mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24h。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

3、包被原的制备

多菌灵半抗原与卵清蛋白偶联得到包被原。

称取卵清蛋白（OVA）50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1MPBS（PH7.2）中，得到溶液B；取30mgEDC和NHS用0.2mL水充分溶解后于加入溶液B中，室温下搅拌30min。取13mg半抗原，溶解于1mLDMF中,然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24小时。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

多菌灵半抗原与人血清白蛋白偶联得到包被原。

称取人血清白蛋白50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1MPBS（PH7.2）中，得到溶液B；取30mgEDC和NHS用0.2mL水充分溶解后于加入溶液B中，室温下搅拌30min。取15mg半抗原，溶解于1mLDMF中,然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24h。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

多菌灵半抗原与兔血清白蛋白偶联得到包被原。

称取兔血清白蛋白50mg，使之充分溶解在3.8mL0.1MPBS（PH7.2）中，得到溶液B；取30mgEDC和NHS用0.2mL水充分溶解后于加入溶液B中，室温下搅拌30min。取15mg半抗原，溶解于1mLDMF中,然后缓慢加入到蛋白溶解中，室温搅拌反应24h。用0.01mol/LPBS4℃透析3d每天换3次透析液。分装，于-20℃保存备用。

4、多菌灵单克隆抗体的制备

（1）动物免疫

将步骤2得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。

（2）细胞融合和克隆化

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8:1（数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA法测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

（3）细胞冻存和复苏

将杂交瘤细胞用冻存液制成1×10⁶个/mL的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。

（4）单克隆抗体的制备与纯化

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。

所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20%（质量分数），碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2%（质量分数）；所述细胞培养基的pH为7.4。

5、羊抗鼠抗抗体的制备

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。

6、多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物的制备

（1）胶体金的制备

用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01%（质量分数），取100mL置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入2.5mL1%柠檬酸三钠，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。

（2）多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下，用0.25mol/L碳酸钾溶液调胶体金的pH值至7.0，按每毫升胶体金溶液中加入20~50μg的标准向胶体金溶液中加入多菌灵单克隆抗体，继续搅拌混匀30min，加入10%BSA，使其在胶体金溶液中的终浓度为1%（体积分数），静置10min。12000r/min、4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。

复溶缓冲液：含酪蛋白0.02%~0.1%（质量分数）、吐温-800.05%~0.2%（质量分数）、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。

7、结合物释放垫的制备

将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白（牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为0.5%）、pH为7.2、0.5mol/L的磷酸盐缓冲液中，均匀浸湿1h，37℃烘3h备用。用Isoflow喷膜仪将制备好的多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物均匀喷涂在结合物释放垫上，每1cm结合物释放垫喷涂0.01mL多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物后，置于37℃环境中（湿度＜20%）60min后取出，置于干燥环境（湿度＜20%）中保存备用。

8、反应膜的制备

将多菌灵半抗原-卵清蛋白偶联物包被到反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。

包被过程：用磷酸缓冲液将多菌灵半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/mL，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测线（T线），包被量为0.8μL/cm；用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠抗抗体稀释到200μg/mL，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线（C线），包被量为1.0μL/cm。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。

9、样品吸收垫的制备

将样品吸收垫置于含0.5%牛血清白蛋白（体积分数）、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用。

10、试纸条的组装

将样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次按顺序粘贴在PVC底板上；结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖，结合物释放垫的末端与反应膜的始端连接，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与PVC底板的始端对齐，吸水垫的末端与PVC底板的末端对齐；所述反应膜上有检测线和质控线，检测线（T线）和质控线（C线）均为与所述试纸条的长相垂直的条状带；检测线位于靠近结合物释放垫的末端的一侧；质控线位于远离结合物释放垫的末端的一侧；将试纸条用机器切成3mm宽的小条，装在特制的塑料制卡中，4~30℃条件下可保存12个月。

实施例2样品中多菌灵残留的检测

1、样品的前处理

（1）检测前样本应恢复至室温20-25℃；

（2）烟叶样品处理方法

干烟叶	鲜烟叶
		称取1.0±0.05 g粉碎的样本至50 mL离心管中	称取2.0±0.05 g粉碎的样本至50 mL离心管中

（3）加入10mL样本提取液(50%甲醇)，用匀浆机将其充分打碎，制备待检样本液；

（4）将打碎的样本转移至注射器中，使用滤膜进行过滤

（5）干烟叶和湿烟叶的稀释方法如下表：

干烟叶（2 ppm）	鲜烟叶（300 ppb）
		100 ul样本液+900 ul样本稀释液	100 ul样本液+300 ul样本稀释液

注：样本稀释液为去离子水，没有条件的实验室推荐使用娃哈哈或者屈臣氏的纯净水。

2、用试纸条进行检测

（1）从原包装袋中取出所需数目的试纸条，打开后请在一个小时内尽快使用；

（2）用移液器取待检样本溶液100μL（滴管2-3滴）垂直滴于加样孔中；

（3）液体流动时开始计时，反应10min，判读结果，超过10min，结果可作为参考。如遇阳性结果，需用确证方法验证。

3、分析检测结果

阴性：T线显色比C线显色深或显色一致，均表示组织样本中多菌灵药物浓度低于检测限，如图2（a）。

阳性：T线显色比C线显色浅或T线不显色，表示组织样本中多菌灵药物浓度等于或高于检测限，如图2（b）。

无效：当质控线（C）不显示出红色条带，则无论检测线（T）显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效，如图2（c）。

实施例3样品检测实例

1、检测限试验

取空白干烟叶样本，在其中分别添加多菌灵至终浓度为1、2、4μg/g，取试纸条进行检测，每个样本重复测定三次。取空白鲜烟叶样本，在其中分别添加多菌灵至终浓度为150、300、600μg/kg，取试纸条进行检测，每个样本重复测定三次。

用试纸条检测干烟叶样本时，当其中多菌灵添加浓度为1μg/g时，试纸条呈阴性；当其中多菌灵添加浓度为2、4μg/g时，试纸条呈阳性，表明本试纸条对烟叶中多菌灵的检测限为2μg/g。用试纸条检测鲜烟叶样本时，当其中多菌灵添加浓度为150μg/kg时，试纸条呈阴性；当其中多菌灵添加浓度为300、600μg/kg时，试纸条呈阳性，表明本试纸条对烟叶中多菌灵的检测限为300μg/kg。

2、假阳性率、假阴性率试验

取已知多菌灵含量大于2μg/g的干烟叶阳性样本各20份和含量小于2μg/g的干烟叶阴性样本各20份，取已知多菌灵含量大于300μg/kg的鲜烟叶阳性样本各20份和含量小于300μg/kg的鲜烟叶阴性样本各20份，用三批试纸条进行检测，计算其阴阳性率。结果见表1，表2。

表1干烟叶检测样本结果

表2鲜烟叶检测样本结果

结果表明：用3个批次生产的试纸条检测阳性烟叶样本时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100%，假阴性率为0；检测20份阴性烟叶样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100%，假阳性率为0。说明本发明的检测多菌灵的试纸条可以对烟叶中多菌灵残留进行快速检测。

3、特异性试验

用多菌灵试纸条检测1μg/g噻苯达唑、甲基托布津、托布津、2-氨基苯并咪唑等药物。结果显示，试纸条质控线和检测线均显色，呈阴性。说明本试纸条对1μg/g噻苯达唑、甲基托布津、托布津、2-氨基苯并咪唑等药物无交叉反应。

Claims (8)

1.一种检测多菌灵的试纸条，包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7），其特征在于：所述反应膜上具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物。

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次粘贴在底板（7）上，且结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫（1）下。

3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物由多菌灵半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白。

4.如权利要求1或3所述的试纸条，其特征在于：所述多菌灵半抗原是由多菌灵和三氟乙酸酐、硝酸铵反应得到，其分子结构式为：

。

5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述多菌灵单克隆抗体是以多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述试纸条的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）制备喷涂有多菌灵单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

8.一种应用权利要求1-6任一所述的试纸条检测烟叶中多菌灵残留的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）样本前处理；

2）用试纸条进行检测；

3）分析检测结果。