CN105420240A - 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用 - Google Patents

治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105420240A
CN105420240A CN201510978356.7A CN201510978356A CN105420240A CN 105420240 A CN105420240 A CN 105420240A CN 201510978356 A CN201510978356 A CN 201510978356A CN 105420240 A CN105420240 A CN 105420240A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antisense oligonucleotide
odn
cell
grc
trail
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510978356.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105420240B (zh
Inventor
高晓东
陈一戎
杨丽霞
李永新
赵永强
苗海东
巨生贵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GANSU PROVINCIAL HOSPITAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Original Assignee
GANSU PROVINCIAL HOSPITAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GANSU PROVINCIAL HOSPITAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE filed Critical GANSU PROVINCIAL HOSPITAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Priority to CN201510978356.7A priority Critical patent/CN105420240B/zh
Publication of CN105420240A publication Critical patent/CN105420240A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105420240B publication Critical patent/CN105420240B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用，属于基因药物技术领域。因反义寡核苷酸序列为：5，-GGAGCGCGCGGCATCGCGGG-3，。<i>hTERT</i>基因全硫代修饰反义寡核苷酸（AS？PS-ODN）抑制肾癌GRC-1细胞端粒酶活性后，肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对GRC-1细胞凋亡有增敏作用。

Description

治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用
技术领域
本发明提供了一种治疗肾癌hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用，特别是涉及一种hTERT基因全硫代修饰的反义寡核苷酸、包含有肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的药物组合物，以及它们在用于制备治疗肾癌药物中的应用，属于基因药物技术领域。
背景技术
端粒位于染色体的末端，具有防止染色体末端降解、融合，起到保护染色体完整性、维持细胞稳定性的作用。端粒酶功能在于合成染色体末端的重复序列，以维持端粒的长度和稳定性。人类端粒酶主要在肿瘤组织中表达，而在正常组织及良性肿瘤中，除了一些具有高度再生潜力和生殖细胞组织外，几乎不表达，表明端粒酶激活与肿瘤发生过程关系密切。现已发现人类端粒酶反转录酶催化亚单位（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT），克隆了hTERT核酸序列，其基因含有逆转录酶高度保守特异序列。现已证明hTERT基因mRNA与端粒酶活性表达一致，其上游表达对端粒酶活性表达起重要作用，被认为是端粒酶活性表达的关键组分和限速因子。
TRAIL是肿瘤坏死因子（TNF）细胞因子家族的新成员，和TNF、调亡相关因子配体（FasL）一样，TRAIL也是通过与细胞膜上的相应的死亡受体(DR4，DR5)结合，激活Caspase通路，传递和放大凋亡信号，从而诱导靶细胞发生快速、大量、高效的凋亡反应[1]。TRAIL与其受体DR4，DR5特异性结合激活信号转导系统，启动凋亡程序的进行[2]。DR4，DR5同样是一种促进细胞凋亡的基因，可以合成执行细胞凋亡的酶：核酸内切酶（DNase）和凋亡蛋白酶（caspase）。前者导致肿瘤细胞染色体DNA片段化，后者水解细胞的蛋白质结构，导致细胞的全面解体[3]。
反义技术的基本原理就是根据碱基互补原则，用人工合成或生物体表达的特定互补的DNA或RNA片段(反义核酸)以抑制或封闭专一靶基因表达的技术，有理由发展成为一种新的基因治疗药物。
[1]WuXX，KakehiY，MizutaniY，etal.EnhancementofTRAIL/Apo2LmediatedapoptosisbyadriamycinthroughinducingDR4andDR5inrenalcellcarcinomacells[J].IntJCancer，2003，104(4):409-417.
[2]钦宪，何丽娅，李平法主编.医学分子生物学[M].郑州:郑州大学出版社，2003.105-116
[3]MsutomiK，PossematoR，WongJM，etal.ThetelomerasereversetranscriptaseregulateschromatinstateandDNAdamageresponses[J].PNAS，2005，102:8222-8227。
发明内容
本发明提供了一种hTERT基因全硫代修饰反义寡核苷酸（ASPS-ODN），其可以对肾癌细胞GRC-1端粒酶活性产生影响，另外，本发明还提供一种药物组合物，反义寡核苷酸与肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)，ASPS-ODN对端粒酶活性抑制作用可以对TRAIL诱导肾癌细胞GRC-1凋亡产生增敏作用。
根据本发明的第一个方面：
一种肾癌细胞hTERT基因反义寡核苷酸，其核苷酸序列为：5，-GGAGCGCGCGGCATCGCGGG-3，。
所述的反义寡核苷酸上的所有碱基是经过硫代修饰的。
根据本发明的第二个方面：
一种用于治疗肾癌的组合物，包括有权利要求1所述的反义寡核苷酸，以及肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)。
根据本发明的第三个方面：
包含有上述组合物的药物，所述的药物是以水为载体，其中反义寡核苷酸的浓度是5～20μmol/L，TRAIL的浓度是50～150ng/ml。
根据本发明的第三个方面：
上述的反义寡核苷酸在制备治疗肾癌药物中的应用。
根据本发明的第四个方面：
上述的组合物在制备治疗肾癌药物中的应用。
有益效果：hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸抑制GRC-1细胞hTERT表达及端粒酶的活性，可以增加GRC-1细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导凋亡的敏感性。采用端粒酶活性抑制剂结合肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体治疗肾癌具有良好应用前景。
附图说明
图1是ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞端粒酶活性的影响研究中的电泳图。
图2是RT-PCR检测ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞hTERT基因mRNA的影响研究中的电泳图（其中，M泳道是marker:PBR322DNA/MsplDNA分子量标准；1和2泳道分别是对照组细胞处理24、48h后；3和4泳道分别是ASPS-ODN处理组细胞处理24、48h后；5和6泳道分别是SPS-ODN处理组细胞处理24、48h后）。
图3是hTERT反义核酸与100ng/mlTRAIL联合作用48h，GRC-1细胞凋亡百分率示意图（其中图例为：A:空白组；B:SPS-ODN；C:ASPS-ODN；D:TRAIL；E:TRAIL+SPS-ODN；F:TRAIL+ASPS-ODN）。
具体实施方式
实施例1材料和方法
1.1.1主要试剂
PMBI-1640培养粉为北京天为时代科技有限公司产品，胎小牛血清为兰州民海生物制品公司产品，端粒酶检测试剂盒购自南京凯基生物公司，噻唑蓝为兰州百奥生物制品公司产品，肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体为武汉博士德生物制品公司产品。异硫氰酸荧光素标记的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白双染凋亡检测试剂盒为北京天为时代科技有限公司产品。
1.1.2引物合成
从基因库中查出hTERT基因mRNA的全部，根据hTERT基因mRNA的序列分析，设计出互补于起始密码子的反义片段，选择起始密码子上游6个碱基及后续的14个碱基共20个碱基长度为作用的靶序列。
hTERT基因的反义寡核苷酸的序列为5，-GGAGCGCGCGGCATCGCGGG-3，（SEQIDNO.1）。
正义核酸序列为5，-CCCGCGATGCCGCGCGCTCC-3，（SEQIDNO.2）。
以上每一条链上的所有碱基都进行全硫代修饰，由北京赛百胜生物制品公司合成，纯化，分装。本研究采用全硫代修饰反义核酸，硫代是指硫元素代替磷酸基团自由氧，是目前反义核酸应用研究最多的一种修饰，可以增强反义核酸的稳定性，提高反义核酸对核酸酶的耐受性，使其药物半衰期增加10倍，同时增强反义核酸对肿瘤细胞的亲核性，从而使反义核酸更容易进入肿瘤细胞核内发挥其抗肿瘤作用。
各序列经计算机网上检索证实与hTERT基因以外的已知人类基因无同源性。hTERT上游引物5，-CGGAAGAGTGTCTGGAGCAA-3，（SEQIDNO.3）；下游引物为5，-GGATGAAGCGCAGTCTGGA-3，（SEQIDNO.4），均由上海生工生物工程技术公司合成。
1.1.3细胞培养
GRC-1细胞株由兰州大学第二附属医院泌尿研究所提供。采用含100mL/L胎小牛血清（60℃灭活3min），100u/ml青霉素，100u/ml链霉素的PMBI-1640培养基，在37℃，50mL/LCO2饱和湿度条件下培养。实验选用对数生长期细胞。
1.1.4统计学分析方法数据采用均数+标准差表示，使用SPSS16.0统计学软件，采用非参数秩和检验进行统计学处理，以P<0.05为差异有统计学意义。
实施例2hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对肾癌GRC-1细胞端粒酶活性的影响
首先，采用TRAP-银染法对端粒酶活性定性分析，按试剂盒说明书操作。实验分为ASPS-ODN组，SPS-ODN组及空白对照组。采用24孔培养板，每组接种3孔，每孔接种1×105细胞。用最适浓度10μmol/L的ODN处理后，收集寡核苷酸处理不同时期后的GRC-1细胞（24、48、72h），用PBS洗涤细胞二次，加入1ml冰冷的Washbuffer，置冰上5min，4℃离心（3000rpm，5min）。弃上清后加入40μl冰冷的Lysisbuffer，置冰上30min4℃离心（13000rpm，30min；离心上清测定其蛋白浓度至5-10μg/ml。取9ulPCR扩增产物，加入1μl10×上样缓冲液，在12%非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳1h。置于硝酸银染液浸泡30min，显色液显色10min，直到全部条带显色，置于10%乙酸浸泡5min终止反应。
TRAP-银染法结果如图1所示，1、2、3条带是hTERTASPS-ODN处理细胞24、48、72h后；4、5、6条带是hTERTSPS-ODN处理细胞24、48、72h后；7、8、9条带是对照组细胞24、48、72h后。可以看出，ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞端粒酶的活性有明显的抑制作用，条带不明显，显著与与SPS-ODN组及空白对照组存在差别。
接下来，采用TRAP-PCR-ELISA法对端粒酶活性定量分析，按试剂盒说明书操作。实验分为hTERTASPS-ODN组，SPS-ODN及空白对照组。采用24孔培养板，每组接种3孔，每孔接种1×105细胞。采用端粒重复序列扩增-多聚酶链反应-酶联免疫吸附测定法检测端粒酶活性，按试剂盒说明书操作。用最适浓度10μmol/L的寡核苷酸处理后，收集寡核苷酸处理不同时期后的GRC-1细胞（24、48、72h），用磷酸盐缓冲液洗涤细胞二次，加入1ml冰冷的洗涤缓冲液置冰上5min，4℃离心（3000rpm，5min）；弃上清后加入40μl冰冷的细胞裂解液置冰上30min4℃离心（13000rpm，30min）；离心上清测定其蛋白浓度至5-10μg/ml。取5μl聚合酶链式反应扩增产物，加入20μl变性试剂，置室温孵育10min，加入225μl混合液，（含地高辛标记的检测抗体），混匀后转100μl混合液于抗生物素包被的微孔板上，37℃杂交2h，加入过氧化物酶偶联的地高辛抗体100μl，室温孵育30min。最后加入过氧化物酶底物四甲基对氨基联苯孵育10min，加入终止液终止反应。测定450nm和655nm吸光值（A）。结果如表1所示：
表1hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对肾癌GRC-1细胞端粒酶活性的影响
与对照组相比，P<0.05。
实施例3ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞hTERT基因mRNA的影响
实验分为ASPS-ODN组，SPS-ODN组及空白对照组。用最适浓度10μmol//L的ODN处理后，收集寡核苷酸处理不同时期GRC-1细胞（24h，48h），用TrizolRNA提取试剂盒提取总RNA，按照MMLV一步法RT-PCR试剂盒的操作步骤进行RT-PCR检测。EP管中加入RT-PCRbuffer25μL，模板RNA1μL，上游引物1μL，下游引物1μL，M-MuLVRT1μL，加入无菌双蒸水至50μL。以β-actin作为内对照进行PCR扩增。PCR条件：1循环：37-40℃cDNA合成30min；38循环：94℃变形15s，60℃退火30s，72℃延伸1min；1循环：72℃延伸10min。扩增产物在15g/L琼脂糖凝胶上电泳，凝胶分析仪分析结果。
RT-PCR法结果显示，ASPS-ODN作用于GRC-1细胞24h，48h，hTERT基因mRNA相对表达量分别与SPS-ODN组及空白对照组相比，有显著性差异（P<0.05）（如图2和表2所示）。
表2ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞hTERT基因mRNA的影响
与对照组相比，P<0.05。
实施例4流式细胞仪测定hTERT基因蛋白的表达水平
收集寡核苷酸处理不同时期后的GRC-1细胞（24h，48h，72h）1×105，，4℃，70mL/L的乙醇固定15min，加入含10mL/L的吐温-20穿透缓冲液洗2次，加入hTERT基因抗体50μL，4℃孵育1h，缓冲液洗2次，加入异硫氰酸荧光素标记的兔抗羊免疫球蛋白50μL，4℃孵育30min，缓冲液洗2次，置流式细胞仪上检测。
流式细胞仪测定结果显示，ASPS-ODN作用于GRC-1细胞24h，48h，72h，hTERT基因蛋白表达的阳性细胞的百分率分别与SPS-ODN组及空白对照组相比，有统计学差异（P<0.05），如表3所示。
表3ASPS-ODN对肾癌GRC-1细胞hTERT基因蛋白表达水平的影响
实施例5噻唑蓝比色试验检测hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸与肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）联合对GRC-1细胞活力的影响
实验分为6组：空白对照组(A组)、SPS-ODN(B组)、hTERTASPS-ODN组(C组)、TRAIL组(D组)、TRAIL+SPS-ODN(E组)，TRAIL+ASPS-ODN组(F组)。采用24孔培养板，每组接种三孔，每孔接种1×105细胞。第一天加入寡核苷酸10μmol/L，24h后加入100ng/mlTRAIL，空白对照组加入等量培养液。加入TRAIL24h，48h，72h，96h后，分别采用噻唑蓝比色试验检测GRC-1细胞的活力。不同作用时间的细胞，每孔加入噻唑蓝溶液20ul，37℃孵育4h，弃去孔内培养液，每孔加入150μl二甲基亚砜，振荡10min。选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值。抑制率=1-实验组A值/空白对照组A值。
hTERTASPS-ODN作用于GRC-1细胞24h加入100ng/mlTRAIL共同作用48h，GRC-1细胞抑制率为39%，与hTERTASPS-ODN组，SPS-ODN组，空白对照组，TRAIL组，TRAIL+SPS-ODN组相比有统计学意义（P<0.05）（表4）。
表4hTERT基因的全硫代修饰反义寡核苷酸与肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合作用对GRC-1细胞活力的影响(百分率)
实施例6流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率
调整细胞待测密度为1×105细胞，取1ml细胞，冷磷酸盐缓冲液洗2次（1000rpm4℃离心10min），细胞悬浮于200μl结合缓冲液中。加入10μl异硫氰酸荧光素标记的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白和5μl碘化丙啶避光室温反应15min。加入300μl结合缓冲液，立即上机检测。
hTERTASPS-ODN10μmol/L+100ng/mlTRAIL联合作用48h，GRC-1细胞凋亡百分率为35.18%，与TRAIL作用组、hTERTSPS-ODN+TRAIL联合作用组、hTERTASPS-ODN组、hTERTSPS-ODN组及对照组进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)。单用TRAIL作用组与hTERTSPS-ODN+TRAIL联合作用组，二者无显著差异（P>0.05）（如图3）。
在其它处理时间的试验中，ASPS-ODN作用于GRC-1细胞24h，48h，72h，hTERT基因蛋白表达的阳性细胞百分率明显下降。GRC-1细胞经过hTERT全硫代修饰反义寡核苷酸与TRAIL联合作用，细胞活力明显受到抑制；GRC-1细胞凋亡百分率明显增高，与单用TRAIL组比较，有统计学意义。
另外，还考察了不同的hTERTASPS-ODN的浓度与TRAIL/叶酸联用对细胞凋亡的影响。各组中分别采用hTERTASPS-ODN5～30μmol/L+100ng/mlTRAIL+5μmol/L叶酸对培养板中GRC-1细胞进行处理，处理时间为48h，每孔接种1×105细胞。依同法进行凋亡细胞的百分率的测定，在不同的hTERTASPS-ODN的浓度条件下的细胞凋亡率如表5所示。
表5不同的hTERTASPS-ODN的浓度条件下的细胞凋亡率
从上实验可以看出，抑制hTERT表达后，肿瘤细胞失去了DNA修复能力，使染色体片段化，同时削弱了肿瘤细胞对DNA损伤的反应，因而加速了TRAIL对肿瘤细胞的凋亡作用。
序列表
<110>甘肃省中医院血液净化中心
<120>治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用
<130>none
<160>2
<170>PatentInversion3.5
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>ASPS-ODN
<400>1
ggagcgcgcggcatcgcggg20
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>PS-ODN
<400>2
cccgcgatgccgcgcgctcc20
<210>3
<211>20
<212>DNA
<213>F-P
<400>3
cggaagagtgtctggagcaa20
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>R-P
<400>4
cgatgaagcgcagtctgga19

Claims (6)

1.一种肾癌细胞hTERT基因反义寡核苷酸，其特征在于：其核苷酸序列为：5，-GGAGCGCGCGGCATCGCGGG-3，。
2.根据权利要求1所述的肾癌细胞hTERT基因反义寡核苷酸，其特征在于：所述的反义寡核苷酸上的所有碱基是经过硫代修饰的。
3.一种用于治疗肾癌的组合物，其特征在于：包括有权利要求1或2所述的反义寡核苷酸，以及肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体。
4.包含有权利要求3所述的组合物的药物，其特征在于：所述的药物是以水为载体，其中反义寡核苷酸的浓度是5～20μmol/L，肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体的浓度是50～150ng/ml。
5.权利要求1或2所述的反义寡核苷酸在制备治疗肾癌药物中的应用。
6.权利要求3所述的组合物在制备治疗肾癌药物中的应用。
CN201510978356.7A 2015-12-23 2015-12-23 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用 Expired - Fee Related CN105420240B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510978356.7A CN105420240B (zh) 2015-12-23 2015-12-23 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510978356.7A CN105420240B (zh) 2015-12-23 2015-12-23 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105420240A true CN105420240A (zh) 2016-03-23
CN105420240B CN105420240B (zh) 2018-11-13

Family

ID=55498781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510978356.7A Expired - Fee Related CN105420240B (zh) 2015-12-23 2015-12-23 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105420240B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105462980A (zh) * 2015-12-23 2016-04-06 甘肃省中医院 hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1580260A (zh) * 2003-08-07 2005-02-16 徐根兴 抑制人端粒酶反转录酶基因表达的siRNA和表达载体及其在制药中的应用
CN1843511A (zh) * 2006-02-14 2006-10-11 南京中脉生物医药有限公司 抑制端粒酶逆转录酶hTERT表达的ShRNA在抗肿瘤中的应用
CN101380473A (zh) * 2008-10-14 2009-03-11 上海师范大学 一种金纳米棒基药物载体及其制备工艺和应用
CN102057054A (zh) * 2008-04-11 2011-05-11 梅里麦克制药股份有限公司 人血清白蛋白接头以及其结合物
CN102274521A (zh) * 2011-08-25 2011-12-14 天津医科大学 基于氧化石墨烯的靶向性基因载体材料及制备和应用
CN102676518A (zh) * 2012-02-27 2012-09-19 华侨大学 一种新型抗肿瘤amiRNA序列及其应用
CN105462980A (zh) * 2015-12-23 2016-04-06 甘肃省中医院 hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1580260A (zh) * 2003-08-07 2005-02-16 徐根兴 抑制人端粒酶反转录酶基因表达的siRNA和表达载体及其在制药中的应用
CN1843511A (zh) * 2006-02-14 2006-10-11 南京中脉生物医药有限公司 抑制端粒酶逆转录酶hTERT表达的ShRNA在抗肿瘤中的应用
CN102057054A (zh) * 2008-04-11 2011-05-11 梅里麦克制药股份有限公司 人血清白蛋白接头以及其结合物
CN101380473A (zh) * 2008-10-14 2009-03-11 上海师范大学 一种金纳米棒基药物载体及其制备工艺和应用
CN102274521A (zh) * 2011-08-25 2011-12-14 天津医科大学 基于氧化石墨烯的靶向性基因载体材料及制备和应用
CN102676518A (zh) * 2012-02-27 2012-09-19 华侨大学 一种新型抗肿瘤amiRNA序列及其应用
CN105462980A (zh) * 2015-12-23 2016-04-06 甘肃省中医院 hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Non-Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FENG WANG等: "Inhibiting hTERT antisense oligodeoxynucleotide changes proliferation and telomerase activity of HL-60 cells", 《LIFE SCIENCE JOURNAL》 *
KAI KRAEMER等: "Antisense-mediated hTERT Inhibition Specifically Reduces the Growth of Human Bladder Cancer Cells", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》 *
THOMAS S. GRIFFITH等: "Induction and Regulation of Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-inducing Ligand/Apo-2 Ligand-mediated Apoptosis in Renal Cell Carcinoma", 《CANCER RESEARCH》 *
XIAO-HUA FU等: "Combination of telomerase antisense oligonucleotides simultaneously targeting hTR and hTERT produces synergism of inhibition of telomerase activity and growth in human colon cancer cell line", 《WORLD JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY》 *
ZHANG YUAN等: "Inhibition of telomerase activity with hTERT antisense increases the effect of CDDP-induced apoptosis in myeloid leukemia", 《THE HEMATOLOGY JOURNAL》 *
应晓杨等: "反义寡核苷酸靶向hTERT对K562细胞株端粒酶活性和细胞凋亡的影响", 《中国实验血液学杂志》 *
杜长丽等: "叶酸靶向的肿瘤治疗研究进展", 《药物生物技术》 *
许宁等: "端粒酶反义寡核苷酸对肾癌细胞端粒酶活性及其体外增殖的影响", 《端粒酶反义寡核苷酸对肾癌细胞端粒酶活性及其体外增殖的影响》 *
郑骏年等: "小干扰RNA阻抑人端粒酶催化亚基基因表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响", 《中华外科杂志》 *
郝林等: "RNA干扰对肾癌细胞端粒酶活性及增殖、凋亡的影响", 《肿瘤防治研究》 *
高晓东: "端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导的膀胱癌细胞（T24）凋亡的影响", 《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
高晓东等: "端粒酶hTERT 反义核酸对TRAIL诱导的氟他胺耐受型前列腺癌LNCaP细胞凋亡作用的研究", 《中国男科学杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105462980A (zh) * 2015-12-23 2016-04-06 甘肃省中医院 hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用
CN105462980B (zh) * 2015-12-23 2018-03-23 甘肃省中医院 hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN105420240B (zh) 2018-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kuo et al. CXCL5/ENA78 increased cell migration and epithelial‐to‐mesenchymal transition of hormone‐independent prostate cancer by early growth response‐1/snail signaling pathway
Li et al. MiR-628-5p decreases the tumorigenicity of epithelial ovarian cancer cells by targeting at FGFR2
Xie et al. Upregulating microRNA-874-3p inhibits CXCL12 expression to promote angiogenesis and suppress inflammatory response in ischemic stroke
EP3456828A1 (en) Albumin production and cell proliferation
CN102676638B (zh) 检测bcr/abl融合基因abl激酶区耐药突变位点的方法及试剂盒
Jia et al. Berberine alleviates myocardial ischemia–reperfusion injury by inhibiting inflammatory response and oxidative stress: The key function of miR-26b-5p-mediated PTGS2/MAPK signal transduction
CN102337297B (zh) 一种mbr-FPGS高效表达载体及其构建方法和应用
Zhang et al. MicroRNA‐449b‐5p targets HMGB1 to attenuate hepatocyte injury in liver ischemia and reperfusion
Li et al. Knocking down of LINC01220 inhibits proliferation and induces apoptosis of endometrial carcinoma through silencing MAPK11
Reyes et al. Regulation of glucose metabolism in hepatocarcinogenesis by microRNAs
Zhang et al. MED13L integrates Mediator-regulated epigenetic control into lung cancer radiosensitivity
Xu et al. LncRNA FOXD2-AS1 knockdown inhibits the resistance of human osteosarcoma cells to cisplatin by inhibiting miR-143 expression.
CN109576366B (zh) lnc-TALC作为分子标志物在评估胶质母细胞瘤TMZ化疗疗效和预后中的用途
Yao et al. Long non-coding RNA 691 regulated PTEN/PI3K/AKT signaling pathway in osteosarcoma through miRNA-9-5p
Chang et al. Total glucosides of paeony inhibited autophagy and improved acute kidney injury induced by ischemia-reperfusion via the lncRNA TUG1/miR-29a/PTEN Axis
Tang et al. Long non-coding RNA long intergenic non-coding 00641 mediates cell progression with stimulating cisplatin-resistance in osteosarcoma cells via microRNA-320d/myeloid cell leukemia-1 axis
CN105420240A (zh) 治疗肾癌的hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用
Ruijun et al. Inhibition of glioblastoma cell growth in vitro and in vivo by brucine, a component of Chinese medicine
CN106380522A (zh) 特异性抑制stat3活性的真核重组蛋白及其制备方法和应用
Shen et al. Knockdown of lncRNA SNHG15 Ameliorates Oxygen and Glucose Deprivation (OGD)-induced neuronal injury via regulating the miR-9-5p/TIPARP axis
CN101955975A (zh) 组织金属蛋白酶抑制因子siRNA表达载体的构建及肝硬化治疗应用
CN113528517B (zh) 激活宫颈癌HeLa细胞中LRIG1基因表达的双链saRNA分子
CN103667287B (zh) 含自由三磷酸基团的GLS特异性siRNA其制备方法及用途
CN109022442B (zh) 一种可有效抑制骨肉瘤生长的生物重组型miR124-3p
CN101386869A (zh) 人甲基鸟嘌呤甲基转移酶基因真核表达质粒及其构建方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20181113

Termination date: 20191223