CN105420231A - 一种从人体唾液中提取基因组dna的方法 - Google Patents

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    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
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Abstract

本发明公开了一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法。它包括核裂解、抽提、纯化、洗涤、晾干、溶解，本发明方法操作简便，成本低，提取得到的DNA纯度高，片段完整，质量好，可以满足一般分子生物学实验操作的要求。

Description

一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法
技术领域
本发明属于生物化学领域，具体的说，它涉及一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法。
背景技术
从人体的血液或组织中提取高质量的DNA，是常规分子生物学研究及临床相关检测的前提，常见的人基因组DNA，是从血液中提取，而血液的采集往往会对被采集者造成伤害和痛苦，血液的采集也需要专业的医护人员和配套的器械器具。而从唾液组织的采集是一种对人体基本无伤害和痛苦的方式，容易采集，价格低，不需要专业的医护人员，也不需要相关专业配套的器械器材。所以从唾液中提取基因组DNA简便易行。
发明内容
本发明的目的是解决以上提出的问题，提供一种一种操作简便、安全、对被采集者无伤害无痛苦、提取的基因组DNA质量高的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明是一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取1ml唾液组织样本，加入3mL核裂解液，50uL蛋白酶K，100uL的SDS，上下剧烈晃动混匀；
2)将步骤1)的样本放置56℃水浴锅处理30min后，再加入3mL核裂解液，上下剧烈震荡混匀；继续放置56℃水浴锅温育处理30min，每隔10min上下轻柔颠倒混匀一次；
3)将步骤2)得到混合液从水浴锅中取出，室温放置5min；
4)向步骤3)得到的上清液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，7068Xg离心10min，将上清转移到干净的离心管中；
5)向步骤4)中得到的上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，7068Xg离心10min，将上清转移到干净的离心管中；
6)向步骤4)中得到的上清液中加入2/3体积-20℃预冷的异丙醇，并加入0.1倍体积的醋酸钠溶液，-20℃放置1h后，4℃，7068Xg离心10min，弃上清；
7)向步骤6)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下轻柔颠倒混匀使沉淀漂浮起来，将沉淀转移到另一干净的离心管中；
8)向步骤7)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下颠倒混匀使沉淀漂浮起来，4℃，16700Xg离心10min，弃上清，此步骤重复一次；
9)步骤8)中得到的沉淀放置室温晾干10min，加入30-50uL的无菌水充分溶解；
10)向步骤9)的溶液中加入0.01倍体积的RNaseA溶液，37℃放置30min，浓度电泳检测，-20℃保存备用。
优选的，所述的唾液组织样本为人唾液样本。
优选的，所述步骤1)和步骤2)中，所述核裂解液中各溶剂组分浓度为：10mmol/LpH＝8.0Tris-HCl，400mmol/LNaCl，2mmol/LEDTA-Na2，0.8mmol/L盐酸胍。
优选的，所述步骤1)中，所述蛋白酶K的浓度为20mg/mL，SDS的浓度为10％。
优选的，所述步骤4)中，所述酚/氯仿/异戊醇混合溶液中，酚、氯仿和异戊醇的体积比是25:24:1。
优选的，所述步骤5)中，所述氯仿/异戊醇混合溶液中，氯仿和异戊醇的体积比是24:1。
优选的，所述步骤6)中，所述醋酸钠溶液的浓度为3M。
优选的，所述步骤10)中，所述RNaseA溶液的浓度为20mg/mL。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明成本低廉，操作简便，对人体无伤害无痛苦。
(2)利用本发明的方法提取唾液DNA，仅需要实验室具有常规离心设备、温育设备即可进行。
(3)本发明方法提取的DNA浓度纯度良好，且提取稳定，可以满足一般分子生物学操作的样本质量要求。
附图说明
图1为利用本方法和现有方法提取DNA的电泳图；
图中，M为Mark，1和2为本方法，3和4为现有方法A，5和6为现有方法B。从图上可以看到1和2的条带完整清晰，说明样本的纯度和完整比较好；3和4的条带暗，且不明显,说明样本的提取产量低，DNA含量少；5和6条带亮但均有轻微拖尾，且胶孔发亮，说明存在样本存在轻微降解和蛋白等杂质污染的情况。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施例进行进一步详细说明：
实施例一：
本实施例是一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，包括以下步骤：
1)取1ml人体唾液组织样本，加入3mL核裂解液，50uL20mg/mL蛋白酶K，100uL10％的SDS，上下剧烈晃动混匀，其中，核裂解液中各溶剂组分浓度为：10mmol/LpH＝8.0Tris-HCl，400mmol/LNaCl，2mmol/LEDTA-Na2，0.8mmol/L盐酸胍；
2)将步骤1)的样本放置56℃水浴锅处理30min后，再加入3mL核裂解液，上下剧烈震荡混匀。继续放置56℃水浴锅温育处理30min，每隔10min上下轻柔颠倒混匀一次，其中，核裂解液同步骤1)；
3)将步骤2)得到混合液从水浴锅中取出，室温放置5min；
4)向步骤3)得到的上清液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，7068Xg离心10min，将上清转移到干净的离心管中；其中，酚、氯仿和异戊醇的体积比是25:24:1；
5)向步骤4)中得到的上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，7068Xg离心10min，将上清转移到干净的离心管中；其中，氯仿和异戊醇的体积比是24:1；
6)向步骤4)中得到的上清液中加入2/3体积-20℃预冷的异丙醇，并加入0.1倍体积、浓度为3M的醋酸钠溶液，-20℃放置1h后，4℃，7068Xg离心10min，弃上清；
7)向步骤6)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下轻柔颠倒混匀使沉淀漂浮起来，将沉淀转移到另一干净的离心管中；
8)向步骤7)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下颠倒混匀使沉淀漂浮起来，4℃，16700Xg离心10min，弃上清，此步骤重复一次；
9)步骤8)中得到的沉淀放置室温晾干10min，加入30-50uL的无菌水充分溶解；
10)向步骤9)的溶液中加入0.01倍体积、浓度为20mg/mL的RNaseA溶液，37℃放置30min，浓度电泳检测，-20℃保存备用。
通过电泳得到的DNA的电泳图，其中，M为Mark，1和2为本方法，3和4为现有方法A，5和6为现有方法B从图1上可以看到1和2的条带完整清晰，说明样本的纯度和完整比较好；3和4的条带暗，且不明显，说明样本的提取产量低，DNA含量少；5和6条带亮但均有轻微拖尾，且胶孔发亮，说明存在样本存在轻微降解和蛋白等杂质污染的情况，因此，本方法提取的DNA浓度纯度良好，且提取稳定，可以满足一般分子生物学操作的样本质量要求。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域中的普通技术人员来说，在不脱离本发明核心技术特征的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取1ml唾液组织样本，加入3mL核裂解液，50uL蛋白酶K，100uL的SDS，上下剧烈晃动混匀；
2)将步骤1)的样本放置56℃水浴锅处理30min后，再加入3mL核裂解液，上下剧烈震荡混匀；继续放置56℃水浴锅温育处理30min，每隔10min上下轻柔颠倒混匀一次；
3)将步骤2)得到混合液从水浴锅中取出，室温放置5min；
4)向步骤3)得到的上清液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，离心力为7068g，离心10min，将上清转移到干净的离心管中；
5)向步骤4)中得到的上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇混合溶液，轻柔颠倒混匀直至呈浑浊乳滴状，无明显分界；室温，离心力为7068g，离心10min，将上清转移到干净的离心管中；
6)向步骤4)中得到的上清液中加入2/3体积-20℃预冷的异丙醇，并加入0.1倍体积的醋酸钠溶液，-20℃放置1h后，4℃，离心力为7068g，离心10min，弃上清；
7)向步骤6)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下轻柔颠倒混匀使沉淀漂浮起来，将沉淀转移到另一干净的离心管中；
8)向步骤7)中得到的沉淀中加入1mL-20℃预冷的70％乙醇,清洗沉淀，上下颠倒混匀使沉淀漂浮起来，4℃，离心力为16700g离心10min，弃上清，此步骤重复一次；
9)步骤8)中得到的沉淀放置室温晾干10min，加入30-50uL的无菌水充分溶解；
10)向步骤9)的溶液中加入0.01倍体积的RNaseA溶液，37℃放置30min，进行浓度电泳检测，-20℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述的唾液组织样本为人唾液样本。
3.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤1)和步骤2)中，所述核裂解液中各溶剂组分浓度为：10mmol/LpH＝8.0Tris-HCl，400mmol/LNaCl，2mmol/LEDTA-2Na，0.8mmol/L盐酸胍。
4.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述蛋白酶K的浓度为20mg/mL，SDS的质量体积比(w/v)为10％。
5.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤4)中，所述酚/氯仿/异戊醇混合溶液中，酚、氯仿和异戊醇的体积比是25:24:1。
6.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤5)中，所述氯仿/异戊醇混合溶液中，氯仿和异戊醇的体积比是24:1。
7.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤6)中，所述醋酸钠溶液的摩尔浓度为3M。
8.根据权利要求1所述的一种从人体唾液中提取基因组DNA的方法，其特征在于，所述步骤10)中，所述RNaseA溶液的浓度为20mg/mL。
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