CN105420120A - 一种阿姆斯特丹散囊菌及其用途 - Google Patents

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邱树毅
陈琳琳
徐佳
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

本发明公开了一种阿姆斯特丹散囊菌及其用途，其形态特征：该菌在CA培养基上生长缓慢，25℃12—14d菌落直径27－30mm，菌落表面平坦，分生孢子结构与闭囊壳混在，闭囊壳亮黄色，菌落反面黄色。菌落在20%蔗糖查氏琼脂培养基上生长较快，25℃10天左右直径达65—70mm；菌落平、薄或具不规则皱纹，闭囊壳大量产生，呈亮黄色；分生孢子较少产生；菌落反面黄色。闭囊壳球形或近球形，直径80—170μm，裸露，亮黄色，子囊近球形，9—12μm，子囊孢子双凸镜形，4.5—5.5μm×3.6—4.5μm，两瓣中间有沟及两个不规则的脊，不平粗糙。分生孢子头辐射形，顶囊烧瓶形，直径16—25μm，产孢结构单层，瓶梗5—7μm×3.2—3.5μm，分生孢子球形，近球形，4—6μm，少数椭圆形5—6.5μm×3—5μm，壁具有小刺。本发明能促进酒体风味的产花果香类物质。

Description

一种阿姆斯特丹散囊菌及其用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种阿姆斯特丹散囊菌，同时涉及该阿姆斯特丹散囊菌在产花果香类物质中的用途。
背景技术
酱香型白酒是中国主要香型白酒，与其他香型白酒一样，酱香酒中香味物质需要先后通过庞杂的微生物体系长时间的对原料作用而得以形成，而目前对酱香型白酒的主体香成分的解释众说纷纭，这种情况的出现主要是由于酱香型白酒的风味物质在形成过程中生成了许多有机物，所以很难确定酒的主体香成分。酒体成分的复杂同时也表明呈香物质的多样性，各种香味物质的共同作用才形成酱香型白酒的独特风味。
霉菌亦既有一定的生香功能，对酱香型白酒的风味成分具有贡献作用。目前用于产酯香的主要是红曲霉属的紫色红曲霉，地霉属的某些种类霉菌能产生浓郁的果香等，在酱香酒中产香物质的研究较少，目前还没有见到相关的公开文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促进酒体风味的产花果香类物质的阿姆斯特丹散囊菌。
本发明的另一目的在于提供该阿姆斯特丹散囊菌在产花果香类物质中的用途.
本发明的一种阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013），其形态特征：该菌在CA培养基上生长缓慢，25℃12—14d菌落直径27－30mm，菌落表面平坦，分生孢子结构与闭囊壳混在，闭囊壳亮黄色，菌落反面黄色。菌落在20%蔗糖查氏琼脂培养基上生长较快，25℃10天左右直径达65—70mm；菌落平、薄或具不规则皱纹，闭囊壳大量产生，呈亮黄色；分生孢子较少产生；菌落反面黄色。闭囊壳球形或近球形，直径80—170μm，裸露，亮黄色，子囊近球形，9—12μm，子囊孢子双凸镜形，4.5—5.5μm×3.6—4.5μm，两瓣中间有沟及两个不规则的脊，不平粗糙。分生孢子头辐射形，顶囊烧瓶形，直径16—25μm，产孢结构单层，瓶梗5—7μm×3.2—3.5μm，分生孢子球形，近球形，4—6μm，少数椭圆形5—6.5μm×3—5μm，壁具有小刺。
该菌种已保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCM2015480，名称为：阿姆斯特丹散囊菌（Eurotiumamstelodamistrain）。
该菌种已于2015年8月5保藏到中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCNO：M2015480，名称：阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）。
本发明的一种阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）的筛选，包括以下步骤：
（一）阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）的分离步骤：
从贵州某酒厂酒曲中,称取10g大曲样品放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振荡约30min。取1mL样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5稀释度的样品悬液中各取1mL涂布于分离培养基上,30℃静止培养5d,挑取单菌落进一步筛选,斜面培养基上保藏。
阿姆斯特丹散囊菌采用的培养基：
分离培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），马铃薯浸粉5g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，氯霉素0.1g/L，pH5.8－6.2。
保藏培养基：PDA培养基。
鉴定培养基：查氏培养基（CA），硝酸钠3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，蔗糖30g/L，琼脂15g/L；20%蔗糖查氏琼脂培养基，硝酸钠3g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，蔗糖200g/L，琼脂15g/L；马铃薯葡萄糖液体培养基，马铃薯浸粉5g/L，葡萄糖20g/L，氯霉素0.1g/L，pH5.8－6.2。
固体发酵培养基：高粱麦粒培养基，高粱与小麦质量比为1：1，小麦全部粉碎，高粱整粒:碎粒质量比为3：1，搅拌均匀，取30g，加10mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌20min。
（三）菌种的保种和传代：
保藏培养基：PDA培养基
保存方法有3种：
（1）传代培养霉菌菌种保存法：将霉菌接种于PDA斜面培养基上，置温箱7d培养后，移至4℃冰箱保存，一般霉菌在4℃冰箱内可以保存1～6月。（2）砂土管霉菌菌种保存法：将砂洗净、烘干、过筛(60目筛)，分装于小试管中，砂的高度约1cm，湿热灭菌完成后，50℃烘干备用。将需要保藏的菌株并已培养充分的斜面培养物以无菌水制成108～1010个/mL菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥器中，在4℃保藏，保藏期可达1～10年。
（3）冷冻干燥霉菌菌种保存法：将待保存的微生物细胞或者孢子悬浮在合适的保护剂中，使成108个/mL浓度，取0.1mL至灭菌安瓿管中，随即进行速冻，然后在加有强力干燥剂的容器中真空抽1d左右，使其中冰水升华，最后熔封管口，置4℃保藏，保藏期可达5～15年。
（四）菌种的生态特征：
该菌在CA培养基上生长缓慢，25℃12—14d菌落直径27—30mm，菌落表面平坦，分生孢子结构与闭囊壳混在，闭囊壳亮黄色，菌落反面黄色。菌落在20%蔗糖查氏琼脂培养基上生长较快，25℃10天左右直径达65—70mm；菌落平、薄或具不规则皱纹，闭囊壳大量产生，呈亮黄色；分生孢子较少产生；菌落反面黄色。
（五）菌种的培养特性
（1）培养温度25℃～35℃，最适温度28℃～30℃；
（2）培养pH5.8～6.2；最佳范围为5～6。
闭囊壳球形或近球形，直径80—170μm，裸露，亮黄色，子囊近球形，9—12μm，子囊孢子双凸镜形，4.5—5.5μm×3.6—4.5μm，两瓣中间有沟及两个不规则的脊。分生孢子头辐射形，顶囊烧瓶形，直径16—25μm，产孢结构单层，瓶梗5—7μm×3.2—3.5μm，分生孢子球形，近球形，4—6μm，少数椭圆形5—6.5μm×3—5μm，壁具有小刺。根据《中国真菌志》描述，鉴定该菌株属于散囊菌属的阿姆斯特丹散囊菌（Eurotiumamstelidamistrain），取名为阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）。
本发明的阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（AspergillusamstelodamiFBKL3.0013）对温度、pH等自然环境条件的适应范围广，对不良环境的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产，生产成本低，不污染环境，不破坏生态平衡。
具体实施方式
1.阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）菌株分离方法：
从贵州某酒厂酒曲中,称取10g大曲样品放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振荡约30min。取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5稀释度的样品悬液中各取1mL涂布于分离培养基上，30℃静止培养5d，挑取单菌落进一步筛选，斜面培养基上保藏。
2、菌株鉴定方法：
将已经分离纯化的菌株接种到CA培养基和20%查氏琼脂培养基上，在25℃培养箱中培养5-20d，观察菌落的形态特征，并用乳酸石碳酸棉蓝染色液染色制片，在光学显微镜下观察菌丝及其孢子形态特征，通过《中国真菌志》及相关文献对其进行形态学鉴定，鉴定该菌株属于散囊菌属的阿姆斯特丹散囊菌（Eurotiumamstelidamistrain），取名为阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelodamiFBKL3.0013）。
3.菌株产花果香能力测定：
取培养7d的散囊菌斜面试管一支用10mL的无菌水洗下，然后以1%的接种量接入高粱与小麦固体发酵培养基中，30℃培养7～9d。进行感官评定，具有花果香味，无霉味。通过GC/MS对发酵产物的挥发性物质进行分析，具有花果香味类物质的相对含量占35.281%。
表1阿姆斯特丹散囊菌GC-MS挥发性成分

Claims (2)

1.一种阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelidamiFBKL3.0013），其特征在于所述菌种的保藏号为CCTCCNO：M2015480。
2.如权利要求1所述的阿姆斯特丹散囊菌FBKL3.0013（EurotiumamstelidamiFBKL3.0013）FBKL3.0013在产花果香物质中的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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