CN105412414A - 护肤用日本医蛭组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了护肤用日本医蛭组合物，由以下重量份数的组分组成：日本医蛭1-20份、发酵冬虫夏草菌丝体5-30份、当归5-35份、人参5-35份、红花5-35份、冰片2-10份、芦荟10-40份、甘草5-25份。本发明要解决的技术问题是提供一种防治冻疮效果好的护肤用日本医蛭组合物冻疮膏及其制备方法。

Description

护肤用日本医蛭组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药制剂领域，具体涉及一种护肤用日本医蛭组合物及其制备方法。

背景技术

冻疮古称为“涿”，首见于《五十二病方》，至隋《诸病源候论》时始称其为“冻疮”，并阐述其病因病机。现中医理论认为：冻疮乃皮肤肌肉受严寒侵袭，气血运行不畅致气血凝滞而成，平素气血衰弱或疲劳过度，暴冻着热，暴热着冻使本病生成。

现有的冻疮膏较常用的为凡士林软膏或者市场上售卖的硼酸、甘油支撑的冻疮膏，其治冻疮的效果均不是很理想，目前市场上出现了一种名为冰王冻疮膏，其治疗冻疮的效果较佳，利用鳄鱼油、甘油、辣椒提取物、硼酸等组分制成。

在研发的过程中，发明人发现了一种新的利用日本医蛭的组合物，日本医蛭是为医蛭科医蛭属的动物，俗名稻田医蛭、蚂蝗、线蚂蝗、水蛭、日本医水蛭，分布于日本、俄罗斯的远东地区、蒙古以及中国大陆的北起东北各省、内蒙古、西至四川、甘肃、南达广东等地，一般栖息于水田及其与之相通的沟渠、池塘和沼泽中以及特别是常年积水或排水不良的沤田和畈心田中数量最多，该物种的模式产地在日本。从日本医蛭中分离并鉴定了8个化合物,其结构分别为：菜油甾醇,十六烷基甘油醚,(2S,3S,4E)-4,5-二脱氢十八鞘氨醇二十五烷酸脂肪酰胺,1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-2-N-(二十二酰基)-E-4,5-二脱氢-3-羟基十八脑苷脂,丁二酸,次黄嘌呤,丙胺酸,异亮氨酸。据研究，日本医蛭干燥全体，具有破血逐瘀、抑制血小板凝集、改善血液微循环和抗血栓的功效，发明人利用日本医蛭添加其他组分制成组合物用以制成冻疮膏，据实验研究可得到效果与冰王冻疮膏效果相当、甚至效果更优的产品。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种防治冻疮效果好的护肤用日本医蛭组合物冻疮膏及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供第一个基础技术方案：护肤用日本医蛭组合物，由以下重量份数的组分组成：日本医蛭1-20份、发酵冬虫夏草菌丝体5-30份、当归5-35份、人参5-35份、红花5-35份、冰片2-10份、芦荟10-40份、甘草5-25份。

采用本发明技术方案的护肤用日本医蛭组合物，中医临床上冻疮防治以温经散寒、活血化瘀、消肿止痛、清热解毒为治则，日本医蛭为医蛭科动物日本医蛭的干燥全体，具有破血逐瘀、抑制血小板凝集、改善血液微循环和抗血栓的功效；发酵冬虫夏草菌丝体粉富含虫草多糖、虫草酸、超氧化歧化酶、氨基酸具温经之效，是很好的护肤添加物；当归为伞形科植物当归的干燥根，具补血和气、润燥滑肠，镇静、镇痛、抗炎，并能促进红蛋白和红细胞的生成去皱活肤的功效；人参具有改善微循环、清除自由基、护肤美颜的功效；红花具有活血、散瘀止痛、扩张血管、抗凝血、抗组织缺氧的功效；冰片为菊科艾纳香属植物大风艾的鲜叶经蒸气蒸馏、冷却所得的结晶开窍醒神、清热，具有散郁火、消肿止痛的功效；芦荟为百合科植物库拉索芦荟、好望角芦荟或其他同属近缘植物叶的汁液浓缩干燥物，具有清热解毒、抗炎、强心活血的作用，广泛用于疥疮、痈疖肿毒等症；甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根，具有益气，清热解毒，缓急止痛，调和诸药的功效，其有效成分能够较强的抑制酪氨酸酶活性，有较好的祛斑作用；清除氧自由基，具有较强的抗氧能力；具有很强的抑菌和杀菌能力；能够减轻皮肤受损后遗留下的疤痕性或非疤痕性的色素沉着。

以中医理论为指导，上述药材合理配比可除寒湿之气，解燥热之毒，使阳气提、阴血充、客寒除，改善冻伤部位血液循环障碍，减轻并治愈因冻疮引起的红肿痛热瘙痒等症状，上述药材的配方来自临床实践，本发明结合现代提取及中药配伍应用原理，据实验研究发现本发明能改善并治愈由血瘀及血液微循环不畅引起的冻疮等症状，且效果好，与冰王冻疮膏效果相当，且在某种特定组份下，效果更优。

优选方案一，在第一个基础方案之上，所述的组分质量份数为：日本医蛭2-15份、发酵冬虫夏草菌丝体5-20、当归10-30份、人参10-30份、红花10-30份、冰片2-6份、芦荟10-30份、甘草5-15份。

优选方案二，在第一个基础方案之上，所述的组分质量份数为：日本医蛭4-10份、发酵冬虫夏草菌丝体10-20、当归15-25份、人参15-25份、红花15-25份、冰片2-5份、芦荟15-30份、甘草10-15份。

优选方案三，在第一个基础方案之上，所述的组分质量份数为：日本医蛭5份、发酵冬虫夏草菌丝体10份、当归15份、人参15份、红花15份、冰片2份、芦荟15份、甘草10份。

优选方案四，在第一个基础方案之上，所述的组分质量份数为：日本医蛭10份、发酵冬虫夏草菌丝体20、当归25份、人参25份、红花25份、冰片4份、芦荟25份、甘草10份。效果最优。

本发明的另一目的是提供一种第二个基础方案护肤用日本医蛭组合物的制备方法，操作步骤如下：

A)取发酵冬虫夏草菌丝体粉碎成发酵冬虫夏草菌丝体粉备用；取日本医蛭提取后得日本医蛭提取物备用；取芦荟提取后得芦荟提取物备用；

B)取当归、人参、红花、甘草粉碎为粉，再加入发酵冬虫夏草菌丝体粉，用85％-95％乙醇润湿2h，再浸渍24-72h，渗漉提取后，收集渗漉液，将渗滤液浓缩至膏状，备用；

C)制备软膏；

取步骤B的膏状与羊毛脂、十八醇、液状石蜡、凡士林混合后，加热熔融，加热至80℃～85℃，为油相；取芦荟提取物、甘油、十二烷基硫酸钠，加热溶解，加热至75℃～85℃，为水相；将水相加入油相中，边加边搅拌至乳化，降温至40℃～55℃，再加入日本医蛭提取物、氮酮、冰片，搅匀，冷却即得半成品；

D)装瓶；

将半成品装入瓶内，封口、加盖、分装，即得成品。

采用本发明的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，当归、红花、人参、甘草为基础药材，粉碎为粉，再与发酵冬虫夏草菌丝体粉一同采用渗漉提取的方式得到膏状状，渗漉属于动态浸出方法，溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取，而发酵冬虫夏草菌丝体是利用冬虫夏草菌在发酵罐中发酵得到的冬虫夏草菌丝体，其产率较低，通常利用乙醇作为溶剂提取有效成分，提取药材中的有效成分更完全。步骤C，采用水相逐渐缓慢加入油相中，乳化后再加入日本医蛭提取物、氮酮、冰片制得半成品冻疮膏。

优选方案一，在第二个基础方案之上，所述的发酵冬虫夏草菌丝体粉，粉碎时温度控制在0℃-12℃之间，粉碎时间为1min-20min，粉的目数通过50～10目筛。低温粉碎避免有效成分丢失。

优选方案二，在第二个基础方案之上，所述的日本医蛭提取物的制备方法为：日本医蛭经过生理盐水提取后，加入硫酸铵分次沉淀后、再离心后经柱层析纯化制得。

优选方案三，在优选方案二的基础之上，所述的日本医蛭提取物的制备方法为：取日本医蛭，匀浆，加5倍量生理盐水提取两次，离心过滤得第一次上清液，第一次上清液中再加入硫酸铵至30％，4℃冷藏静置24h；再离心过滤取第二次上清液，第二次上清液中加入硫酸铵至70％，4℃冷藏静置12-48h，再离心得固形物，固形物用重蒸馏水溶解后用柱层析纯化，得日本医蛭提取物。

优选方案四，在优选方案三的基础之上，所述的离心过滤时，离心的转速为9000r/min。

具体实施方式

本发明各实施例的组分质量份数如表1所示，单位：kg；

表1各实施例组分质量份数

以上述实施例一为例,具体说明本发明护肤用日本医蛭组合物的制备方法,其操作步骤为：

A、原料准备：

1)制备发酵冬虫夏草菌丝体粉末

将5kg发酵冬虫夏草菌丝体放入将粉碎机中粉碎，温度控制在0℃，粉碎时间1min，粉碎完成后过50目筛，备用；

2)制备日本医蛭提取物

取1kg日本医蛭，匀浆,加5kg生理盐水提取两次，4℃冷藏24h后，以转速为6000r/min离心过滤得第一次上清液，在第一次上清液中缓慢加入硫酸铵至30％，然后4℃冷藏静置24h，再以转速为9000r/min离心过滤得第二次上清液，在第二次上清液中缓慢加入硫酸铵至70％,4℃冷藏静置12h，再以转速为9000r/min离心得固形物，固形物用重蒸馏水溶解，通过过Sephadex-25柱层析纯化，再用重蒸馏水洗脱,减压浓缩至浸膏，得日本医蛭提取物；

3)制备芦荟提取物

取10kg芦荟加水煎煮30min，筛网过滤，滤液冷却后，以9000转/分离心，得芦荟提取物；

B)取5kg当归、5kg人参、5kg红花、5kg甘草粉碎为粗粉，再添加步骤1)得到的发酵冬虫夏草菌丝体粉末后，用85％乙醇润湿，保持2h，装柱浸渍24h，渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，将渗漉液浓缩至膏状，备用；

C)制备软膏

取步骤B)得到的膏状物与羊毛脂、十八醇、液状石蜡、凡士林加热熔融，加热至80℃，为油相；取步骤A)中得到的芦荟提取物和甘油、十二烷基硫酸钠，加热溶解，加热至75℃，为水相；将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌至乳化，降温至40℃，加入步骤A)得到的日本医蛭提取物、氮酮、冰片，搅匀，冷却得半成品；

D)装瓶

将挤出器洗净，用75％的酒精对挤出器腔体进行消毒，消毒后用纯化水冲洗4次，将制得的半成品软膏加入到挤出器内，通过挤出器挤出到乳膏瓶内，封口、加盖、分装，即得成品。

在具体实施过程中，步骤B)中的制备膏状物时，润湿的乙醇浓度为86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％；浸渍的时间在25h、28h、30h、40h、50h、60h、70h、72h或者在24-72h中的任意时间；步骤C)中，油相的加热时间于81℃、82℃、83℃、84℃、85℃或者在80～85℃中任意一个温度，水相的加热时间为76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃或者75～85℃的任意温度，乳化后的温度降至41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃或者在40～55℃中任意温度均可，对产品的效果无影响。

实施例二：实施例十一与实施例一的制备方法一致。

实验例一：

1动物

1.1品系和供应

清洁级SD大鼠，由重庆市中药研究院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK(渝)2012-0006。

1.1.2年龄、体重、性别

6-8周龄，157.5-192.6g/只，单一雄性。

1.1.3动物数量

140只(单一雄性)。

1.1.4纳入试验的动物数

140只。

1.2动物饲养

1.2.1笼具

实验动物分组饲养在清洁环境中，饲养设施符合清洁级实验动物的饲养要求。

1.2.2食物

合格饲料每天添加1次，实验动物自由摄食。

1.2.3饮水

自来水分装于水瓶中供小鼠自由饮用。

1.2.4动物饲养房间的环境控制

动物饲养在受控环境中，温度20.3～22.9℃，日温差未超过4℃。动物房每天温度通过台式温度计读取并记录，由实验动物研究所保存。

维持12小时明暗交替的光照循环，动物房间的换气次数为8次/小时。

各项环境控制遵循实验动物研究所的SOPs。

2.试验设计

2.1检疫与环境适应

试验开始前，动物将在试验房间内适应1天，笼旁观察1次，动物均无异常情况出现。

2.2试验方法

使用1％水合氯醛麻醉(腹腔注射，300mg/kg)后，将所有大鼠左后足踝关节一下部位浸入-25℃无水乙醇中1.5min，冷冻结束后室温下自行复温，造成冻疮模型。于造模前(Day-1)、造模后1小时(Day0)及造模24小时后至Day7每天用软尺测量足掌周径(测左后足大趾和小趾根部周径，作为动物分组参考)，造模24小时后每天测量足掌周径，计算造模后大鼠冻伤足每天的肿胀百分率[周径变化值(冻后值-冻前值)/冻前值×100％＝肿胀百分率]。

2.3分组

造模前按照体重随机分成14组，每组10只(详见表2)。

2.4给药

表2：分组与给药

2.5动物种属、数量、给药途径选择理由

供试品选择涂抹给药是与供试品在使用中的暴露途径一致。SD大鼠是这类试验常选用的动物，数量的选择是基于满足生物学评价和统计学要求的最低数量。

3.试验结果

3.1临床观察结果

试验期间，除冻伤足明显肿胀外无其他异常表现。

3.2各组动物足掌周径变化

表3：足掌周径均数表

3.3足掌肿胀百分率

表4：足掌肿胀百分率表

对各组的冻疮模型效果从表3、表4中的可以得出：空白对照组与凡士林组的肿胀百分率均有不同程度的消减，是自身修复的一种表现，但是肿胀率并未发生根本性的改变，说明冻疮未有根本性的好转；市售冰王冻疮膏与空白对照组、凡士林组相比，具有良好的治疗冻疮的效果，但与实施例一至实施例十一相比，效果上与实施例一至实施例四、实施例四至实施例十一相当，无显著性差异,效果上不及实施例五；实施例一至实施例十一的治疗效果均显著优于空白对照组与凡士林组，实施例一至实施例十一的肿胀数据随着治疗的进行，肿胀率逐渐下降，说明足掌冻疮在逐渐好转，由其是实施例五，当治疗至第七天时，足掌周径(2.58±0.33cm)几乎与冻伤前(2.42±0.04cm)相当，表现出了良好的治疗效果；同时实施例五与市售冰王冻疮膏相比，组方实施例五的治疗效果显著优于市售冰王冻疮膏，说明以中医理论为指导的组方在改善足掌微循环及对冻疮的康复作用效果确切。

3.4结论

实施例一至实施例十一对冰乙醇致大鼠冻疮的初步治疗作用效果显著。

实验例二：

1.动物

1.1品系和供应

SPF级SD大鼠，重庆市中药研究院实验动物研究所提供，合格证号：(SCXK(渝)203－0006)。

1.2年龄、体重、性别

6-7周龄，约160-200g/只，全雄。

1.3动物数量：130只。

1.4纳入试验的动物数：130只。

1.5动物个体识别

根据重庆市中药研究院实验动物研究所SOP，将采用苦味酸标记及笼具挂牌的方法进行动物个体标识。

2.动物饲养

2.1笼具

实验动物将饲养在清洁笼具中，饲养设施符合清洁级实验动物的饲养要求，每周换笼盒1次。(使用许可证号：SCXK(渝)203－0003)。

2.2食物

合格饲料每天添加1次。试验动物自由摄食，如因试验需要而影响自由摄食，将会如实记录。

2.3饮水

自来水分装于水瓶中供大鼠自由饮用。

3.动物饲养房间的环境控制

动物饲养在受控环境中，温度16-28℃，日温差不超过4℃。动物房每天温度和湿度将通过壁挂式温湿度计读取并记录，由实验动物研究所保存。维持3小时明暗交替的光照循环，如果因为试验需要而影响光照循环，则需如实记录发生时间。动物房间的换气次数不应少于8次/小时。各项环境控制遵循实验动物研究所的SOPs。

4.试验设计

4.1检疫与环境适应

试验开始前，动物将在试验房间内适应至少1天，每天笼旁观察1次。选择健康动物作为受试动物。检疫内容：是否与订购时要求的质量指标一致；动物一般状态，动物体重是否达到试验要求的体重范围。

4.2试验方法

使用1％水合氯醛麻醉(腹腔注射，300mg/kg)后，将所有大鼠左后足踝关节一下部位浸入-25℃乙醇中1.5min，冷冻结束后室温下自行复温，造成冻伤模型。于造模前与造模24小时后每天用软尺测量足掌周径(测左后足大指和小指根部周径)，计算造模后大鼠冻伤足每天的肿胀百分率(周径变化值(冻后值-冻前值)/冻前值×10％＝肿胀百分率)，实验结束后，比较各组间每天的平均肿胀百分率。

4.3分组

造模后按照冻伤造模后1小时的足掌周径均匀地分成13组，每组10只(详见表5)。

4.4给药

表5分组与给药

注：每次给药连续涂抹2次，每次间隔10分钟，造模当天Day0结束后1小时给药1次，3小时候后再给药1次。

4.5动物种属、数量、给药途径选择理由

大鼠是这类试验常选用的动物，数量的选择是基于满足生物学评价和统计学要求的最低数量。供试品选择涂抹给药是与供试品在使用中的暴露途径一致。

5.试验结果

5.1临床观察结果

试验期间，除冻伤足掌明显肿胀外无其他异常表现。

5.2各组动物足掌周径变化

表6：足掌周径均数表

5.3足掌肿胀百分率结果

表7：足掌肿胀百分率表

注：日本医蛭提取物组为根据实施例制备方法中的步骤A制备而来，日本医蛭提取用量与其它组相同。

由表5-表7可见，在给药Day1～Day7的7天试验中，与蒸馏水对照组相比较，日本医蛭提取物组、实施例一至实施例十一均显示出一定的治疗效果，但日本医蛭提取物组效果不具有显著性；与日本医蛭提取物组相比而言，实施例一至实施例十一的治疗效果均较优于日本医蛭提取物，但只有组方实施例五显著优于日本医蛭提取物；上述各组方中效果由好到差依次为：实施例五＞实施例四＞实施例七＞实施例六＞实施例二＞实施例十一＞实施例一＞实施例九＞实施例八＞实施例十＞实施例三＞日本医蛭提取物＞蒸馏水对照组。

综上所述：说明按中医理论为指导的本发明专利所述组方在改善足掌微循环及对冻疮的康复作用效果确切。

6.结论

实施例一至实施例十一对冰乙醇致大鼠冻疮有明显的治疗作用，且实施例五治疗效果最佳。

对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。

Claims (10)

1.护肤用日本医蛭组合物，其特征在于：由以下重量份数的组分组成：日本医蛭1-20份、发酵冬虫夏草菌丝体5-30份、当归5-35份、人参5-35份、红花5-35份、冰片2-10份、芦荟10-40份、甘草5-25份。

2.根据权利要求1所述的护肤用日本医蛭组合物，其特征在于：所述的组分质量份数为：日本医蛭2-15份、发酵冬虫夏草菌丝体5-20、当归10-30份、人参10-30份、红花10-30份、冰片2-6份、芦荟10-30份、甘草5-15份。

3.根据权利要求1所述的护肤用日本医蛭组合物，其特征在于：所述的组分质量份数为：日本医蛭4-10份、发酵冬虫夏草菌丝体10-20、当归15-25份、人参15-25份、红花15-25份、冰片2-5份、芦荟15-30份、甘草10-15份。

4.根据权利要求1所述的护肤用日本医蛭组合物，其特征在于：所述的组分质量份数为：日本医蛭5份、发酵冬虫夏草菌丝体10份、当归15份、人参15份、红花15份、冰片2份、芦荟15份、甘草10份。

5.根据权利要求1所述的护肤用日本医蛭组合物，其特征在于：所述的组分质量份数为：日本医蛭10份、发酵冬虫夏草菌丝体20、当归25份、人参25份、红花25份、冰片4份、芦荟25份、甘草10份。

6.根据权利要求1~5中任意一项所述的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，其特征在于：操作步骤如下：

A）取发酵冬虫夏草菌丝体粉碎成发酵冬虫夏草菌丝体粉备用；取日本医蛭提取后得日本医蛭提取物备用；取芦荟提取后得芦荟提取物备用；

B）取当归、人参、红花、甘草粉碎为粉，再加入发酵冬虫夏草菌丝体粉，用85%-95%乙醇润湿2h，再浸渍24-72h，渗漉提取后，收集渗漉液，将渗滤液浓缩至膏状，备用；

C）制备软膏；

取步骤B的膏状与羊毛脂、十八醇、液状石蜡、凡士林混合后，加热熔融，加热至80℃～85℃，为油相；取芦荟提取物、甘油、十二烷基硫酸钠，加热溶解，加热至75℃～85℃，为水相；将水相加入油相中，边加边搅拌至乳化，降温至40℃～55℃，再加入日本医蛭提取物、氮酮、冰片，搅匀，冷却即得半成品；

D）装瓶；

将半成品装入瓶内，封口、加盖、分装，即得成品。

7.根据权利要求6所述的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，其特征在于：所述的发酵冬虫夏草菌丝体粉，粉碎时温度控制在0℃-12℃之间，粉碎时间为1min-20min，粉的目数通过50~10目筛。

8.根据权利要求6所述的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，其特征在于：所述的日本医蛭提取物的制备方法为：日本医蛭经过生理盐水提取后，加入硫酸铵分次沉淀后、再离心后经柱层析纯化制得。

9.根据权利要求8所述的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，其特征在于：所述的日本医蛭提取物的制备方法为：取日本医蛭，匀浆，加5倍量生理盐水提取两次，离心过滤得第一次上清液，第一次上清液中再加入硫酸铵至30%，4℃冷藏静置24h；再离心过滤取第二次上清液，第二次上清液中加入硫酸铵至70%，4℃冷藏静置12-48h，再离心得固形物，固形物用重蒸馏水溶解后用柱层析纯化，得日本医蛭提取物。

10.根据权利要求9所述的护肤用日本医蛭组合物的制备方法，其特征在于：所述的离心过滤时，离心的转速为9000r/min。