CN105403635B - 丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种丙二醇中三氯乙烯的检测方法，该方法包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备及空白溶液的制备，之后采用气相色谱法以顶空进样的方式将上述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液依次注入气相色谱仪中，根据外标法计算三氯乙烯的量。本发明通过对色谱条件的优选及供试品、对照品制备方法的试验，建立了丙二醇中可能存在的三氯乙烯的气相色谱分析方法；方法学验证试验研究的结果表明：所建立的HS‑GC方法准确度高、专属性强、重现性良好，通过对丙二醇中三氯乙烯的控制，确保其作为药用辅料的安全性。

Description

丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法

技术领域

本发明涉及制药技术领域，特别是涉及一种药用辅料丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法。

背景技术

地佐辛注射液是扬子江药业集团有限公司研制的新型麻醉性镇痛药。地佐辛是一种强效阿片类镇痛药，能缓解术后疼痛，其镇痛强度、起效时间和作用持续时间与吗啡相当。当稳态血药浓度超过5～9ng/mL时，产生缓解术后疼痛的作用，出现最大镇痛作用的时间比血药浓度达峰时间晚20～60分钟。注射本品可完全快速吸收。临床不良反应包括恶心、呕吐等。本品辅料包括氯化钠、乳酸、焦亚硫酸钠和丙二醇。

丙二醇为1,2-丙二醇，含C₃H₈O₂不得少于99.5％，25℃时的相对密度为1.035-1.037；本品为无色澄清的粘稠液体，有引湿性，与水、乙醇或三氯甲烷能任意混溶。由于能与水混溶，在制药技术领域一般可与水混合使用，以增加药物的溶解度或稳定性。丙二醇生产过程中可能引入杂质三氯乙烯。中国药典丙二醇质量标准中未对三氯乙烯进行控制。

三氯乙烯为无色透明液体，有似氯仿的气味，不溶于水，溶于乙醇、乙醚，可混溶于多数有机溶剂，主要用作溶剂，用于脱脂、冷冻、医药、香料、橡胶工业、洗涤织物等等。三氯乙烯可经呼吸道、消化道和皮肤吸收，中毒主要损害中枢神经系统，吸入轻度中毒有头晕、头痛、恶心、呕吐等。ICH和《中国人民共和国药典》(2015)中规定三氯乙烯为需要控制的第二类残留溶剂，限度为0.008％。

综上所述，控制辅料丙二醇中三氯乙烯可进一步确保地佐辛注射液的安全性，降低临床可能出现的恶心、呕吐等不良反应发生率。

发明内容

本发明提供了一种有效地检测丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的方法，可以确保以丙二醇作为辅料注射剂的药品质量。

本发明的目的在于提供一种丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法。

本发明的另一个目的是提供上述检测方法用于含丙二醇注射剂质量控制的应用。

本发明采用下述技术方案实现：

一种丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，首先制备空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，然后分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液顶空平衡30min后，精密量取1ml，采用顶空进样的方式注入到气相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量；

上述气相试验的色谱条件为：

色谱柱：Agilent DB-624(30m*0.53mm*3.0μm)，起始温度为36℃～44℃，维持5分钟，以每分钟10℃的升温速率升至230℃，维持5分钟；

检测器：电子捕获检测器(ECD)，温度为300℃；

进样口温度：200℃；

载气：高纯氮气，流速为2.0ml/min，分流比为90:1；

顶空条件：平衡温度55℃～65℃加热27min～33min，定量环温度65℃～75℃，传输管温度75℃～85℃，进样量1ml。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中所述色谱柱起始温度优选为36℃、40℃、或44℃，最优选的起始温度为40℃。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中，所述顶空条件中平衡温度优选为55℃、60℃、或65℃，最优选60℃。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中所述顶空条件中加热27min、30min、或33min，最优选30min。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中所述顶空条件中定量环温度为65℃、70℃、或75℃，最优选70℃。

在本发明的优选实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中所述顶空条件中传输管温度为75℃、80℃、或85℃，最优选80℃。

在本发明的实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中，所述对照品溶液的制备方法为：取三氯乙烯约20mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加DMSO(二甲基亚砜)稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含三氯乙烯约200μg的对照品储备液A；精密量取三氯乙烯对照品储备液A 1ml，置100ml容量瓶中，加丙二醇试剂(分析纯)稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含三氯乙烯约2μg的对照品储备液B；精密量取对照品储备液B 1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得对照品溶液。

在本发明的实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中，所述空白溶液的制备方法为：取丙二醇试剂(分析纯)1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得。

在本发明的实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中，所述供试品溶液的制备方法为：精密量取丙二醇样品1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得。

在本发明的实施方案中，本发明提供的丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其中，所述外标法计算公式为：

式中：Cx：供试品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Cs：对照品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Ax：供试品溶液中三氯乙烯的峰面积；

As：对照品溶液中三氯乙烯的峰面积；

A₀：空白溶液中三氯乙烯的峰面积。

另一方面，本发明提供了上述检测方法用于含丙二醇注射剂质量控制的应用，这里，所述含丙二醇注射剂包括但不限于地佐辛注射液。

本发明通过对色谱条件的优选及供试品、对照品制备方法的试验，建立了丙二醇中可能存在的残留物三氯乙烯的气相色谱分析方法。该方法采用电子捕获检测器，克服了常用的通用性氢火焰离子化检测器(FID)检测三氯乙烯时灵敏度较低的问题，显著提高了检测灵敏度，从而提高检测结果的准确度。

本发明同时对建立的检测方法进行了验证。验证结果表明：3个浓度下平均回收率为99.0％，在90.0％～110.0％范围内，回收率的相对标准偏差(RSD)为6.5％；精密度试验的RSD为4.7％；线性关系良好，相关系数0.9972；专属性试验考察无阴性干扰。试验证明所建立的方法准确度高、专属性强、重现性良好，通过对丙二醇中残留溶剂三氯乙烯量的控制，确保其作为注射剂辅料的安全性，从而进一步确保地佐辛注射液的安全性，降低临床可能出现的不良反应发生率。

附图说明

图1为本发明实施例1对照品溶液色谱图(FID检测器)。

图2为本发明实施例1对照品溶液色谱图(ECD检测器)。

图3为本发明实施例1三氯乙烯的线性图。

具体实施方式

下面通过具体的实例来说明本发明的技术方案，对于本领域技术人员而言，该实例并非对本发明的保护范围限制。

实施例1

样品名称：丙二醇(来源：南京威尔化工有限公司)

仪器：安捷伦Agilent7890A气相色谱仪

色谱条件：

色谱柱：Agilent DB-624(30m*0.53mm*3.0μm)，起始温度为40℃，维持5分钟，以每分钟10℃的升温速率升至230℃，维持5分钟；

检测器：电子捕获检测器(ECD)，温度为300℃；

进样口温度：200℃；

载气：高纯氮气，流速为2.0ml/min，分流比为90:1；

顶空条件：平衡温度60℃加热30min，定量环温度70℃，传输管温度80℃，进样量1ml。

对照品溶液的制备：取三氯乙烯约20mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含三氯乙烯约200μg的对照品储备液A；精密量取三氯乙烯对照品储备液A 1ml，置100ml容量瓶中，加丙二醇试剂(分析纯)稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含三氯乙烯约2μg的对照品储备液B；精密量取对照品储备液B 1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得对照品溶液。

空白溶液的制备：取丙二醇试剂(分析纯)1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：精密量取丙二醇样品1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得。

含量测定：将上述对照品溶液、空白溶液和供试品溶液采用顶空进样的方式注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。本发明中，丙二醇中含三氯乙烯不得大于2μg/mL。

计算公式为：

式中：Cx：供试品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Cs：对照品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Ax：供试品溶液中三氯乙烯的峰面积；

As：对照品溶液中三氯乙烯的峰面积；

A₀：空白溶液中三氯乙烯的峰面积.

重复性试验：

对照品溶液的制备：精密称取三氯乙烯约20mg，加入DMSO定容至100ml，摇匀，制成每1ml含三氯乙烯200μg的对照品储备液A。精密地量取三氯乙烯对照品储备液A 1ml，置于100ml的容量瓶中，加分析纯丙二醇(试剂)稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含三氯乙烯2μg对照品储备液B。精密地量取1ml对照品储备液B，置于20ml顶空瓶中，加入纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密地量取待测样品1ml，置于20ml顶空瓶中，加入纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得供试品溶液。

空白溶液的制备：精密地量取分析纯丙二醇(试剂)1ml，置于20ml顶空瓶中，加入纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得供试品溶液。

含量测定：将上述空白溶液、对照品溶液和供试品溶液采用顶空进样的方式分别注入到气相色谱仪中，通过峰面积采用外标法计算含量。本发明中，丙二醇中含三氯乙烯不得过2×10^-6g/ml(2ppm)。

计算公式：

式中：Cx：供试品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Cs：对照品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Ax：供试溶液中三氯乙烯的色谱峰面积；

As：对照溶液中三氯乙烯的色谱峰面积；

Ao:空白溶液中三氯乙烯的色谱峰面积。

精密度：取含量测定项下的供试品溶液，重复进样6次，结果三氯乙烯的峰面积RSD为4.7％，重复性良好，具体数据见表1。

表1三氯乙烯精密度试验结果

线性试验：

溶液的制备：线性范围从待测残留溶剂三氯乙烯定量限到对照品溶液浓度的120％，分别为：定量限、60％水平、80％水平、100％水平、120％水平。按对照品储备液配制方法配制三氯乙烯浓度分别为8.4ng/ml、1255.2ng/ml、1673.6ng/ml、2092.0ng/ml、2510.4ng/ml的系列对照品储备液。

测定：取以上各溶液1mL置入顶空瓶空中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，60℃平衡30min后顶空取样1mL注入气相色谱中，每个浓度进样3针，记录色谱图，求每个浓度水平进样3次峰面积的平均值。并按照下式计算其相关线性系数r，数据和计算结果见表2。

按浓度由低到高依次进样，以溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程为Y＝24.2X(r＝0.9972)。试验结果表明，三氯乙烯在8.4ng/ml～2510.4ng/ml范围内，呈良好的线性关系。测定结果见表2。

表2三氯乙烯测定的线性范围

回收率试验：溶液的制备：按对照品溶液的配制方法配制相当于对照品溶液浓度的80％水平、100％水平、120％水平的供试品溶液。分别称取三氯乙烯18.05mg、20.11mg、22.01mg，按对照品溶液的配制方法制得3个浓度水平的回收率试验溶液，每个浓度配制3份。

测定：回收率试验溶液和对照品溶液各顶空平衡30min后，注入气相色谱仪，记录色谱图，具体数据见表3。

表3三氯乙烯回收率试验结果

耐用性试验：

①改变平衡温度、定量环温度和传输管温度

顶空平衡温度为55℃加热30min，定量环温度65℃，传输管温度75℃，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为6.9％。

顶空平衡温度为65℃加热30min，定量环温度75℃，传输管温度85℃，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为9.6％。

改变平衡温度、定量环温度和传输管温度，使它们分别在55℃～65℃、60℃～80℃、65℃～85℃的范围内波动，结果显示试验数据的重复性良好，波动在可接受的范围内(标准规定RSD≤10％)。说明了平衡温度、定量环温度和传输管温度的微小变化(变化率约±10％)不会对试验结果产生显著的影响，即该检测方法具有良好的耐用性。

②改变顶空平衡时间

顶空平衡温度为60℃加热27min，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为5.7％。

顶空平衡温度为60℃加热33min，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为7.7％。

改变顶空平衡时间，使其在27min～33min的范围内波动，结果显示试验数据的重复性良好，波动在可接受的范围内(标准规定RSD≤10％)。说明了顶空平衡时间的微小变化(变化率±10％)不会对试验结果产生显著的影响，即该检测方法具有良好的耐用性。

③改变色谱柱的初始温度

起始温度为36℃，维持5分钟，以每分钟10℃的升温速率升至230℃，维持5分钟，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为4.5％。

起始温度为44℃，维持5分钟，以每分钟10℃的升温速率升至230℃，维持5分钟，其余色谱条件不变，按上述重复性试验项下操作，三氯乙烯峰面积的RSD为6.8％。

改变色谱柱起始温度，使其在36℃～44℃的范围内波动，结果显示试验数据的重复性良好，波动在可接受的范围内(标准规定RSD≤10％)。说明了起始柱温的微小变化(变化率±10％)不会对试验结果产生显著的影响，即该检测方法具有良好的耐用性。

Claims (13)

1.一种丙二醇中残留溶剂三氯乙烯的检测方法，其特征是：

首先制备空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，然后分别将空白溶液、对照品溶液和供试品溶液顶空平衡30min后，精密量取1ml，采用顶空进样的方式注入到气相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量；

气相试验的色谱条件为：

色谱柱：Agilent DB-624,30m*0.53mm*3.0μm，起始温度为36℃～44℃，维持5分钟，以每分钟10℃的升温速率升至230℃，维持5分钟；

检测器：电子捕获检测器，温度为300℃；

进样口温度：200℃；

载气：高纯氮气，流速为2.0ml/min，分流比为90:1；

顶空条件：平衡温度55℃～65℃加热27min～33min，定量环温度65℃～75℃，传输管温度75℃～85℃，进样量1ml；

其中，所述对照品溶液的制备方法为：取三氯乙烯约20mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含三氯乙烯约200μg的对照品储备液A；精密量取三氯乙烯对照品储备液A1ml，置100ml容量瓶中，加分析纯丙二醇试剂稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含三氯乙烯约2μg的对照品储备液B；精密量取对照品储备液B 1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得对照品溶液；

所述空白溶液的制备方法为：取分析纯丙二醇试剂1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得；

所述供试品溶液的制备方法为：精密量取丙二醇样品1ml，置20ml顶空瓶中，加纯化水3ml，加盖密封，摇匀，即得；

所述外标法计算公式为：

<mrow> <mi>C</mi> <mi>x</mi> <mo>=</mo> <mfrac> <mrow> <mi>A</mi> <mi>x</mi> <mo>&amp;times;</mo> <mi>C</mi> <mi>s</mi> </mrow> <mrow> <mo>(</mo> <mi>A</mi> <mi>s</mi> <mo>-</mo> <msub> <mi>A</mi> <mn>0</mn> </msub> <mo>)</mo> </mrow> </mfrac> </mrow>

式中：Cx：供试品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Cs：对照品溶液中三氯乙烯的浓度，μg/ml；

Ax：供试品溶液中三氯乙烯的峰面积；

As：对照品溶液中三氯乙烯的峰面积；

A₀:空白溶液中三氯乙烯的峰面积。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述色谱柱起始温度为36℃。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述色谱柱起始温度为40℃。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述色谱柱起始温度为44℃。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中平衡温度为55℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中平衡温度为60℃。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中平衡温度为65℃。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中加热27min。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中加热30min。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中加热33min。

11.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中定量环温度为65℃。

12.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中定量环温度为70℃。

13.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述顶空条件中定量环温度为75℃。