CN105384717B - 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

甘松新酮类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105384717B
CN105384717B CN201510749938.8A CN201510749938A CN105384717B CN 105384717 B CN105384717 B CN 105384717B CN 201510749938 A CN201510749938 A CN 201510749938A CN 105384717 B CN105384717 B CN 105384717B
Authority
CN
China
Prior art keywords
nardosinone
derivative
rhizoma nardostachyos
extract
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201510749938.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105384717A (zh
Inventor
吴红华
徐砚通
高秀梅
陈应鹏
王忠平
应树松
刘艳庭
朱彦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University of Traditional Chinese Medicine filed Critical Tianjin University of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN201510749938.8A priority Critical patent/CN105384717B/zh
Publication of CN105384717A publication Critical patent/CN105384717A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105384717B publication Critical patent/CN105384717B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/02Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 2
    • C07D317/06Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 2 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C407/00Preparation of peroxy compounds
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C409/00Peroxy compounds
    • C07C409/02Peroxy compounds the —O—O— group being bound between a carbon atom, not further substituted by oxygen atoms, and hydrogen, i.e. hydroperoxides
    • C07C409/14Peroxy compounds the —O—O— group being bound between a carbon atom, not further substituted by oxygen atoms, and hydrogen, i.e. hydroperoxides the carbon atom belonging to a ring other than a six-membered aromatic ring
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C45/79Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C45/80Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by liquid-liquid treatment
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C49/00Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
    • C07C49/587Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring
    • C07C49/703Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups
    • C07C49/723Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups polycyclic
    • C07C49/727Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups polycyclic a keto group being part of a condensed ring system
    • C07C49/733Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups polycyclic a keto group being part of a condensed ring system having two rings
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明提供了甘松新酮及其衍生物以及它们的制备方法与应用,从败酱科甘松属植物甘松(Nardostachys chinensis Bata l.)的根茎中分离纯化而得,具有5‑羟色胺转运体(SERT)调节活性,可在制备用于抗抑郁症、焦虑症、精神分裂症、强迫症、神经退行性等疾病的药物方面进行应用、以及药物成瘾性和消化系统功能紊乱等疾病的治疗药物制备方面进行应用,具有重要的药物开发价值。

Description

甘松新酮类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及植物提取物及其制备方法与应用,尤其是甘松新酮类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
5-羟色胺转运体(SERT)是一种对5-HT有高度亲和力的跨膜转运蛋白,约含630个氨基酸残基,其编码基因(SLC6A4)分别位于7号和11号染色体上,由跨度约为35kb的14个外显子组成。SERT蛋白包含12-13个跨膜区,N端及C端位于胞质中,靠近N端处有cAMP依赖性蛋白激酶结合位点,在第三与第四跨膜区之间有一位于细胞外的环状部分,是N-连接的糖基化位点。
SERT属于Na+/Cl-依赖型转运蛋白,主要位于5-HT能神经元。SERT从神经突触间隙中重新摄取5-HT进入突触前神经元,直接影响突触间隙5-HT浓度,改变突触后受体介导信号的量和作用持续时间。此外,发现SERT在胎盘组织、骨髓、肾、肺、心、肾上腺、肝、甲状旁腺、甲状腺、胰腺和小肠等器官亦有分布,提示SERT参与多种生理功能。
SERT是转运5-HT的重要分子,与情绪、食欲、睡眠、记忆、学习等许多生理心理功能相关,SERT及5-HT表达改变可引起焦虑、抑郁、强迫症、恐惧症,甚至精神分裂症,并与药物成瘾性密切相关;此外,发现SERT在胃肠道功能性疾病中扮演了重要角色,如临床上慢传输性便秘、肠道易激综合征、功能性腹胀等胃肠功能性疾病,采用针对SERT的抗抑郁药、抗焦虑药物取得了疗效。
甘松(Nardostachys chinensis Batal.)是败酱科甘松属植物,具有理气止痛,开郁醒脾;外用祛湿消肿的功效,甘松已经报道的生物活性包括(1)作用于神经系统,如抗抑郁、镇静和抗惊厥、抗帕金森和记忆恢复;(2)作用于心血管系统,如降血压、抗心律失常、抗心肌缺血、抗心血管损伤;(3)作用于呼吸系统,如增强耐缺氧能力;(4)抑菌;(5)抗肝损伤等。甘松主要成分之一甘松新酮,也是甘松特有的化学成分,具有降血压、抗癫痫、中枢抑制作用、抗抑郁、促神经生长和抗肿瘤等多种生物活性。甘松中存在一系列甘松新酮衍生物,包括环氧化产物、过氧五元环开环产物等,特别是少量或微量成分鲜有报道,生物活性及相关机制还有待进一步发现。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供甘松新酮类化合物——甘松新酮及其衍生物,具体为:甘松新酮、1(10)-环氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A和甘松过氧酮A。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松新酮及其衍生物的制备方法。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述甘松新酮及其衍生物的应用。
为解决上述技术问题,本发明的技术方案是:
甘松新酮及其衍生物,为甘松新酮、1(10)-环氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A和甘松过氧酮A,具有下述结构式(I)式:
其中,A:甘松新酮[1(10)-en-9-oxo-7β,11-cycloperoxo-];B:1(10)-环氧甘松新酮[1(10)-epoxy-9-oxo-7β,11-cycloperoxo-];C:甘松新酮二醇[1(10)-en-9-oxo-7β,11-diol-];D:甘松双酮
A[1(10)-en-7,9-dioxo-11-ol-];E:甘松过氧酮
A[1(10),8(9)-diene-7-oxo-9-hydroperoxy-11-ol-]。
优选的,上述甘松新酮及其衍生物,其物理化学和波谱性质为:
甘松新酮(nardosinone,A),无色结晶(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197、216、251、288、334nm;CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):211(-0.57)、240(+0.56)、280(-0.36)、343(+0.18)nm;1H-NMR(CDCl3,400MHz):δH 7.03(1H,dd,J=2.8,4.8Hz,H-1),2.22,2.31(2H,m,each,H-2),1.53(2H,m,H-3),1.93(1H,m,H-4),2.92(1H,d,J=9.6Hz,H-6),4.89(1H,m,H-7),2.87(1H,dd,J=7.6,18.4Hz,H-8α),2.63(1H,dd,J=1.6,18.8Hz,H-8β),1.37(3H,s,12-CH3),1.17(3H,s,13-CH3),1.12(3H,s,14-CH3),1.01(3H,d,J=6.8Hz,15-CH3);13C-NMR(CDCl3,100MHz):δC 137.8(C-1),25.9(C-2),25.8(C-3),33.1(C-4),38.5(C-5),59.7(C-6),78.1(C-7),40.0(C-8),196.5(C-9),140.1(C-10),85.1(C-11),22.2(C-12),23.9(C-13),26.9(C-14),16.20(C-15)。
1(10)-环氧甘松新酮[1(10)-epoxynardosinone,B],无色结晶(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197.0nm;[α]2 D 0+1.27(c 1.0,MeOH);CD(c 0.05,MeOH)λ(Δε):196.5(-1.33)、215.5(-2.42)nm;(-)-ESI-MS:m/z265.25[M-H]-、(+)-ESI-MS:m/z 267.33[M+H]+;氢谱、碳谱核磁数据见具体实施方式部分表1和表2。
甘松新酮二醇(nardosinonediol,C),无色结晶(二氯甲烷)。UV(MeOH)λmax:197、239、333nm;CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):233(-0.29)、241(-0.27)、282(-0.80)、327(-1.11)nm;1H-NMR(DMSO-d6,600MHz):δH 6.60(1H,d,J=9.1Hz,H-1),1.46(1H,t,J=15.7,8.3Hz,H-2),2.16(1H,dd,J=12.1,3.9Hz,H-3),2.21(1H,m,H-4),2.21(1H,d,J=12.8Hz,H-6),4.44(1H,m,H-7),2.64(1H,d,J=12.1Hz,H-8),0.90(3H,s,H-12),1.22(3H,s,H-13),0.92(3H,s,H-14),1.31(3H,d,J=4.8Hz,H-15);13C-NMR(DMSO-d6,100MHz):δC 135.2(C-1),26.0(C-2),25.0(C-3),32.1(C-4),39.9(C-5),52.7(C-6),66.4(C-7),45.6(C-8),199.3(C-9),142.3(C-10),77.5(C-11),16.2(C-12),30.2(C-13),25.6(C-14),35.2(C-15)。
甘松双酮A(nardosinodione A,D),无色油状物(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:198.0、295.5nm;[α]2 D 0+4.67(c 0.1,MeOH);CD(c 0.05,MeOH)λ(Δε):203.0(-0.67)、209(-0.78)、225.0(-0.14)、245.0(-0.39)、293.5(+1.57)、329.0(-1.51)nm;(-)-ESI-MS m/z249.25[M-H]-、(+)-ESI-MS:m/z251.37[M+H]+;氢谱、碳谱核磁数据见具体实施方式部分表1和表2。
甘松过氧酮A(9-hydroperoxynardostachone A,E),淡黄色油状物(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197.5、269.5nm;[α]2 D 0+55.33(c 0.3,MeOH);CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):279.5(+1.13)、326.5(-0.91)nm;(-)-ESI-MS m/z 265.19[M-H]-、(+)-ESI-MS m/z 267.36[M+H]+;氢谱、碳谱核磁数据见具体实施方式部分表1和表2。
上述甘松新酮及其衍生物,归属于nardosinone-型倍半萜,母核上7,11-位形成五元过氧环,1,10-位形成双键或发生环氧化(A和B);或者五元环打开,11位羟基取代,7位羟基或酮羰基取代,1,10-位形成双键,9位酮羰基或烯醇过氧羟基取代(C、D和E),其中,7、11-位羟基可被取代基酰化、酚醚化、酰胺化成酯、酚醚或含氮化合物;9-位过氧羟基具有有机过氧酸的性质。其化学结构特点是:土青木香烷型倍半萜母核上7,11-位形成五元过氧环,1,10-位形成双键或发生环氧化;或者11位羟基取代,7位羟基或酮羰基取代,1,10-位形成双键,9位酮羰基或烯醇羟基取代。
上述甘松新酮及其衍生物的制备方法,具体步骤如下:
(1)甘松根茎每20kg用70%(v/v)乙醇浸提3次,每次48小时,合并提取液,减压浓缩,得粗提物浸膏;然后用70%(v/v)乙醇热提上述药渣3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩,再次得粗提物浸膏;合并两次粗提物得总浸膏;
(2)所得粗提物总浸膏,经水分散后,分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水层;
(3)将石油醚部位经硅胶柱色谱(100-200目拌样硅胶与200-300目柱硅胶重量比为4:33),石油醚:乙酸乙酯(体积比)=100:0(100:0指100%石油醚洗脱情况)-100:50溶剂系统梯度洗脱,得22个流份Fr.1-22;
(4)石油醚:乙酸乙酯=100:2-100:3溶剂洗脱流份-流份Fr.7,经反复硅胶柱层析,分离得到化合物甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A、甘松过氧酮A,流份Fr.7-1经制备型高效液相色谱甲醇:水(体积比)=60:40溶剂洗脱,分离得到化合物1(10)-环氧甘松新酮。
上述甘松新酮及其衍生物甘松新酮(化合物A)和甘松新酮二醇(化合物C)在制备抑制5-羟色胺转运体(SERT)活性药物方面的应用。
上述甘松新酮及其衍生物1(10)-环氧甘松新酮(化合物B)、甘松双酮A(化合物D)和甘松过氧酮A(化合物E)在制备促进5-羟色胺转运体(SERT)活性药物方面的应用。
优选的,上述甘松新酮及其衍生物在制备抗抑郁症、焦虑症、精神分裂症、强迫症、神经退行性疾病、药物成瘾性和消化系统功能紊乱等疾病的治疗药物方面的应用。
具有上述甘松新酮及其衍生物的药物组合物,包含治疗和/或预防有效量的上述化合物以及任选的药学可接受的赋形剂。
上述药学可接受的赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂,特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态,用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如,可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等,必要时,还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。
上述药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂、注射用无菌粉针等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明的有益效果是:
本发明所述甘松新酮及其衍生物,从败酱科甘松属植物甘松(Nardostachyschinensis Batal.)的根茎中分离纯化而得,具有如下特征:土青木香烷型倍半萜母核上7,11-位形成五元过氧环,1,10-位形成双键或发生环氧化;或者11位羟基取代,7位羟基或酮羰基取代,1,10-位形成双键,9位酮羰基或烯醇过氧羟基取代;所述甘松新酮及其衍生物具有调节(抑制或促进)5-羟色胺转运体(SERT)活性,可作为抑郁症、焦虑症、精神分裂症、强迫症、神经退行性疾病、药物成瘾性和消化系统功能紊乱等疾病的治疗药物,具有重要的药物开发价值。
附图说明
图1是甘松新酮及其衍生物,甘松新酮、1(10)-环氧甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A和甘松过氧酮A对SERT活性的增强作用,其中,阳性对照药2μM氟西汀(Fluoxetine)和1.0μM噻奈普汀(tianeptine),**p<0.01,***P<0.001;
图2是甘松新酮及其衍生物中的新化合物1(10)-环氧甘松新酮、甘松双酮A和甘松过氧酮A的NMR谱图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案,下面结合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
实验仪器与试剂:傅里叶变换核磁共振波谱仪(瑞士Bruker公司,AVIII型400MHz及600MHz);显色剂:10%硫酸乙醇。
实施例1
甘松新酮及其衍生物的制备(提取分离流程):
甘松药材饮片购自安徽济人药业有限公司(批号:110709,规格:1kg/袋,产地:四川),约20kg。甘松根茎20kg用70%(v/v)乙醇浸提3次,每次48小时,合并提取液,减压浓缩,得粗提物浸膏3kg;然后用70%乙醇热提上述药渣3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩,得粗提物浸膏400g;合并两次粗提物得总浸膏3.4kg;所得粗提物总浸膏,经水分散后,依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到石油醚部位320g、乙酸乙酯部位1kg、正丁醇部位600g、水层1.2kg;将石油醚部位320g经硅胶柱色谱(拌样硅胶100-200目400g,柱硅胶200-300目3.3kg,石油醚:乙酸乙酯=100:0(指100%石油醚洗脱情况)-100:50溶剂系统梯度洗脱),得22个流份Fr.1-22;流份Fr.7(石油醚:乙酸乙酯=100:2-100:3溶剂洗脱流份),经反复硅胶柱层析,分离得到化合物甘松新酮(A,50mg)、甘松新酮二醇(C,6mg)、甘松双酮A(D,3mg)、甘松过氧酮A(E,2mg)。流份Fr.7-1,经制备型高效液相色谱甲醇:水=60:40溶剂洗脱,分离得到化合物1(10)-环氧甘松新酮(B,3mg)。各化合物结构式如下:
其中,如图2所示,A:甘松新酮[1(10)-en-9-oxo-7β,11-cycloperoxo-];B:1(10)-环氧甘松新酮[1(10)-epoxy-9-oxo-7β,11-cycloperoxo-];C:甘松新酮二醇[1(10)-en-9-oxo-7β,11-diol-];D:甘松双酮A[1(10)-en-7,9-dioxo-11-ol-];E:甘松过氧酮A[1(10),8(9)-diene-7-oxo-9-hydroperoxy-11-ol-]。
甘松新酮(nardosinone,A),无色结晶(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197、216、251、288、334nm;CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):211(-0.57)、240(+0.56)、280(-0.36)、343(+0.18)nm;1H-NMR(CDCl3,400MHz):δH 7.03(1H,dd,J=2.8,4.8Hz,H-1),2.22,2.31(2H,m,each,H-2),1.53(2H,m,H-3),1.93(1H,m,H-4),2.92(1H,d,J=9.6Hz,H-6),4.89(1H,m,H-7),2.87(1H,dd,J=7.6,18.4Hz,H-8α),2.63(1H,dd,J=1.6,18.8Hz,H-8β),1.37(3H,s,12-CH3),1.17(3H,s,13-CH3),1.12(3H,s,14-CH3),1.01(3H,d,J=6.8Hz,15-CH3);13C-NMR(CDCl3,100MHz):δC 137.8(C-1),25.9(C-2),25.8(C-3),33.1(C-4),38.5(C-5),59.7(C-6),78.1(C-7),40.0(C-8),196.5(C-9),140.1(C-10),85.1(C-11),22.2(C-12),23.9(C-13),26.9(C-14),16.20(C-15)。
1(10)-环氧甘松新酮[1(10)-epoxynardosinone,B],无色结晶(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197.0nm;+1.27(c 1.0,MeOH);CD(c 0.05,MeOH)λ(Δε):196.5(-1.33)、215.5(-2.42)nm;(-)-ESI-MS:m/z265.25[M-H]-、(+)-ESI-MS:m/z 267.33[M+H]+;氢谱核磁数据见表1,碳谱核磁数据见表2。ESI-MS分别在m/z 265.25处给出[M-H]-峰、在m/z 267.33处给出[M+H]+峰,结合NMR谱确定该化合物的分子式为C15H22O4,计算不饱和度为5。
将化合物B的NMR数据与已知化合物甘松新酮比较,发现甘松新酮C-1(137.7)、C-10(139.9)位的双键信号消失,取而代之的是两个连氧碳信号δC 60.2(C-1)、61.9(C-10),提示化合物B为甘松新酮1(10)位双键还原后的环氧化产物。
HSQC、HMBC谱等信息进一步证实以上推测,化合物的平面结构如下式所示。
NOESY谱中,δH 3.92(s,H-1)与δH 1.40(s,Me-12)空间相关,提示C1-O键、C6-C11键处于相反方向;δH 3.03(d,8.4,H-6)与δH 1.40(s,Me-12)、1.20(s,Me-14)、0.91(d,J=6.8Hz,Me-15)空间相关,提示C4-C15键、C5-C14键、C11-C13键处于同一方向;δH 1.20(s,Me-14)与δH 4.92(td,J=2.0,8.0Hz,H-7)空间相关,提示C5-C14键、C7-O键处于相反方向。通过与化合物甘松新酮相比较,确定了化合物化合物B的相对构型。经系统文献检索,化合物B为一未见报道的新化合物,命名为1(10)-环氧甘松新酮[1(10)-epoxynardosinone]。
甘松新酮二醇(nardosinonediol,C),无色结晶(二氯甲烷)。UV(MeOH)λmax:197、239、333nm;CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):233(-0.29)、241(-0.27)、282(-0.80)、327(-1.11)nm;1H-NMR(DMSO-d6,600MHz):δH 6.60(1H,d,J=9.1Hz,H-1),1.46(1H,t,J=15.7,8.3Hz,H-2),2.16(1H,dd,J=12.1,3.9Hz,H-3),2.21(1H,m,H-4),2.21(1H,d,J=12.8Hz,H-6),4.44(1H,m,H-7),2.64(1H,d,J=12.1Hz,H-8),0.90(3H,s,H-12),1.22(3H,s,H-13),0.92(3H,s,H-14),1.31(3H,d,J=4.8Hz,H-15);13C-NMR(DMSO-d6,100MHz):δC 135.2(C-1),26.0(C-2),25.0(C-3),32.1(C-4),39.9(C-5),52.7(C-6),66.4(C-7),45.6(C-8),199.3(C-9),142.3(C-10),77.5(C-11),16.2(C-12),30.2(C-13),25.6(C-14),35.2(C-15)。
甘松双酮A(nardosinodione A,D),无色油状物(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:198.0、295.5nm;+4.67(c 0.1,MeOH);CD(c 0.05,MeOH)λ(Δε):203.0(-0.67)、209(-0.78)、225.0(-0.14)、245.0(-0.39)、293.5(+1.57)、329.0(-1.51)nm;(-)-ESI-MS m/z249.25[M-H]-、(+)-ESI-MS:m/z251.37[M+H]+;氢谱核磁数据见表1,碳谱核磁数据见表2。(-)-ESI-MS在m/z249.25处给出[M-H]-峰、(+)-ESI-MS在m/z 251.37处给出[M+H]+峰,结合1H-NMR、13C-NMR谱确定该化合物的分子式为C15H22O3,计算不饱和度为5。
13C-NMR(CDCl3,150MHz)谱中显示有15个碳信号,其中其中δC 206.3(C-7)、195.5(C-9)为2个酮羰基碳信号;δC 138.4(C-1)、140.7(C-10)为1组烯碳信号,δC 72.0(C-11)为1个连氧碳信号,结合不饱和度推测结构中可能含有2个环。
1H-NMR谱中,高场化学位移δH0.90-1.40处有3个连季碳的甲基质子信号:δH 1.33(s,3H)、1.36(s,3H)、0.90(s,3H)和1个连叔碳的甲基质子信号δH 0.98(d,J=6.8Hz,3H),推测可能为土青木香烷型倍半萜12、13、14和15位的甲基特征信号峰。此外,结合HSQC谱,δH7.10(1H,dd,J=3.6,4.2Hz,H-1)为1个烯氢质子信号。HMBC谱给出相关信息:季碳甲基δH0.98(3H,d,J=6.8Hz,15-Me)与δC 26.6(C-3)、33.0(C-4)、39.5(C-5)相关;δH 0.90(3H,s,14-Me)与δC 140.7(C-10)相关;亚甲基δH 2.33(2H,m,H-2)与δC 26.6(C-3)、33.0(C-4)相关;δH 3.46(1H,d,J=21.0Hz,H-8)、3.33(1H,dd,J=1.8,21.0Hz,H-8)与δC 206.3(C-7)、195.5(C-9)相关;次甲基δH 2.78(d,J=1.2Hz,H-6)与δC 39.5(C-5)、206.3(C-7)、72.0(C-11)、16.2(C-14)、140.7(C-10)相关;烯碳氢信号δH7.10(1H,dd,J=3.6,4.2Hz,H-1)与δC26.0(C-2)、195.5(C-9)、140.7(C-10)、39.5(C-5)相关。综合以上信息,得出该化合物的平面结构。
NOESY谱中,化学位移在δH 2.78处的氢与δH 1.36(s,Me-13)、0.90(s,Me-14)有NOE效应,推测出该化合物的相对构型,经系统文献检索,为一未见报道的新化合物,命名为甘松双酮A(Nardosinodione A),
甘松过氧酮A(9-hydroperoxynardostachone A,E),淡黄色油状物(乙酸乙酯)。UV(MeOH)λmax:197.5、269.5nm;+55.33(c 0.3,MeOH);CD(c0.05,MeOH)λ(Δε):279.5(+1.13)、326.5(-0.91)nm;(-)-ESI-MS m/z 265.19[M-H]-、(+)-ESI-MS m/z 267.36[M+H]+;氢谱核磁数据见表1,碳谱核磁数据见表2。(-)-ESI-MS在m/z265.19处给出[M-H]-峰、(+)-ESI-MS在m/z 267.36处给出[M+H]+峰,结合1H-NMR、13C-NMR谱确定该化合物的分子式为C15H22O4,计算不饱和度为5。
13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)谱中显示有15个碳信号,其中其中δC 198.8为1个α,β-不饱和酮羰基碳信号;δC 130.5、136.4、101.8、166.5为2组烯碳信号,δC 65.6、71.4为2个连氧碳信号,结合不饱和度推测结构中可能含有2个六元环。
1H-NMR谱中,高场区化学位移在δH0.89-1.10处有3个季碳甲基质子信号:δH 0.97(s,3H)、1.10(s,3H)、0.89(s,3H)和1个叔碳的甲基质子信号δH0.89(overlapped,3H)。此外,结合HSQC谱,δH 6.52(br s,H-1)、5.16(m,H-8)为2个烯氢质子信号。HMBC谱给出相关信息,如下式所示:季碳甲基δH 0.89(overlapped,15-Me)与δC 25.7(C-3)、32.1(C-4)相关;δH0.89(s,14-Me)与δC 136.4(C-10)相关;δH 0.97(s,12-Me)与δC 71.4(C-11)相关;次甲基δH2.30(s,H-6)与δC 40.4(C-5)、198.8(C-7)、71.4(C-11)、136.4(C-10)相关;烯碳氢信号δH5.16(s,H-8)与δC 136.4(C-10)相关。另根据分子式,结构中应存在过氧羟基官能团;综合以上信息,得出该化合物的平面结构。
NOESY谱中,δH 2.68(1H,m,H-4)与δH 1.10(s,13-Me)有NOE效应,推测出该化合物的相对构型,经Scifinder数据库检索,为一未见报道的新化合物,命名为甘松过氧酮A(9-hydroperoxynardostachone A)。
表2. 1(10)-环氧甘松新酮、甘松双酮A和甘松过氧酮A化合物的碳谱数据(13C-NMRin 100MHz,in CDCl3)
实施例2
本发明所述化合物对5-羟色胺转运体(SERT)的影响
采用稳定转染的hSERT-HEK293细胞株,以4-(4-(dimethylamino)phenyl)-1-methylpyridinium(APP+)为荧光底物,在高内涵系统上检测甘松新酮及其衍生物对SERT活性的影响。
1)实验仪器与试剂
实验仪器:
高内涵Operetta系统和Columbus数据管理和分析系统(PerkinElmer),超净台,移液枪(1000μL,200μL,20μL,10μL,2.5μL,美国Eppendorf公司)
试剂和材料:
人胚肾细胞系HEK293(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库),hSERT pcDNA3质粒(Addgene,plasmid 15483),MEM培养基(Gibco),APP+(Sigma),Hoechst 33342(CellSignaling Technology),96孔板(Costar 3605)
2)实验操作过程
首先建立并鉴定了稳定表达hSERT-HEK293细胞株{安磊,李静,金增亮等.人源5-羟色胺转运体稳定表达细胞系的建立及其功能探究[J].军事医学2011,35(9):681-684}。以APP+为荧光底物,基于高内涵系统检测SERT的功能{Fowler A,Seifert N,Acker V.etal.A nonradioactive high-throughput/high-content assay for measurement of thehuman serotonin reuptake transporter function in vitro[J].Journal ofBiomolecular Screening,2006,11(8):1027-1034}
具体步骤:
(1)精密称取甘松新酮及其衍生物,用DMSO配制成20mM的母液,用无酚红MEM基础培基稀释药物至10.0μM,1.0μM,0.1μM。
(2)按1.0×104细胞/孔的密度接种稳定转染的hSERT-HEK293细胞至96孔板中,在37℃,5%CO2条件下培养24h。
(3)实验设立空白对照组,阳性对照2.0μM氟西汀组和1.0μM噻奈普汀组,甘松新酮及其衍生物分别设立10.0μM,1.0μM,0.1μM组。细胞弃去培养基,用PBS缓冲液洗2遍,按照80μL/孔体积加入各待测样品,每个浓度3个复孔,在37℃,5%CO2条件下避光孵育2-3h。
(4)孵育完成后,每孔加入20μL APP+,孵育20分钟。
(5)弃去孔内的液体,用PBS缓冲液洗2遍,每孔加入1.0μg/mL Hoechst50μL,避光孵育20min。
(6)弃去孔板内的液体,PBS洗2-3遍,采用高内涵系统检测细胞内的荧光强度
Hoechst 33342Excitation:360-400nm,Emission:410-480nm
APP+Excitation:460-490nm,Emission:505-550nm
3)数据分析:
采用Columbus数据管理和分析系统进行图像分析,根据Hoechst 33342荧光识别细胞核方式来确定细胞,根据胞内APP+荧光强度来确定SERT转运活性,计算相对荧光强度=(胞内APP+荧光强度药物组/胞内APP+荧光强度对照组)进行ANOVA分析。
4)实验结果
实验结果(图1)显示化合物A对SERT活性有显著性的抑制作用(F(5,48)=281.8,p<0.0001),Dunnett多重比较事后检验(Dunnett's multiple comparison post hoc test)显示化合物A的作用浓度为0.1μM(q=15.60,p<0.001),1μM(q=13.13,p<0.001)和10.0μM(q=4.540,p<0.001)时都能显著性的抑制SERT的活性,并呈量效趋势,阳性药对照组氟西汀在2.0μM时能显著抑制SERT的活性(q=30.34,p<0.001),另外一阳性药对照组噻奈普汀在1.0μM时能显著增强SERT活性(q=4.872,p<0.001)。
化合物B对SERT活性有显著性的增强((F(5,47)=802.4,p<0.0001)),Dunnett多重比较事后检验显示化合物G-6在浓度为10.0μM(q=4.952,p<0.001)时都能显著增强SERT活性,在浓度为1.0μM(q=0.3353,n.s.)和0.1μM(q=1.042,n.s.)对SERT活性没有明显的影响,阳性药对照组氟西汀在2.0μM时能显著抑制SERT的活性(q=46.32p<0.001),另外一阳性药对照组噻奈普汀在1.0μM时能显著增强SERT活性(q=6.632,p<0.001)。
化合物C对SERT活性有显著性的抑制(F(5,42)=197.0,p<0.0001)。Dunnett多重比较事后检验显示化合物C在浓度为10.0μM(q=7.958,p<0.001)、1.0μM(q=11.72,p<0.001)和0.1μM(q=14.63,p<0.05.)时对SERT的活性都有显著的抑制且有一定的量效关系,阳性药对照组氟西汀在2.0μM时能显著抑制SERT的活性(q=26.60,p<0.001),另外一阳性药对照组噻奈普汀在1.0μM时能显著增强SERT活性(q=3.347,p<0.01)。
化合物D对SERT活性有显著性增强(F(5,47)=866.8,p<0.0001)。Dunnett多重比较事后检验显示化合物D在浓度为10.0μM(q=5.940,p<0.001)和1.0μM(q=3.657,p<0.001)都能显著增强SERT活性,在浓度为0.1μM(q=3.006,p<0.05.)对SERT的活性有显著的抑制,阳性药对照组氟西汀在2.0μM时能显著抑制SERT的活性(q=45.39,p<0.001),另外一阳性药对照组噻奈普汀在1.0μM时能显著增强SERT活性(q=7.741,p<0.001)。
化合物E对SERT活性有显著性增强(F(5,33)=394.4,p<0.0001)。Dunnett多重比较事后检验显示化合物E在浓度为10.0μM(q=5.250,p<0.001)和1.0μM(q=4.662,p<0.001)都能显著增强SERT活性,在浓度为0.1μM(q=2.611,n.s.)对SERT的活性无显著影响,阳性药对照组氟西汀在2.0μM时能显著抑制SERT的活性(q=30.67,p<0.001),另外一阳性药对照组噻奈普汀在1.0μM时能显著增强SERT活性(q=5.447,p<0.001)。
综上可知,所述5-羟色胺转运体(SERT)是一种对5-HT有高度亲和力的跨膜转运蛋白,在胎盘组织、骨髓、肾、肺、心、肾上腺、肝、甲状旁腺、甲状腺、胰腺和小肠等器官均有分布,属于Na+/Cl-依赖型转运蛋白,主要位于5-HT能神经元,从神经突触间隙中重新摄取5-HT进入突触前神经元,直接影响突触间隙5-HT浓度,改变突触后受体介导信号的量和作用持续时间,从而参与多种生理心理功能(如情绪、食欲、睡眠、记忆、学习等)。
SERT是临床药物研发的重要靶点,传统选择性SERT抑制剂较多,但选择性5-羟色胺再摄取促进剂(SSRE)非常少,至今报道的有噻奈普汀(tianeptine),临床主要用于抗抑郁药。噻奈普汀对人体的作用特点包括:对心境紊乱有一定作用,介于镇静性抗抑郁药和兴奋性抗抑郁药之间;对躯体不适,尤其是对于焦虑和心境紊乱有关的胃肠不适有明显作用;对酒精中毒病人在戒酒期间出现的人格和行为紊乱有一定作用;而且,噻奈普汀对下列方面无不良作用:睡眠和警觉;心血管系统;胆碱能系统(无抗胆碱能症状);药物成瘾。
本发明通过对从甘松根茎中分离得到的甘松新酮及其衍生物进行体外影响5-羟色胺转运体(SERT)活性的研究,发现甘松新酮(化合物A)和甘松新酮二醇(化合物C)能够显著抑制SERT活性,1(10)-环氧甘松新酮(化合物B)、甘松双酮A(化合物D)和甘松过氧酮A(化合物E)能够显著促进SERT活性,从而确证甘松新酮及其衍生物为调节SERT失衡引起的相关生理心理疾病和消化道疾病的的有效成分。因此,甘松新酮及其衍生物可以用来制备治疗抑郁症等生理心理疾病的药物和和肠道易激综合征等胃肠道功能紊乱疾病的药物。
实施例3
制备方法:按上述比例将甘松新酮及其衍生物、乳糖和淀粉均匀混合,过200目筛,用水均匀润湿,把润湿后的混合物干燥再过筛,加入硬脂酸镁,然后将混合物压片,每片重250mg,活性成分含量为10mg。
实施例4
胶囊剂:甘松新酮及其衍生物 20mg
半乳糖 188mg
硬脂酸镁 2mg
制备方法:按上述比例将甘松新酮及其衍生物与半乳糖均匀混合,过200目筛,把得到的混合物,加入硬脂酸镁,装入2号胶囊,即得。
上述参照具体实施方式对该甘松新酮及其衍生物以及它们的制备方法与应用进行的详细描述,是说明性的而不是限定性的,可按照所限定范围列举出若干个实施例,因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改,应属本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种甘松新酮的衍生物,其特征在于:具有下述结构式:
其中,B:1(10)-环氧甘松新酮;D:甘松双酮A;E:甘松过氧酮A。
2.权利要求1所述甘松新酮的衍生物的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:
(1)甘松根茎每20kg用70%v/v的乙醇浸提3次,每次48小时,合并提取液,减压浓缩,得粗提物浸膏;然后用70%v/v的乙醇热提上述药渣3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩,再次得粗提物浸膏;合并两次粗提物得总浸膏;
(2)所得粗提物总浸膏,经水分散后,分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水层;
(3)将石油醚部位经硅胶柱色谱,石油醚:乙酸乙酯=100:0-100:50溶剂系统梯度洗脱,得22个流份Fr.1-22;
(4)石油醚:乙酸乙酯=100:2-100:3溶剂洗脱流份-流份Fr.7,经反复硅胶柱层析,分离得到化合物甘松新酮、甘松新酮二醇、甘松双酮A、甘松过氧酮A,流份Fr.7-1经制备型高效液相色谱甲醇:水=60:40溶剂洗脱,分离得到化合物1(10)-环氧甘松新酮。
3.权利要求1所述甘松新酮的衍生物在制备促进5-羟色胺转运体活性药物方面的应用。
4.权利要求1所述甘松新酮的衍生物在制备抗抑郁症、焦虑症、精神分裂症、强迫症、神经退行性疾病、药物成瘾性和消化系统功能紊乱疾病的治疗药物方面的应用。
5.具有权利要求1所述甘松新酮的衍生物的药物组合物,其特征在于:包含治疗和/或预防有效量的所述甘松新酮的衍生物以及任选的药学可接受的赋形剂。
CN201510749938.8A 2015-11-05 2015-11-05 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用 Active CN105384717B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510749938.8A CN105384717B (zh) 2015-11-05 2015-11-05 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510749938.8A CN105384717B (zh) 2015-11-05 2015-11-05 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105384717A CN105384717A (zh) 2016-03-09
CN105384717B true CN105384717B (zh) 2018-11-23

Family

ID=55417542

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510749938.8A Active CN105384717B (zh) 2015-11-05 2015-11-05 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105384717B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108303480A (zh) * 2017-11-09 2018-07-20 天津中医药大学 一种甘松活性成分的定量检测方法及甘松活性成分与应用
CN116173008B (zh) * 2023-03-03 2023-10-20 广西医科大学 甘松新酮作为铁死亡诱导剂的应用
CN116813462B (zh) * 2023-05-29 2024-10-15 天津中医药大学 一种甘松新酮降解产物及其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102370635A (zh) * 2010-08-24 2012-03-14 石晋丽 甘松新酮的用途及制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102370635A (zh) * 2010-08-24 2012-03-14 石晋丽 甘松新酮的用途及制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
甘松有效成分研究;张旭,等,;《中药材》;20070131;第30卷(第1期);第38-41页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105384717A (zh) 2016-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105384717B (zh) 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用
Lin et al. Quercetin 3‐O‐malonylglucoside in the leaves of mulberry (Morus alba) is a functional analog of ghrelin
WO2022257995A1 (zh) 一种隐丹参酮衍生物及其制备方法和降脂抗肥胖的应用
CN108303480A (zh) 一种甘松活性成分的定量检测方法及甘松活性成分与应用
CN108530430A (zh) 酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用
CN101590065A (zh) 西伯利亚远志糖A1、西伯利亚远志糖A5和tenuifoliside A在制备治疗抑郁症产品中的应用
CN116925054B (zh) 紫丁香中的一种木脂素化合物及其制备方法与应用
CN105085308B (zh) 菖蒲酰胺类化合物及其制备方法与应用
CN105152894B (zh) 甘松马兜铃烷型倍半萜类化合物以及制备方法与应用
CN107802626A (zh) 降血糖组合物及其制备方法、用途
CN108059592B (zh) 去氧甘松香醇a及其制备方法与应用
CN107805269A (zh) Dictyopterisinf及其制备糖尿病或肥胖症药物中的应用
CN105152893B (zh) 甘松马兜铃酮b及其制备方法与应用
CN113754620B (zh) 火麻仁中的木脂素酰胺类化合物及其制备方法和应用
CN105878229B (zh) 甘松萍瑚烷型倍半萜化合物的用途
CN110452248A (zh) 一种新颖倍半萜化合物及其制备方法与应用
CN108690033B (zh) 含黄酮类药物活性分子的荧光探针及其制备方法和应用
CN105713009B (zh) 菖蒲醇内酯化合物及其制备方法与应用
CN105153072B (zh) 甘松香酮c及其制备方法与应用
CN105777518B (zh) 双甘松烯酮a化合物及其制备方法与应用
CN107586284A (zh) 一种2‑芳基苯并呋喃类衍生物在制备痛风药物中的用途
CN106749147B (zh) 降血糖化合物及其制备方法、用途
CN114315772B (zh) 一种查尔酮类化合物及其制备方法和用途
CN115010598B (zh) 化合物Villanovane Ⅵ及其药物组合物与其制备方法和应用
CN116813462B (zh) 一种甘松新酮降解产物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant