CN107586284A - 一种2‑芳基苯并呋喃类衍生物在制备痛风药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种2‑芳基苯并呋喃类衍生物，该衍生物具备抗氧化的活性，具备黄嘌呤氧化酶抑制活性，能用于制备抗氧化、治疗痛风及高尿酸血症的组合物、药物、保健品。

Description

一种2-芳基苯并呋喃类衍生物在制备痛风药物中的用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，特别涉及一种2-芳基苯并呋喃类衍生物及其制备方法，该类衍生物具备黄嘌呤氧化酶抑制活性，该类衍生物具备抗氧化活性，该类衍生物能用于制备治疗或预防痛风及高尿酸血症的组合物、药物和保健品。

技术背景

随着人们生活水平的不断提高，饮食结构和生活方式也随之发生了很大变化，过多的摄入嘌呤和蛋白质饮食使高尿酸血症和痛风的患病率正呈逐渐上升的趋势，已成为一种常见病、多发病。痛风作为一种严重影响公共健康的代谢性疾病，常与其他代谢性疾病相伴发生，如冠心病、高血压、高血脂、糖尿病等。痛风是由生物机体内嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄减少引起的一种晶体性关节炎，临床主要表现为高尿酸血症和尿酸盐结晶沉积所致的特征性急性关节炎、痛风石、痛风石性慢性关节炎，并可发生尿酸盐肾病、尿酸性尿路结石等病症[A.M.Abeles，et al.，Update on gout：pathophysiology and potentialtreatments，Curr.Pain Headache Rep.，2007，11，440-446]。高尿酸血症是诱发痛风的重要生理生化基础，主要表现为血清尿酸浓度过高，其产生原因主要为尿酸生成过多和尿酸排泄减少[D.B.Crittenden，M.H.Pillinger，The year in gout-2010-2011，Bull.NYUHosp.Jt.Dis.，2011，69，257-263]。持续性的高尿酸血症是痛风的前兆和潜在的诱因，更是高血压、冠心病、肥胖症等疾病发生的危险因素[E.Krishnan，et al.，Hyperuricemia andincidence of hypertension among men without metabolic syndrome，Hypertension，2007，49，298-303]。因此，高尿酸血症和痛风在我国可能成为仅次于糖尿病的代谢性疾病，对其治疗途径的研究有着举足轻重的作用。

黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，简称XO)是尿酸合成过程中的关键酶，是治疗高尿酸血症的重要药物靶点之一。它可催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，并进一步催化黄嘌呤氧化产生尿酸和超氧阴离子[K.Sugamura，J.F.J.Keaney，Reactive oxygen species incardiovascular disease，Free Radical Bio.Med.，2011，51，978-992]。目前治疗高尿酸血症和痛风没有特效药，临床上使用的多数药物只是治标不治本，而且具有较为明显的毒副作用，而降低过高的尿酸是其主要的治疗策略。别嘌呤醇(Allopurinol)和非布索坦(Febuxostat)是目前临床上使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂类抗痛风新药，具有较好的抑制尿酸生成的作用，但在临床使用中仍存在一些明显的如肝肾功能损伤、血液系统损害、关节疼痛以及引起皮肤问题等不良反应[S.J.Wang，et al.，Synthesis of some 5-phenylisoxazole-3-carboxylic acid derivatives as potent xanthine oxidaseinhibitors，Eur.J.Med.Chem.，2010，45，2663-2670]。因此，寻找和发现结构新颖的安全有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂对于高尿酸血症和痛风及与黄嘌呤氧化酶相关疾病的治疗和人体代谢学等方面的研究具有重要意义。

天然产物一直都是寻找治疗各类疾病药物的重要源泉，并取得了许多可喜的成果，如川芎嗪、长春西汀等心血管药物，鬼臼毒素、紫杉醇等抗肿瘤药物均被发现于天然产物[L.Ouyang，et al.，Plant natural products：from traditional compounds to newemerging drugs in cancer therapy，Cell Proliferat.，2014，47，506-515]。此外，一些天然产物具有水溶性差、毒副作用大、体内代谢快、生物半衰期短等成药性缺陷，但经过适当的化学结构优化后，也成为了临床使用的一线药物，如依托泊苷、多烯紫杉醇等[D.J.Newman，G.M.Cragg，Natural products as sources of new drugs over the 30years from 1981 to 2010，J.Nat.Prod.，2012，75，311-335]。因此，对天然产物中的活性化合物进行适当的结构修饰是新药研发的重要途径。丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)，为唇形科鼠尾草属植物，其根供药用[L.M.Zhou，et al.，Danshen：an overview of itschemistry，pharmacology，pharmacokinetics，and clinical use，J.Clin.Pharmacol.，2005，45，1345-1359]，具有活血祛瘀、镇静安神、消肿止痛等多种良好功效，尤其在心脑血管疾病如冠心病、高血脂症、脑血管疾病等的治疗中发挥着重要作用[X.P.Chen，et al.，The anticancer properties of Salvia Miltiorrhiza Bunge(Danshen)：a systematicreview，Med.Res.Rev.，2014，34，768-794]。根据丹参化学成分的性质，主要可以分为两大类：脂溶性成分和水溶性成分。其中，脂溶性成分主要集中在以丹参酮为代表的二萜醌类化合物，而水溶性成分则多为具有酚酸类结构，是丹参发挥良好药效的主要物质基础之一[Y.R.Lu，L.Y.Foo，Polyphenolics of Salvia-a review，Phytochemistry，2002，59，117-140]。其中，在化学成分、药代动力学及药理学等方面研究较多的水溶性成分为丹参素(β-3，4-二羟苯乳酸)、丹酚酸A和丹酚酸B，其它酚酸类化合物还包括丹酚酸C、D、E、F、G、H、I、迷迭香酸、紫草酸等。药理学研究表明，丹酚酸类成分通过多种作用机制而发挥药理作用，如抑制血小板聚集、抗血栓形成、防止动脉粥样硬化斑块形成、抑制细胞内源性胆固醇合成，具有很强的抗氧化作用，可以清除自由基、减少自由基对机体的损伤、抑制脂质过氧化反应，并且影响细胞内钙离子浓度及ATP酶活性等[J.H.C.Ho，et al.，Salvianolic acids：small compounds with multiple mechanisms for cardiovascular protection，J.Biomed.Sci.，2011，18，30]。

朱大元等发现，丹参中的丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸和丹参素这些酚酸类物质具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制作用，并能降低高尿酸血症模型中小鼠的血清尿酸水平(CN200410084620.4)。

我们在前期大量筛选研究过程中发现了丹酚酸C是一个非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，其防治高尿酸血症和痛风的作用尚未见有报道[Y.Fu，et al.，Affinity selection-based two-dimensional chromatography coupled with high-performance liquidchromatography-mass spectrometry for discovering xanthine oxidase inhibitorsfrom Radix Salviae Miltiorrhizae，Anal.Bioanal.Chem.，2014，406，4987-4995.]。丹酚酸C具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性，且抑制作用明显优于丹酚酸A(燕玉婷，中国药科大学学报，2013，44，442-446)。丹酚酸C可以作为黄嘌呤氧化酶抑制剂用于防治痛风和高尿酸血症及其并发症(CN201210000772.6)。

燕玉婷等对丹酚酸C在大鼠体内的代谢过程进行了研究，运用HPLC-QTOF-MS/MS的方法从大鼠血液及尿液中检测得到五种代谢产物，并根据化合物的裂解规律对丹酚酸C在大鼠体内的药物代谢途径进行了初步推测，其结果如下图所示(燕玉婷，中国药科大学学报，2013，44，442-446)。

推测的丹酚酸C在小鼠体内的代谢途径

综上所述，丹酚酸C是一种具有2-芳基苯并呋喃环骨架结构的黄嘌呤氧化酶抑制剂。芳基苯并呋喃类化合物，分布于自然界多种高等植物中，一直以来都是研究者们所关注的热点。它是一类具有新木脂素骨架类型的化合物，且具有广泛的生物学活性，如抗病毒、抗肿瘤、抗真菌、抗氧化、免疫调节及心血管疾病等方面。综述近年来对芳基苯并呋喃类化合物的研究进展，其研究工作多集中在苯并呋喃类骨架化合物的分离鉴定、衍生物库的合成构建及构效关系的探讨、生物活性的筛选及作用机制的研究，尤其是构建苯并呋喃环新方法的发现(蒲文臣，有机化学，2011，31，155-165)。据此及前期研究结果，可以推测：丹酚酸C具有2-芳基苯并呋喃的结构骨架，而具有此骨架类型的衍生物是否是其具有较好的黄嘌呤氧化酶抑制活性的主要原因？且结构中的酚羟基基团对其活性是否具有一定的影响？其构效关系如何？而带着这些尚未得到答案的疑问，我们以2-芳基苯并呋喃环为结构基础，构建了含有此骨架结构的系列衍生物，并对合成得到的衍生物进行了分子水平和细胞水平的黄嘌呤氧化酶抑制活性和抗氧化活性的评价，为此类型化合物的构效关系研究和设计合成新型黄嘌呤氧化酶抑制剂提供了理论依据。

本发明所述的2-芳基苯并呋喃环类化合物，是在后期实验研究过程中发现的又一个系列具有2-芳基苯并呋喃环骨架结构，并具有潜在的良好黄嘌呤氧化酶抑制活性的非嘌呤类抑制剂，该类化合物的相关活性尚未见文献报道。

发明内容

本发明公开了一种2-芳基苯并呋喃环类衍生物。

本发明公开了一种2-芳基苯并呋喃环类衍生物的制备方法。

本发明公开了一种2-芳基苯并呋喃环类衍生物的抗氧化活性。

本发明公开了一种2-芳基苯并呋喃环类衍生物具备黄嘌呤氧化酶抑制活性。

本发明公开了一种2-芳基苯并呋喃环类衍生物用于制备治疗或预防痛风、和、或高尿酸血症的组合物、药物和保健品。

本发明公开的苯并呋喃环类衍生物的结构通式如式I所示：

其中，R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈各自独立为氢，羟基，卤素，硝基，未取代或经卤素、羟基、硝基、C_1-2烷氧基中选出1～3个取代基取代的C_1-4烷基，未取代或经卤素、羟基、硝基、C_1-2烷氧基中选出1～2个取代基取代的C_1-3烷氧基；

R₉为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基、C_1-3烷基、C_1-2烷氧基中选出1～3个取代基取代的C_1-4烷基，未取代或经卤素、羟基取代的3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的其他芳基(其中，所述卤素X＝F，Cl，Br，n＝1，2，3)，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧基苄基等；

本发明公开的2-芳基苯并呋喃环类衍生物如下所示

本发明公开的2-芳基苯并呋喃环类衍生物的合成方法如下：

(1)将Salvianolic acid C(1)与无机碱混合，超声溶解于混合溶剂中，加热，并不断TLC检测反应，直至原料基本反应完全。待反应完全后，运用硅胶柱色谱分离，得到反应中间体Tournefolic acid A(2)；

(2)取适量相应的醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析分离纯化得目标衍生物。

所述的第1步中的无机碱水解可选择LiOH、NaOH、KOH等，有机溶媒为THF、MeOH、H₂O或为其混合溶剂，优选为混合溶剂MeOH/H₂O，且溶剂体积比优选为3∶1～5∶1，反应时间优选为8～12h；

所述的第1步中的TLC检测条件为：展开剂为氯仿/甲醇/甲酸(10∶1∶0.1，v/v/v)，硅胶板检测和显色条件为I₂、UV(254/365nm)和5％浓硫酸-香草醛加热显色鉴定；

所述的第1步中的分离纯化方法具体为：硅胶柱层析，用氯仿/甲醇/甲酸(10∶1∶0.1，v/v/v)等度洗脱得到目标产物Tournefolic acid A(2)；

所述的第2步中的醇可以选择反应产物相应的系列醇衍生物，如脂肪醇、芳香醇、一级醇、二级醇和三级醇等；TLC检测条件为：展开剂为氯仿/甲醇/甲酸(8∶1∶0.1，v/v/v)，硅胶板检测和显色条件为I₂、UV(254/365nm)和5％浓硫酸-香草醛加热显色鉴定；

本制备方法中所得到的化合物，均通过质谱和核磁共振等光谱学方法进行结构鉴定，并利用HPLC法进行了纯度检测。

本发明的2-芳基苯并呋喃环类衍生物及其药物上可接受的成盐化产物可与药用常见辅料和载体结合，制备痛风及高尿酸血症药物的组合物，从而达到预防或治疗的效果。上述药物可根据实际的需要选择合适的剂型，如片剂、注射剂、栓剂、气雾剂、缓释制剂、纳米制剂等。

附图说明

图1化合物Tournefolic acid A与黄嘌呤氧化酶(XOD)分子对接结果

图2化合物3的¹H-NMR

图3化合物3的¹³C-NMR

图4化合物4的¹H-NMR

图5化合物4的¹³C-NMR

图6化合物5的¹H-NMR

图7化合物5的¹³C-NMR

图8化合物6的¹H-NMR

图9化合物6的¹³C-NMR

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式不限于此。

本文中使用的测定仪器：

高分辨率质谱用美国Agilent G1969 TOF/MS质谱仪；

核磁共振用瑞士Bruker AV-300核磁共振仪；

反应试剂均购自Sigma-Aldrich或Aladdin试剂公司，试剂均为分析纯或化学纯，氘代试剂购自美国剑桥CIL试剂公司。

实施例1

1. 2-芳基苯并呋喃类衍生物2的合成

Tournefolic acid A(TAA)(2)

准确称取Salvianolic acid C(1)(1equiv)于50mL二颈圆底瓶中，加入MeOH/H₂O4mL(5∶1v/v)，超声至样品完全溶解，加入准确称取适量的无机碱(NaOH或KOH)，加热条件下不断TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1v/v/v)检测反应，直至原料完全消失。待反应完全后，放置至室温，蒸干溶剂MeOH，加入15mL蒸馏水稀释，冰水浴冷却下，逐滴滴加10％HCl水溶液并不断搅拌，至pH 3～4，停止滴加。加入乙酸乙酯(20mL×4)萃取，合并有机层，饱和NaCl溶液洗涤，MgSO₄干燥，减压浓缩，得反应产物粗品。经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸10∶1∶0.1v/v/v)，得目标产物Tournefolic acid A(2)(yield 89％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.42氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.92(d，1H，J＝15.9Hz)，7.41-7.29(m，3H)，7.18(s，1H)，6.88(d，1H，J＝8.1Hz)，6.73(d，1H，J＝8.1Hz)，6.43(d，1H，J＝15.9Hz)；¹³CNMR(CD₃OD，75MHz)δ171.3，159.3，148.0，146.7，145.7，144.6，144.3，132.5，126.1，123.4，119.7，118.7，116.7，116.0，113.3，111.7，99.2.HR-MS(ESI)m/z：found 311.0563[M-H]^-，calcd.for C₁₇H₁₂O₆311.0561.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物Tournefolic acid A(2)的化学式为C₁₇H₁₂O₆，其结构如下式：

实施例2

2. 2-芳基苯并呋喃类衍生物3的合成

Methyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(3)

取适量甲醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸12∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标衍生物3(yield 92％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.53氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.90(d，1H，J＝15.9Hz)，7.43-7.27(m，3H)，7.17(s，1H)，6.86(d，1H，J＝8.1Hz)，6.71(d，1H，J＝8.1Hz)，6.42(d，1H，J＝15.9Hz)，3.79(s，3H)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ170.1，159.3，148.0，146.7，145.9，144.5，144.5，132.6，126.1，123.4，119.6，118.7，116.7，115.3，113.4，111.7，99.2，52.0.HR-MS(ESI)m/z：found325.0790[M-H]^-，calcd.for C₁₈H₁₄O₆325.0795.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物3的化学式为C₁₈H₁₄O₆，其结构如下式：

实施例3

3. 2-芳基苯并呋喃类衍生物4的合成

Ethyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(4)

取适量乙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸12∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标衍生物4(yield 81％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.57氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.90(d，1H，J＝15.9Hz)，7.41-7.27(m，3H)，7.18(s，1H)，6.86(d，1H，J＝8.1Hz)，6.71(d，1H，J＝8.1Hz)，6.43(d，1H，J＝15.9Hz)，4.25(q，2H，J＝6.9Hz)，1.33(t，3H，J＝6.9Hz)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ169.6，159.4，148.0，146.7，145.8，144.3，144.3，132.4，126.1，123.4，119.7，118.7，116.7，115.7，113.4，111.7，99.2，61.5，14.6.HR-MS(ESI)m/z：found339.0947[M-H]^-，calcd.forC₁₉H₁₆O₆339.0942.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物4的化学式为C₁₉H₁₆O₆，其结构如下式：

实施例4

4. 2-芳基苯并呋喃类衍生物5的合成

Propyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(5)

取适量丙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析梯度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸15∶1∶0.1-7∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标衍生物5(yield 83％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.61氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.92(d，1H，J＝15.9Hz)，7.40-7.30(m，3H)，7.19(s，1H)，6.88(d，1H，J＝8.1Hz)，6.73(d，1H，J＝8.1Hz)，6.45(d，1H，J＝15.9Hz)，4.17(t，2H，J＝6.9Hz)，1.75(m，2H)，1.02(t，3H，J＝6.9Hz)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ169.7，159.4，148.0，146.8，145.8，144.3，144.3，132.5，126.2，123.4，119.7，118.7，116.8，115.7，113.4，111.8，99.2，67.2，23.2，10.7.HR-MS(ESI)m/z：found 353.1107[M-H]^-，calcd.for C₂₀H₁₈O₆353.1112.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物5的化学式为C₂₀H₁₈O₆，其结构如下式：

实施例5

5. 2-芳基苯并呋喃类衍生物6的合成

lsopropyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(6)

取适量异丙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸15∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标衍生物6(yield 85％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.63氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.90(d，1H，J＝15.9Hz)，7.41-7.29(m，3H)，7.20(s，1H)，6.88(d，1H，J＝8.1Hz)，6.73(d，1H，J＝8.1Hz)，6.43(d，1H，J＝15.9Hz)，5.12(m，1H)，1.33(d，6H，J＝6.3Hz)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ169.2，159.4，148.0，146.7，145.8，144.1，144.1，132.5，126.2，123.4，119.7，118.7，116.8，116.2，113.4，111.7，99.2，69.0，22.2.HR-MS(ESI)m/z：found 353.1083[M-H]^-，calcd.for C₂₀H₁₈O₆353.1090.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物6的化学式为C₂₀H₁₈O₆，其结构如下式：

实施例6

6. 2-芳基苯并呋喃类衍生物7的合成

2-chloroethyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(7)

取适量2-氯乙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸10∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标衍生物7(yield 73％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.61氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.96(d，1H，J＝15.9Hz)，7.43-7.30(m，3H)，7.21(s，1H)，6.92(d，1H，J＝8.1Hz)，6.75(d，1H，J＝8.1Hz)，6.48(d，1H，J＝15.9Hz)，4.42(t，2H，J＝6.9Hz)，3.94(t，2H，J＝6.9Hz)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ168.2，160.3，150.7，147.9，146.2，145.4，144.9，133.1，127.6，124.7，120.6，119.2，117.4，11S.7，113.6，111.5，99.8，69.6，42.3.HR-MS(ESI)m/z：found374.1101[M-H]^-，calcd.forC₁₉H₁₅ClO₆374.1105.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物7的化学式为C₁₉H₁₅ClO₆，其结构如下式：

实施例7

7. 2-芳基苯并呋喃类衍生物8的合成

Cyclopropyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(8)

取适量环丙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析梯度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸15∶1∶0.1-7∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标化合物8(yield 78％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.54氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.90(d，1H，J＝15.9Hz)，7.44-7.32(m，3H)，7.17(s，1H)，6.85(d，1H，J＝8.1Hz)，6.70(d，1H，J＝8.1Hz)，6.41(d，1H，J＝15.9Hz)，3.27(m，1H)，0.58(m，2H)，0.35(m，2H)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ166.7，158.2，149.0，147.7，146.5，145.2，144.1，131.6，127.5，124.2，120.9，119.3，117.4，115.7，114.2，112.2，100.6，45.2，5.7，5.7.HR-MS(ESI)m/z：found 352.0947[M-H]^-，calcd.forC₂₀H₁₆O₆352.0953.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物8的化学式为C₂₀H₁₆O₆，其结构如下式：

实施例8

8. 2-芳基苯并呋喃类衍生物9的合成

(E)-2-((3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acryloyl)oxy)propanoic acid(9)

取适量2-羟基丙酸置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶0.1，v/v/v)分离纯化得目标化合物9(yield 70％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.63氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.91(d，1H，J＝15.9Hz)，7.39-7.29(m，3H)，7.16(s，1H)，6.79(d，1H，J＝8.1Hz)，6.68(d，1H，J＝8.1Hz)，6.40(d，1H，J＝15.9Hz)，5.61(q，1H，J＝6.9Hz)，1.45(d，6H，J＝6.9Hz)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ173.4，167.5，159.1，149.7，147.6，145.2，144.1，143.7，131.7，127.9，124.6，120.5，119.3，115.6，114.4，113.7，110.7，99.9，72.2，17.8.HR-MS(ESI)m/z：found384.0845[M-H]^-，calcd.forC₂₀H₁₆O₈384.0849.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物9的化学式为C₂₀H₁₆O₈，其结构如下式：

实施例9

9. 2-芳基苯并呋喃类衍生物10的合成

Allyl(E)-3-(2-(3，4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl)acrylate(10)

取适量烯丙醇置于冰水浴下冷却15min，缓慢滴加2eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)(1eq)，放置于室温，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8∶1∶1，v/v/v)不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析分离等度洗脱(氯仿/甲醇/甲酸12∶1∶0.1，v/v/v)纯化得目标化合物10(yield 76％)。

对以上步骤中得到的反应产物进行结构解析。

理化性质：深黄色粉末(TLC R_f＝0.57氯仿/甲醇4∶1)。

波谱信息：¹H NMR(CD₃OD，300MHz)δ7.93(d，1H，J＝15.9Hz)，7.40-7.27(m，3H)，7.16(s，1H)，6.85(d，1H，J＝8.1Hz)，6.74(d，1H，J＝8.1Hz)，6.41(d，1H，J＝15.9Hz)，6.05(m，1H)，5.32(d，2H，J＝10.2Hz)，4.78(d，2H)；¹³C NMR(CD₃OD，75MHz)δ167.8，159.8，148.5，146.9，145.1，144.2，143.4，132.5，132.0，126.8，122.4，120.3，119.2，118.6，117.5，116.0，112.6，111.4，100.7，65.1.HR-MS(ESI)m/z：found 352.0974[M-H]^-，calcd.forC₂₀H₁₆O₆352.0981.

根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物10的化学式为C₂₀H₁₆O₆，其结构如下式：

实施例10

采用体外酶学实验测定2-芳基苯并呋喃类衍生物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性

10. 1试剂与标准溶液的配制

(1)75mM磷酸缓冲液(PB，pH 7.4)：含KH₂PO₄0.0956g，K₂HPO₄0.6946g，EDTA1.862mg，用超纯水稀释至50mL。每次实验前新鲜配制，用于溶解稀释样品和其它试剂；

(2)XOD溶液：取25U/2.6mL的XOD，用75mM的PB溶液稀释至0.08U/mL的XOD工作液，用移液器吹匀，置于冰上保存，待用；

(3)底物配制：精密称取适量黄嘌呤(XA)加入0.1N NaOH溶液5mL中，超声溶解，后者中加入75mM PB溶液95mL，配制成终浓度为0.48mM的底物母液，涡旋混匀1min，每次实验前新鲜配制；

(4)供试药物配制：精密称取受试药物适量，用DMSO溶解配制为10mM的储备液，于-20℃避光保存。实验前用PB稀释至不同浓度(0～30mM)，DMSO含量小于0.1％。

10. 2实验步骤

(1)在96孔板上加入不同浓度的待测样品溶液100μL，再加入0.08U/mL XOD 50μL，并以相同体积的PB作为空白对照，以已知的黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇(Allopurinol)作为阳性对照，在酶标仪上37℃孵育3min，每组平行设置4个复孔。

(2)加入底物0.48mM XA 50μL启动反应，在波长295nm处每隔15s读数一次，记录吸光值，共计7min。数据处理：使用Excel分析处理数据，并用GraphPad Prism 6.0.2计算得到半数抑制浓度(IC₅₀)。

(3)测定结果如表1所示，通过反应得到的2-芳基苯并呋喃环类衍生物2～10整体上均具有较为显著地黄嘌呤氧化酶抑制活性，其中部分衍生物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性接近于别嘌呤醇的抑制活性。同时，结合前期研究结果，当其结构中的呋喃环被开环(如异丹酚酸C)或双键被饱和(如丹酚酸A)都将导致其活性的降低或丧失，可知2-芳基苯并呋喃环的骨架结构对此类衍生物具有较好的黄嘌呤氧化酶抑制活性有着重要作用。

表1 2-芳基苯并呋喃环类衍生物的黄嘌呤氧化酶抑制活性评价

^aIC₅₀值均为四次平行实验结果；

实施例11

采用DPPH自由基清除实验评价合成得到的2-芳基苯并呋喃环类衍生物的抗氧化活性

11. 1试剂与标准溶液的配制

(1)DPPH溶液的配制：精密称取适量DPPH，加入MeOH溶液中，超声溶解，配制为10mM的储备液，于-20℃避光保存。实验前用MeOH稀释至0.1mM，每次实验前新鲜配制，并注意避光保存；

(2)供试药物的配制：精密称取受试药物适量，用MeOH溶解配制为10mM的储备液，于-20℃避光保存。实验前用MeOH稀释至不同浓度(0～50mM)，待用。

11. 2实验步骤

(1)在96孔板上加入不同浓度的待测样品溶液100μL，再加入0.1mM DPPH溶液100μL，并以相同体积的MeOH作为空白对照，以已报道的活性化合物槲皮素(Quercetin)作为阳性对照，在酶标仪上37℃摇晃混匀1min后，暗处放置30min，每组平行设置3个复孔。

(2)在波长517nm处用酶标仪记录其吸光值，数据处理：使用Excel分析处理数据，并用GraphPad Prism 6.0.2计算得到半数抑制浓度(IC₅₀)。

(3)测定结果如表2所示，合成得到的2-芳基苯并呋喃类衍生物整体上均具有较强的DPPH自由基清除活性，具有较明显的抗氧化作用，且由其结构可推测2-芳基苯并呋喃环上邻酚羟基的取代对其具有较显著的清除自由基的能力有着重要影响。

表2 2-芳基苯并呋喃环类衍生物的抗氧化活性评价

^aIC₅₀值均为三次平行实验结果；

^b文献报道IC₅₀＝9.1μM；

实施例12

采用细胞模型评价反应得到的2-芳基苯并呋喃环类衍生物对尿酸生成的影响

(1)供试药物配制：精密称取受试药物适量，用DMSO配制为10mM的样品储备液，并于4℃保存备用。

(2)实验步骤：正常肝细胞LO2接种于6孔板中培养(铺板密度1×10⁶个/mL)，铺板4h后，进行细胞实验。实验分为空白组、模型组和给药组，其中模型组和给药组分别加入造模剂黄嘌呤(以DMSO配制为储备液待用)，空白组加入相同体积DMSO，并以非布索坦(Febuxostat)作为阳性对照。阳性对照药非布索坦取其浓度为5μM，受试药物用培养基稀释至所需浓度(10μM，30μM，50μM)后，加入6孔板中，37℃度孵育15min后，模型组、给药组分别加入终浓度为10μM的黄嘌呤，每组分别设两个复孔，置于细胞培养箱中培养24h后，收集培养基100μL进行LC-MS分析。

(3)质谱分析前处理：取100μL收集的培养基，加入MeOH 400μL、CHCl₃100μL和H₂O300μL，涡旋混匀，4℃，20,000g离心10min，取上层清液真空减压浓缩干燥。加入100μL H₂O复溶样品，并加入内标加兰他敏(1.25μM)10μL(终浓度为0.125μM)，4℃，13,000rpm离心10min，取上层清液进行LC-MS(Agilent 1100 series)分析。

(4)测定结果如表3所示，合成得到的2-芳基苯并呋喃环化合物Tournefolic acidA对肝细胞模型中的尿酸生成有较为明显的抑制作用，并呈现出一定的浓度依赖性。

表3 2-芳基苯并呋喃环类化合物对肝细胞模型中尿酸生成影响的评价

实施例13

采用分子对接(Molecular docking)的方法初步推测2-芳基苯并呋喃环化合物Tournefolic acid A(2)与黄嘌呤氧化酶(XOD)的相互作用方式

为了初步阐明合成得到的系列芳基苯并呋喃类衍生物与黄嘌呤氧化酶可能存在的结合模式及相互作用位点，这里，我们选择代表性化合物Tournefolic acid A(2)，采用分子对接的方法初步探讨其与黄嘌呤氧化酶作用方式的分析。黄嘌呤氧化酶(PDB code：1FIQ)由A、B、C三条亚基构成，其中包含有三个活性结构域，分别为A链中的Fe/S中心结构域，B链中的FAD结构域和C链中的钼蝶呤(Mo-pt)结构域。在对接实验中，用已知作用于黄嘌呤氧化酶可用于治疗痛风及高尿酸血症的临床药物非布索坦(Febuxostat)作为对照。分析分子对接结果，我们根据其结合自由能(binding free energy)确定，认为化合物与黄嘌呤氧化酶结合自由能最低的对接构象为其优势构象，并对其作进一步分析。分子对接结果如图1，化合物2及Febuxostat的结合自由能分别为-7.32和-8.19。由图1可以看出，化合物2分别与氨基酸残基LYS256、Val259和GLY260形成了三个氢键。其中，Febuxostat也与氨基酸残基LYS256形成一个氢键的相互作用。化合物2及Febuxostat与多个相同的关键氨基酸残基发生着相互作用，如ALA255、LYS256、Leu257和Val259，表明化合物2可能与阳性药Febuxostat相类似，作用于黄嘌呤氧化酶相同的结合口袋而发挥着对酶的抑制效应。同时也可以看出，氢键的形成和疏水性相互作用等作用力的存在对于维系蛋白受体-配体复合物构象的稳定发挥着重要作用。

实施例14

苯并呋喃化合物Tournefolic acid A(TAA)(2)制剂的制备

(1)本发明的苯并呋喃化合物TAA的片剂：

衍生物TAA 2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g

制备工艺：取本发明的衍生物TAA过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。

(2)本发明的苯并呋喃化合物TAA的胶囊

衍生物TAA 2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g

制备工艺：取本发明的衍生物TAA过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。

(3)本发明的苯并呋喃化合物TAA的软胶囊

衍生物TAA 10mg，大豆卵磷脂100g

制备工艺：取本发明的衍生物TAA，加大豆软磷脂，胶体磨混匀，抽真空，压制，即得软胶囊。

(4)本发明的苯并呋喃化合物TAA的冻干粉：

衍生物TAA 2g，亚硫酸钠4g，乙醇50mL，加水定容至1000mL；

制备工艺：取本发明的衍生物TAA分散在乙醇中，亚硫酸钠溶于水中，在超声或搅拌条件下将拿硫酸钠溶液逐渐加入，使成澄清透明溶液；补加水定容至足量；经0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥得到。

上述实施例为本发明具有代表性的实施方案的举例说明，仅仅是示例性的说明，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种苯并呋喃环类衍生物，结构通式如式I所示：

其中，R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈各自独立为氢，羟基，卤素，硝基，未取代或经卤素、羟基、硝基、C_1-2烷氧基中选出1～3个取代基取代的C_1-4烷基，未取代或经卤素、羟基、硝基、C_1-2烷氧基中选出1～2个取代基取代的C_1-3烷氧基；

R₉为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基、C_1-3烷基、C_1-2烷氧基中选出1～3个取代基取代的C_1-4烷基，未取代或经卤素、羟基取代的3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基、C_1-2烷氧基取代的其他芳基，其中，所述卤素X＝F，Cl，Br，n＝1，2，3。

2.一种苯并呋喃环类衍生物，结构通式为如下任意一项

3.根据权利要求1-2的一种苯并呋喃环类衍生物，合成方法如下：

(1)将Salvianolic acid C(1)与无机碱混合，超声溶解于混合溶剂中，加热，并不断TLC检测反应，直至原料基本反应完全；待反应完全后，运用硅胶柱色谱分离，得到反应中间体Tournefolic acid A(2)；

(2)取适量相应的醇置于冰水浴下冷却15 min，缓慢滴加2 eq SOCl₂，冷却反应30min，再加入化合物Tournefolic acid A(2)，1 eq，放置于室温，并TLC不断监测反应，直到原料点基本消失。减压浓缩反应产物，产物粗品经硅胶柱层析分离纯化得目标衍生物；

所述的第1步中的无机碱水解可选择LiOH、NaOH、KOH等，有机溶媒为THF、MeOH、H₂O或为其混合溶剂，优选为混合溶剂MeOH/H₂O，且溶剂体积比优选为3∶1～5∶1，反应时间优选为8～12h；

所述的第1步中的TLC检测条件为：展开剂为氯仿/甲醇/甲酸10∶1∶0.1，v/v/v，硅胶板检测和显色条件为I₂、UV 254/365nm和5％浓硫酸-香草醛加热显色鉴定；

所述的第1步中的分离纯化方法具体为：硅胶柱层析，用氯仿/甲醇/甲酸10∶1∶0.1，v/v/v等度洗脱得到目标产物Tournefolic acid A (2)；

所述的第2步中的醇可以选择反应产物相应的系列醇衍生物，如脂肪醇、芳香醇、一级醇、二级醇和三级醇等；TLC检测条件为：展开剂为氯仿/甲醇4∶1，v/v，硅胶板检测和显色条件为I₂、UV254/365nm和5％浓硫酸-香草醛加热显色鉴定；

所得到的化合物，均通过质谱和核磁共振等光谱学方法进行结构鉴定，并利用HPLC法进行了纯度检测。

4.根据权利要求1-2的一种苯并呋喃环类衍生物，其特征在于：

苯并呋喃环类衍生物及药物上可接受的成盐化产物可与药用常见辅料和载体结合，制备痛风及高尿酸血症药物的组合物。

5.根据权利要求1-2的一种苯并呋喃环类衍生物，其特征在于：

制成，如片剂、注射剂、栓剂、气雾剂、缓释制剂、纳米制剂。

6.根据权利要求1-2的一种苯并呋喃环类衍生物，其特征在于：

其用于制备清除自由基的组合物、药物、保健品上的应用。

7.根据权利要求1-2的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：其用于制备黄嘌呤氧化酶抑制剂的组合物、药物、保健品上的应用。

8.根据权利要求1-2的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：其用于制备治疗痛风及高尿酸血症的组合物、药物、保健品上的应用。