CN105372424A - 肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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CN105372424A CN201510769634.8A CN201510769634A CN105372424A CN 105372424 A CN105372424 A CN 105372424A CN 201510769634 A CN201510769634 A CN 201510769634A CN 105372424 A CN105372424 A CN 105372424A
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Abstract

本发明公开了一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法，该肝促凝血活酶试验测定试剂盒通过含有多种有效成分的缓冲液体系a与缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆、缓冲体系b和兔脑粉、组织因子酯化物的结合，加强了试剂的稳定性，进一步得到准确性高、重复性强及效果好的肝促凝血活酶试验测定试剂。

Description

肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种体外诊断试剂盒及其制备方法，尤其涉及一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
肝功能异常是指，当肝脏受到某些致病因素的损害，可以引起肝脏形态结构的破坏和肝功能的代谢异常。如果损害比较严重而且广泛(一次或长期反复损害)，引起明显的物质代谢障碍、解毒功能降低、胆汁的形成和排泄障碍及出血倾向等肝功能异常改变，称为肝功能不正常。
由于肝脏功能多样，所以肝功能检查方法很多。与肝功能有关蛋白质检查有血清总蛋白、白蛋白与球蛋白之比、血清浊度和絮状试验及甲胎蛋白检查等；与肝病有关的血清酶类有谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶及乳酸脱氢酶等；与生物转化及排泄有关的试验有磺溴酞钠滞留试验等；与胆色素代谢有关的试验，如胆红素定量及尿三胆试验等。通过化验血液来对这些检查项目做出准确的检测。肝促凝血活酶试验(HPT)是检查肝脏储备功能的方法之一，其能较正确地反映血浆因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ的活性变化，对急性肝功能衰竭的早期诊断和慢性肝病肝脏损害程度的判断极为有用。
现有HPT测定的试剂由兔脑组织凝血活酶、牛吸附血浆、钙离子、磷脂等适量配制而成。由于硫酸钡吸附牛血浆中缺乏Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ因子，加入检测的人血浆后方能发生凝血，因此可以通过凝血时间的长短得知待测血浆中Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ因子的情况，即HPT活动值。但是由于实验室使用HPT试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成检测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。同时，现有的HPT试剂存在稳定性和重复性差、保存时间短的问题，因此研制一种安全、可靠、准确、稳定，保存时间长的HPT试剂，对临床诊断疾病来说是十分必要的。
发明内容
为了克服上述现有背景技术中的不足，本发明提供一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法，该肝促凝血活酶试验测定试剂盒
通过含有多种有效成分的缓冲液体系与缺因子血浆、兔脑粉和组织因子酯化物的结合，加强了试剂的稳定性，进一步得到准确性、重复性及稳定性等总体性能更好的肝促凝血活酶试验测定试剂。
为了实现上述目的，本发明提供一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中；
所述硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆按照1:1～9的体积比混合而成，所述兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在所述缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成；
所述缓冲液体系a中各组分的含量为：0.01～0.3wt％的缓冲剂、1～5wt％的甘氨酸、0.01～0.2wt％的稳定剂a、其余为水，所述缓冲剂选自于：MPOS、HEPES、TRICINE、TAPSO、PBS，所述稳定剂a选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，所述缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源选自于：牛血浆、猪血浆、兔血浆、羊血浆；
所述缓冲液体系b中各组分的含量为：0.1～0.6wt％的TAPSO、1～5wt％的甘氨酸、0.4～1.0wt％的聚乙二醇6000、0.4～1.0wt％的硫酸钠、8～20mM的氯化钙、0.01～0.2wt％的稳定剂b、0.01～0.2wt％的Brij-35、其余为水，所述缓冲液体系b的pH值为5.0～7.0，所述稳定剂b选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，所述兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的4～8wt％，所述组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.1～0.5wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述缓冲剂在缓冲液体系a中的含量为0.1～0.2wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述甘氨酸在缓冲液体系a中的含量为2～4wt％，所述甘氨酸在缓冲液体系b中的含量为2～4wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述稳定剂a在缓冲液体系a中的含量为0.08～0.15wt％，所述稳定剂b在缓冲液体系b中的含量为0.05～0.15wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源为牛血浆和羊血浆体积比为1:3的混合物。
优选地，在上述技术方案中，所述TAPSO在缓冲液体系b中的含量为0.3～0.5wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述所述聚乙二醇6000在缓冲液体系b中的含量为0.45～0.85wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述硫酸钠在缓冲液体系b中的含量为0.5～0.7wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述所述氯化钙在缓冲液体系b中的含量为10～16mM。
优选地，在上述技术方案中，所述Brij-35在缓冲液体系b中的含量为0.03～0.05wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的5～6.7wt％。
优选地，在上述技术方案中，所述组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.15～0.35wt％。
本发明还提供制备肝促凝血活酶试验测定试剂盒的方法，包括如下步骤：(1)确定缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源后，称量硫酸钡加入选取的血浆中，搅拌混匀后温浴，温浴后离心取上清即为缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆；(2)配制缓冲液体系a，将缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆与缓冲液体系a以体积比为9:1的比例混合，搅拌混匀，分装冻干后即得硫酸钡吸附血浆；(3)配制缓冲液体系b，温浴，称量兔脑粉加入温浴后的缓冲液体系b中，搅拌混匀后离心取上清，在上清中加入组织因子酯化物，充分混匀后经过分装冻干，即得兔脑粉提取物试剂；(4)将硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂分别包装后得到肝促凝血活酶试验测定试剂盒。
本发明的有益效果：提供一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法，该肝促凝血活酶试验测定试剂盒通过含有多种有效成分的缓冲液体系a与缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆、缓冲体系b和兔脑粉、组织因子酯化物的结合，加强了试剂的稳定性，进一步得到准确性高、重复性强及稳定性好的肝促凝血活酶试验测定试剂。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
本发明的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中；
硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆按照1:1～9的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成；
缓冲液体系a中各组分的含量为：0.01～0.3wt％的缓冲剂、1～5wt％的甘氨酸、0.01～0.2wt％的稳定剂a、其余为水，缓冲剂选自于：MPOS、HEPES、TRICINE、TAPSO、PBS，稳定剂a选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源选自于：牛血浆、猪血浆、兔血浆、羊血浆；
缓冲液体系b中各组分的含量为：0.1～0.6wt％的TAPSO、1～5wt％的甘氨酸、0.4～1.0wt％的聚乙二醇6000、0.4～1.0wt％的硫酸钠、8～20mM的氯化钙、0.01～0.2wt％的稳定剂b、0.01～0.2wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为5.0～7.0，所述稳定剂b选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的4～8wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.1～0.5wt％；使用本发明试剂盒时，处理后的待测血浆、硫酸钡吸附血浆用量及兔脑粉提取物试剂用量的体积比为1:0.9～1.1:2～2.2。
制备肝促凝血活酶试验测定试剂盒的方法，包括如下步骤：(1)确定缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源后，称量硫酸钡加入选取的血浆中，搅拌混匀后温浴，温浴后离心取上清即为缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆；(2)配制缓冲液体系a，将缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆与缓冲液体系a以体积比为1～9:1的比例混合，搅拌混匀，分装冻干后即得硫酸钡吸附血浆；(3)配制缓冲液体系b，温浴，称量兔脑粉加入温浴后的缓冲液体系b中，搅拌混匀后离心取上清，在上清中加入组织因子酯化物，充分混匀后经过分装冻干，即得兔脑粉提取物试剂；(4)将硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂分别包装后得到肝促凝血活酶试验测定试剂盒。
实施例1
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的牛血浆按照1:1的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.08wt％的MPOS、4.5wt％的甘氨酸、0.05wt％的Kathon、其余为水，兔脑粉的含量为7.6wt％，组织因子酯化物的含量为0.12wt％，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.53wt％的TAPSO、1.7wt％的甘氨酸、0.92wt％的聚乙二醇6000、0.43wt％的硫酸钠、17mM的氯化钙、0.03wt％的叠氮钠、0.15wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为5.8，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的7.6wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.12wt％。
制备肝促凝血活酶试验测定试剂盒的方法，步骤同前述。
应用本实施例得到的试剂盒借助血凝仪测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法为：取待测血浆，加入0.109mmol/L枸橼酸钠抗凝，再用生理盐水稀释抗凝后的待测血浆，取稀释后的抗凝待测血浆与硫酸钡吸附血浆等体积混合，搅拌混匀后置于37℃水浴温浴3min，再加入已预温至37℃的兔脑粉提取物试剂，兔脑粉提取物试剂的用量与稀释后的抗凝待测血浆的体积比为2:1，混合后立即混匀计时，记录凝血酶原时间。做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例2
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆按照1:9的体积比混合而成，该缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆为牛血浆和羊血浆体积比为1:3的混合物，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成；缓冲液体系a中各组分的含量为：0.1wt％的TAPSO、4wt％的甘氨酸、0.08wt％的叠氮钠、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.5wt％的TAPSO、2wt％的甘氨酸、0.85wt％的聚乙二醇6000、0.5wt％的硫酸钠、16mM的氯化钙、0.05wt％的Kathon、0.05wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为6.5，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的6.7wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.15wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例3
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的猪血浆按照1:4的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.01wt％的HEPES、5wt％的甘氨酸、0.01wt％的牛血清白蛋白、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.6wt％的TAPSO、1.0wt％的甘氨酸、1.0wt％的聚乙二醇6000、0.4wt％的硫酸钠、20mM的氯化钙、0.01wt％的Proclin、0.2wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为6.0，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的8wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.1wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例4
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的羊血浆按照1:8的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.26wt％的TRICINE、1.3wt％的甘氨酸、0.17wt％的氯仿、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.16wt％的TAPSO、4.2wt％的甘氨酸、0.43wt％的聚乙二醇6000、0.9wt％的硫酸钠、9mM的氯化钙、0.17wt％的氯仿、0.02wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为6.8，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的4.5wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.4wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例5
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的羊血浆按照1:5的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.2wt％的PBS、2wt％的甘氨酸、0.15wt％的Kathon、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.3wt％的TAPSO、4wt％的甘氨酸、0.45wt％的聚乙二醇6000、0.7wt％的硫酸钠、10mM的氯化钙、0.15wt％的石炭酸、0.03wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为6.0，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的5wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.35wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例6
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的牛血浆按照1:2的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.3wt％的MPOS、1.0wt％的甘氨酸、0.2wt％的牛血清白蛋白、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.1wt％的TAPSO、5wt％的甘氨酸、0.4wt％的聚乙二醇6000、1.0wt％的硫酸钠、8mM的氯化钙、0.2wt％的Kathon、0.01wt％的Brij-35、其余为水、缓冲液体系b的pH值为5.0，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的4wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.5wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实施例7
肝促凝血活酶试验测定试剂盒，包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中，硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的羊血浆按照1:9的体积比混合而成，兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成，缓冲液体系a中各组分的含量为：0.15wt％的HEPES、3wt％的甘氨酸、0.1wt％的Proclin、其余为水，缓冲液体系b中各组分的含量为：0.4wt％的TAPSO、3.5wt％的甘氨酸、0.6wt％的聚乙二醇6000、0.55wt％的硫酸钠、12mM的氯化钙、0.13wt％的硫柳汞、0.045wt％的Brij-35、其余为水，缓冲液体系b的pH值为7.0，兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的6.5wt％，组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.25wt％。
肝促凝血活酶试验测定试剂盒制备方法同前述。
应用本实施例得到的试剂盒在血凝仪上测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法同实施例1，做十次平行实验，记录数据，分析本实施例试剂的重复性，本实施例中试剂重复性如表1。
实验例
实验例1
应用实施例1～5得到的试剂盒借助血凝仪测定待测血浆的凝血酶原时间，测定方法为：取待测血浆，加入0.109mmol/L枸橼酸钠抗凝，再用生理盐水稀释抗凝后的待测血浆，取稀释后的抗凝待测血浆与硫酸钡吸附血浆等体积混合，搅拌混匀后置于37℃水浴温浴3min，再加入已预温至37℃的兔脑粉提取物试剂，兔脑粉提取物试剂的用量与稀释后的抗凝待测血浆的体积比为2:1，混合后立即混匀计时，记录凝血酶原时间。做十次平行实验，记录数据。用现有试剂测定同样的血浆样本，记录下凝血酶原时间，本发明试剂与现有试剂重复性比较结果如表1。
表1：实施例1～5中试剂的重复性
表1表明，本发明试剂与现有试剂相比，变异系数(CV)值较小，重复性好
实验例2
本发明试剂与现有试剂稳定性比较结果如表2。
表2：本发明试剂与市售试剂稳定性比较
试剂 1天 4天 6天 11天 13天
本发明试剂 25.3 25.4 25.3 25.8 26.3
现有试剂 26.3 26.2 27.5 28.1 29.2
表2表明，本发明试剂的凝血酶原时间值在13天内均无明显变化，而现有试剂的凝血酶原时间值从第6天就发生了变化，且随着天数的增加，其凝血酶原时间值呈明显变大的趋势，说明本发明试剂的稳定性较好。

Claims (13)

1.一种肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：包含硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂，两种试剂储存在不同的容器中；
所述硫酸钡吸附血浆由缓冲液体系a和缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆按照1:1～9的体积比混合而成，所述兔脑粉提取物试剂由缓冲液体系b和溶解在所述缓冲液体系b中的兔脑粉、组织因子酯化物组成；
所述缓冲液体系a中各组分的含量为：0.01～0.3wt％的缓冲剂、1～5wt％的甘氨酸、0.01～0.2wt％的稳定剂a、其余为水，所述缓冲剂选自于：MPOS、HEPES、TRICINE、TAPSO、PBS，所述稳定剂a选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，所述缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的来源选自于：牛血浆、猪血浆、兔血浆、羊血浆；
所述缓冲液体系b中各组分的含量为：0.1～0.6wt％的TAPSO、1～5wt％的甘氨酸、0.4～1.0wt％的聚乙二醇6000、0.4～1.0wt％的硫酸钠、8～20mM的氯化钙、0.01～0.2wt％的稳定剂b、0.01～0.2wt％的Brij-35、其余为水，所述缓冲液体系b的pH值为5.0～7.0，所述稳定剂b选自于：叠氮钠、Kathon、Proclin、牛血清白蛋白、硫柳汞、硝酸汞苯、氯仿、石炭酸，所述兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的4～8wt％，所述组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.1～0.5wt％。
2.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述缓冲剂在缓冲液体系a中的含量为0.1～0.2wt％。
3.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述甘氨酸在缓冲液体系a中的含量为2～4wt％，所述甘氨酸在缓冲液体系b中的含量为2～4wt％。
4.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述稳定剂a在缓冲液体系a中的含量为0.08～0.15wt％，所述稳定剂b在缓冲液体系b中的含量为0.05～0.15wt％。
5.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：，所述缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源为牛血浆和羊血浆体积比为1:3的混合物。
6.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述TAPSO在缓冲液体系b中的含量为0.3～0.5wt％。
7.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述聚乙二醇6000在缓冲液体系b中的含量为0.45～0.85wt％。
8.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述硫酸钠在缓冲液体系b中的含量为0.5～0.7wt％。
9.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述氯化钙在缓冲液体系b中的含量为10～16mM。
10.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述Brij-35在缓冲液体系b中的含量为0.03～0.05wt％。
11.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述兔脑粉在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的5～6.7wt％。
12.根据权利要求1所述的肝促凝血活酶试验测定试剂盒，其特征在于：所述组织因子酯化物在缓冲液体系b中的用量占缓冲液体系b重量的0.15～0.35wt％。
13.制备如权利要求1所述肝促凝血活酶试验测定试剂盒的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)确定缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆的血浆来源后，称量硫酸钡加入选取的血浆中，搅拌混匀后温浴，温浴后离心取上清即为缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆；(2)配制缓冲液体系a，将缺凝血因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅹ、Ⅸ的血浆与缓冲液体系a以体积比为1～9:1的比例混合，搅拌混匀，分装冻干后即得硫酸钡吸附血浆；(3)配制缓冲液体系b，温浴，称量兔脑粉加入温浴后的缓冲液体系b中，搅拌混匀后离心取上清，在上清中加入组织因子酯化物，充分混匀后经过分装冻干，即得兔脑粉提取物试剂；(4)将硫酸钡吸附血浆和兔脑粉提取物试剂分别包装后得到肝促凝血活酶试验测定试剂盒。
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