CN105349624B - 一种遗传性耳聋基因检测试剂盒 - Google Patents

一种遗传性耳聋基因检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种遗传性耳聋基因分型检测试剂盒，包括PCR反应液A，检测遗传性耳聋基因235delC、299—300delAT、176del16及内参HBB，PCR反应液B，检测遗传性耳聋基因35delG、IVS7‑2A>G、2186A>G及内参HBB，PCR反应液C，检测遗传性耳聋基因A1555G、C1494、538C>T及内参HBB，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照。本发明利用不同荧光标记的探针，采用同一样本进行4管PCR扩增的方法，能同时检测235delC、299—300delAT、176del16、35delG、IVS72A>G、2186A>G、A1555G、C1494、538C>T和人β‑globin，并确定其型别，与现有检测试剂盒相比，具有以下优势：具有更高的特异性和灵敏度；封闭检测，无需PCR后反应，避免交叉污染和环境污染；可实现一管PCR反应检测多种型别，更简便和快速；分三管扩增能检测9种遗传耳聋突变基因，检测型别多，使用方便。

Description

一种遗传性耳聋基因检测试剂盒
技术领域：
本发明属体外诊断试剂领域，具体的，涉及一种试剂盒，更具体的，涉及一种遗传性耳聋基因(9个型)核酸分型检测试剂盒。
背景技术：
耳聋是导致交流障碍最常见的疾病，大多数发病都与遗传有关。在所有耳聋患者中，遗传性耳聋约占1/2，遗传性耳聋可分为综合征型耳聋(SHI)和非综合征型耳聋(NSHI)。SHI除了耳聋，还有眼、骨、肾、皮肤等其他病变，NSHI仅有耳聋。学语前耳聋发病率为1/1000，约半数是遗传所致，其中70％为NSHI，30％是SHI。
NSHI患者数量较多，可分为常染色体显性遗传性耳聋(DFNA3，15％～20％)、常染色体隐性遗传性耳聋(DFNBI，80％)、性连锁(DFN X—linked，l％)和线粒体遗传性耳聋(1％)四类，主要相关基因包括GJB2、、GJB6、GJB3、SLC26A4、12S rRNA、MYOTA，其中中国最常见的致聋基因为GJB2、SLC26A4和12SrRNA。GJB2编码的连接蛋白26(connexin26)异常被公认为耳聋最常见的病因，表达于耳蜗，在耳蜗毛细胞K+循环中发挥重要作用，其突变可导致DFNBl和DFNA3。目前，NSHI病人中已发现100多种GJB2突变类型，有4种常见的突变形式(235delC、299—300delAT、35delG和176del16)，约占总突变种类的88％，其中GJB2235delc是亚洲人中最常见突变。
SLC26A4基因编码溶脂蛋白，溶脂蛋白在内耳中表达于内淋巴管、内淋巴囊、椭圆囊、球囊、血管纹纺锤形细胞、耳蜗外沟和螺旋突起。其转运功能可以在细胞内外实现Cl-/I-或C1-/HCO3-离子互换，突变的SLC26A4基因编码异常的溶脂蛋白，使其失去正常的离子转运功能，致使内淋巴液离子环境失衡，进而导致耳聋。目前发现的SLC26A4基因突变已有170多种，在中国散发的NSHL儿童中，IVS7-2A＞G、2168A＞G和1229C＞T3种突变类型发生率最高。线粒体DNA 12SrRNA与氨基糖苷类抗生素药物致聋及NSHL密切相关，常见突变类型有A1555G和C1494T两种。由这两种突变形成的U-A或G-C碱基配对使线粒体DNA更加容易与氨基糖甙类药物结合，抑制线粒体的氧化磷酸化过程造成耳毒性，使携带者听力下降或是原有听力下降程度更加严重。
GJB3定位于人类染色体lp33—p35，编码有270个氨基酸的连接蛋白31(connexin31)。GJB3突变既可导致DFNA又可导致DFNB。GJB3的错义突变E183K和无义突变R180X被认为与高频听力下降有关。主要突变类型包括R180X、E183K、423delATT、1141V。
GJB6位于13号染色体上，与GJB2紧邻，其最常见突变是342kb的大片段缺失，342kb纯合缺失或与GJB2单杂合突变共存的杂合缺失会导致感音神经性耳聋。
MYOTA定位于染色体1lql3.5，其突变导致Usher综合征1B型，同时还与常染色体显性和隐性非综合征耳聋有关，主要突变类型包括R244P、IVS3—2A>G35963597ins T。
目前，市场上产品常用的筛选耳聋基因的方法有酶切法、变性高效液相色谱技术(DHPLC)、高分辨率熔解曲线分析(high-resolution melt，HRM)和基因芯片。本发明采用多色荧光PCR法检测GJB2(235delC、299—300delAT、176del16、35delG)，SLC26A4(IVS7-2A>G、2186A>G)，线粒体12srRNA(A1555G、C1494)，GJB3(538C>T)4个耳聋基因中的9个常见致聋突变位点。
发明内容：
本发明目的是利用多色荧光PCR技术提供一种特异性强、灵敏度高、重复性好且准确度高的遗传性耳聋基因分型检测试剂盒。
本发明提供的一种遗传性耳聋基因分型检测试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液A，检测遗传性耳聋基因235delC、299—300delAT、176del16及内参HBB，PCR反应液B，检测遗传性耳聋基因35delG、IVS7-2A>G、2186A>G及内参HBB，PCR反应液C，检测遗传性耳聋基因A1555G、C1494、538C>T及内参HBB，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照。
本发明所涉及的PCR反应液A包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的235delC的引物和探针、1-200μM的299—300delAT的引物和探针、1-200μM的176del16的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
PCR反应液B包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的35delG的引物和探针、1-200μM的IVS7-2A>G的引物和探针、1-200μM的2186A>G的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
PCR反应液C包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的A1555G的引物和探针、1-200μM的C1494的引物和探针、1-200μM的538C>T的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
具体的10×PCR buffer(1-200mM KCl、1-200mM(NH4)2SO4、1-200mM Tris-HCl(pH8.5))、1-25mM MgCl2、dNTPs(1-25mM dATP、1-25mM dGTP、1-25mM dCTP、1-12.5mMdUTP、1-12.5mM dTTP混合物)。
具体的，
(1)235delC引物探针为：
上游引物F1；5’-CCAGCATTGGAAAGATCTGGC-3’
下游引物R1：5’-GCCACTAGGAGCGTGGCGTGGACAC-3’
探针P1：5’-FAM-GGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTC-BHQ-3’
(2)299—300delAT引物探针为：
上游引物F2；5’-CCAGCATTGGAAAGATCTGGC-3’
下游引物R2：5’-GCCACTAGGAGCGTGGCGTGGACAC-3’
探针P2：5’-HEX-GAACGTGTGCTACGATCACTACTTC-BHQ-3’
(3)176del16引物探针为：
上游引物F3；5’-GCACGCTGCAGACGATCCTG-3’
下游引物R3：5’-GCAGGGTGTTGCAGAACAAAGTCG-3’
探针P3：5’-ROX-GGAAAGATCTGGCTCACCGTCTT-BHQ-3’
(4)内参HBB引物探针为：
上游引物F4；5’-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3’
下游引物R4：5’-TTGTCACAGTGCAGCTCACTCA-3’
探针P4：5’-CY5-ACAACCTCAAGGGCACCTTTGCCAC-BHQ-3’
(5)35delG引物探针为：
上游引物F5；5’-ATGGATTGGGGCACGCTG-3’
下游引物R5：5’-GACCTTCTGGGTTTTGAT-3’
探针P5：5’-FAM-ATCCTGGGGGTGTGAA-BHQ-3’
(6)IVS72A>G引物探针为：
上游引物F6；5’-GTACGACGGCTTCTCCAT-3’
下游引物R6：5’-GACAGTCTTCTCCGTGGG-3’
探针P6：5’-HEX-TGGCCTACCGGAGACGAGAAG-BHQ-3’
(7)2186A>G引物探针为：
上游引物F7；5’-TCCGCATCGAAGGCTCCCT-3’
下游引物R7：5’-AAGATCTGGCTCACCGTCTT-3’
探针P7：5’-ROX-GTACGTCTTCTATGTCATGTACG-BHQ-3’
(8)A1555G引物探针为：
上游引物F8；5’-CATCAAGGGGGAGATAAAGAG-3’
下游引物R8：5’-ACGACGGCTTCTCCATGCAGC-3’
探针P8：5’-FAM-GGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAG-BHQ-3’
(9)C1494引物探针为：
上游引物F9；5’-GTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTG-3’
下游引物R9：5’-GTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTG-3’
探针P9：5’-HEX-TGGCCTACCGGAGACGAGAAG-BHQ-3’
(10)538C>T引物探针为：
上游引物F10；5’-CTCTTCCTCTACCTGCTGC-3’
下游引物R10：5’-GCCCACCATGAAGTAGGTG-3’
探针P10：5’-ROX-TGGACTGCTACATTGCCTGA-BHQ-3’
本发明所涉及的Taq/UNG酶混合液包括耐热DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
本发明所涉及的阴性对照为含有粘蛋白和BSA的TE缓冲液。
本发明所涉及的阳性对照包括遗传性耳聋基因235delC、299—300delAT、176del16、35delG、IVS72A>G、2186A>G、A1555G、C1494、538C>T和人β-globin的线性化重组质粒的混合液、粘蛋白和BSA的TE缓冲液。
上述方法制造的试剂盒为遗传性耳聋基因分型检测试剂盒。优选为一种遗传性耳聋基因(9个型)核酸分型检测试剂盒，主要适用于检测孕妇脐带血样本中遗传性耳聋基因(9个型)核酸的存在。
本发明的作用和效果
本发明提供的试剂盒的使用方法包括以下步骤：
(1)样本的采集和保存；
(2)PCR扩增试剂配制；
(3)样本、阴性对照和阳性对照的处理；
(4)加样；
(5)PCR扩增；
(6)结果分析。
本发明利用不同荧光标记的探针，采用同一样本进行4管PCR扩增的方法，能同时检测235delC、299—300delAT、176del16、35delG、IVS72A>G、2186A>G、A1555G、C1494、538C>T和人β-globin，并确定其型别，与现有检测试剂盒相比，具有以下优势：
(1)具有更高的特异性和灵敏度；
(2)封闭检测，无需PCR后反应，避免交叉污染和环境污染；
(3)可实现一管PCR反应检测多种型别，更简便和快速；
(4)分三管扩增能检测9种遗传耳聋突变基因，检测型别多，使用方便。
附图说明：
图1显示野生型样本在扩增试剂A中的扩增曲线；
图2显示阴性对照在3种PCR反应液中的扩增曲线；
图3显示样本在扩增试剂B中的扩增曲线。
具体实施方式：
图1 显示野生型样本在扩增试剂A中的扩增曲线，其中横坐标为PCR循环数，纵坐标为荧光值；
图2 显示阴性对照在3种PCR反应液中的扩增曲线，其中横坐标为PCR循环数，纵坐标为荧光值；
图3 显示样本在扩增试剂B中的扩增曲线，其中横坐标为PCR循环数，纵坐标为荧光值。
下面结合具体实施例，对本发明进一步说明，但发明的保护范围并不限于此。
实施例1：试剂盒的组成
遗传性耳聋基因(9个型)核酸分型检测试剂盒的组成如表1所示：
表1 遗传性耳聋基因(9个型)核酸分型检测试剂盒的组成
其中，PCR反应液A中各组分的终浓度为1×PCR缓冲液、引物各100nM、探针各50nM、dNTPs(0.4mM dATP、0.4mM dGTP、0.4mM dCTP、0.2mM dTTP、0.2mM dUTP)、4mM MgCl2；
其中，PCR反应液B中各组分的终浓度为1×PCR缓冲液、引物各100nM、探针各50nM、dNTPs(0.4mM dATP、0.4mM dGTP、0.4mM dCTP、0.2mM dTTP、0.2mM dUTP)、4mM MgCl2；
其中，PCR反应液C中各组分的终浓度为1×PCR缓冲液、引物各100nM、探针各50nM、dNTPs(0.4mM dATP、0.4mM dGTP、0.4mM dCTP、0.2mM dTTP、0.2mM dUTP)、4mM MgCl2；
其中，Taq/UNG酶混合液中Golden Taq DNA聚合酶终浓度为5U，UNG酶终浓度为0.5U；
其中，阴性对照为200μL含有100mg/μLBSA、25mg/dL粘蛋白的TE缓冲液(pH8.0)；
其中，阳性对照为200μL含有235delC、299—300delAT、176del16、HBB、35delG、IVS7-2A>G、2186A>G、A1555G-PCR、C1494、538C>T、HBB线性化重组质粒的混合液、100mg/μLBSA、25mg/dL粘蛋白的TE缓冲液(pH8.0)。
实施例2：上述实施例1所列试剂盒用于遗传性耳聋基因(9个型)核酸分型检测的使用方法
(1)样本的提取
抽取孕妇脐带血2mL，采用北京天根生化科技有限公司的微量样品基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。
(2)PCR扩增试剂配制
取出PCR反应液A、PC反应液B、PC反应液C室温解冻，混匀后5000转/分钟离心10秒，取出Taq/UNG酶混合液，按照混匀后5000转/分钟离心10秒。反应体系需提前计算好所需管数(待测样本+阴性对照+阳性对照)进行配制，每人份的配制用量如表1所示：
表1 每人份PCR扩增试剂配制表
(3)加样
吸取待测样本阳性对照和阴性对照各5μL，分别加入到扩增试剂A、扩增试剂B、扩增试剂C中，盖上管盖。如有气泡，可用手指弹击，去除气泡。5000转/分钟离心30秒至管壁无明显液珠，转移至PCR扩增区。
(5)PCR扩增
将PCR管放入ABI7500扩增仪样品槽，按对应顺序设置待检样本、阳性对照、阴性对照。
每个样品选择FAM、HEX、ROX和CY54个通道。参比荧光(Passive Reference)设置为none。其PCR反应程序如下表2所示：
表2 PCR扩增程序
反应体积设定50μL，保存文件，运行程序。
(6)结果分析
将Baseline设为3-15(根据实际情况，Baseline Cycler可在一定范围内变化)，荧光阈值(Threshold)设定原则以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点，且Ct值显示为undet。对FAM、HEX、ROX和CY54个通道分别进行观察曲线的形状和记录Ct值。
质控对照：阴性对照在3种PCR反应管的4个通道Ct值均显示Undet；阳性对照在3种PCR反应管的4个通道均Ct≤32；样本内对照β-globin在3种扩增试剂的CY5荧光通道Ct≤40。同时符合以上三个条件，此反应视为有效。
判断：一种以上PCR扩增试剂中Ct值≤37判定为检测到相应突变体；37<Ct≤40时，重复检测一次，仍为37<Ct≤40的判定为检测到相应HPV型别，否则为没有检测到9种突变体；Ct>40或显示为Undet，判定结果为没有检测到9种突变体。4种不同荧光探针标记在3种PCR扩增试剂中检测的靶基因见表3所示：
表3 4种不同荧光探针标记在3种PCR扩增试剂中检测的靶基因
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (1)

1.一种遗传性耳聋基因分型检测试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液A，检测遗传性耳聋基因235delC、299—300delAT、176del16及内参HBB，PCR反应液B，检测遗传性耳聋基因35delG、IVS7-2A>G、2186A>G及内参HBB，PCR反应液C，检测遗传性耳聋基因A1555G、C1494、538C>T及内参HBB，Taq/UNG酶混合液，阳性对照，阴性对照；
所述的PCR反应液A包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的235delC的引物和探针、1-200μM的299—300delAT的引物和探针、1-200μM的176del16的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
所述的PCR反应液B包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的35delG的引物和探针、1-200μM的IVS7-2A>G的引物和探针、1-200μM的2186A>G的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
所述的Taq/UNG酶混合液包括耐热DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶；
所述的阴性对照为含有粘蛋白和BSA的TE缓冲液；
所述的阳性对照为包括遗传性耳聋基因235delC、299—300delAT、176del16、35delG、IVS72A>G、2186A>G、A1555G、C1494、538C>T和人β-globin的线性化重组质粒的混合液、粘蛋白和BSA的TE缓冲液；
所述的PCR反应液C包括10×PCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-200μM的A1555G的引物和探针、1-200μM的C1494的引物和探针、1-200μM的538C>T的引物和探针、1-200μM的HBB的引物和探针及无菌蒸馏水；
具体的10×PCR buffer为1-200mM KCl、1-200mM(NH4)2SO4、1-200mM Tris-HCl；MgCl2为1-25mM MgCl2；dNTPs为1-25mM dATP、1-25mM dGTP、1-25mM dCTP、1-12.5mM dUTP、1-12.5mM dTTP混合物；
其中，上述各引物探针特异性设计如下：
(1)235delC引物探针为：
上游引物F1；5’-CCAGCATTGGAAAGATCTGGC-3’
下游引物R1：5’-GCCACTAGGAGCGTGGCGTGGACAC-3’
探针P1：5’-FAM-GGAGATGAGCAGGCCGACTTTGTC-BHQ-3’
(2)299—300delAT引物探针为：
上游引物F2；5’-CCAGCATTGGAAAGATCTGGC-3’
下游引物R2：5’-GCCACTAGGAGCGTGGCGTGGACAC-3’
探针P2：5’-HEX-GAACGTGTGCTACGATCACTACTTC-BHQ-3’
(3)176del16引物探针为：
上游引物F3；5’-GCACGCTGCAGACGATCCTG-3’
下游引物R3：5’-GCAGGGTGTTGCAGAACAAAGTCG-3’
探针P3：5’-ROX-GGAAAGATCTGGCTCACCGTCTT-BHQ-3’
(4)内参HBB引物探针为：
上游引物F4；5’-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3’
下游引物R4：5’-TTGTCACAGTGCAGCTCACTCA-3’
探针P4：5’-CY5-ACAACCTCAAGGGCACCTTTGCCAC-BHQ-3’
(5)35delG引物探针为：
上游引物F5；5’-ATGGATTGGGGCACGCTG-3’
下游引物R5：5’-GACCTTCTGGGTTTTGAT-3’
探针P5：5’-FAM-ATCCTGGGGGTGTGAA-BHQ-3’
(6)IVS72A>G引物探针为：
上游引物F6；5’-GTACGACGGCTTCTCCAT-3’
下游引物R6：5’-GACAGTCTTCTCCGTGGG-3’
探针P6：5’-HEX-TGGCCTACCGGAGACGAGAAG-BHQ-3’
(7)2186A>G引物探针为：
上游引物F7；5’-TCCGCATCGAAGGCTCCCT-3’
下游引物R7：5’-AAGATCTGGCTCACCGTCTT-3’
探针P7：5’-ROX-GTACGTCTTCTATGTCATGTACG-BHQ-3’
(8)A1555G引物探针为：
上游引物F8；5’-CATCAAGGGGGAGATAAAGAG-3’
下游引物R8：5’-ACGACGGCTTCTCCATGCAGC-3’
探针P8：5’-FAM-GGCTCCCTGTGGTGGACCTACACAG-BHQ-3’
(9)C1494引物探针为：
上游引物F9；5’-GTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTG-3’
下游引物R9：5’-GTGTCCACGCCAGCGCTCCTAGTG-3’
探针P9：5’-HEX-TGGCCTACCGGAGACGAGAAG-BHQ-3’
(10)538C>T引物探针为：
上游引物F10；5’-CTCTTCCTCTACCTGCTGC-3’
下游引物R10：5’-GCCCACCATGAAGTAGGTG-3’。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040038266A1 (en) * 2002-05-28 2004-02-26 Dobrowolski Steven F. Advancing the detection of hearing loss in newborns through parallel genetic analysis
CN103276065A (zh) * 2013-05-15 2013-09-04 向华 用于检测与遗传性耳聋相关的基因snp的引物系统及其用途
CN104164474A (zh) * 2013-05-17 2014-11-26 刘代新 一种检测尿液中pca3基因和psa基因表达量的荧光定量pcr法及其诊断试剂盒
CN104694644A (zh) * 2015-02-27 2015-06-10 济南英盛生物技术有限公司 一种先天性耳聋基因多通道荧光pcr检测试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040038266A1 (en) * 2002-05-28 2004-02-26 Dobrowolski Steven F. Advancing the detection of hearing loss in newborns through parallel genetic analysis
CN103276065A (zh) * 2013-05-15 2013-09-04 向华 用于检测与遗传性耳聋相关的基因snp的引物系统及其用途
CN104164474A (zh) * 2013-05-17 2014-11-26 刘代新 一种检测尿液中pca3基因和psa基因表达量的荧光定量pcr法及其诊断试剂盒
CN104694644A (zh) * 2015-02-27 2015-06-10 济南英盛生物技术有限公司 一种先天性耳聋基因多通道荧光pcr检测试剂盒

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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荧光定量PCR技术用于行遗传性耳聋基因检测胎儿的21三体综合征筛查的可行性;卢彦平 等;《中华妇产科杂志》;20110630;第46卷(第6期);427-430

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