CN105287499A - 一种防治心脑血管疾病的天然药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种预防或治疗心脑血管疾病的天然药物组合物，具体地涉及一种由银杏内酯与天然碳苷黄酮类化合物组成的药物组合物，特别是一种以银杏内酯B与牡荆素或荭草素为主要活性成分的药物。经实验研究表明，该组合物对于心脑血管系统疾病具有明显的改善和治疗作用。本发明所使用的原材料来源广泛、天然无毒、副作用小、成本较低，具有广阔的实际应用价值。

Description

一种防治心脑血管疾病的天然药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药、保健品领域，涉及一种预防或治疗心脑血管疾病的天然药物组合物，具体地涉及一种由银杏内酯与天然碳苷黄酮类化合物组成的药物组合物及其在预防或治疗心脑血管疾病及其并发症方面的应用。

背景技术

心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，据世界卫生组织统计，全世界每年因患心脑血管疾病而死亡者约为1200万人，我国每年心脑血管疾病患者的死亡人数高达60万，50％－70％的中风存活者遗留瘫痪、失语等严重残疾，给家庭和社会带来了沉重的负担。心脑血管疾病具有“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高,并发症多”，即“四高一多”的特点。心脑血管疾病的发生是多因素综合致病的，其中包括高血压、心脏病、缺血性脑卒中、糖尿病、高血脂、高血压等高危因素，同时饮酒、吸烟、体重超标、精神压力、环境污染、不合理膳食等也是心脑血管病的重要致病因素。

目前在心脑血管病治疗药物中，中西药各有侧重。西药起效快，适合急性发病患者抢救给药，不适合长期服用，具有靶点单一、毒副作用大、依耐性强等缺点。中药等天然植物药以其疗效确切、副作用小、疗效全面、适合长期预防给药、成本低等优势也占有较大的市场份额。中药在资源方面具有极大的优势，诸如丹参、银杏叶、山楂叶、川芎、白芍、栀子、三七、葛根、绞股蓝等都具有良好的抗心脑血管疾病活性，这给开发新型抗心脑血管疾病药物提供了有力的资源保障。另有相关数据显示，我国脑中风病人出院后第一年的复发率是30%，第五年的复发率高达59%，而二级预防做得较好的美国仅为10%。因此，开发新型天然抗心脑血管疾病的药物具有广阔的市场空间，也很有必要。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种疗效确切、安全方便、副作用小的抗心脑血管疾病药物组合物，特别是用于治疗和预防缺血性脑损伤、缺血性心肌损伤、缺血性脑痴呆、脑梗阻、脑梗死等心脑血管疾病。

本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明药物组合物是由银杏内酯与碳苷黄酮类化合物组成，具体地，是由如下重量配比的原料药制成：

银杏内酯1-250份，碳苷黄酮1-250份；

进一步地，该组合物是由如下重量配比的原料构成：

银杏内酯20-180份，碳苷黄酮50-220份；

更进一步地，该组合物是由如下重量配比的原料构成：

银杏内酯50-100份，碳苷黄酮80-180份。

根据本发明药物组合物的一个优选实施方案，如上所述银杏内酯为银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J、白果内酯等中的一种或多种；所述碳苷黄酮为牡荆素、异牡荆素、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、荭草素、异荭草素、夏佛托苷、异夏佛托苷、葫芦巴苷、葛根素、芒果苷等中的一种或多种。

根据本发明药物组合物的一个优选实施方案，所述银杏内酯以银杏内酯B为优，所述碳苷黄酮以牡荆素、荭草素为优。

根据本发明药物组合物的一个优选实施方案，所述银杏内酯及碳苷黄酮可以通过常规提取纯化手段从天然植物中获取，也可以直接使用市售产品。

根据本发明药物组合物的一个优选实施方案，所述银杏内酯及碳苷黄酮还可以采用它们的衍生物或盐代替。

本发明药物的活性成分可以直接入药服用或加入药剂学上可接受的辅料按常规工艺制备成所需制剂。如可以制成常用的片剂(分散片、泡腾片、口腔崩解片、含片、咀嚼片、泡腾片)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊剂)、颗粒剂、丸剂(滴丸剂)、散剂等固体制剂形式的口服药物，也可以制成糖浆、口服液等液体制剂形式的口服药物；还可以制成膏剂、凝胶剂、软膏剂、巴布剂、贴膏剂、搽剂、洗剂、涂膜剂等外用制剂形式的外用药物。因此，该药物组合物中除有效成分外，还可以含有药学上可以接受的辅料。

所述辅料，可以根据不同的制剂有所不同，如在片剂、胶囊剂、颗粒剂等固体制剂中常用的稀释剂、崩解剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、填充剂等；在糖浆、口服液等液体制剂形式中常用的表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂、助流剂等；在凝胶剂、软膏剂等外用制剂形式中常用的药用油性基质、水性基质、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、透皮吸收促进剂、表面活性剂等。

本发明所述常用辅料包含但不限定于：淀粉、乳糖、糊精、糖粉、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、改良淀粉、山梨醇、聚乙烯吡咯酮、重质碳酸镁、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲淀粉钠、羟丙基纤维素、聚维酮K30、倍他环糊精、白陶土、预胶化淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素、糖精钠、枸橼酸、碳酸氢钠、碳酸钠、卡拉胶、琼脂、明胶、海藻酸钠、黄原胶、瓜耳豆胶、西黄耆胶、阿拉伯胶、槐豆胶、刺梧桐胶、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚丙烯酰胺、交联型聚丙烯酸钠、聚乙烯醇、卡波姆、山梨酸、山梨酸钾、羟苯乙酯、苯甲醇、尼泊金、硫柳汞、二甲基亚砜、氮酮、三乙醇胺、氢氧化钠、甘油、丙二醇、BHT、BHA、十二烷基硫酸钠、吐温类、司盘类等。

根据本发明药物组合物的一个优选实施方案，本发明组合物还可以含有一种或多种具有相同或相似活性的其他活性成分。

本发明所述其他活性成分，包括但不限于来源于天然植物如牡荆叶、牡荆子、木豆、含羞草、牛筋草、紫花地丁、西番莲、山楂叶、钩藤、绞股蓝、银杏叶、黄芩、荷叶、红景天、甘草、金莲花、小叶榕、丹参、川芎、山豆根、蒲黄、红花、苦参等或它们的有效部位和提取物；以及部分化学合成药物如肝素钠、硝酸甘油、硝酸异山梨酯、硝苯地平、盐酸地尔硫卓、普萘洛尔、普罗帕酮、卡托普利、伊贝沙坦、米罗地尔、洛伐他丁、苯扎贝特、安妥明、吉非贝特等。

本发明的另一个目的是提供如上限定的药物组合物在生产用于预防和治疗心脑血管疾病中的应用。所述心脑血管疾病包括但不限于缺血性脑卒中、脑血栓、动脉粥样硬化、冠心病、心肌纤维化、血管性脑痴呆、脑溢血、高血压、高血糖、高血脂、心肌梗死、缺血性肺心病等疾病。

众所周知，银杏内酯为银杏叶及其制剂中的主要药理活性物质，大量实验研究表明，银杏内酯具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗血小板凝集、促进学习记忆、预防早老性痴呆等作用。银杏内酯对于心脑血管系统的作用主要表现在对于缺血性脑损伤、缺血性心肌损伤的保护上，特别是对于缺血性脑损伤的保护作用使其在临床上表现出良好的抗脑血栓、脑卒中、脑梗死的活性。银杏内酯通过多种途径发挥抗脑缺血损伤的作用，如改善能量代谢、抑制缺血后炎症因子和炎症反应的发生、抗氧化、降低兴奋性氨基酸所致细胞损伤、抑制NO的生成、减少缺血细胞凋亡等，能够明显改善神经症状、缩小梗死面积、减轻脑水肿。银杏内酯为血小板活化因子（PAF）受体拮抗剂，其中以银杏内酯B作用最强。PAF与受体结合后，通过多种信号传导途径引起脑损伤，其可能机制包括：通过耦联的G蛋白激活磷脂酶C（PLC），产生三磷酸甘油（IP3）和甘油二酯（DG），IP3可诱导细胞内钙离子浓度的升高，DG可激活蛋白激酶C（PKC），导致细胞膜功能障碍；促进兴奋性氨基酸释放，兴奋性氨基酸（EAA）与N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）受体结合，致钙通道开放；激活磷脂酶A2（PLA2），使花生四烯酸代谢产物（PGs、TXA2、LTs）大量生成，引发炎症反应；刺激诱生型一氧化氮合酶（iNOS）的活化；激活核转录因子（NF-κB），诱导多种细胞因子和炎症介质基因的表达。银杏内酯通过拮抗上述信号通道系统，进而发挥其抗脑缺血的作用。

碳苷是结构较为特殊的一类苷类化合物，碳苷黄酮是碳苷类化合物中为数最多的一类。碳苷黄酮（C-glycosylflavones）是指糖与黄酮母核通过C-C键连接的一类黄酮苷。根据黄酮母核结构不同，碳苷黄酮可分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢查耳酮、酮、黄烷-3-醇等。碳苷黄酮以芹菜素和木犀草素为苷元的最多。所连接的糖苷大多与黄酮母核A环的C-6或C-8位相连，糖基主要包括葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖等。部分碳苷黄酮中含有2个糖，连接在不同的碳位，或者2个糖以不同的顺序相连。部分碳苷黄酮中有乙酰基、羟基苯甲酰基、芥子酰基、香豆酰基等取代。碳苷黄酮具有溶解度小，难于酸水解的共同特点。碳苷黄酮具有广泛的药理活性，包括抗氧化、保护心血管系统、降血糖、保肝、兴奋子宫平滑肌、治疗甲状腺疾病、杀虫、抗病毒、抗辐射等作用。碳苷黄酮对于心血管系统的作用是多方面的，可能与改善细胞钙离子超载、抑制呼吸氧爆发、抑制细胞凋亡和炎症反应等有关，具体地可能与丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivatedproteinkinase，MAPK）通路、NF-κB相关通路及过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisomeproliferatoractivatedreceptorgamma，PPARγ）相关通路的调节有关。碳苷黄酮相对于其他黄酮类化合物具有较好的稳定性，这更有利于产品的开发。

本发明组合物结合了银杏内酯在抗缺血性心肌损伤、脑损伤以及碳苷黄酮调节血脂、降血糖、抗氧化等方面的优点，制备出的药物经药理研究表明具有抗缺血性脑损伤、抗缺血性心肌损伤、降血脂、抗动脉粥样硬化等作用。因此本发明组合物可以作为一种新的抗心脑血管病药物，广泛用于临床心血管疾病的预防和治疗。

以下实施例旨在进一步说明本发明组合物，而不是限制本发明。在不违背本发明精神和原则的前提下，对发明个别技术步骤进行的任何改动或改变都将落入本发明保护范围内。

具体实施方式

实施例1

将适量聚乙二醇6000、聚氧乙烯40硬脂酸酯加热熔融，加入β-环糊精、微晶纤维素搅匀，依次加入银杏内酯B20g、牡荆素60g，搅匀，60-80℃保温，滴入液体石蜡中，待滴丸冷却后取出，沥净并擦除液体石蜡，即得滴丸剂。

实施例2

将适量聚乙二醇6000加热熔融，50g银杏内酯B、100g葒草素用β-环糊精包合固化，再加入到已熔融好的聚乙二醇6000中；搅匀，60-80℃保温，滴入液体石蜡中，待滴丸冷却后取出，沥净并擦除液体石蜡，即得滴丸剂。

实施例3

将聚乙二醇4000、聚乙二醇6000加热熔融，加入30g银杏内酯B、120g牡荆素，混匀，60-80℃保温，滴入二甲硅油中，待滴丸冷却后取出，沥净并擦除二甲硅油，即得滴丸剂。

实施例4

将泊洛沙姆加热熔融，加入司盘搅匀，再加入80g银杏内酯B、80g葒草素，混匀，60-80℃保温，滴入汽油中，待滴丸冷却后取出，沥净并擦除汽油，即得滴丸剂。

实施例5

取银杏内酯B100g、牡荆素80g，混合均匀，加入低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、微晶纤维素适量，混匀，以85％乙醇制粒，加入适量硬脂酸镁混匀，压片，

包薄膜衣，即得片剂。

实施例6

取银杏内酯B180g、葒草素50g，混合均匀，粉成细粉，加入糊精、微晶纤维素、阿斯巴甜适量，混匀，以80％乙醇制粒，干燥，整粒，分装，即得颗粒剂。

实施例7

取银杏内酯B70g、牡荆素120g，混合均匀，粉成细粉，加入适量乳糖，混匀，制粒，干燥，装入1号胶囊，即得胶囊剂。

实施例8

取银杏内酯B1g、牡荆素250g，混合均匀，粉成细粉，加入适量微晶纤维素、PVPP、甘露醇，混匀，以85％乙醇制粒，压片，即得口腔崩解片。

实施例9

取银杏内酯B250g、红草素1g，微粉化，加入适量交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、微分硅胶、硬脂酸镁、乳糖，混合均匀，制粒，干燥，压片，即得分散片.

实施例10

取银杏内酯B90g、牡荆素110g，混合均匀，粉成细粉，按照药粉∶富马酸∶酒石酸∶碳酸钠=5:6:2.4:3.9为泡腾片组成的比例，加入富马酸、酒石酸、碳酸钠、甘露醇适量、0.5％桔子香精及1.2％的甜菊糖苷，混匀，按照聚乙二醇单硬脂酸酯酯∶吐温60∶无水乙醇=1：2：22为粘合剂的比例，其中粘合剂用量可占药粉和固体辅料总重的5-30％(V/W)，制粒，干燥，整粒，加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，压片，即得泡腾片。

实施例11

取银杏内酯B90g、牡荆素55g,加水溶解，加入适量的混悬剂、调味剂、防腐剂，混匀，加水定容，滤过，分装，即得口服液。

药效学实验

试验例1本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血的影响

1.动物及试药

实验动物为SD大鼠，雄性，体重180-210g，受试药物按照实施例1、2、3、4制备。

2.分组及给药

实验动物按体重随机分组，分为对照组、牡荆素组、银杏内酯组、红草素组、本发明组合物组（受试药品按实施例1、2、3、4制备），每组10只大鼠。各试验组动物连续灌胃给药2周，对照组给予等量生理盐水，给药剂量以实际有效成分含量计算。末次给药2小时后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉，右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一弧形切口，长约1.5cm，夹断颞肌并切除，暴露颞骨，于实体显微镜下用牙科钻在颞骨与颞鳞骨接合处靠近口侧1mm处作一直径2.5mm的骨窗，清理残渣，暴露大脑中动脉，置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。将吸有50%氯化铁溶液10μL的小片定量滤纸敷在此段大脑中动脉上，30分钟后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，缝合伤口，回笼饲养。温度控制在24℃左右。

3.神经症状评分标准

实验动物术后24小时进行行为检测。评分标准为：①提鼠尾观察前肢屈曲情况，如前肢对称前伸，记为0分；如手术对侧出现肩屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼具，记为1分。②将动物置于平面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，记为0分；如手术对侧阻力下降，记为1分。③将动物两前肢置一金属网上，观察肌张力。双侧肌张力对等且有力记为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。④提鼠尾，动物有不停的向手术对侧旋转者，记为1分。根据以上标准评分，满分为4分，分数越高，动物行为障碍越严重。

4.脑梗塞范围测定

动物经行为测试后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位脑干后剩余的部分在4℃以下冠状切成5片，并迅速将脑片置于TTC染液中，37℃避光30分钟，取出后置于10%甲醛液中保存24小时，经染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，以梗塞组织重量占全脑重量以及患侧脑重量的百分比作为脑梗塞范围。

5.结果及分析

实验结果显示，各实验组药物对于局灶性脑缺血均具有一定改善作用，其中本发明组合物具有显著的抗脑缺血作用，相对于单独应用银杏内酯、牡荆素、荭草素等其效果更优，显示本发明组合物具有较强的协同作用。

表1本发明组合物对MCAO大鼠神经症状的影响

组别	剂量mg/kg	12小时神经症状评分	24小时神经症状评分
				对照组	-	3.25±0.43	3.03±0.46
牡荆素组	150	2.83±0.36*	2.52±0.49*
				银杏内酯组	100	2.74±0.35*	2.45±0.41*
荭草素组	100	2.82±0.42*	2.55±0.44*
				实施例1	150	2.28±0.35**	2.10±0.42**
实施例2	150	2.33±0.41**	2.05±0.37**
				实施例3	150	2.31±0.37**	2.01±0.45**
实施例4	150	2.28±0.40**	2.04±0.38**

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2本发明组合物对MCAO大鼠脑梗塞范围的影响

组别	剂量mg/kg	梗塞占全脑重%	梗塞占半脑重%
				对照组	-	4.32±0.75	8.24±1.29
牡荆素组	150	3.35±0.78*	6.25±1.56*
				银杏内酯组	100	3.30±0.77*	6.10±1.62*
荭草素组	100	3.42±0.69*	6.18±1.71*
				实施例1	150	2.33±0.78**	4.55±1.26**
实施例2	150	2.48±0.52**	4.58±1.32**
				实施例3	150	2.53±0.67**	4.60±1.35**
实施例4	150	2.43±0.63**	4.52±1.29**

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

试验例2本发明组合物对大鼠实验性心肌缺血的影响

1.实验方法

试验用药前各组大鼠先做心电图检查，弃去S-T段、T波有异常改变者和心率失常者，将大鼠随机分为空白对照和造模组，每组10只，每天分别灌胃。空白对照组给予生理盐水、其他试验组按设定剂量给药。连续给药10天，于第10天灌药后30min，按照如下方法造模：将各组大鼠用20％乌拉坦5ml/kg腹腔注射浅麻醉后，背位固定，皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素，正常对照组给予等容量的生理盐水，连接心电图机，走纸速度50cm/s，标准电压10mm/mv，记录成膜后心电图变化。导联心电图，观察ST段的改变。具备以下条件之一者判断为心肌缺血阳性：1)S-T段水平向下或向上偏移≥0.1mv；2)T波高耸超过同导联R波的1/2；3)T波高耸伴S-T段移位。阴性判断标准：1)S-T段斜形偏移，或水平偏移<0.1mv；2)T波低平或双向倒置。以模型组大鼠心电图ST段抬高≥0.1mv作为造模成功的标志。连续给药10天，于末次灌药后30min造模，造模前、造模后即刻5min、10min、20min、30min时用生理记录仪导联心电图，并在6h后采血，离心取血清检测CK、CK-MB。

2.结果及分析

2.1对J点位移的影响

空白组与模型组比较有非常显著性差异(P<0.01)，说明造模成功；与模型组比较，本发明组合物（实施例1、2、3、4）在不同时间对J点位移有显著下降作用，且本发明组合物的作用优于组合物中各成分单一应用，表明本发明组合物各有效成分间具有明显的协同作用。

表3本发明组合物对大鼠J点位移的影响

注：与模型组相比^*P<0.05；^**P<0.01

2.2对异丙肾上腺素所致急性心肌缺血大鼠血清CK、CK-MB的影响

与空白组比较，模型组造模6h后，可使肌酸激酶CK、肌酸激酶同功酶CK-MB明显升高，说明造模成功；与模型组比较，各实验组均有改善大鼠急性心肌缺血的作用，但是本发明组合物的效果明显优于单独应用牡荆素、银杏内酯、荭草素，表明本发明组合物对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤具有更好的保护作用。

表4对异丙肾上腺素所致急性心肌缺血大鼠血清CK、CK-MB的影响

组别	剂mg/kg	CK（U/L）	CK-MB（U/L）
				空白组	-	350.18±35.27**	236.26±37.31**
模型组	-	1287.29±129.67	850.78±100.28
				牡荆素组	150	682.35±89.24*	612.47±48.23*
银杏内酯组	100	572.41±48.26*	458.56±37.25*
				荭草素组	100	642.51±45.38*	429.83±48.37*
实施例1	150	368.27±22.26**	288.64±39.62**
				实施例2	150	412.55±38.33**	279.38±41.24**
实施例3	150	387.66±41.21**	248.53±37.65**
				实施例4	150	420.33±28.64**	268.52±37.48**

注：与模型组相比^*P<0.05；^**P<0.01

心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。冠心病是引起心肌缺血最主要、最常见的病因。试验发现本发明组合物及其有效成分单独应用，对异丙肾上腺素所致急性心肌缺血大鼠不同时间J点位移都有显著下降作用，对血清CK、CK-MB都具有明显的降低作用，说明本发明组合物及其有效成分对心肌缺血具有明显的保护作用。试验结果表明，本发明组合物对于心肌缺血性损伤的保护作用明显强于其有效成分单独使用，表明本发明组合物中各有效成分间存在明显的协同效应。

试验例3本发明组合物对实验性血栓的抑制作用

1.试验方法

将大鼠随机分组，每组15只，即空白对照组、阿司匹林组(1％CMC-Na溶液研磨配成0.88mg/mL悬混液，按5mg/kg/d剂量给药)、牡荆素组、银杏内酯组、荭草素组、本发明组合物组（按实施例1、2、3、4制备)。空白对照组给同体积生理盐水，其余实验组按给定剂量给药，每天给药一次，连续7天。

体内血栓形成实验：各组大鼠第7天给药后1h，参照动-静脉旁路血栓形成法，用0.8％的戊巴比妥钠40mg/kg剂量腹腔注射麻醉，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。取三段聚乙烯塑料管，中间一段内径为2mm，长约8.5cm，两端的两段塑料管内径为1.5mm，各长10cm。在中段塑料管内放入一根长约7cm预先称重的4号手术丝线，其中一端露出塑料管0.5cm以固定位置，并保持在管中的丝线长度为6.5cm，将肝素钠溶液充满聚乙烯塑料管内，将塑料管的一端插入左侧颈外静脉后，将塑料管的另一端插入右侧颈总动脉，随即立刻开放血流。血流开放20分钟后，立即中断血流并迅速取出中段的丝线，称取丝线的重量，即为总重量。总重量减去丝线的重量即为血栓湿重。按下列公式计算血栓抑制率：抑制率=(对照组血栓湿重-实验组血栓湿重)/对照组血栓湿重×100％。将各组血栓湿重进行统计学比较。

血小板聚集抑制试验：在各组大鼠第7天给药1h后，用上述方法麻醉大鼠，颈总动脉插管放血，血液用3.8％枸橼酸钠按1:9比例抗凝，以500转/分离心5分钟，取上部血浆即为富血小板血浆(PRP)，余下部分再次以3500转/分离心15分钟，上清液为贫血小板血浆(PPP)，用血小板计数仪计数PRP血小板，用PPP调节PRP的血小板计数至3×105个/mm²左右。样品管37℃保温3分钟后加入ADP5μL(终浓度为5μmol/L)，搅拌子转速500r/min，记录加入ADP后的记录笔移动的行距，按下式计算聚集率：聚集率(％)=加入ADP的行程×100％/0-100％的行程。计算出各实验组的平均聚集率和标准差，并按下式计算各实验组的血小板聚集抑制率：聚集抑制率(％)=(空白对照组聚集率-实验组聚集率)/空白对照组聚集率×100％。

2.实验结果及讨论

2.1对实验性血栓形成的影响

各给药组与空白对照组相比，对血栓形成均有明显的抑制作用，其中本发明组合物对于大鼠血栓湿重具有非常显著性差异（P＜0.01），牡荆素组、银杏内酯组及荭草素组对大鼠血栓湿重具有显著性差异（P＜0.05），提示本发明组合物对于实验性血栓的形成的抑制作用明显优于牡荆素、银杏内酯、荭草素单独应用。

表5本发明组合物对大鼠血栓形成的影响

组别	剂mg/kg	血栓湿重/g	抑制率%
				对照组	-	0.084±0.016	/
阿司匹林	5	0.053±0.012*	36.90
				牡荆素组	150	0.045±0.006**	46.43
银杏内酯组	100	0.050±0.009*	40.47
				荭草素组	100	0.054±0.007*	35.71
实施例1	150	0.032±0.004**	61.90
				实施例2	150	0.036±0.002**	57.14
实施例3	150	0.040±0.002**	52.38
				实施例4	150	0.042±0.005**	50.00

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.2本发明组合物对大鼠血小板凝聚率的影响

实验中，各给药组与空白对照组相比，对ADP诱导的大鼠血小板聚集均有明显的抑制作用。其中本发明组合物组对血小板聚集抑制率(与对照组相比，^**P<0.01)

超过牡荆素、银杏内酯、荭草素等单独应用的试验组(与对照相比，^*P<0.05)，提示本发明组合物在抗血小板聚集方面效果优于本发明组合物有效成分单独应用，这些成分间具有明显的协同效应。

表6本发明组合物对大鼠血小板聚集率的影响

组别	剂量	血小板凝聚率%	聚集抑制率%
				对照组	-	48.15±4.87	/
阿司匹林	5	24.32±3.12*	49.49
				牡荆素组	150	27.77±4.52*	42.32
银杏内酯组	100	20.89±3.88*	56.61
				荭草素组	100	26.18±4.23*	45.63
实施例1	150	17.26±2.28**	64.15
				实施例2	150	14.85±4.79**	69.16
实施例3	150	13.64±3.26**	71.67
				实施例4	150	17.33±3.82**	64.01

注：与对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

血栓是血液里的一些成分发生聚集，形成团块，影响了血液的流动，出现血栓的原因主要是血液成分的改变、血管内皮受损和血流流动速度的改变。血栓可以阻塞冠状动脉血管，致使血流急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久的急性缺血，最终导致心肌的缺血性坏死；另外，脑血管的某个部位自发形成血栓，造成脑部血管堵塞、血液流通不畅，形成“脑血栓”，脑血栓形成后，血栓脱落引起血管堵塞，形成脑梗。本发明组合与其有效成分单独应用相比较，具有更好的降低血栓大小，抑制血栓形成、降低血小板凝聚率的作用，提示本发明组合物具有更好的治疗和预防心脑血管疾病的作用。

Claims (6)

1.一种防治心脑血管疾病的天然药物组合物，其特征在于，它是以银杏内酯和碳苷黄酮类化合物为主要活性成分，添加药学上可接受的辅料和/或其他活性成分制备而成的药物制剂。

2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于它是由如下重量配比的原料组成：

银杏内酯1-250份，碳苷黄酮1-250份；

进一步地，该组合物是由如下重量配比的原料构成：

银杏内酯20-180份，碳苷黄酮50-220份；

更进一步地，该组合物是由如下重量配比的原料构成：

银杏内酯50-100份，碳苷黄酮80-180份。

3.根据权利要求1-2所述的组合物，其特征在于所述银杏内酯为银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J、白果内酯等中的一种或多种；所述碳苷黄酮为牡荆素、异牡荆素、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、荭草素、异荭草素、夏佛托苷、异夏佛托苷、葫芦巴苷、葛根素、芒果苷等中的一种或多种。

4.根据权利要求1-2所述组合物，其特征在于所述银杏内酯以银杏内酯B为优，所述碳苷黄酮以牡荆素或荭草素为优。

5.根据权利要求1-5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物制剂以经口给药的药物制剂为主，包括但不限于颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液、散剂。

6.根据权利要求1-6制备的药物组合物在生产用于预防和治疗心脑血管疾病中的应用，所述心脑血管疾病包括但不限于缺血性脑损伤、缺血性心肌损伤、缺血性脑痴呆、脑梗阻、脑梗死、动脉粥样硬化、冠心病、脑血栓、心肌梗死等疾病。