CN105287275A - 一种含有锁阳的化妆品组合物 - Google Patents

Abstract

本发明描述锁阳、锁阳提取物以及锁阳生物酵素在化妆品组合物中作为皮肤护理活性成分的用途。其在抗氧化、抗衰老方面有显著的功效。

Description

一种含有锁阳的化妆品组合物

技术领域

本发明涉及锁阳或其提取物在化妆品组合物中作为皮肤护理活性成分的用途。发明还涉及锁阳的生物发酵物(biofermentation)，其用于抗衰老化妆品用途的皮肤护理活性物(skincareactive)。

背景领域

皮肤的胞外基质(“ECM”)在衰老过程中特别重要。ECM不仅提供了皮肤细胞附着和皮肤的正确定向需要的三维支架，而且ECM还作为对皮肤细胞的信号的传递管道发挥作用，所述信号刺激皮肤细胞实施关键功能，例如组织修复。当通过环境暴露或正常衰老过程而破坏ECM时，皮肤就发展了不想要的衰老外观，例如皱纹。用于降低皮肤内已存在的纤维状蛋白质的破坏，刺激产生更多的这类蛋白质是化妆品领域的期望。例如，人白细胞弹性蛋白酶是由活化的白细胞释放的丝氨酸蛋白酶，能够在暴露于UV光或其它刺激性刺激物下的皮肤中，引起多种ECM蛋白质组分的广泛破坏。因此，具有对该蛋白酶的抑制作用，从而保护ECM免受破坏的化妆品是有利的。

锁阳是补肾用的一味药，它可平肝补肾、益精养血、润肠通便，治疗气血不足造成的不孕症，还可强筋健骨、补充钙质。对人体机能有很大益处；增强免疫功能；清除自由基；抗血小板聚集；具有糖类皮质激素样作用；补充维生素和矿物质。最新科学实验证明锁阳还具有防癌、抗病毒、延缓衰老的作用。适用于免疫力低下、易感染疾病者；中青年操劳事业而健康透支者；尿频便秘、失眠脱发、哮喘、痿弱早泄等多种慢性疾病患者。

在多年的研究中，我们发现当锁阳作为皮肤护理活性物在化妆品中使用并用于皮肤时，锁阳或其提取物和/或生物酵素提供了抗衰老、抗氧化的益处，其通过抑制弹性蛋白酶的活性和清除自由基的作用，提供了显著的抗衰老效果。

发明内容

本发明涉及锁阳，特别是锁阳的提取物和/或锁阳的生物酵素用于化妆品组合物来改善皮状况和/或提供抗衰老效果。

本发明还涉及锁阳，特别是锁阳的提取物和/或锁阳的生物酵素用于化妆品组合物来改善皮肤条件和/或提供抗衰老效果，任选的与其他中草药或其提取物或其生物酵素以及其他因子混合。

本发明还涉及所述锁阳抑制人白细胞弹性蛋白酶和清除自由基的美容用途。

此外，本发明涉及所述锁阳特别是锁阳的提取物和/或锁阳的生物酵素为皮肤提供抗氧化效果的美容用途。

本发明还涉及化妆品组合物，例如乳膏、霜剂、凝胶、洗剂、喷雾制剂、乳液、混悬液或液体制剂，其包含安全和有效量的本发明锁阳、锁阳提取物和/或锁阳生物酵素。

技术术语的解释

除非另外指出，本文中使用的所有百分比和比例都是占总组合物的重量。除非另外指出，所有温度都是摄氏度。

本文中使用的术语“安全和有效量”是指足以诱导本文中描述的正向益处的化合物或组合物的量，但根据技术人员的判断低至足以避免严重的副作用。

本文中使用的，改善皮肤状况包括消除、最小化和/或预防皮肤的瑕疵，所述瑕疵可以视觉上或通过触觉检测到，例如不整(irregularity)，包括但不限于皱纹、不均匀或粗糙、丧失皮肤弹性、松垂、胶原分解、丧失从变型的皮肤回复力(recoil)，和暗黄。

用于本发明的锁阳是指挑选新鲜锁阳肉质茎，或采用置于工业冷藏库保鲜的新鲜锁阳肉质茎，或采用工业冷冻库冷藏的速冻锁阳肉质茎，或选用精选的锁阳肉质茎及碎料作为原料；将原料清洗后打浆，干燥获得锁阳粉；或是将原料进行干燥，将干品粉碎后获得锁阳粉或锁阳颗粒；或将原料用适宜的溶剂进行提取获得浸膏，根据需要将浸膏进一步干燥为浸膏粉。

用于本发明的锁阳生物酵素是按照如下方法制备的锁阳生物酵素。

本发明以锁阳为核心基质，通过现代生物发酵技术，提供一种锁阳酵素。

用于制备本发明锁阳酵素的原料主要是锁阳，进一步含有谷物、蔬菜、水果、坚果、食用菌、草本(其他中药材)以及海底植物等。

用于本发明的锁阳是指新鲜的锁阳、干燥的锁阳或经过各种炮制方法炮制的锁阳饮片。其中新鲜的锁阳在净选后切成适宜大小的片状、条状或粒状用于发酵处理，或打磨成浆液用于发酵处理。对于干燥锁阳或锁阳饮片可经浸泡后制备成适宜大小的片状、条状或粒状用于发酵处理，或打磨成浆液用于发酵处理，或不经浸泡直接磨成粉末进行发酵处理。

用于本发明的所述谷物包含但不限于小麦、大米、玉米、小米、豆类；所述蔬菜包含但不限于叶类、根茎类、果实类，如黄瓜、香瓜、西瓜、苦瓜、野菜、椰菜、萝卜、白菜、豆芽、莴苣、芹菜等；所述水果包含但不限于橘子、番茄、柠檬、葡萄、各类梨、苹果、木瓜、杨桃、草莓等。所述坚果包含但不限于核桃、花生、榛子、松籽等。所述食用菌包含但不限于各类蘑菇。所述草本包含但不限于枸杞、人参、芦荟、冬虫夏草、灵芝等。所述海底植物包含但不限于海带、紫菜等。上述材料以浆液或粉末的形式使用。

用于本发明的发酵方式有液体发酵方法和固体发酵方法。

液体发酵方法：

将发酵菌种接种于含有液体培养基的发酵基质后在一定条件下发酵。

用于本发明的液体发酵菌种包括但不限于酵母菌、乳酸菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、双岐杆菌、米曲霉、蜜环菌、虫草菌、灵芝菌、朱红菌等一种或多种能够用于食物或药物发酵的菌种。

用于本发明液体发酵的培养基是用于食物或药物常见的培养基如包括但不限于麦芽汁培养基、水果浆液培养基、谷物水溶液培养基等。所述培养基中可以加入糖类、氮源和无机盐。所述糖类包括但不限于白糖、红糖、低聚糖类、糖醇类、冰糖、蜂蜜等。作为优选，所述糖类的加入量为原料总重量的0-8％。所述氮源包括但不限于酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉、玉米浆、鱼粉、蚕蛹粉、麸皮等。作为优选，所述氮源的加入量为原料总重量的0-10％。所述无机盐包括但不限于硫酸铵、氯化锰、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等。作为优选，所述无机盐的加入量为原料总重量的0-3％。优选地，在发酵过程中，根据菌种的不同分阶段植入培养基。

用于本发明液体发酵的方法包括如下步骤：

(1)对原材料进行杀菌处理，此处的杀菌处理包括低温杀菌、射线杀菌、化学杀菌等不破坏原材料品质的杀菌处理方法；

(2)制备培养基：采用本领域常规方法制备各种液体发酵培养基，包括但不限于麦芽汁培养基、水果浆液培养基、谷物水溶液培养基。

作为优选，所述麦芽汁培养基是将麦芽经过筛选、清洗、干燥，制得的干麦芽经糖化、糊化、过滤等工序而成。作为优选，所述麦芽为大麦麦芽或小麦麦芽。作为优选，所述干燥为晒干或烘干。作为优选，所述糖化采用酸法、酶法或酸酶结合法糖化。

作为优选，所述水果浆液培养基是取水果可食用部分，经清洗、打浆(加水或不加水)、过滤制得。

作为优选，所述谷物水溶液培养基是将谷物去杂、清洗、研磨后，加水煮沸、过滤而得。

作为优选，所述培养基在使用前需经灭菌处理。

作为优选，所述麦芽汁培养基适于仅以中药材为发酵基质；当发酵基质中含有水果时可以以水果浆液作为培养基；如果发酵基质中含有谷物类物质时可以以谷物的水溶液作为培养基。这种原则仅做一般性指导，当发酵基质中碳水化合物和水含量足够用于发酵菌生长时，则可以使用发酵基质作为培养基。

(3)制备发酵基质：在灭菌培养基中，加入锁阳原料，优选加入研磨成浆液的锁阳原料。作为优选，所述锁阳原料的加入量为培养基的0.3-8％(w/v，v/v)、或1-5％(w/w，v/v)、或2.5％(w/w，v/v)。进一步优选加入基他中药材粉末，更进一步优选加入谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物等其中的一种或多种。其他中药材或谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物可以粉末形式依据常规用量加入，一般为0-10％(w/v)。

(4)菌种植入并发酵：将选择的菌种进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。作为优选，所述菌种为厌氧菌种、好氧菌种或厌氧与好氧菌种兼用。所述厌氧、好氧菌种的植入量为发酵基质5-16％(w/w)，或8-12％(w/w)、或10％(w/w)。作为优选，所述扩大培养包括固体斜面培养、摇瓶培养和/或种子罐培养。作为优选，所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖2-4％、蛋白胨1-3％、豆粉1-2％、琼脂2-4％、硫酸镁0.05-0.08％、磷酸二氢钾0.2-0.3％、氯化钠0.1-0.3％。作为优选，所述摇瓶培养的培养基包括葡萄糖2-3％，蛋白胨1-4％，豆粉0.5-2％，麸皮0.5-2％，硫酸镁0.01-0.1％，磷酸二氢钾0.1-0.4％、磷酸氢二钾0.1-0.2％。作为优选，所述摇瓶的转速为200转/min。作为优选，所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.5％-1.5％、蛋白胨1％-2％、玉米浆0.5％-1.0％、磷酸二氢钾0.03％-0.05％、硫酸锌0.02％-0.07％、氯化镁0.04％-0.08％，其余为水。

作为优选，当选择厌氧菌种时，在厌氧条件下于25-40℃密封静置培养15-40天，或发酵温度为28-35℃、30-32℃或31℃，发酵时间为21-35天、25-28天或27天。

进一步优选，当选择好氧菌种时，在通气条件下于22-35℃发酵7-30天，或发酵温度为25-30℃或28℃，发酵时间为14-25天或18-22天或20天。所通气体为无菌空气，通气量为2.5-5.0L/min。

更进一步优选，所述发酵分阶段进行，第一阶段为好氧发酵，选择好氧菌种，发酵温度为22-35℃，无菌空气通气量为2.5-5.0L/min，好氧发酵时间为7-30天；第二阶段转为厌氧发酵，选择厌氧菌种，关闭通气，控制发酵温度为25-40℃，厌氧发酵时间为15-40天。

(5)抽取发酵后的液体，经过滤后得到锁阳酵素。

固体发酵方法：

将发酵菌种接种于含有固体培养基的发酵基质后在一定条件下发酵。

用于本发明的固体发酵菌种包括但不限于酵母菌、乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、芽孢杆菌、双岐杆菌、米曲霉、蜜环菌、虫草菌、灵芝菌、朱红菌等一种或多种能够用于食物或药物发酵的菌种。

用于本发明固体发酵的培养基是用于食物或药物常见的培养基如包括但不限于麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基等。所述培养基中可以加入糖类、氮源和无机盐。所述糖类包括们不限于白糖、红糖、低聚糖类、糖醇类、冰糖、蜂蜜等。作为优选，所述糖类的加入量为原料总重量的0-8％。所述氮源包括但不限于酵母粉、蛋白胨、黄豆饼粉、玉米浆、鱼粉、蚕蛹粉、麸皮等。作为优选，所述氮源的加入量为原料总重量的0-10％。所述无机盐包括但不限于硫酸铵、氯化锰、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等。作为优选，所述无机盐的加入量为原料总重量的0-3％。优选地，在发酵过程中，根据菌种的不同分阶段植入培养基。

用于本发明固体发酵的方法包括如下步骤：

(1)对原材料进行杀菌处理，此处的杀菌处理包括低温杀菌、射线杀菌、化学杀菌等不破坏原材料品质的杀菌处理方法；

(2)制备培养基：采用本领域常规方法制备各种液体发酵培养基，包括但不限于麦芽汁固体培养基、水果培养基、谷物培养基。

作为优选，所述麦芽汁固体培养基是将麦芽经过筛选、清洗、干燥，制得的干麦芽经糖化、糊化、过滤等工序，最后加入琼脂制成。作为优选，所述麦芽为大麦麦芽或小麦麦芽。作为优选，所述干燥为晒干或烘干。作为优选，所述糖化采用酸法、酶法或酸酶结合法糖化。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5％(g/100mL)，或2-4％(g/100mL)、或3％(g/100mL)。

作为优选，所述水果培养基是取水果可食用部分，经清洗、打浆(加水或不加水)、过滤、浓缩，最后加入琼脂制得。作为优选，所述浓缩至浆液中固含量为3-15％(g/100mL)、或5-10％(g/100mL)、或8％(g/100mL)。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5％(g/100mL)，或2-4％(g/100mL)、或3％(g/100mL)。

作为优选，所述谷物培养基是将谷物去杂、清洗、研磨后，加水煮沸、过滤，加入琼脂而得。作为优选，所述琼脂的加入量为1-5％(g/100mL)，或2-4％(g/100mL)、或3％(g/100mL)。

作为优选，所述培养基在使用前需经灭菌处理。

作为优选，所述麦芽汁固体培养基适于仅以中药材为发酵基质；当发酵基质中含有水果时可以选择水果培养基；如果发酵基质中含有谷物类物质时可以选择谷物培养基。这种原则仅做一般性指导，当发酵基质中碳水化合物和水含量足够用于发酵菌生长时，则可以使用发酵基质作为培养基。

(3)制备发酵基质：在灭菌培养基中，加入锁阳原料，优选加入切成适宜大小的片状、条状或粒状的锁阳原料。作为优选，所述锁阳原料的加入最为培养基的0.3-8％(w/w)、或1-5％(w/w)、或2.5％(w/w)。进一步优选加入其他中药材粉末，更进一步优选加入谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物等其中的一种或多种。其他中药材或谷物、蔬菜、食用菌、坚果、海底植物可以粉末形式依据常规用量加入，一般为0-10％(w/w)。

(4)菌种植入并发酵：将选择的菌种进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。作为优选，所述菌种为厌氧菌种、好氧菌种或厌氧与好氧菌种兼用。所述厌氧、好氧菌种的植入量为发酵基质5-16％(w/w)，或8-12％(w/w)、或10％(w/w)。作为优选，所述扩大培养包括固体斜面培养、摇瓶培养和/或种子罐培养。作为优选，所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖2-4％、蛋白胨1-3％、豆粉1-2％、琼脂2-4％、硫酸镁0.05-0.08％、磷酸二氢钾0.2-0.3％、氯化钠0.1-0.3％。作为优选，所述摇瓶培养的培养基包括葡萄糖2-3％，蛋白胨1-4％，豆粉0.5-2％，麸皮0.5-2％，硫酸镁0.01-0.1％，磷酸二氢钾0.1-0.4％、磷酸氢二钾0.1-0.2％。作为优选，所述摇瓶的转速为200转/min。作为优选，所述种子罐培养的培养基为牛肉膏0.5％-1.5％、蛋白胨1％-2％、玉米浆0.5％-1.0％、磷酸二氢钾0.03％-0.05％、硫酸锌0.02％-0.07％、氯化镁0.04％-0.08％，其余为水。

作为优选，当选择厌氧菌种时，在厌氧条件下于25-40℃密封静置培养15-40天，或发酵温度为28-35℃、30-32℃或31℃，发酵时间为21-35天、25-28天或27天。

进一步优选，当选择好氧菌种时，在通气条件下于22-35℃发酵7-30天，或发酵温度为25-30℃或28℃，发酵时间为14-25天或18-22天或20天。所通气体为无菌空气，通气量为2.5-5.0L/min。

更进一步优选，所述发酵分阶段进行，第一阶段为好氧发酵，选择好氧菌种，发酵温度为22-35℃，无菌空气通气量为2.5-5.0L/min，好氧发酵时间为7-30天；第二阶段转为厌氧发酵，选择厌氧菌种，关闭通气，控制发酵温度为25-40℃，厌氧发酵时间为15-40天。

(5)收集培养基，获得本发明锁阳酵素。

锁阳和/或锁阳提取物和/或锁阳生物酵素在化妆品组合物中使用，所述组合物局部应用，在皮肤上产生抗衰老效果，例如弹性蛋白酶的抑制和清除自由基，用于提供抗衰老和抗氧化效果。本发明的锁阳和/或锁阳提取物和/或锁阳生物酵素可用于任何形式的化妆品组合物，其含量于要实现的想要的益处以及组合物的类型(例如：乳膏、霜剂、凝胶、洗剂、喷雾制剂、乳液、混悬液或液体制剂)，应该是安全的和有效量的，而优选的含量的使用范围是在基于锁阳为0.01％和25％之间，进一步优选0.05-10％，更进一步优选0.1-3％。

在一个优选的实施方案中，在用于弹性蛋白酶抑制和清除自由基的化妆品配方中，使用的锁阳生物酵素在0.01％至约15％之间。

在一个特别优选的实施方案中，锁阳的提取物与锁阳的生物酵素混合，并保存形成用作为化妆品活性成分的混合物，其甚至产生更有效的抗衰老和抗氧化效果。在一个优选的实施方案中，锁阳生物酵素和锁阳取物以30∶70的比例混合。在另一个实施方案中，锁阳提取物和锁阳生物酵素不混合成一种活性成分，而在最终的化妆品化合物的配制中组合使用，提供增强的抗衰老和抗氧化效果。

如前所述，本发明的提取物和生物酵素作为化妆品组合物中的活性成分是特别有效的。这些化妆品组合物可以由本领域技术人员以常规方法处理，并适合化妆品用途。特别地，组合物优选适合用于有皱纹的、有线纹的、粗糙的、干燥的、易起屑的、衰老的和/或UV-损伤的皮肤，从而改善皮肤的外观和触感，以及用于健康的皮肤，从而预防或延缓皮肤的退化。

本发明的化妆品组合物还可以包含多种在化妆品领域使用的添加剂。CTFA化妆品成分手册(CTFACosmeticIngredientHandbook)描述了大量本领域技术人员常规使用的非限制性化妆品成分，它们适合在本发明的化妆品组合物中使用。这类成分类型的实例包括：研磨剂、乳化剂、吸收剂、胶凝剂、防泡剂、缓冲剂、着色剂、成膜材料、pH调节剂、湿润剂、增稠剂和色素。还认识到，基于意在通过组合物产生的想要的整体效果，本发明的化妆品组合物还可以使用其他的化妆品活性成分，例如：抗-痤疮活性物(例如：水杨酸或过氧化苯甲酰)，抗皱活性物(例如：类视黄醇或β-羟酸)，抗氧化剂(例如：抗坏血酸及其衍生物，或茶叶提取物)，螯合剂(例如：糠偶酰二肟)，抗炎剂(例如：皮质类同醇)，减肥剂(例如：咖啡因)，皮肤增光剂(例如：桑椹提取物或曲酸)，或防晒剂(例如：名为PARSOI，的可商购产品)。

一般通过本领域已知的制备化妆品组合物的常规方法来制备本发明的组合物。此类方法一般涉及在一个或多个步骡中混合成分，成为相对均一的状态，其中有或没有加热、冷却、使用真空等。组合物可以是任何常规的形态，例如乳膏、霜剂、凝胶、洗剂、喷雾制剂、乳液、混悬液或液体制剂。

在任何化妆品组合物的给定配方中，根据本发明锁阳或其提取物或生物酵素的量的上下限都是基于化妆品组合物的想要的效果，配方的其它组分、组合物类型、成本和实用性。然而，基于总重量，锁阳或其提取物或生物酵素的量优选的包括在约0.05％和约10％之间，更优选的在约0.1％和3％之间。

本文中描述的化妆品组合物作为用于治疗具有衰老迹象的皮肤的美容治疗方法的一部分是特别有效的，其中，向需要此类治疗的皮肤施用。

此类组合物，进行改善此类皮肤状况所需的持续时间。虽然此类持续时间根据此类化妆品组合物的效果而变化，优选的每天向皮肤应用至少一次化妆品组合物。

下列实施例进一步描述和示例了本发明，不应视为对本发明的限制。

实施例1锁阳提取物

将新鲜的锁阳在40℃下进行干燥，干燥后的锁阳粉碎过20-30目筛网，用8倍量锁阳重量的质量浓度为70％的乙醇浸泡0.5小时，回流提取3次，第一次1.5小时，第二次1小时，第三次0.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得锁阳提取物浓缩液。

实施例2：锁阳生物酵素

(1)取新鲜的锁阳净选后打磨成浆液，低温杀菌处理。

(2)麦芽汁培养基的制备：将大麦麦芽经过筛选、清洗、自然晒干，制得干麦芽经酸法糖化、糊化、过滤等工序而成；并加入3％的葡萄糖，灭菌。

(3)制备发酵基质：在上述灭菌麦芽汁培养基中，加入步骤(1)所得的锁阳浆液，所述锁阳浆液的加入量为培养基的3％(v/v)。

(4)菌种植入并发酵：选择乳酸菌为发酵菌种，经固体斜面培养进行扩大培养后，植入所述发酵基质中进行发酵。所述固体斜面培养的培养基组成包括葡萄糖3％、蛋白胨2％、豆粉1％、琼脂3％、硫酸镁0.1％、磷酸二氢钾0.1％、氯化钠0.5％。所述乳酸菌的植入量为发酵基质8％(w/w)。所述发酵是在厌氧条件下于30℃密封静置发酵40天。

(5)抽取发酵后的液体，经过滤后得到锁阳酵素。

实施例3：抗氧化测试

利用ABTS总抗氧化能力测试(ABTSTotalAntioxidantCapacityTcst)检测锁阳粉末、实施例1的提取物和实施例2的生物酵素，所述测试测量给定量的测试样品清除过量的ABTS(2，2′-连氮二-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基正离子的程度。在测试前，通过过滤(0.2μm孔径)和/或离心从样品中去除任何不溶性物质。在完成测试后，进行计算并以等价量的标准抗氧化剂Trolox(α-生育酚的水溶性类似物)来表示所述能力。该检测是确定测试样品的“总抗氧化能力”的标准方法。

通过将等份的测试物按不同浓度与含有固定量的ABTS⁰⁺的反应混合物混合，来实施检测。在20分钟反应期结束时，通过测量ABTS⁰⁺在734nm的吸光值，确定剩余的未清除的ABTS⁰⁺。在每个检测中都包括了Trolox作为样品，作为为了以“Trolox当量”表示测试样品的抗氧化能力的标准。特别地，每种未知样品的抗氧化能力用与20μMTrolox等价的浓度(％v/v)表示。下表1中显示了各样品的Trolox等价。表1中具有最低等价浓度的样品具有最大的清除能力。表1中的等价浓度代表终点时的总清除能力(热力学参数)。

表1：关于各样品自由基清除能力，与200μMTrolox等价的各测试样品的％v/v浓度

样品	200μM Trolox等价的％v/v浓度
		锁阳粉	1.76
锁阳提取物	2.01
		锁阳生物酵素	2.35

锁阳粉、锁阳提取物以及锁阳生物酵素均有清除自由基的功效。

实施例4：抗衰老测试：弹性蛋白酶抑制实验。

锁阳粉的10％w/w水溶液

锁阳提取物的5％w/w水溶液

锁阳酵素的5％w/w水溶液

20％的5％锁阳提取物+80％的5％锁阳酵素

利用Whatman1微米滤纸过滤样品，并利用0.8和0.2微米过滤进一步澄清。

测试中的阳性活性证实测试物的抗衰老活性，根据人白细胞弹性蛋白酶对显色肽底物的切割速率而实施测试，以每个样品的IC₅₀值表示，其表示抑制人白细胞弹性蛋白酶达50％的测试样品的浓度，较低的IC₅₀值表示具有更高的弹性蛋白酶抑制作用。

在多孔板中生长人真皮成纤维细胞，然后用不同的测试物干预刺激，在孵育3天后，通过ELISA测量分泌到生长培养基中的I型胶原的量，用相对于来自未刺激细胞的培养基中检测的百分比来表示每种测试条件下存在的胶原的量。

根据上述测试方法，滤出物的弹性蛋白酶抑制作用如下表。

表2：对于白细胞弹性蛋白酶的抑制作用的IC₅₀值：

由上表的实验结果显示，锁阳及其提取物和生物酵素均有较好的抗氧化和抗衰老活性，在抗衰老活性中，弹性蛋白酶的抑制活性明显，尤其是锁阳酵素以及锁阳提取物与锁阳生物酵素的混合物显示出非常明显的弹性蛋白酶抑制作用。

实施例5：化妆品组合物

下表实施例示例了本发明的皮肤护理组合物，组合物以常规方式处理，适合美容用途。

表3本发明的皮肤护理乳液

表4本发明的洗面组合物

表6本发明的护肤膏霜

应该理解，本文中例举和描述的发明的特定实施方案仅意在示范，可以修饰和以不同但等价的方式实践本发明，具有本文教导的益处，这对本领域技术人员是显而易见的。因此很明显，上文公开的特定实施方案是可以改变或修饰的，所有此类变体都认为在本发明的范围和精神内。

Claims (8)

1.一种化妆品组合物，其包含锁阳或其衍生物和化妆品可接受的赋形剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其中锁阳衍生物包括锁阳提取物和锁阳生物酵素。

3.如权利要求1所述的组合物，其中锁阳或其衍生物的含量为0.01-25％。

4.如权利要求1所述的组合物，所述组合物是乳膏、霜剂、凝胶、洗剂、喷雾制剂、乳液、混悬液或液体制剂。

5.一种化妆品活性成分，其包含锁阳及其衍生物。

6.如权利要求5所述的活性成分，其中锁阳衍生物包括锁阳提取物和锁阳生物酵素。

7.锁阳或其衍生物用于制备改善皮肤状态的化妆品中的用途。

8.如权利要求7所述用途，其中锁阳衍生物包括锁阳提取物和锁阳生物酵素。