CN105256062B - 与颅内动脉瘤相关的微小rna - Google Patents

Abstract

本发明公开了miR‑193b在制备颅内动脉瘤诊断工具中的应用。本发明利用测序和QPCR实验证明miR‑193b在正常对照组织和颅内动脉瘤组织中的表达存在差异，因此认为miR‑193b是诊断颅内动脉瘤的分子标志物。本发明通过体外培养的细胞实验证明miR‑193b的表达可以抑制与颅内动脉瘤发生相关的细胞凋亡过程，因此认为miR‑193b是治疗颅内动脉瘤的药物靶标。作为一种新的颅内动脉瘤诊治分子标志物，该分子标志物在临床上具有广泛的应用前景。

Description

与颅内动脉瘤相关的微小RNA

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及miR-193b在诊治颅内动脉瘤中的用途。

背景技术

颅内动脉瘤(Intracranial Aneurysm)是指多种因素造成的颅内动脉壁结构破坏，进而导致的动脉壁异常膨出。颅内动脉瘤发病率较高，尸体解剖检出率约为1-5％。颅内动脉瘤破裂出血后30天的死亡率达45％，存活者中30％存在不同程度的残疾，严重威胁人类的生命健康。然而，关于颅内动脉瘤的发病机制并不明确，其可能与遗传、高血压、血流动力学、获得性血管壁损伤有关。

微小核糖核酸，英文名为microRNA，是一类长约19至23个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子。它们在进化上高度保守，并与动物的许多正常生理活动，如生物个体发育、组织分化、细胞凋亡以及能量代谢等密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。最近的研究发现慢性淋巴细胞性白血病以及Burkitt淋巴瘤中的几种微小核糖核酸的表达水平均有不同程度的下调(Lawrie CH，Gal S，Dunlop HM et al.Detection ofelevated levels of tumor-associated microRNAs in serum of patients withdiffuse large B-cell lymphoma.Br J Haematol2008；141：672-675)；分析比较人肺癌、乳腺癌组织中的微小核糖核酸表达时，发现有若干组织特异性微小核糖核酸的表达水平相对于正常组织发生了变化(Garofalo M，Quintavalle C，Di Leva G etal.MicroRNAsignatures of TRAIL resistance in human non-small cell lung cancer.Oncogene2008)。也有研究证明微小核糖核酸影响了心肌肥厚、心衰、动脉粥样硬化等心血管疾病的发生和发展，并且与II型糖尿病等代谢性疾病有密切关联(Tryndyak VP，Ross SA，Beland

FA，Pogribny IP.Down-regulationof the microRNAs miR-34a，miR-127，andmiR-200b in rat liver during hepatocarcinogenesis induced by a methyl-deficient diet.Mol Carcinog.2008 Oct21)。这些实验结果提示微小核糖核酸表达及特异性变化与疾病发生和发展之间存在着必然联系。

由于微小核糖核酸在基因转录后的表达调控中起着超乎想象的重要作用，因此它与疾病存在以下的关联性：首先，微小核糖核酸的变化可能是病因，这是因为疾病的抑制因子以及促进因子都可能是微小核糖核酸的靶位点，当微小核糖核酸本身先发生了紊乱表达，比如本来抑制疾病促进因子的微小核糖核酸表达量降低了，或者抑制疾病抑制因子的微小核糖核酸表达量升高了，其最终结果都会导致下游一系列基因表达的变化以及某些通路的整体紊乱，进而诱发疾病发生；其次，微小核糖核酸的变化也可能是疾病的结果，这是因为当疾病(如癌症)发生时，会导致染色体片段的丢失、基因的突变或者染色体片段的剧烈扩增，若微小核糖核酸正好位于这一变化区段内，那么其表达量将发生极其显著的变化。

因此，理论上微小核糖核酸分子完全可以作为一类新的疾病标记物，它的特异性变化必然与疾病产生发展相关联。同时微小核糖核酸还可以作为潜在的药物作用靶点，通过抑制疾病过程中上调的微小核糖核酸或过表达下调的微小核糖核酸，将有可能极大地缓解疾病的发生和发展。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种可用于早期诊断颅内动脉瘤的微小RNA标记物。

本发明的目的之二在于提供上述微小RNA的用途。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了一种微小RNA在制备颅内动脉瘤诊断工具中的应用，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR-193b。

应当知道，本发明的微小RNA包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示完整微小RNA核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。

本领域人员应该了解，为了保证微小RNA的稳定性，可以在微小RNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对微小RNA碱基进行修饰，但是上述修饰不影响微小RNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miR-193b功能的条件下，对miR-193b进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本发明的保护范围之内。

在本发明的一些具体的实施方式中，所述miR-193b是成熟miR-193b。

虽然在某些具体实施方式中所使用的是成熟miRNA，但是本领域技术人员可以预期，初始miRNA、前体miRNA将可以获得与成熟miRNA同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA、前体miRNA加工为成熟miRNA。

本发明的微小RNA核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟miRNA主要呈单链形式，而前体miRNA是部分自互补的，以形成双链结构。本发明的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。

进一步，上述诊断工具包括但不限于，芯片、试剂盒、试纸、高通量测序平台。所述诊断工具包括用于检测miR-193b的表达水平的试剂。

进一步，所述试剂盒包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR-193b的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR-193b的引物和/或探针。

本发明提供了一种颅内动脉瘤的诊断工具，所述诊断工具包括检测miR-193b表达水平的试剂。

进一步，所述诊断工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。

进一步，所述试剂盒包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR-193b的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR-193b的引物和/或探针。

进一步，所述试剂盒中的针对miR-193b的引物和/或探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于检测前面所述的微小RNA表达水平的引物和/或探针。将多种微小RNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种微小RNA指标联合诊断颅内动脉瘤的情况也包含在本发明的保护范围之内。

进一步，所述芯片上固定的所述寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于检测miR-193b的表达水平的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一芯片上通过检测多种miRNA指标联合诊断颅内动脉瘤也包含在本发明的保护范围之内。

进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。

所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本发明的miRNA芯片。如果核酸不含氨基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》；J.L.erisi，V.R.Iyer，P.O.BROWN.Exploring the metabolic and genetic control of geneexpression on a genomic scale.Science，1997；278：680和马立人，蒋中华主编.生物芯片.北京：化学工业出版社，2000，1-130。

本发明的miR-193b可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达miR-193b的DNA片段的载体转染细胞获得。所述载体包括病毒载体、真核载体。

病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。

真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEF Bos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。

可以表达微小RNA的DNA片段可以通过如下方式获取：从miRNA数据库中(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)寻找微小RNA在基因组上的位置及具体序列信息，根据基因组序列确定初始miRNA的位置，在初始miRNA位置的上下游500-800bp区间内设计特异性引物，扩增引物中间的序列即可获得表达微小RNA的DNA片段。

药物筛选：在得知了前面所述的miR-193b与颅内动脉瘤的密切相关性后，可以基于该特征来筛选促进miR-193b表达的物质。之后，可从所述的物质中找到对于治疗颅内动脉瘤真正有用的药物。

因此，本发明还提供了一种筛选治疗颅内动脉瘤的潜在物质的方法，所述的方法包括：用候选物质处理颅内动脉瘤相关细胞体系，若所述候选物质可促进前面所述的miR-193b的表达或活性，则表明该候选物质是治疗颅内动脉瘤的潜在物质。所述细胞体系可以是亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系(如动物模型，优选非人哺乳动物的动物模型，如鼠、兔、羊、猴等)等。优选地，对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以进一步选择和确定对于治疗颅内动脉瘤真正有用的物质。

本发明还提供了miR-193b在制备治疗颅内动脉瘤的药物中的应用。

进一步，所述药物组合物包括有效剂量的促进剂。所述促进剂能够促进miR-193b的表达、或能够促进miR-193b的活性、或能够促进miR-193b的有效作用时间、或能够促进miR-193b的稳定性。所述促进剂的靶标不限于miR-193b本身，还包括miR-193b的上下游，例如：编码miR-193b的基因组序列，miR-193b的靶基因、调控miR-193b的蛋白或者基因。

进一步，miR-193b促进剂包括蛋白、寡核苷酸、小分子化合物、寡核苷酸表达载体。

所述用于寡核苷酸表达的载体包括病毒载体、真核载体。

病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、甲病毒载体。

真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEF Bos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pBin438、pCAMBIA1301等。

优选地，所述miR-193b促进剂是miR-193b本身或者miR-193b序列的表达载体。

本发明的治疗颅内动脉瘤的药物还包含药物学上可以接受的载体，所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。

所述药物可以制成包括但不限于显微注射剂、适于转染的剂型、注射液、片剂、粉剂、粒剂、胶囊剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

所述药物可以单独施用；或者与其他能够治疗颅内动脉瘤的药物进行组合施用。

所述药物可以离体施用：将miR-193b的表达载体在体外导入或转染人体自身或异体细胞(或异种细胞)，经体外细胞扩增后，输回人体。

所述药物可以体内施用：将miR-193b的表达载体直接导入体内。这种载体可以是病毒型或非病毒性，甚至是裸DNA或RNA。

所述的受试者可以是人类或者其他哺乳动物。更具体地，受试者是器官、组织、细胞。

本发明使用的“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本发明所述的miR-193b的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述miRNA促进剂的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。

分析miRNA表达谱的方法包括但不限于以下几种：反转录聚合酶链式反应方法(RT-PCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应方法(Real-time PCR)、Northern印迹杂交方法(Northern blotting)、核糖核酸酶保护分析方法(RNase protection assay)、Solexa测序技术(Solexa sequencingtechnology)和生物芯片。在本发明的具体实施方式中，采用了Solexa测序技术。

本发明中使用的“微小RNA”与“miRNA”通用。

本发明中使用的“诊断颅内动脉瘤”包括对颅内动脉瘤的预判，即判断受试者是否存在患有颅内动脉瘤的风险，也包括对颅内动脉瘤的诊断，即判断受试者是否已经患有颅内动脉瘤，也包括对颅内动脉瘤预后的判断，即判断受试者是否存在复发的可能性或者判断受试者已经复发。

本发明中使用的“治疗颅内动脉瘤”包括疾病的治愈、疾病的好转。

本发明使用体外培养的血管平滑肌细胞来研究对颅内动脉瘤的治疗作用。本领域技术人员可知，颅内动脉瘤发生的一个重要的生理特征在于血管平滑肌细胞的凋亡加剧，因此本发明利用血管平滑肌细胞的凋亡实验来研究miR-193b与颅内动脉瘤治疗的关系。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了miR-193b与颅内动脉瘤相关，通过检测受试者miR-193b的表达，可以判断受试者是否患有颅内动脉瘤、或者判断受试者是否存在患有颅内动脉瘤的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。

本发明发现了一种新的分子标记物-miR-193b，相比传统的检测手段，微小诊断更及时、更特异、更灵敏，能够实现颅内动脉瘤的早期诊断，从而降低颅内动脉瘤的死亡率。

附图说明

图1显示利用QPCR检测miR-193b在颅内动脉瘤组织中的表达情况；

图2显示利用QPCR检测anti-miR-193b对miR-193b表达的干扰情况。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述本发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。下述实施例中，若非特意表明，所用的试剂均为分析纯，所用试剂均可从商业渠道获得。文中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著的科学出版社2002年出版的《分子克隆实验指南》一书中所述的条件，或按照制造商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。

实施例1 Solexa测序筛选与颅内动脉瘤相关的miRNA

1、样本获取：收集8例颅内动脉瘤患者，手术夹闭瘤颈后切除动脉瘤标本，去除粘连组织及附壁血栓，立即投入液氮中保存。取8例脑外伤患者的颞浅动脉，投入液氮中保存作为正常对照组织。样本收集时均得到患者及其家属同意。

2、RNA提取：将碾杵和匀浆器等器皿在200℃干烤4h，去除RNA酶，冷却；加入液氮中预冷，将组织从液氮中迅速取出，碾成粉末；用刮匙将组织放入预先加入TRIzol试剂的匀浆器中，匀浆数分钟；将匀浆后的液体转入无RNA酶的离心管中，加入氯仿后，4℃离心分层；将上层水相转入一无RNA酶的离心管中，加入氯仿后，4℃离心分层；将上层水相转入一无RNA酶的离心管中，加异丙醇，4℃离心沉淀RNA；用75％乙醇洗涤沉淀2次；用无RNA酶的去离子水溶解沉淀。抽提的RNA进行质量鉴定(用安捷伦2100测定RNA浓度、纯度和完整性)。质量鉴定好的RNA存放在-80℃冰箱待用。

3、反转录：利用TaKaRa公司的反转录试剂盒(One Step PrimeScript miRNA cDNASynthesis Kit)构建两种组织的cDNA文库，根据试剂盒的说明进行反转录。

4、将反转录后的样品利用Solexa方法测序(Solexa测序由华大基因公司完成)。

5、结果：

分析Solexa方法测序结果，miR-193b在正常对照组织和颅内动脉瘤中存在差异表达，在颅内动脉瘤组织miR-193b的水平显著降低。

实施例2 QPCR验证差异表达的miR-193b

1、样本收集：实施例1的检测结果选择miR-193b进行大样本QPCR验证。按照实施例1中的样本收集方式选择正常对照组织和颅内动脉瘤组织各40例。

2、RNA提取：将碾杵和匀浆器等器皿在200℃干烤4h，去除RNA酶，冷却；加入液氮中预冷，将组织从液氮中迅速取出，碾成粉末；用刮匙将组织放入预先加入TRIzol试剂的匀浆器中，匀浆数分钟；将匀浆后的液体转入无RNA酶的离心管中，加入氯仿后，4℃离心分层；将上层水相转入一无RNA酶的离心管中，加入氯仿后，4℃离心分层；将上层水相转入一无RNA酶的离心管中，加异丙醇，4℃离心沉淀RNA；用75％乙醇洗涤沉淀2次；用无RNA酶的去离子水溶解沉淀。抽提的RNA进行质量鉴定(用安捷伦2100测定RNA浓度、纯度和完整性)。质量鉴定好的RNA存放在-80℃冰箱待用。

3、逆转录：

采用TAKARA公司的反转录试剂盒(DRR047)，对1μg RNA进行反转，该试剂盒较传统反转录试剂盒增加了去除基因组DNA的步骤，可在最大程度上保证RNA的纯度和扩增的特异性。反应体系和反应条件参照试剂盒说明书进行。

4、QPCR反应：

以cDNA为模板，使用针对目标miRNA的PCR引物及Takara的SYBR(R)Premix ExTaqTM荧光定量PCR体系，在stratagen MX3000P定量PCR仪上进行扩增，并测得样品的Ct值。将所得Ct值通过代入测定标准曲线得出的公式，采用绝对定量的计算方法得出样品中的目标miRNA的含量。U6基因作为内照对miRNA qPCR检测结果进行标准化校正。

针对miR-193b的引物如下：

正向引物为5’-AACTGGCCCTCAAAGTCCCGCT-3’(SEQ ID NO.1)，

反向引物为通用反向引物(购自北京旷博生物技术有限公司)。

针对U6的引物如下：

正向引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’(SEQ ID NO.2)，

反向引物：5’-ACGCTTCACGAATTTGCGT-3’(SEQ ID NO.3)。

5、结果

如图1所示，与正常对照组织相比，颅内动脉瘤组织中miR-193b的表达水平显著降低，与Solexa测序结果一致。

实施例3 干扰miR-193b表达

1、设计合成针对miR-193b的反义寡核苷酸(anti-miR-193b)

在miRNA数据库(http://www.sanger.ac.uk)中找到miR-193b的序列信息，根据miR-193b的序列信息由大连宝生物生物技术有限公司设计合成anti-miR-193b和随机对照序列(anti-miR-NC)。

2、细胞培养

将血管平滑肌细胞HA-VSMC，用浓度10％小牛血清的高糖1640培养基于37℃、浓度5％CO₂的细胞培养箱中培养，每2d换液1次，取3-8代细胞进行试验。

3、细胞转染

将血管平滑肌细胞分为2组，分别为对照组(anti-miR-NC组)、miR-193b干扰组(anti-miR-193b组)，将血管平滑肌细胞细胞运用转染试剂LipofectamineTM2000进行转染，转染方法参照说明书。反义寡核酸的工作浓度均为5μM。转染后72h收集各组细胞用于后续实验。

4、QPCR实验

细胞总RNA提取和PCR步骤同实施例2。

5、结果

如图2所示，与anti-miR-NC组相比，anti-miR-193b组的细胞内miR-193b的水平显著下调，表明干扰miR-193b表达成功。

实施例4 干扰miR-193b表达对血管平滑肌细胞凋亡的影响

1、细胞培养和转染

步骤同实施例3。

2、凋亡实验：细胞转染72h后，使用预冷PBS洗涤细胞，然后用0.25％胰酶消化细胞，中止消化，将离心收集的细胞使用PBS重悬，将细胞定量为1×10⁶个/ml，取200μL上述细胞悬液放置到Appendorf管中，加入10μL Annexin-V-FITC混匀，室温暗处孵育染色15min，上机前5min加入10mg/L碘化丙锭(PI)染色5μL。未转染的细胞分别用Annexin-V-FITC和PI染色用于标准定量。用FACS流式细胞仪进行双色荧光细胞流式计数，观察凋亡细胞百分比。

3、统计学方法

实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用的t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

4、结果：

anti-miR-NC组的细胞凋亡率为(6.71+0.17)％，anti-miR-193b的细胞凋亡率为(36.24+2.03)％，上述差异具有统计学意义(P<0.05)，上述结果表明，降低miR-193b表达则会导致细胞凋亡加剧，给予我们的启示是可以通过增加miR-193b表达的方式来抑制细胞凋亡。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.检测微小RNA表达量的试剂在制备颅内动脉瘤诊断工具中的应用，其特征在于，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR-193b。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微小RNA是成熟miR-193b。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断工具包括检测权利要求1所述的微小RNA表达水平的试剂。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述诊断工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括针对权利要求1所述的微小RNA的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体，以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于权利要求1所述的微小RNA的部分或全部序列；所述试纸包括针对权利要求1所述的微小RNA的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对权利要求1所述的微小RNA的引物和/或探针。

7.微小RNA在制备治疗颅内动脉瘤的药物中的应用，其特征在于，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR-193b。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物包含所述微小RNA的促进剂。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述促进剂能够促进所述微小RNA的表达、或者能够促进所述微小RNA的稳定性、或者能够促进所述微小RNA的活性、或者能够促进所述微小RNA的有效作用时间。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述促进剂选自以下组：蛋白、寡核苷酸、小分子化合物、寡核苷酸表达载体。