CN105242051A - 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂 - Google Patents

基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂 Download PDF

Info

Publication number
CN105242051A
CN105242051A CN201510608171.7A CN201510608171A CN105242051A CN 105242051 A CN105242051 A CN 105242051A CN 201510608171 A CN201510608171 A CN 201510608171A CN 105242051 A CN105242051 A CN 105242051A
Authority
CN
China
Prior art keywords
igfbp
conversion luminescence
reaction
growth factor
reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510608171.7A
Other languages
English (en)
Inventor
罗朝领
董敏
卢荣春
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI KAIJING BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
SHANGHAI KAIJING BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI KAIJING BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical SHANGHAI KAIJING BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201510608171.7A priority Critical patent/CN105242051A/zh
Publication of CN105242051A publication Critical patent/CN105242051A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于上转换发光检测人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)的检测系统，利用反应杯检测系统进行检测。反应杯检测系统包括载体板、反应测试杯、荧光检测仪。反应检测杯由反应检测杯、试管盖组成。滴加样本到反应检测杯中进行检测，反应5-15min将载体板取出插入荧光检测仪的卡槽中读取数值。本发明的特点是：结合上转换发光检测人IGFBP-1，其背景值低、测量便捷、准确、操作简单；数据采用wifi传输，医生可以快速获得检测结果以达到快速诊断。

Description

基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)芯片检测系统及试剂
技术领域
本发明涉及一种免疫检测系统和试剂检测人IGFBP-1，是一种通过上转化发光方法检测的装置，本发明属于医疗产品领域。
背景技术
胎膜早破是指在临产前胎膜自然破裂，它是围生期最常见的并发症，可导致早产率升高，围生儿病死率增加，宫内感染率及产褥感染率升高。
类胰岛素生长因子结合蛋白（IGFBPs）家族是一组可特异地限制调节类胰岛素生长因子I、II（IGF-I、II）的可溶性蛋白质，它包括6种IGFBP，分别依次命名为IGFBP1-6，但生理特征各不相同。IGFBP1由234个氨基酸组成，它以磷酸化、部分磷酸化以及非磷酸化等形式存在。IGFBP-1作为一种内自分泌和旁分泌因子，在女性生殖系统中起重要作用，特别是对排卵、受精卵着床到胎儿分娩过程。
首先，IGFBP-1用于胎膜早破的诊断。羊水中非磷酸化IGFBP-1浓度比母体血清高100-1000倍，且不受宫颈粘液、尿液及精液的影响。故非磷酸化IGFBP-1可用作胎儿早破的诊断指标。目前芬兰MecixBiochemica研制的actimPROM试纸条，用免疫层析法检测阴道样本中的非磷酸化IGFBP-1,该方法的阳性检出率为95.7%，阴性检出率为93.1%，对可疑病例敏感性、特异性分别为70.8%、88.2%，阳性预测率为92%。Rutamen用其检测怀疑胎膜早破者，阳性者有70.8%发生早产，比阴性者发生早产危险性高6.9倍。故用IGFBP-1诊断胎膜早破不但可以提高诊断的准确性和速度，降低胎膜早破的误诊率和宫内感染的发生率，还可以降低孕妇早产的风险，降低围产儿死亡率。目前临床常用的诊断胎膜早破么方法有硝嗪试纸和羊齿结晶实验，但均受尿液、精液、血液等的干扰，假阳性率高，且需大量的羊水，检测不出微小破裂。羊水中其它一些蛋白质包括催乳素、甲胎蛋白和胎儿纤维结合素（FFN）也曾被建议用作羊水标记物，但这些蛋白在羊水和血清之间低浓度梯度限制它们尤其在妊娠7-9个月时作为血性阴道分泌物中羊水标记物的价值。故用非磷酸化IGFBP-1检测胎儿早破优于其它方法。
其次，IGFBP-1可以预测分娩。研究表明临产胎膜完整妇女宫颈分泌物中有少量磷酸化IGFBP-1，且其非磷酸化结构与妊娠晚期蜕膜中类似，与羊水中的不同，说明胎膜完整。妇女宫颈分泌物中的IGFBP-1源于蜕膜，是在宫颈成熟时宫缩机械性压力、蛋白水解或局部炎症反应等作用下绒毛膜-蜕膜分离后从间质中漏出。Nuutila研究表明Bishop评分宫颈成熟妇女么宫颈分泌物IGFBP-1浓度明显高于宫颈未成熟妇女。因此它可作为分娩预测的指标。临床上常用的分娩预测方法为宫颈评分，但其存在较高的假阳性，特异性低。检测宫颈分泌物中FFN和IGFBP-1为预测分娩提供了更准确的方法。FFN局限于胎膜的绒毛膜层，与IGFBP-1一样在宫颈成熟绒毛与子宫下段的蜕膜分离是漏出，也曾被建议用于分娩预测。但与IGFBP-1比，FFN不足之处在于要受精液影响，假阳性率高，检测至少需2小时。因此，IGFBP-1更适用于临床预测分娩。
总之，IGFBP-1在排卵、受精卵着床、胎儿生长等过程中起重要作用，对其在各过程中的作用及其作用机理的深入研究在产科领域具有重要意义。
上转化发光颗粒UCP在标志物检测领域具有巨大潜能。上转化发光具有独特的光学特性，它具有以下特点：
1）灵敏度高：不受外界的背景干扰；
2）稳定性高：避免了样本腐蚀或自身衰变引发的淬灭现象；
3）灵活性高：可以组合多样化光谱；
4）安全性高：对于检测者、检测样品和环境都没有危害；
5）方便简易：可对样品直接进行检测，无需特殊处理；
以上特点决定其在生物标记物方面应用前景较广阔，尤其是在床旁检测领域。
免疫检测是测定一种特异蛋白的灵敏方法。典型的免疫检测方法包括：酶联免疫吸收分析（ELISA)以及免疫印迹法检测（westernblot），免疫检测的常规程序冗长费时、不易携带且成本较高。因此床旁检测是医学诊断领域的大势所趋，它的特点是快速、方便携带、操作简单。它不仅可以在医院使用，还可以在基层使用。因此一种基于上转化发光的人IGFBP-1芯片检测系统及试剂在临床检测领域具有重要的应用价值。
发明内容
针对以上存在的问题，本发明提供了免疫检测系统和试剂检测人IGFBP-1。本发明的特点是：结合上转换发光方法检测人IGFBP-1，以IGFBP-1作为标志物，其准确性和特异性更高；利用上转换发光方法测定，其背景值低，测量便捷、准确、操作简单。
其中一个优选的实施方案中：基于上转化发光的检测人IGFBP-1的反应杯系统，包括：载体板、反应检测杯、荧光检测仪。载体板上包被有待检测抗原鼠抗人IGFBP-1单抗。将反应杯中加入100微升标记了UCP颗粒的IGFBP-1单抗（浓度为1mg/ml），将试管盖中间有小孔的盖子盖在反应杯上，在冻干机中冻干。将载体板插入反应检测杯中，滴加100微升样本进行检测，样本可以直接与一抗及冻干液发生一步反应，反应5-15min将载体板取出插入荧光检测仪的卡槽中读取数值，将数值带入标准曲线中对样本浓度进行计算。直接打印检测结果，或者检测结果通过wifi传输到医院数据中心让医生直接调阅检测结果，到达快速检测，快速诊断的目的。而且该检测仪器轻便，不到1Kg，操作简便，一键出结果，可广泛适用于体检、120急诊、野外检测等环境。
所述的载体板是黑色聚苯乙烯板。长宽为6mmX10mm。其上有3X4个点，点间距为1.5mm，点直径为1.5mm。其上包被有鼠抗人IGFBP-1单抗。
在另一种优选的实施方案中，利用免疫层析试纸条检测系统进行检测。分析膜为硝酸纤维素膜，在试纸条前端包被兔抗羊IgG（1mg/ml）作为质控点；利用UCP标记IGFBP-1单抗，将UCP标记的IGFBP-1单抗浸润在玻璃纤维垫上，烘干。烘干后裁剪成长条。将硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫贴到底板上。结合垫上通过加样区将样品添加到加样垫上，结果判读处对应分析膜的检测带和质控带。
所述的荧光检测仪大小只有12cmX6cmX5.5cm，可以随意携带，方便操作。
附图说明
图1为试管立体图，为长方体，长宽高依次为10mmX4mmX40mm，底端有负压装置。
图2为试管正面图，内径为8mm。此侧管体距底部10mm为磨砂透明面。
图3为试管侧面图，内径为2mm。
图4插有塑料杆的盖子，盖子为长方形，上端有长方形片状把手，方便盖子开合，盖子中央下端连有宽约1-3mm杆子，杆子下端连有可以自由取下的黑色高吸附蛋白的聚苯乙烯板，此板为长方体，长宽高依次为6mmX0.5-1mmX10mm。
图5为中央带有小孔的盖子，盖子为长方形，中央留有直径为1mm的小孔，盖好盖子后，可以将液体试剂加入试管中在冻干机中进行冻干。
图6为黑色聚苯乙烯板生产时整体压制为A4纸大小，每个小片可以从整板上方便的拆下来。黑色聚苯乙烯板正面有3X4或者4X5个凹面小孔，孔径为1mm或者0.5mm。
图7为在板的上端后面有一扣眼，与杆子下端设计小扣，两者可以随意扣合及分。A为侧面图，B为正面图。
图8A为荧光检测装置。
图8B为屏幕，在激光灯一侧留有卡槽，如图9。
图9为卡板，可放置聚苯乙烯板。
图10为聚苯乙烯板取下后可放置在卡板上，然后将卡板放入卡槽中进行读数。
图11上转换发光免疫层析试纸条检测系统结构示意图，其中1为样品垫；2为结合垫；3为分析膜；4为吸水垫；5为粘性底衬；6为4种蛋白连接蛋白抗体UCP结合物；7为标记蛋白
图12为将样品加入装有UCP颗粒标记的抗体冻干粉反应杯
图13为将载体板插入反应杯，其中装有样品及抗体冻干粉
图14为反应结合示意图，样品中的抗原与载体板上的抗体及标记UCP颗粒的抗体发生一步反应。
具体实施方式
具体实施一：反应杯检测系统
1.如图1管体内加入UCP颗粒标记的IGFBP-1溶液共100微升（浓度均为1mg/ml），盖上如图5中间有圆孔的盖子，放入冻干机内在-50℃条件下冻干。
2.如图6黑色聚苯乙烯上固定有12-20个点的蛋白，加在如图6的凹面小孔内，每点0.1-0.5微升，点间距0.5-1mm。
3.包被蛋白在聚苯乙烯薄片上，包被鼠抗人IGFBP-1单抗，使IGFBP-1单抗在一条与反应杯底边平行的直线上，在检测蛋白的上方，包被兔抗羊IgG（1mg/ml）作为质控点。固定在如图4手柄架上。放入如图1的试管中，放入恒温震荡摇床中在37℃条件下反应10分钟。
4.反应好后将管放入负压抽滤器中抽出反应的液体，取出带黑色聚苯乙烯薄片的手柄架正面朝上放入如图10的卡槽中，插入检测仪侧面方口中进行检测。
5.通过荧光检测仪读数得到反应荧光值，通过标准曲线计算样品的浓度。
具体实施二：免疫层析试纸条检测
1.包被：将兔抗羊IgG稀释到1mg/ml，作为C线包被液；将鼠抗人IGFBP-1单抗稀释到1mg/ml，作为T线。通过喷膜仪，将T线包被液和C线包被液包被到硝酸纤维素膜上，晾干，即可得到单克隆抗体包被测试条。
2.标记抗体：利用UCP标记鼠抗人IGFBP-1单抗备用。
3.结合垫的制备：将上述利用UCP标记的四种抗体润在玻璃纤维上，放入烘箱37度下烘烤2h，烤干后裁剪成长条。
4.组装试纸条：将硝酸纤维素膜、吸水纸、结合垫、样品垫贴到底板上。
将样品加到样品垫上，5-15min后，将试纸条插入荧光检测仪，在分析膜结果观测处进行数值读取。

Claims (4)

1.一种基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)芯片检测系统及试剂，其特征在于：上转换发光UCP颗粒标记了鼠抗人IGFBP-1单抗I。
2.一种基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)芯片检测系统及试剂，其特征在于：反应杯检测系统中的载体板为黑色聚苯乙烯，上面包被有鼠抗人IGFBP-1单抗II。
3.一种基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)芯片检测系统及试剂，其特征在于：将样品滴加到反应检测杯中进行检测，反应5-15min后将卡取出载体板插入荧光检测仪的卡槽中读取数值，将数值代入标准曲线中对样本浓度进行计算。
4.如权利要求3所述，检测样品为羊水、宫颈分泌物、血清等。
CN201510608171.7A 2015-09-23 2015-09-23 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂 Pending CN105242051A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510608171.7A CN105242051A (zh) 2015-09-23 2015-09-23 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510608171.7A CN105242051A (zh) 2015-09-23 2015-09-23 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105242051A true CN105242051A (zh) 2016-01-13

Family

ID=55039770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510608171.7A Pending CN105242051A (zh) 2015-09-23 2015-09-23 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105242051A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107525937A (zh) * 2017-08-25 2017-12-29 苏州优函信息科技有限公司 基于上转换发光标记物、蛋白芯片及检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101805406A (zh) * 2009-06-26 2010-08-18 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 人胰岛素样生长因子结合蛋白-1的单克隆抗体、相关的宿主细胞、诊断试剂和诊断试剂盒
CN104422770A (zh) * 2013-08-23 2015-03-18 上海凯璟生物科技有限公司 基于上转换发光的妇科肿瘤标志物ca125、ca153、scca、he4芯片检测系统及试剂
CN104459138A (zh) * 2014-12-05 2015-03-25 重庆乾德生物技术有限公司 一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101805406A (zh) * 2009-06-26 2010-08-18 无锡博慧斯生物医药科技有限公司 人胰岛素样生长因子结合蛋白-1的单克隆抗体、相关的宿主细胞、诊断试剂和诊断试剂盒
CN104422770A (zh) * 2013-08-23 2015-03-18 上海凯璟生物科技有限公司 基于上转换发光的妇科肿瘤标志物ca125、ca153、scca、he4芯片检测系统及试剂
CN104459138A (zh) * 2014-12-05 2015-03-25 重庆乾德生物技术有限公司 一种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107525937A (zh) * 2017-08-25 2017-12-29 苏州优函信息科技有限公司 基于上转换发光标记物、蛋白芯片及检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8647888B2 (en) Immunoassay test strip for use in a diagnostic system
CA2956723C (en) System and method for monitoring health based on collected bodily fluid
Cole et al. Hyperglycosylated hCG (invasive trophoblast antigen, ITA) a key antigen for early pregnancy detection
CN103777002B (zh) 一种早孕多功能检测试纸的制备方法
Bergman et al. Utilisation of medical care by abused women.
WO2019174165A1 (zh) hCG周期检测试纸、试剂盒及其制备方法、应用
US20080241958A1 (en) Method for Determining HCG Levels in Fluid Samples
WO2021017417A1 (zh) 一种人绒毛膜促性腺激素半定量检测试纸、试剂杯及其制备方法和应用
EP2930516B1 (en) Pregnancy testing
CN104870997A (zh) 诊断装置和方法
CN110531091B (zh) 一种促黄体生成素检测试纸、试纸卡及其制备方法和应用
CN101930007A (zh) 一种孕妇早产检测的上转发光快速定量试剂盒
CN105242051A (zh) 基于上转换发光的人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(igfbp-1)芯片检测系统及试剂
Campbell et al. Biomarkers of ovulation, endometrial receptivity, fertilisation, implantation and early pregnancy progression
CN110346578B (zh) 用于胰岛素样生长因子结合蛋白-1和胎儿纤维连接蛋白含量的联合定量检测系统
CN208172022U (zh) 一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒
CN201229341Y (zh) 子宫外孕、怀孕天数胶体金法检测试纸
CN104422770A (zh) 基于上转换发光的妇科肿瘤标志物ca125、ca153、scca、he4芯片检测系统及试剂
CN204595001U (zh) 胎膜早破便捷检测试纸条及胎膜早破便捷检测试纸
CN204594999U (zh) 一种胎膜早破便捷检测试纸条及胎膜早破便捷检测试纸
WO2010150804A1 (ja) 破水および羊水塞栓症の検査方法
EP3194979B1 (en) Method for determining the risk of preterm birth
US20220057407A1 (en) Method for detecting imminent childbirth
CN111615366A (zh) 诊断仪、诊断用装置以及诊断方法
CN108614123B (zh) 一种判断早孕时间和早孕异常的检测装置和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160113

RJ01 Rejection of invention patent application after publication