CN105237615A - 一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，将板蓝根粉碎，用乙酸乙酯浸泡，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗3~5次，烘干；滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，超声10~80s；溶液加热至60~90℃，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，加热分别调节酸碱，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；合并滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩加乙醇，静置12~24h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。本发明建立了同时提取板蓝根多肽和多糖的方法，操作简单，多肽提取率高达95.45%，多糖提取得率高达92.48%，杂质含量低于5%。
Description
技术领域
本发明属于多肽提取技术领域，具体涉及一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺。
背景技术
板蓝根是常用中药。味苦,性寒,有清热解毒、凉血利咽功能。用于瘟毒发斑、高热头痛、大头瘟疫、烂喉丹痴、作腮、喉痹、疮肿、水痘、麻疹、肝炎、流行性感冒等症。作为中药，研究其主要有效成分，并分离出不同成分分别研究其功效，可以解决目前中药普遍存在的副作用不明确的问题。据文献报道，板蓝根所含化学成分主要有五大类:分别为生物碱类、芥子昔类、含硫类、有机酸及其醋类以及多肽多糖类化合物。有研宄表明板蓝根中抗病毒有效成分可能是蛋白或多肽,而板蓝根多糖的活性主要在于机体的免疫调节方面。而板蓝根中的其他成分例如有机酸类化合物具有抗内毒素活性，靛红为单胺氧化酶的抑制剂。目前，板蓝根冲剂或者板蓝根口服液大多是通过简单的中药加工方法制得，比如热水浸提法，鉴于不同成分的不同药理作用，急需开发一种提取板蓝根中有效成分多肽和多糖的工艺。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，该工艺通过常规步骤中的条件考察，建立了同时提取板蓝根多肽和多糖的方法，操作简单，提取得率高，提取物中主要成分为多肽和多糖。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，包括如下步骤：
1）板蓝根粉碎，用乙酸乙酯浸泡3~8h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗3~5次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，超声10~80s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至60~90℃，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，加热至60~90℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至7.5~8.5，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，加热至60~90℃，以碳酸调节溶液pH至5.5~6.5，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至滤液体积的1/5，加乙醇至含醇量70~90%，静置12~24h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。
步骤1）中乙酸乙酯的用量为每一克板蓝根加入5~8mL的乙酸乙酯，优选为每一克板蓝根加入6mL的乙酸乙酯。在提取之前先对板蓝根中加入乙酸乙酯浸泡，可以除去板蓝根中的生物碱类、有机酸类化合物。
步骤2）中蒸馏水的用量为每一克滤饼加入2~5mL的蒸馏水；优选为每一克滤饼加入3mL的蒸馏水。
步骤2）中浸泡时间为1.5h，超声40s，超声频率为200~400Hz。增加超声步骤，破坏板蓝根的外壁分子结构，可以提高后续步骤中水提取的效果，严格控制超声时间，超声时间长会打断多肽的肽键和多糖的糖苷键，从而降低产物的活性。
步骤3）中加热温度至75~80℃，搅拌2h，搅拌转速为200rpm。
步骤4）和步骤5）中蒸馏水的用量为每一克滤饼加入2~5mL的蒸馏水。
步骤4）中调节溶液pH至8.0。
步骤5）中调节溶液pH至6.0。
步骤4）和5）调节不同的溶液pH，可以将酸性多肽和碱性多肽全部提取出来，提高多肽的提取率。
步骤6）中加乙醇至含醇量80%。
本发明所用的原料板蓝根可以来源于不同产地，不同形式，在提取前，将其粉碎成粉状，可以提高其各成分的浸出率。
有益效果：本发明提供一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，该工艺通过常规步骤中的条件考察，建立了同时提取板蓝根多肽和多糖的方法，操作简单，提取得率高，提取物中主要成分为多肽和多糖，多肽提取率高达95.45%，多糖提取得率高达92.48%，杂质含量低于5%。
具体实施方式
以下实施例中采用的板蓝根来自于安徽毫州。板蓝根多糖的测定采用硫酸-苯酚法测定，多肽的测定采用凯氏定氮法。
实施例1
一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，包括如下步骤：
1）将5g板蓝根粉碎，用25mL乙酸乙酯浸泡3h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗3次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加18mL蒸馏水浸泡1h，超声10s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至60℃，搅拌3h，搅拌转速为120rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加18mL蒸馏水浸泡1h，加热至90℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至8.0，搅拌1h，搅拌转速为160rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加18mL蒸馏水浸泡1h，加热至90℃，以碳酸调节溶液pH至6.0，搅拌1h，搅拌转速为160rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至9mL，加乙醇至含醇量70%，静置12h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高达92.16%，多糖提取得率高达89.38%，杂质含量为4.4%。
实施例2
一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，包括如下步骤：
1）将5g板蓝根粉碎，用30mL乙酸乙酯浸泡8h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗3~5次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加22mL蒸馏水浸泡1.5h，超声40s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至80℃，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加22蒸馏水浸泡1.5h，加热至80℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至8，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加22蒸馏水浸泡1.5h，加热至80℃，以碳酸调节溶液pH至6，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至12mL，加乙醇至含醇量90%，静置12h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物，多肽提取率高达95.45%，多糖提取得率高达92.48%，杂质含量为3.4%。
实施例3
一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，包括如下步骤：
1）取5g板蓝根粉碎，用40mL乙酸乙酯浸泡5h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗5次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加蒸馏水15mL浸泡2h，超声40s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至80℃，搅拌2h，搅拌转速为180rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加蒸馏水15mL浸泡2h，加热至80℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至8，搅拌2h，搅拌转速为180rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加蒸馏水15mL浸泡2h，加热至80℃，以碳酸调节溶液pH至6，搅拌2h，搅拌转速为180rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至滤液体积的9mL，加乙醇至含醇量80%，静置22h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高达94.25%，多糖提取得率高达90.57%，杂质含量为3.9%。
实施例4
一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，包括如下步骤：
1）取5g板蓝根粉碎，用乙酸乙酯25mL浸泡6h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗5次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加蒸馏水18mL浸泡1.5h，超声40s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至75℃，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加蒸馏水18mL浸泡1.5h，加热至75℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至8，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加蒸馏水18mL浸泡1.5h，加热至80℃，以碳酸调节溶液pH至6，搅拌2h，搅拌转速为200rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至滤液体积的10mL，加乙醇至含醇量90%，静置12h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高达93.18%，多糖提取得率高达92.76%，杂质含量为2.6%。
Claims (9)
1.一种同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，包括如下步骤：
1）板蓝根粉碎，用乙酸乙酯浸泡3~8h，过滤，将滤饼用蒸馏水淋洗3~5次，烘干；
2）将步骤1）烘干的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，超声10~80s；
3）将步骤2）超声处理后的溶液加热至60~90℃，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
4）将步骤3）过滤的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，加热至60~90℃，以碳酸氢钠调节溶液pH至7.5~8.5，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
5）将步骤4）过滤的滤饼加蒸馏水浸泡1~2h，加热至60~90℃，以碳酸调节溶液pH至5.5~6.5，搅拌1~3h，搅拌转速为120~300rpm，过滤，收集滤液；
6）合并步骤3）、4）、5）的滤液，置于蒸发皿中，蒸发浓缩至滤液体积的1/5，加乙醇至含醇量70~90%，静置12~24h，离心，弃上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。
2.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤1）中乙酸乙酯的用量为每一克板蓝根加入5~8mL的乙酸乙酯。
3.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤2）中蒸馏水的用量为每一克滤饼加入2~5mL的蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤2）中浸泡时间为1.5h，超声40s。
5.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤3）中加热温度至75~80℃，搅拌2h，搅拌转速为200rpm。
6.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤4）和步骤5）中蒸馏水的用量为每一克滤饼加入2~5mL的蒸馏水。
7.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤4）中调节溶液pH至8.0。
8.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤5）中调节溶液pH至6.0。
9.根据权利要求1所述的同时提取板蓝根多肽和多糖的工艺，其特征在于，步骤6）中加乙醇至含醇量80%。
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