CN105237512B

CN105237512B - 6‑取代‑1‑((1‑取代苯基‑1,2,3‑三唑‑4‑基)甲基)‑4‑羰基喹啉‑3‑甲酸或药用盐、制备和应用

Info

Publication number: CN105237512B
Application number: CN201410322452.1A
Authority: CN
Inventors: 邹敏; 马方; 陈慧平; 张长征; 张小俊; 赵志鸿; 王桂芳; 张壮丽; 张艳; 郑立运; 王宁; 王东阳; 王庆端
Original assignee: Henan Academy of Medical and Pharmaceutical Sciences
Current assignee: Henan Academy of Medical and Pharmaceutical Sciences
Priority date: 2014-07-08
Filing date: 2014-07-08
Publication date: 2017-08-18
Anticipated expiration: 2034-07-08
Also published as: CN105237512A

Abstract

本发明属于有机合成技术领域，具体公开了一种6‑取代‑1‑((1‑取代苯基‑1,2,3‑三唑‑4‑基)甲基)‑4‑羰基喹啉‑3‑甲酸类化合物或其药用盐及其制备和应用。通式为：式中R、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅相同或不同，它们各选自H、卤素、硝基、氨基、羟基、C₁‑C₄的烷基、C₁‑C₄的卤代烷基、C₁‑C₄的烷氧基、C₁‑C₄的羧基、甲酰基中的一种。以取代苯胺为原料，与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合制得中间体I，Gould‑Jacobs环合制得中间体II；取代苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”制得中间体III；中间体II和中间体III经N‑烷基化反应，碱水解、酸化得目标产物IV。本发明所述化合物或其药用盐具有很好抗肿瘤作用。

Description

6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸或药用盐、制备和应用

技术领域

本发明属于有机合成技术领域，具体涉及一种6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物或其药用盐及其制备和应用。

背景技术

现有抗肿瘤药物存在效率低、选择性差、可产生耐药性、治疗窗窄等缺点，防治效果不甚理想。

生物信息学研究发现，喹诺酮类衍生物(基本结构见Fig1)除抗菌外，还具有抗肿瘤、抗病毒等其它生物活性，尤其在抗肿瘤方面备受关注，是近年来研究抗肿瘤化合物的“热点”结构之一。1,2,3-三唑化合物除具有抗菌、抗结核、抗病毒等生物活性外，还具有很好的抗肿瘤活性，如Miller等将1,2,3-三唑和芳酰胺结合,合成了系列具有抗肿瘤活性的化合物[J.Med.Chem.2010,53,3389-3395]。Demchuk等人合成了考布他汀(CA24)1,2,3-三唑衍生物，对多种肿瘤细胞显示出很强抗增殖活性[Bioorganic&Medicinal Chemistry[J],2014,22,738-755]。

X＝CH；N

Fig1喹诺酮平面环

依据喹诺酮和1,2,3-三唑类衍生物抗肿瘤特性，设计合成高效低毒的抗肿瘤化合物具有显著的医学临床意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供新的具有抗肿瘤活性的N-1位被苯基三唑取代、同时6位被合理修饰的6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物或其药用盐，并提供其在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明采取的技术方案如下：

通式为如下结构式的6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物或其药用盐：

式中R、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅相同或不同，它们各选自H、卤素、硝基、氨基、羟基、C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的卤代烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的羧基、甲酰基中的一种。

根据本发明化合物的结构通式，可知其具有足够的酸性，因此能与许多有机或无机碱形成可药用盐。此处使用的术语“可药用盐”指本发明化合物的盐，对活的有机体基本上无毒。典型的可药用盐包括那些通过本发明的化合物与无机碱形成的盐，这些盐被称为碱加成盐。

碱加成盐包括那些衍生自无机碱的盐，无机碱如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐。因此，在制备本发明的盐中有用的碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钙、碳酸钙等。

本发明部分优选化合物为：

a.6-氯-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

b.6-甲基-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

c.6-氟-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

d.6-甲氧基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

e.6-氯-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

f.6-氯-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

g.6-氯-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

h.6-甲基-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

6-甲基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

j.6-甲基-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

k.6-氟-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

l.6-氟-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

m.6-氟-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸。

制备方法，步骤如下：

(1)以取代苯胺为原料，与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合制得中间体I，即2-((取代苯胺)亚甲基)丙二酸二乙酯；

(2)中间体I经Gould-Jacobs环合制得中间体II，即6-取代-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯；

(3)取代苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”制得中间体III，即4-溴甲基-1-取代苯基-1,2,3-三唑类化合物；

(4)中间体II与中间体III经N-烷基化反应，碱水解、酸化制得目标产物IV，即6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物；

前述取代苯胺、中间体I、中间体II、中间体III、取代苯基叠氮的结构通式依次为：

合成路线如下，反应式中各取代基所代表基团如前所述：

具体地，步骤(1)的具体过程如下：取代苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯中加入溶剂1至溶解，加热回流反应2-10h，反应结束后，室温静置，抽滤，重结晶，得中间体I；所述溶剂1为苯、甲苯、二甲苯、甲醇、丙醇、异丙醇中的一种或它们的混合物。

较佳溶剂1为甲苯或二甲苯；重结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、苯、甲苯、二甲苯中的一种或它们的混合物，较佳的重结晶溶剂为乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇中的一种或它们的混合物。

具体地，步骤(2)的具体过程如下：中间体I加入溶剂2至溶解，加热回流经Gould-Jacobs环合反应2-10h，反应结束后，室温静置，抽滤，重结晶，得中间体II；所述溶剂2为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺或二苯醚中的一种或它们的混合物。

较佳溶剂2为二苯醚；重结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、正己烷、二氯甲烷、氯仿或N,N-二甲基甲酰胺中的一种或它们的混合物，较佳的重结晶溶剂为正己烷、二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或它们的混合物。

具体地，步骤(3)的具体过程如下：溴丙炔与取代苯基叠氮、催化剂1在溶剂3中于10-60℃下“Click Chemistry”反应5-40h，停止反应，室温放置，水洗、抽滤得粗品，重结晶，得中间体III；所述溶剂3为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、四氢呋喃中的一种和水以体积比1：0.5-2组成的混合溶剂；所述催化剂1为二价铜与还原剂抗血酸钠的混合物或亚铜，取代苯基叠氮与二价铜及抗血酸钠的摩尔比为5：0.5-2：1-4，催化剂1为亚铜时，不需加抗坏血酸钠，取代苯基叠氮与亚铜摩尔比为5：0.5-2。

较佳溶剂3为N,N-二甲基甲酰胺、叔丁醇、四氢呋喃中的一种和水组成的混合溶剂；亚铜为碘化亚铜或溴化亚铜，二价铜为醋酸铜或硫酸铜；重结晶溶剂为乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇中的一种或它们的混合物，较佳的重结晶溶剂为乙酸乙酯、甲酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或它们的混合物。

具体地，步骤(4)的具体过程如下：中间体III与催化剂2以摩尔比1：0.1-1的比例先在溶剂4中10-30℃搅拌1-2h，然后加入摩尔比1：2-5的中间体II和缚酸剂(及时吸收反应中产生的氯化氢，有利于反应向正向进行)，升温至50-70℃经N-烷基化反应5-20h，然后加碱水解，升温至70-120℃，再反应5-10h，停止反应，放置至室温，加盐酸酸化，水洗，抽滤得粗品，重结晶，得目标产物IV；所述溶剂4为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或叔丁醇中的一种或它们的混合物；所述缚酸剂为碳酸钾或碳酸钠；所述催化剂2为碘化钠或碘化钾。

较佳溶剂4为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

本发明中，溶剂1-4的使用量能保证将各自相应的反应原料溶解即可。

本发明所述化合物或其药用盐在抗肿瘤方面的应用，尤其是在制备抗肝癌、抗结肠癌、抗白血病、抗肺癌、抗宫颈癌药物中的应用。

本发明的有益效果：依据1,2,3-三唑和喹诺酮类衍生物抗肿瘤特性，本发明在N-1位引入苯基取代三唑，同时6位进行合理修饰，提供了一种新的具有抗肿瘤活性喹诺酮类衍生物；测定结果显示：与阳性对照物DDP相比，部分化合物表现出了优异抗肿瘤活性，对其中HepG2、HT29、HL60肿瘤细胞抗肿瘤活性普遍高于或接近顺铂，在抗肿瘤领域有很好的应用前景；本发明制备过程中的合成方法成本低、步骤简单、反应条件温和、产率高、易于后处理。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明所提供的具体实施方式、特征进行详述，但本发明并不局限在下列实施例的范围内。

取代苯基叠氮按照文献Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2008),18(23),6244-6247制备。

实施例1

6-氯-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-1)的合成

(1)2-((4-氯苯胺)亚甲基)丙二酸二乙酯(I-1)的合成

在装有温度计、回流冷凝器的100mL三颈瓶中，加入3.8g(0.030mol)对氯苯胺和6.5mL(0.031mol)乙氧亚甲基丙二酸二乙酯，加入15mL甲苯溶解，加热至回流，TLC跟踪，展开剂V(乙酸乙酯)：V(石油醚)＝1：4，反应6h，停止反应，室温静置，抽滤，乙醇重结晶，得2-((4-氯苯胺)亚甲基)丙二酸二乙酯(I-1)，白色晶体7.56克，产率87％，m.p.80-81℃， ¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.46(d，J＝13.2Hz，1H，CH of Vinylic,)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.07(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，4.30(q，J＝6.8Hz，2H,CH₂,of OCH₂CH₃)，4.24(q，J＝7.2Hz，2H,CH₂,of OCH₂CH₃)，1.38(t，J＝7.2Hz，3H,CH₃of OCH₂CH₃)，1.33(t，J＝7.2Hz，3H,CH₃of OCH₂CH₃)。

(2)6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯(II-1)的合成

在装有温度计、回流冷凝器的50ml三颈瓶中，加入5.94g(0.020mol)2-((4-氯苯胺)亚甲基) 丙二酸二乙酯(I-1)，加入8ml二苯醚溶解，溶液呈浅黄色透明状，加热至回流，TLC跟踪，展开剂V(乙酸乙酯)：V(石油醚)＝1：2，反应7h，室温静置，抽滤，DMF重结晶，得6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯(II-1)，白色固体3.21g，产率64％，m.p.232-233℃，¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：8.59(s，J＝13.2Hz，1H,2-H of ArH)，8.07(d，J＝2.4Hz，1H,ArH)，7.75(dd，J₁＝11.2Hz,J₂＝2.4Hz，1H,ArH)，7.67(d，J＝8.8Hz，1H,ArH)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H,CH₂,of OCH₂CH₃)，1.28(t，J＝7.2Hz，3H,CH₃of OCH₂CH₃)。

(3)4-溴甲基-1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑(III-1)的合成

在装有电磁搅拌、温度计和冷凝器的50mL三颈瓶中,将1.53(0.01mol)克对氯叠氮苯和1.17克(0.011mol)溴丙炔，加入叔丁醇和水(体积比1:1)20ml混合液中，然后加0.792克(0.004mol)抗坏血酸钠和0.5克(0.002mol)五水合硫酸铜，室温下反应，TLC跟踪,展开剂:v(石油醚):v(乙酸乙酯)＝5:1,15h,停止反应，水洗，抽滤得粗品，粗品乙醇重结晶，得4-溴甲基-1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑(III-1)白色粉末1.99克，产率73.9％；IR(cm^-1)ν：3113,3071,1500,1223,1133,836,1H NMR(400MHz,CDCl₃),δ:4.72(2H,s,J＝5.6,CH2Br),7.51(2H,d,J＝8.8,Ph),7.69(2H,d,J＝8.8,Ph),7.97(1H,s,H-5)。

(4)6-氯-1-((1-(4-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-1)的制备

在装有温度计的100mL三颈瓶中，加入20mL DMF，2.70克(0.010mol)4-溴甲基-1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑(III-1)和0.75克(0.0050mol)催化剂NaI，室温充分搅拌1h，将2.53g(0.011mol)6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯(II-1)和0.030molK₂CO₃加到上述混合物中，然后升温至70℃，TLC跟踪，展开剂V(二氯甲烷)：V(甲醇)＝30：1，反应20h，加入0.4克(0.010mol)NaOH的水溶液，升温至100℃，再反应8h，停止反应，放置至室温，再用质量分数为10％的盐酸酸化，水洗，抽滤，乙醇重结晶，得6-氯-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-1)3.2克，产率77.9.0％，m.p.256-257℃，IR(cm^-1)ν：3485(O-H)，3173(quinoline＝C-H),3121(triazole＝C-H),1750(C＝O,1520，1460(C＝C)。¹H NMR(400MHz,DMSO):5.67(s,2H,CH₂of NCH₂),7.58(d,2H,ArH,J＝8.8Hz),7.76(d,2H,ArH,J＝8.8Hz),7.91-8.15(m,3H,ArH),8.32(s,1H,C＝CH of triazole),8.70(s,1H,ArH)；E.A.for C₁₉H₁₂Cl₂N₄O₃：Calcd:C56.96，H2.91，N13.49；found:C56.93，H2.89，N13.50。

实施例2

6-甲基-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-2)的合成

按照实施例1的方法，对甲基苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合制得2-((4-甲基苯胺)亚甲基)丙二酸二乙酯：白色固体，产率80.3％；Gould-Jacobs环合制得6-甲基-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯：白色粉末，产率73.1％，再与4-溴甲基-1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑经N烷基化反应，NaOH水解、盐酸酸化，制得6-甲基-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-2)，白色固体，产率71.2％，m.p.223-224℃。IV-2的结构表征如下：IR(cm^-1)ν:3470(O-H)，3163(quinoline＝C-H),3115(triazole＝C-H)，1745(C＝O,1516，1465(C＝C)。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ:2.45(s,3H,-CH₃),5.65(s,2H,CH₂of NCH₂),7.55(d,2H,ArH,J＝7.2Hz),7.71(d,2H,ArH,J＝8.0Hz),7.78-8.10(m,3H,ArH),8.22(s,1H,C＝CH of triazole),8.64(s,1H,ArH)。E.A.for C₂₀H₁₅ClN₄O₃：C60.84，H3.83，N14.19；found：C60.82，H3.80，N14.21。

实施例3

6-氟-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-3)的合成

以对氟苯胺为原料，按照实施例1的方法，与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合得到2-((4-氟苯胺)亚甲基)丙二酸二乙酯：白色固体，产率71.2％；Gould-Jacobs环合制得6-氟-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯：白色粉末，产率71.7％；再与4-溴甲基-1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑经N烷基化反应，NaOH水解，盐酸酸化，制得6-氟-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-3)，白色固体，产率71.2％，m.p.218-219℃。IV-3的结构表征如下：IR(cm^-1)ν：3495(O-H),3179(quinoline＝C-H),3125(triazole＝C-H)，1753(C＝O,1530，1470(C＝C)；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ:5.70(s,2H,CH₂of NCH₂),7.60(d,2H,ArH,J＝8.0Hz),7.81(d,2H, ArH,J＝8.0Hz),8.00-8.17(m,3H,ArH),8.24(s,1H,C＝CH oftriazole),8.73(s,1H,ArH)。E.A.for C₁₉H₁₂ClFN₄O₃:Calcd：C57.23，H3.03，N14.05；found：C57.22，H3.05，N14.01。

实施例4

6-甲氧基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-4)的合成

以对甲氧基苯胺为原料，按照实施例1的方法与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合，Gould-Jacobs环合，制得中间体6-甲氧基-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯；对氟苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”制得4-溴甲基-1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑；6-甲氧基-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯和4-溴甲基-1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑经N烷基化，NaOH水解，盐酸酸化，制得6-甲氧基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-4)，浅黄色固体，产率81.2％，m.p.242-243℃。IV-4的结构表征如下：IR(cm^-1)ν:3476(O-H),3167(quinoline＝C-H),3119(triazole＝C-H),1748(C＝O),1556,1451(C＝C)。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ(ppm):(400MHz,DMSO):3.84(s,3H,-OCH₃),5.61(s,2H,CH₂of NCH₂),7.50(d,2H,ArH,J＝7.6Hz),7.69(d,2H,ArH,J＝9.2Hz),7.79-7.88(m,3H,ArH),8.20(s,1H,C＝CH of triazole),8.64(s,1H,ArH)。E.A.for C₂₀H₁₅FN₄O₄：C60.91，H3.83，N14.21；found：C60.93，H3.80，N14.24。

实施例5

6-氯-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-5)的合成

按照实施例1的方法，对甲基苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”，制得4-溴甲基-1- (4-甲基苯基)-1,2,3-三唑，再与6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯经N烷基化反应，NaOH水解，盐酸酸化，制得6-氯-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-5)，浅黄色固体，产率71.9％，m.p.247-248℃。IV-5的结构表征如下：IR(cm^-1)ν：3463(O-H)，3173(quinoline＝C-H),3121(triazole＝C-H),1750(C＝O,1512，1455(C＝C)。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ:2.41(s,3H,-CH₃),5.66(s,2H,CH₂of NCH₂),7.51(d,2H,ArH,J＝7.2Hz),7.70(d,2H,ArH,J＝8.4Hz),7.76-8.13(m,3H,ArH),8.22(s,1H,C＝CH oftriazole),8.65(s,1H,ArH)。E.A.for C₂₀H₁₅ClN₄O₃：Calcd：C60.84，H3.83，N14.19；found：C60.81，H3.81，N14.23。

实施例6

6-氯-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-6)的合成

按照实施例1的方法，对氟苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”，制得4-溴甲基-1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑，再与6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯经N烷基化反应，NaOH水解、酸化，制得6-氯-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-6)，浅黄色固体，产率75.2％，m.p.236-237℃，IV-6的结构表征如下：IR(cm^-1)ν：3465(O-H),3173(quinoline＝C-H),3121(triazole＝C-H),1752(C＝O),1566，1485(C＝C)。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ(ppm)：5.68(s,2H,CH₂of NCH₂),7.56(d,2H,ArH,J＝8.0Hz),7.79(d,2H,ArH,J＝8.0Hz),7.97-8.15(m,3H,ArH),8.25(s,1H,C＝CH of triazole),8.71(s,1H,ArH)。E.A.for C₁₉H₁₂ClFN₄O₃，Calcd：C57.23，H3.03，N14.05；found：C57.25，H3.00，N14.01。

实施例7

6-氯-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-7)的合成

以对氯苯胺为原料，按照实施例1的方法与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯缩合，Gould-Jacobs环合，制得中间体6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯；对硝基苯基叠氮与溴丙炔“ClickChemistry”，制得4-溴甲基-1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑，再与6-氯-4-羰基喹啉-3-甲酸乙酯经N烷基化反应，NaOH水解，盐酸酸化，制得6-氯-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸(IV-7)，浅黄色固体，产率71.9％，m.p.270-271℃，IV-7的结构表征如下：IR(cm^-1)ν：3460(O-H),3173(quinoline＝C-H),3121(triazole＝C-H),1757(C＝O),1573，1490(C＝C)。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ(ppm)：5.68(s,2H,CH₂of NCH₂),7.64(d,2H,ArH,J＝9.2Hz),7.80(d,2H,ArH,J＝8.0Hz),8.01-8.15(m,3H,ArH),8.30(s,1H,C＝CHof triazole),8.69(s,1H,ArH)。E.A.for C₁₉H₁₂ClN₅O₅，Calcd：C53.60，H2.84，N16.45；found：C53.63，H2.86，N16.42。

根据上述的实施例相似的原料和方法，制备了如下表1所示化合物，但本发明所要求保护的化合物不限于此：

表1

编号	化合物名称	m.p./℃
			a	6-氯-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	256-257
b	6-甲基-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	223-224
			c	6-氟-1-((1-(4-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	218-219
d	6-甲氧基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	242-243
			e	6-氯-1-((1-(4-甲基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	247-248
f	6-氯-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	236-237
			g	6-氯-1-((1-(4-硝基苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸	270-271

体外抗肿瘤活性测试

原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够使噻唑蓝(MTT)还原为不溶于水的蓝紫色针状结晶甲瓚(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞则没有该功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的蓝紫色结晶，并且在490mn波长处有最大吸收峰。因此在490mn波长处测定吸光度可反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，甲瓒形成的量与细胞数成正比。

供试细胞

人肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞A549、白血病细胞HL60，该5种肿瘤细胞株均购自中国科学院上海生命科学院细胞库。

主要仪器与耗材

生物安全柜，力康发展有限公司，HFsafe-1200TE；

CO₂培养箱，力康发展有限公司，HF160W；

倒置生物显微镜，奥林巴斯，BDS200；

空气浴恒温摇床，国华企业，ZD-85型；

EXL800uv全自动酶标仪，Bio-Rad公司，168-1000XC；

精密可调微量移液器，Eppendorf(德国)公司；

96孔细胞培养板，Corning(美国)公司；

细胞培养瓶，Corning(美国)公司。

主要试剂

阳性对照品DPP，南京制药厂有限公司；

优级胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；

胰蛋白酶，Gibco公司；

RPMI1640培养液、DMSO和四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)，美国Solarbio公司。

实验步骤如下：

MTT溶液的配制：称取MTT50mg，溶于10mL的磷酸缓冲液(PBS)中，用0.22um微孔滤器过滤除菌，分装，4℃避光保存，两周内有效。

供试药物的配置：取实施例1-7所制备的化合物，即表1中的化合物a-g，各取lmg，分别用20μL DMSO溶解配成样品母液，临用前，精密吸取适量上述样品母液用RPMI1640培养液稀释成不同浓度梯度的工作液。将顺铂溶于RPMI1640培养液配制成母液0.9mg/ml(3mmol/L)，针对不同肿瘤细胞再用RPMI1640培养液稀释成5个不同浓度梯度的工作液。

细胞培养

人结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞HepG2、肺癌细胞A549、白血病细胞HL60使用RPMI1640培养液，37℃饱和湿度、5％CO₂培养箱中常规培养；每2-3d换液1次，当细胞汇合度达90％时，进行传代培养。实验过程中用台盼蓝染色法检测细胞活性。

测定方法

以DDP为阳性对照，肿瘤细胞株包括人结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞HepG2、肺癌细胞A549、白血病细胞HL60。

收集对数生长期细胞，用细胞计数板计数，用含10v％胎牛血清的RPMI1640培养液调整细胞悬液浓度为8×10⁴个/ml(HT29、Hela、HepG2)、1×10⁶个/ml(A549、HL60)，96孔细胞培养板中每孔加入100μl细胞悬液，于细胞培养箱(5v％CO₂，37℃)中孵育24h，待细胞贴壁后小心吸去上清(对于悬浮细胞HL60，孵育4h，离心并吸去上清)，再加入配制好的含有本发明化合物a-g的工作液，每个浓度设三个复孔，每孔100μL，并设空白对照孔、溶剂对照孔及阳性对照孔：空白对照孔加入100μL含10v％胎牛血清的RPMI1640培养液，溶剂对照孔加入100μL含有0.1v％DMSO及10v％胎牛血清的RPMI1640培养液，阳性对照孔加入100μL含有DPP的工作液。连续培养48h后，每孔加入20μl MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4h后，小心吸去孔内培养液(HL60：离心后吸去上清)，每孔加入DMSO150μl，置摇床上避光振荡6min，使结晶物充分溶解，在酶标仪490nm波长处测定各孔吸光度(OD)值，按下面的公式计算各药物对肿瘤细胞生长抑制率：

抑制率(％)＝(1-给药孔OD值/空白对照孔OD值)×100％

试验结果显示，0.1v％DMSO溶剂对细胞影响可忽略，IC₅₀值用统计软件Spss13.0进行计算，实验结果见表2。

表2目标化合物体外抗肿瘤活性IC₅₀(μmol/L)数据

Compounds	HepG2	A549	Hela	HT29	HL60
						a	15.61	79.55	63.20	16.10	27.13
b	25.00	73.50	59.00	27.21	30.37
						c	14.50	81.30	60.78	16.21	14.33
d	20.61	74.10	58.10	32.01	28.21
						e	29.32	67.03	64.03	24.98	32.88
f	15.97	86.73	63.71	19.01	16.10
						g	33.01	83.50	68.61	30.24	29.10
DDP	12.02	15.04	13.11	21.03	43.34

测定结果显示：上述化合物对肿瘤细胞均有不同程度的抗肿瘤活性，且伴随着取代基的不同而改变，部分化合物表现出优异抗肿瘤活性。与阳性对照物DDP相比，a、c、f对5种肿瘤细胞有很好抗肿瘤活性，其中对HepG2、HT29、HL60体外抗肿瘤作用普遍与顺铂相近或高于顺铂，如化合物c对HepG2、HT29、HL60的IC₅₀值分别为14.50、16.21、14.33μmol/L。

上述参照实施例对6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物及其制备方法和应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims

1.通式为如下结构式的6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物或其药用盐：

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于选自下述中的一种：

i.6-甲基-1-((1-(4-氟苯基)-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸；

3.制备如权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于步骤如下：

(3)取代苯基叠氮与溴丙炔“Click Chemistry”反应制得中间体III，即4-溴甲基-1-取代苯基-1,2,3-三唑类化合物；

(4)中间体II与中间体III经N-烷基化，碱水解、酸化制得目标产物IV，即6-取代-1-((1-取代苯基-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-羰基喹啉-3-甲酸类化合物；

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(1)的具体过程如下：取代苯胺与乙氧亚甲基丙二酸二乙酯中加入溶剂1至溶解，加热回流反应2-10h，反应结束后，室温静置，抽滤，重结晶，得中间体I；所述溶剂1为苯、甲苯、二甲苯、甲醇、丙醇、异丙醇中的一种或它们的混合物。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(2)的具体过程如下：中间体I加入溶剂2至溶解，加热回流经Gould-Jacobs环合反应2-10h，反应结束后，室温静置，抽滤，重结晶，得中间体II；所述溶剂2为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺或二苯醚中的一种或它们的混合物。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(3)的具体过程如下：溴丙炔与取代苯基叠氮、催化剂1在溶剂3中于10-60℃下“Click Chemistry”反应5-40h，停止反应，室温放置，水洗、抽滤得粗品，重结晶，得中间体III；所述溶剂3为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、四氢呋喃中的一种和水以体积比1：0.5-2组成的混合溶剂；所述催化剂1为二价铜与还原剂抗血酸钠的混合物或亚铜，取代苯基叠氮与二价铜及抗坏血酸钠的摩尔比为5：0.5-2：1-4，催化剂1为亚铜时，不需加抗坏血酸钠，取代苯基叠氮与亚铜摩尔比为5：0.5-2。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：亚铜为碘化亚铜或溴化亚铜，二价铜为醋酸铜或硫酸铜。

8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤(4)的具体过程如下：中间体III与催化剂2以摩尔比1：0.1-1的比例先在溶剂4中搅拌1-2h，然后加入摩尔比1：2-5的中间体II和缚酸剂，升温至50-70℃经N-烷基化反应5-20h，然后加碱水解，升温至70-120℃，再反应5-10h，停止反应，放置至室温，加盐酸酸化，水洗，抽滤得粗品，重结晶，得目标产物IV；所述溶剂4为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或叔丁醇中的一种或它们的混合物；所述缚酸剂为碳酸钾或碳酸钠；所述催化剂2为碘化钠或碘化钾。

9.如权利要求1或2化合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物方面的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述化合物或其药用盐在制备抗肝癌、抗结肠癌、抗白血病、抗肺癌、抗宫颈癌药物中的应用。