CN105229442B - 组织从样本分离 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于将材料从生物样本（11）中感兴趣的区域（“样本‑ROI”（RS））分离的方法和样本分离设备（400）。本发明的实施例包括将具有样本‑ROI处的孔径（24）的结构化盖板（20）应用到样本（11）。然后可以通过盖板中的孔径（24）从样本‑ROI选择性地移除样本材料。盖板（20）可以例如是具有一侧上的黏合剂的带。在样本的（显微镜）图像（I）中的感兴趣区域的选择之后，可以自动地切出盖板（20）中的孔径（24）。可替换地，可以通过打印或标绘产生结构化盖板（20）。而且，样本材料可以优选地通过裂解移除并且还可以经受分子诊断（MDx）。

Description

组织从样本分离
技术领域
本发明涉及用于将材料从生物样本中感兴趣的区域分离的方法和样本分离设备。
背景技术
US 2003/032082 A1公开了一种用于隔离生物材料层的一部分的方法。所述部分利用聚焦激光束切除并且然后利用先前已经附接到样本的胶带拾取。
WO 2005/033668 A1公开了一种方法，其中激光对要从包括生物样本和稳定层的制剂隔离的组织进行切割。该稳定层可以例如是箔。在另一实施例中，具有预制孔洞的中间层部署在气动式抓爪的孔径前面。
WO 03/008934 A1公开了一种支撑衬底与覆盖衬底之间的制剂的布置，其中激光从所有三个层切出解剖部分。
US 2005/250219 A1描述了一种类似方法，其中对象载体上的生物材料通过由透明制剂、混合物和/或纯净物质制成的膜所覆盖，其中激光切穿所有三个层。
US 2012/273112 A1公开了一种用于产生针对体液的分析带的方法，其中将诊断辅助标签传送给载体带。
发明内容
基于该背景，将有利的是具有允许材料从诸如生物标本之类的样本的容易且准确的分离的措施。
通过根据权利要求1的样本分离设备和根据权利要求2的方法解决该问题。在从属权利要求中公开优选的实施例。
在第一方面中，本发明的实施例涉及一种用于将材料从生物样本中感兴趣的区域分离的样本分离设备。在下文中，样本中所述感兴趣的区域将被称为“样本-ROI”。例如，其可以对应于具有诸如染色化验中的特定颜色之类的具体特征的一个或多个细胞或细胞组份，其中合期望的是仅提取样本-ROI的材料以用于另外的测试。样本分离设备包括用于提供具有样本-ROI处的孔径的盖板的“结构化单元”。
一般而言，盖板可以包括具有足够稳定性的形状（典型地平坦的）并且允许在板中/通过板的孔径的制造的任何固体材料。例如，板可以包括诸如聚合物（聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、PMMA等等）之类的合成材料或具有填充物粒子的聚合物粘合剂的复合材料、交联材料（比如丙烯酸盐、聚氨酯、硅树脂）的层，或具有黏合层的聚合物载体层的层压板，比如压敏黏合剂、凝胶、单体混合物。应当指出，在一些实施例中，盖板存在于两个状态：最初没有孔径（“非结构化盖板”）和最终具有孔径（“结构化盖板”）。
一般而言，盖板中的孔径可以具有任何任意的形状和大小，包括诸如圆形或矩形之类的简单几何形状。而且，孔径可以包括分布在盖板的区域内的若干断开的分片或开口。“样本-ROI处”的孔径的定位意指结构化盖板可以以这样的方式布置在给定生物样本上：孔径至少部分地与所述样本的样本-ROI重叠。优选地，孔径和样本-ROI基本上彼此匹配使得孔径的（几乎）每个点位于样本-ROI的对应点处并且反之亦然。然而，也允许任何其他类型的（部分）重叠（例如，如果孔径仅覆盖样本-ROI的子区域的话）。
根据第二方面，本发明的实施例涉及一种用于将材料从生物样本中感兴趣的区域（被称为“样本-ROI”）分离的方法。该方法包括以下步骤：
a）产生具有样本-ROI处的孔径的盖板；
b）将所述盖板应用到样本，其中该应用可以在步骤a）之前、期间或之后完成。
例如，具有孔径的结构化盖板可以首先产生（例如通过切割或打印）并且然后应用/传送给样本。或者可以首先将非结构化盖板应用到样本，并且然后可以原位产生孔径（例如通过切割）。而且，也可能的是在样本上的一个步骤中产生具有其孔径的盖板（例如通过打印）。
一旦已经产生结构化盖板（不管是提前还是原位产生），则其可以可选地顺序应用到若干样本，特别地具有类似样本-ROI的样本。例如，这样的样本可以作为来自相同活组织检查的连续切片而获得。
一般而言，该方法包括可以利用以上所述种类的样本分离设备执行的形成步骤。因此，针对所述设备所提供的解释对于该方法类似地有效，并且反之亦然。
样本分离设备和方法具有以下优点：其允许样本材料从生物样本中感兴趣的区域的容易且准确的分离。这通过将仅在样本-ROI的位置处具有孔径的盖板应用（沉积）到样本而实现，因此使得能够访问样本-ROI，同时屏蔽样本的其余部分。然后可以应用任何适当的方法以主动地（仅）处置样本-ROI中的材料。具体而言，可能的是将用于提取样本-ROI的样本材料的提取流程应用到全部样本表面，因为所述流程将仅在未由盖板屏蔽的区域中（即在孔径/样本-ROI处）有效。
在下文中，将更详细地描述可以结合以上方法和样本分离设备实现的本发明的各种优选实施例（即使仅针对要么方法要么设备对其进行详细描述）。
样本-ROI的材料的“分离”一般地是指使该材料从样本的其余部分可区分（关于一些先前独特的方面或特征）（或者反之亦然）的任何过程。由于分离并且通过运用所创建的区别，所述材料然后可以例如与样本的其余部分分离地原位处理。在优选的实施例中，“分离”包括或必需通过盖板中的孔径将样本材料从样本-ROI移除。样本分离设备可以优选地包括“移除单元”以用于该目的，即用于通过盖板中的孔径将样本材料从样本-ROI移除。
如以上已经解释的，本发明的所有实施例包括结构化盖板可以顺序应用到若干样本。在前述实施例的上下文中，这具有以下优点：可以将足够的材料从所述样本移除（通过孔径）以用于后续处理步骤。
在一个优选的实施例中，盖板包括（至少）一侧上的黏合剂。然后，盖板可以容易地附接到生物样本的表面。由于盖板的孔径外部的材料通常不经受另外的测试（而是被丢弃），因而常常不一定的是，黏合剂与生物材料和/或要利用所提取的材料执行的化验相容。出于该原因，任何已知或商业上可获得的（黏合剂）带可以典型地用作盖板。
存在最初非结构化的盖板可以如何结构化，即提供有样本-ROI处的孔径的各种方式。根据一个实施例，通过切割在最初非结构化盖板中产生孔径。原则上，可以手动地完成这样的切割。在更为鲁棒、准确和高效的方法中，可以自动地完成切割，例如在某种激光切割装置或由致动器控制的刀具的帮助下。
根据另一实施例，通过光刻产生孔径。优选地，在该实施例中，通过可以直接地层压在样本或分离的衬底上的（固体）光刻胶实现盖板。然后，通过利用光的选择性照明在感兴趣的区域（ROI）内部或外部变换光刻胶，接着移除（例如蚀刻）ROI处的光刻胶（要么经变换要么未经变换）。该流程的结果是要么已经在样本上要么可以传送给它（在从衬底拆卸之后）的结构化盖板。使用光刻的另一次优选的方式将包括通过将光刻胶应用到其上来结构化给定非结构化盖板。在光刻的帮助下，可以在小空间规模上准确地生成孔径。可以“离线”应用光刻，即在将盖板应用到样本之前，或者其可以在将非结构化盖板应用到样本之后完成。优选地以免掩模的方法完成光刻胶的照明，例如使用微镜阵列。
在另一实施例中，通过沉积材料连续地（“逐点”）建立具有孔径的盖板。因此，其可以从一开始形成有孔径，即在不需要中间产生非结构化盖板的情况下。
连续的沉积可以特别地是打印或标绘(plot)过程。可以很好地控制这些流程的结果，例如通过在其上可获得描述样本-ROI的数据的数字计算机。
在沉积之后，所沉积的材料可以优选地物理地和/或化学地更改。因此，其特性可以改变成在一方面对于沉积过程并且在另一方面对于其预期用途是最佳的。例如，材料的粘度应当在沉积过程期间是低的，但是之后是高的，以提供稳定的盖板。所沉积的材料可以例如被加热、冷却、暴露于辐射和/或暴露于诸如氧气之类的试剂。
生物样本将优选地提供在某种载体上，使得可以容易地对其进行处置。载体可以特别地是（显微镜-）载玻片，因为这是容易可获得的，良好标准化以与许多装置相容，并且当然适于手边的样本的显微镜检查。
在前述实施例的进一步发展中，盖板包括用于其与载体对齐的对齐构件。因此，可以实现载体上的样本-ROI与盖板中的孔径的位置之间的良好匹配。优选地，在没有另外的工具（诸如显微镜）的情况下，可以手动地完成这样的对齐。例如，如果盖板至少部分地适于载体的形状（例如如果这两者具有相同大小的矩形边缘），则这一点得以实现。用户然后可以简单地使盖板和载体的适配部分重叠以实现正确的（或至少定义明确的）总体定位。在优选的实施例中，对齐将由自动化解决方案实现，其基于光学反馈根据所计算的平移(translation)对样本和盖板进行定位。
例如在其移除期间，通过盖板中的孔径的样本-ROI的样本材料的处置可以以各种方式完成，用户可以鉴于手头的样本和关于样本材料的预期流程而从中选择最适当的一个。在一个特定实施例中，孔径处的样本材料可以被暴露于试剂（尤其是诸如缓冲液的溶液）、被裂解、被加热和/或被冷却。如果样本包括一个或多个生物细胞并且如果分子诊断应当利用所提取的材料执行，则样本材料的裂解是可能的。例如，可以在US 2011/159485 A1中找到用于核酸的提取的适当裂解缓冲剂。
一般而言，样本材料的加热可以是有利的，因为其加快（化学）反应。而且，加热可以用于熔化材料，从而允许其通过流动的移除。例如，可以应用冷却以使所加热的材料返回到正常温度。
一般而言，样本可以包括可熔化材料，特别地在大约30℃与大约90℃之间，优选地在大约40℃与大约70℃之间的中等温度处熔化的材料。这样的材料的示例是石蜡，其常常用于生物样本的制备，特别地用于显微镜研究的组织切片的制备。在样本材料的移除期间，可以通过应用热量而使可熔化材料液化。而且，可以通过熔化这样的材料实现相位分离，从而允许所述材料从感兴趣的实际生物材料的容易分离。
在优选的实施例中，在应用盖板之前通过浸入二甲苯（或等效溶剂）中接着利用乙醇置换二甲苯而对样本进行去石蜡。该流程还可以使用在病理学实验中以制备用于染色的样本。
根据本发明的另外的实施例，盖子可以部署在盖板的孔径处，特别地在样本材料的移除期间。因此，可以创建包括样本-ROI的或多或少闭合的腔室。盖子可以特别地提供有用于将提取液引导到样本-ROI的入口和/或用于从样本-ROI引流（液化和/或溶解的）样本材料的出口。可以利用如显微镜检查中所使用的盖玻片实现盖子的简单实现。可以利用专用盖子实现更为通用的解决方案，所述专用盖子具有例如黏合剂以创建促进缓冲剂引入和移除的限定体积的腔室。
在本发明的另一实施例中，可以提供致动器以用于将能量应用给样本，特别地以电磁辐射、加热和/或超声的形式。例如，可以在将样本材料从样本-ROI移除期间应用能量。因此，可以辅助将期望的样本材料从样本和/或衬底（载体）拆卸。致动器可以可选地包括加热器、光源和/或超声换能器。
一般而言，可以通过适于手头应用的任何流程选择和限定样本-ROI。在优选的实施例中，从涉及样本的对象的图像中感兴趣的区域导出样本-ROI。在下文中，图像中所述感兴趣的区域将被称为“图像-ROI”以将其与样本-ROI区分。“涉及样本的对象”可以是样本自身。然而，其还可以是从与取得手头样本的相同材料（“较高水平的样本”）所生成的附加（子）样本。其可以例如是从与样本相同的活组织检查所生成的（优选地相邻的）切片。图像可以优选地是显微镜图像，例如利用数字扫描显微镜生成。而且，可以例如通过病理学家手动地或者通过图像分析软件自动地或者通过二者的组合完成图像-ROI的限定。
优选地执行样本-ROI从所选择的图像-ROI的前述导出和/或图像-ROI的选择，同时考虑盖板结构化的能力。如果盖板结构化例如通过切割技术实现，则典型地将存在空间分辨率和/或边界的曲率上的下限。考虑这些限制将避免使用不能由实际结构化流程实现的样本-ROI或图像-ROI。
给定图像-ROI可以可选地用于导出超过一个样本-ROI。如果例如从单个“较高水平的样本”获得若干单独的样本，例如来自给定活组织检查的若干切片，则通常将必要的是标识每个单独的样本/切片上的样本-ROI。基于单个参考，图像-ROI然后可以是同样的，然而，样本-ROI的位置以及还有其形状对于每个单独的切片可以不同。因此，出于将材料从来源于相同组织块的连续切片分离的目的，可以存在参考相同图像ROI的若干样本-ROI。应当指出，不同的样本-ROI通常将要求产生多个相关联的盖板。
在本发明的另一实施例中，在将样本材料从样本-ROI移除之后，可以生成样本的图像。这样的图像对于验证期望的材料是否已经实际上移除可以是有用的。图像可以在盖板仍处于原处的情况下（要么从样本侧要么从盖板的相对侧取得图像）或在移除盖板之后生成。
在另一实施例中，样本的图像可以在应用盖板之前生成以验证载玻片上的样本的位置和/或变形以供盖板的孔径的准确定位。可选地，图像可以在应用盖板之前取得以在移除样本材料之前验证孔径的确切位置。
从样本-ROI获得的样本材料可以优选地经受分子化验。在该上下文中，术语“分子化验”要以宽广的意义理解，包括通过其可以确定来自样本-ROI的材料的取决于其化学成分的一个或多个参数的任何检查、测试或实验。作为示例，分子化验可以包括特定蛋白质或核酸序列（例如肿瘤标记）的（定性或定量）检测。具体而言，分子化验可以包括PCR（例如q-PCR、qRT-PCR、RT-PCR、qrt-PCR或数字PCR）、测序（特别地下一代测序）或微阵列杂交或另一分子化验技术或这些的组合。
附图说明
本发明的这些和其他方面将从下文描述的实施例显而易见并且参考下文描述的实施例得以阐述。
在图中：
图1示意性地示出了根据本发明的实施例的样本材料的提取；
图2图示了通过激光切割的盖板的结构化；
图3图示了将所述结构化盖板应用给样本；
图4图示了将样本材料从盖板的孔径处的样本-ROI移除；
图5图示了具有孔径的盖板的打印；
图6图示了图5的打印材料的固化；
图7示出了针对样本提取使用具有孔径的盖板的实验结果。
在图中，同样的参考数字指代同样或类似的部件。
具体实施方式
患者材料（例如组织和细胞）的病理学诊断研究是特别地肿瘤学中的许多处置决策的基础。来自活组织检查的标准薄切片呈现在显微镜载玻片上并且根据特定协议染色以使组织的形态可视化，例如通过苏木精-伊红（短H&E）。最近，基于抗体向组织上所存在的蛋白质的特异性粘合，所谓的免疫组织化学（IHC），以及核苷酸的所设计的序列向染色体或基因的部分的杂交（原位杂交，ISH），正在研发用于疾病特异性生物标记的原位染色以用于靶向药物的伴随诊断。一般地，可以利用亮视场显微镜完成评估。载玻片可以在研究之后作为备份存储长时间，以防需要重新评估诊断。
随着对癌细胞中的基因突变的作用的逐渐理解，分子诊断（“MDx”）正变为用于选择靶向治疗和预测处置响应的病理学的关键部分。这可以通过组织上的q-PCR微阵列和/或测序（Sanger或下一代）完成。对于MDx分析的灵敏度和特异性而言，仅选择组织切片的相关区域至关重要。通过非癌组织的稀释可能引起误诊。
目前，病理学家利用某种类型的笔对需要选择用于MDx的区域进行标记。实验室技术人员然后试图将所选择的区域从相同活组织检查的新（较厚的）切片或甚至从组织块移除。出于两个原因，该流程是非常不准确并且麻烦的：第一，部段的标记难以用手进行，特别地如果已经通过数字扫描采集图像的话。病理学家需要在他头中平移图像以用手对载玻片进行标记；第二，技术人员需要找到在不失去所选择的区域外部的任何或剥离材料的情况下精确地刮掉材料的方式。而且，样本的污染是个问题。
总之，用于样本提取的已知流程具有以下缺点中的一个或多个：
- 麻烦的手动流程。
- 从载玻片的样本材料的不准确选择。
- 归因于手动流程的污染风险。
- 归因于不准确选择的误诊风险。
- 所选择的材料的文档的缺乏。
- 标准化和再现性的缺乏。
在下文中，将描述本发明的实施例，其解决以上问题并且呈现在针对MDx分析的组织病理学研究之后从薄部段选择组织样本材料的新方式。该方法的一个特征是湿法处理，即通过例如裂解缓冲剂中的选择性溶解来移除样本的期望部段。通过层压在载玻片上的结构化层保护（感兴趣的区域ROI外部的）非期望材料。
图1示意性地图示了适于身体组织的样本11的检查的设置中的本发明的实施例。样本从组织部段的选择性移除中的第一步是确定感兴趣的区域（ROI）。这可以基于组织病理学染色流程接着通过病理学家针对诊断的检查而完成。可替换地，可以通过图像分析软件工具支持或甚至完全自动地完成分析。可以根据从图像分析所导出的参数表征感兴趣的区域。取决于根据临床协议所要求的MDx分析的种类，可以采取针对ROI限定的要求。在ROI的病理学选择之后，可以考虑附加的要求以达到ROI的最终设计。然后，将该设计传送到结构化单元，其在此处实现为带切割工具。切割工具切掉带的片段，其典型地具有与承载样本的载玻片部分确切地相同的尺寸以便于对齐。然后，手动或自动地将带传送到所讨论的载玻片并且附接到它。现在将参考图1更详细地描述这些步骤。
检查在样本制备单元100处开始，其中身体组织的切片11制备在用作载体的显微镜载玻片10上。典型地，通过从石蜡包埋活组织检查切割大约4-10微米的薄部段来获得组织样本。所谓的伐区(coupes)放置在水膜上的显微镜玻璃载玻片10上以从微成型(micro-toming)应变松弛并且然后晾干。
而且，样本11可以可选地通过适当的染色剂12染色，例如通过H&E或IHC。存在可用于不同应用的许多染色协议。可以通过将具有伐区的载玻片浸渍在包含试剂的不同溶液中而在工作台上手动地执行染色协议，但是还可以以自动化方式执行。
一个或多个标记M可以打印在显微镜载玻片10上或雕刻在其中，其可以稍后用作用于使图像坐标与载玻片10上的实际坐标相关的参考点。而且，具有样本11的载玻片10可以可选地覆盖有盖玻片（未示出）以便允许稍后扫描期间的高图像质量。
在制备步骤之后，将具有样本11的载玻片10传送给图像生成单元200，其可以特别地是数字扫描显微镜。
样本的数字图像I 通过显微镜200生成并且传递给样本选择单元300，其在此处通过具有显示器（监视器）301、存储器303以及像键盘和鼠标那样的输入设备304的工作站302而实现。样本的图像I可以显示在监视器301上以允许通过病理学家的视觉检测。病理学家可以标识图像中感兴趣的区域RI并且因此对其进行标记。
可以优选地通过自动图像分析例程辅助（或完全地完成）该“图像-ROI”RI的标识。可以针对总大小等等优化区域，从而可选地考虑到起因于（在样本分离设备400中）稍后应用的样本提取技术的约束。作为计算的结果，确定可以在查看样本载玻片的同时可视化于屏幕301上和/或显微镜200中的图像-ROI RI。
然后可以通过病理学家在光标的帮助下手动地调节和选择图像-ROI RI。优选地，病理学家可以以任何放大率对位置进行标记。标记将典型地基于组织形态完成，其是用于关于病变的恶性或存在的不同细胞类型做出决策的基础。可以选择并且标记无限数目的图像。当完成时，软件可以以适当的放大率为病理学家提供所选择的图像-ROI的概览并且将区域调节到必要的分辨率，其可以稍后由负责样本的物理提取的样本分离设备400来处理以供分子测试。创建文件，其包含图像-ROI RI的边界的实际（图像-和/或样本-）坐标以及可以由样本分离设备400解析的必要参考。
在用于MDx的实际样本已经从组织的下一切片移除并且尚未从用于图像分析的那个移除的情况下，图像-ROI的平移必须由软件使用下一切片的特征做出以覆盖图像。这样的特征可以通过光学系统从下一切片获得，可选地在化学染色反应之后。
以上所提到的文件可以用作用于样本分离设备的输入，其能够直接移除所指示的部段并且将其传送给可以引入到分子测试仪器（或样本制备仪器）中的样本支持器。
在所示的实施例中，具有样本11的显微镜载玻片10接下来被传送给样本分离设备400，其中提取对应于所选择的图像-ROI RI的样本-ROI RS并且将其从样本的其余部分分离。优选地，将该样本-ROI RS传送给分离的支持器，例如试管30。而且，样本分离设备可能可选地能够连续地移除若干区域并且将那些提交至分离的分子测试。
样本分离设备400包括两个子单元，即：
- “结构化单元”410，其用于提供具有样本-ROI处的孔径24的盖板20。
- 移除单元420，其用于通过所述孔径24将样本材料从样本-ROI移除。
如图2中更详细地所示，“盖板”可以通过（商业上可获得的）带20实现，包括例如具有一侧上的黏合剂22的塑料的载体板21。因此，结构化单元410可以通过商业上可获得的自动化带切割器（例如来自日本Roland DG公司的切割标绘器）实现。利用结构化单元410，通过例如利用激光411切掉带的相关联片段25，在带20中生成对应于期望的样本-ROI的孔径24。应当指出，一般而言，孔径24可以具有任何形状并且可以特别地包括若干断开的分片。
如图3中更详细地所示，结构化（预切割的）带20（手动地或自动地）层压在具有样本11的载玻片10上，由此黏合剂22附接到样本。
如图4中更详细地所示，载玻片10然后浸入裂解缓冲剂中以用于溶解样本的可访问部分，即样本-ROI RS。为了限制裂解缓冲剂的体积并且出于方便的原因，优选的实施例使用放置在带20上并且具有之后可以闭合的引入裂解/提取缓冲剂的开口（参见框箭头）的盖子25。
具有盖子25的载玻片20可以优选地放置在热板421上并且被带到期望的温度以用于核酸的完全裂解和/或提取以及可选地在样本是福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织或细胞学样本的情况下的石蜡的熔化。在加热之后，样本的裸露部分将溶解并且-在FFPE样本的情况下-石蜡将从缓冲剂相位分离。在冷却下来之后，包含样本的缓冲剂可以从Eppendorf试管30吸取或涌入其中或以其他方式传送给分子检查单元500以用于期望的生物标记的净化、放大和检测。
在优选实施例中，可以从超声换能器422应用（聚焦）超声以加速细胞裂解/提取。
而且，可以再使用结构化盖板20来参考相同图像ROI从另外的（连续）切片（从相同活组织检查取得）提取样本材料以获得用于成功的MDx测试的足够材料。例如，可以从来自相同组织块的多达十个切片移除相同的样本-ROI（取决于ROI中的肿瘤细胞的数目和MDx测试的种类）。
附加地或可替换地，一个图像-ROI可以可选地用于产生涉及超过一个样本-ROI的若干盖板。如果例如从给定活组织检查生成若干切片，则通常将必要的是标识每个单独的切片上的样本-ROI，因为例如样本-ROI的位置以及还有其形状可以随着切片而不同。
可以在样本-ROI RS的提取之前和/或之后从组织载玻片10扫描新图像以确认和控制选择。可以在工作站302上连同原始图像和MDx分析的结果一起归档该图像。
具有样本的其余部分的显微镜载玻片10可以可选地存储在存储单元600中以用于稍后的访问和验证，或者其可以简单地被丢弃。利用载玻片10的稍后处理步骤可以特别地包括后续检查，包括例如关于另一感兴趣区域的至少一个新（特别地不同的）分子化验和/或至少一个新（特别地不同的）染色。
在分子检查单元500中，若干分子技术可用于所选择的样本-ROI的分析，比如PCR（该术语下包括若干技术，比如q-PCR、RT-PCR、qrt-PCR、数字PCR等等）以用于检测癌细胞中的单点基因突变或任何其他DNA突变、DNA缺失、DNA插入、DNA重排或复制数目放大或其他结构改变，和/或确定癌细胞中的基因或其他所转录的DNA序列的RNA表达的程度，或用于确定癌细胞中的基因变化的较宽频谱的RNA或DNA测序（下一代测序），例如要么在整个染色体组上要么在整个外显子组上，或靶向到染色体组的较小区域、外来体或转录组，以及在各种深度中。根据癌细胞的基因突变以及其与预断相关的对应RNA表达简档或可替换地对特定处置的敏感性（比如通过靶向药物）来解释结果，或者以实际上评估已经开始或完成的处置的效果（处置监视）。
图5和6图示了用于产生具有孔径24的盖板20的“结构化单元”410'的可替换实施例，其可以取代单元410使用以用于允许组织从标准显微镜载玻片的自动化、灵活且精确的选择。
一般流程与以上所描述的那个类似：首先，从样本的图像选择感兴趣的区域以作为图像-ROI，优选地基于染色组织的图像分析和解析。然后将描述该图像-ROI的文件传送给结构化单元410'，其应当产生具有对应于图像-ROI的孔径24的盖板20（并且在应用到样本、样本-ROI之后）。
结构化单元410'中的所确定的图像-ROI的投影要求对齐。存在实现这一点的两个主要选项，这取决于是否使用用于图像-ROI的确定的相同载玻片。在该情况下，可以在没有附加成像的情况下使用机械对齐。在具有组织的相邻切片的新载玻片的情况下，新载玻片需要由结构化单元410'成像。
该实施例的主要新颖步骤在于，通过诸如打印或标绘之类的材料沉积技术产生保护盖板20。
图5针对打印的情况图示了这一点。在x和y方向上逐行顺序地移动打印机的喷嘴412以覆盖要产生的盖板20的整个区域。除在对应于图像/样本-ROI的期望孔径24的点处，在每个点处从喷嘴沉积材料。
不同的打印技术可用于该步骤，因为存在可用的不同墨水。针对所沉积的材料的主要要求在于，其必须承受孔径中的样本材料的分离条件，即在升高的温度（取决于协议，这可以高达80℃）和升高的PH下的缓冲剂中不溶解。还要求对衬底和组织的良好粘合。典型地，将盖子或帽子应用在盖板上以创建用于分离缓冲剂的方便引入的体积（参见图4）。还要求保护盖板上的帽子的粘合。为了便于控制对齐，有益的是具有盖板20的清楚可见的颜色。
大部分打印技术，例如喷墨机，要求低粘度的墨水。这可以以不同方式实现，例如：
(i) 加热高粘度材料，
(ii) 使用低粘度前驱体材料并且在打印之后对其进行转换，或者
(iii) 制造低粘度溶剂中的材料的溶液并且在打印之后移除溶剂。
还可以可选地在打印之后处置盖板20以用于通过例如辐照、加热或组合的稳定化。而且一般地，合期望的是具有用于病理学的易于使用的解决方案。因此，不要求归因于危险溶剂或材料的使用的环境保护的实施例是优选的。
在满足以上考虑的一个优选的实施例中，将热熔化墨水用于打印。这要求加热的打印喷嘴（412）和墨水供应，但是没有后打印处置（除以任何方式发生的冷却之外）。出于该目的，材料包括例如蜡、ABS聚合物和/或PLA聚合物。
在另一优选的实施例中，将UV可固化墨水用于打印。在打印之后，使盖板暴露于UV或UV-VIS辐射，同时保护打印头以防暴露于该辐射。图6针对所打印的盖板20暴露于来自UV灯413的UV-辐射图示了这一点。出于该目的，材料包括例如环氧树脂、丙烯酸盐、烯醇和/或硅树脂。
在另一优选的实施例中，可以使用通过暴露于潮湿而凝固的水固化墨水。出于该目的，材料包括例如硅树脂。
在另一实施例中，两个反应成分可以分离地打印并且一旦沉积在载玻片上则反应以形成稳定层。出于该目的，材料包括例如环氧化物和胺、异硫氰酸酯和胺、酐和胺和/或烯醇和胺。
在另一实施例中，打印聚合物溶液并且晾干以玻璃化。这样的系统优选地使用环境友好的溶剂，比如水、甲醇、乙醇等等。系统可以提供有活性炭过滤器或凝固储存器以在其不能蒸发于环境中的情况下收集溶剂。所要求的溶剂的数量是非常低的（典型地，所打印的体积将小于每样本0.1ml，并且样本的典型数目将小于每实验室和天10个，这导致所估计的负载小于每天1ml溶剂）。
可以采用多喷嘴打印机，按需滴落或连续滴落的打印机。作为打印的可替换方案，可以使用标绘。在该情况中，提供材料的连续流动，并且移动标绘头以覆盖所要求的表面。这允许使用较高粘度材料（溶液和/或反应混合物和/或热熔化物）。
优选地，通过考虑样本-ROI和来自打印技术的设计约束的计算机程序完成孔径24的设计。包含盖板20的孔径在没有掩模的情况下产生并且因此不要求任何准备、成本或时间。可以以亚毫米分辨率创建任何形状。
结构化单元410'中产生的盖板20的使用如以上所述：在将结构化盖板应用到样本之后，组织材料暴露于溶解样本-ROI（在孔径内部）中但不来自样本-ROI外部的生物分子的溶液，因为这由盖板的保护层覆盖。然后，提供具有生物分子的缓冲剂以用于分子诊断分析，如例如在通过PCR、测序或其他分子诊断技术的可选的另外净化、放大和检测之后。
可选地，盖子可以应用/胶合在载玻片上以限制裂解溶液或缓冲剂，其可以通过吸液管经由盖子中的访问端口而应用和移除。可替换地，可以使用裂解和/或提取步骤的更为复杂和专用的实施例。
在样本材料的提取之后，可以丢弃其余样本，或者可替换地，可以利用适当的处置剥掉盖板，并且可以产生具有用于不同分析的不同孔径的另一盖板。由于在分离缓冲剂中不存在保护层的溶液，因而不发生与分子分析的干扰。
所描述的方法是非常简单和鲁棒的。其避免通过可能导致污染的刮擦的打开、机械和手动移除。方法可以应用在分子病理学中，特别地用于基于癌细胞中的分子改变的标识的肿瘤学中的患者分层。
总之，本发明的实施例已经描述为在针对分子诊断分析的组织病理学研究（比如qPCR和/或排序）之后允许样本材料从具有薄部段的组织载玻片的可靠且方便、优选地自动化选择的示例。一个特征是湿法处理，即通过裂解缓冲剂中的选择性溶解的样本的期望部段的移除。方法基于覆盖除针对分析所选择的部分之外的所有样本材料。期望的图案通过软件工具创建，其允许之前从样本部段或者从因此已经染色的相邻切片所获得的图像上的区域的选择。基于染色组织的图像分析和解释，可以特别地选择感兴趣的区域（ROI）。ROI数据被传送到提供具有对应于ROI（在使用样本的不同切片的情况下移置在样本切片上）的孔径的盖板的设备。
可以通过商业上可获得的自动化带切割器执行带的结构化。可替换地，可以通过打印或标绘在ROI外部的样本上形成连续层的材料而提供盖板。可以通过喷墨机、连续式喷墨或3D打印或类似地通过标绘完成材料的应用。材料可以可选地是前驱体材料，其通过UV辐射、烘烤或干燥而在应用之后转换成更稳定的材料。典型材料可以是热塑性聚合物、单体或非反应与反应成分的混合物。
从未覆盖的（ROI）部分，核酸（或其他生物标记）在升高的温度下溶解在闭合设备中的裂解缓冲剂中。可以在没有预处置的情况下或者在去石蜡之后使用FFPE材料。在裂解之后，溶解材料可以从设备移除并且传送到期望的分析器具，或者可替换地，设备可以经由专用接口直接耦合。可以传送样本材料以用于通过PCR、测序或其他分子诊断技术的另外净化、放大和检测。
感兴趣的区域外部的区域通过结构化的层（带）覆盖，例如通过基于由病理学家或自动化软件解析系统做出的选择而从连续层自动地切掉所选择的区域并且在将孔径与所标识的ROI对齐的样本切片上应用层的切割工具。实验室技术人员仅必须放置盖子并且引入裂解缓冲剂。方法可以直接应用在标准玻璃载玻片上的所研究的组织部段上。可以容易地进行选择之后的检查。分辨率通过带结构化技术确定，其可以尤其是针对高分辨率的平版印刷和针对中分辨率的切割工具。系统可以链接到数字病理学扫描仪和图像分析软件以用于选择感兴趣的区域和表征输入材料。
实验结果
在使用根据Qiagen的化验miRNeasy FFPE的RNA提取从FFPE癌细胞SKBR3选择性提取mRNA的实验中测试所描述的方法。应用以下协议：
- 从块切割4μm厚的福尔马林固定石蜡包埋SKBR3细胞的四个部段。
- 去石蜡：3 x二甲苯8 min；100% EtOH 5 min & 30秒。
- 应用包含孔径的黑带（Metamark E-系列, UK）。
- 在黑带上应用杂交腔室。
- 提取：将240μl的PKD + 50μl的蛋白酶K注入100μl/样本中，闭合腔室；保持15分钟60℃，然后15分钟80℃。
- 从杂交腔室取出流体并且添加100μl的PKD
- RNA净化、cDNA反应以及PCR。
图7示出了根据针对带中的孔径的两个大小（即相应地3.5mm2和5mm2）的HER2 mRNA和GAPDH mRNA（管家基因）的阈值循环数目（CT值，竖直轴）的结果。
比较显露以下差异：mRNA复制数目中的相对比例：2.23（从PCR中的CT差异所转换的）；孔径的表面比例：2.04（5×5/3.5×3.5）。
这得出（从染色导出的）4x103个细胞的部段的3.5×3.5 mm2孔径中的所估计数目的SKBR细胞核。
虽然已经在附图和前述描述中详细说明和描述了本发明，但是这样的说明和描述将被认为是说明性或示例性而非限制性的；本发明不限于所公开的实施例。通过研究附图、说明书和随附权利要求书，本领域技术人员在实践所主张的发明时可以理解和实现所公开的实施例的其他变型。在权利要求中，词语“包括”不排除其他元件或者步骤，并且不定冠词“一”或“一个”不排除多个。单个处理器或者其他单元可以实现权利要求中记载的若干项目的功能。在互不相同的从属权利要求中记载特定措施的仅有事实不指示不能有利地使用这些措施的组合。计算机程序可以存储/分布在诸如连同其他硬件或者作为其一部分提供的光学存储介质或者固态介质之类的合适介质上，而且可以以其他形式分布，诸如经由因特网或其他有线或无线电信系统。权利要求中的附图标记不应解释为对范围的限制。

Claims (17)

1.一种用于将材料从生物样本（11）中被称为样本-ROI（RS）的感兴趣区域分离的样本分离设备（400），包括用于通过使用从涉及样本的图像 (I) 中被称为“图像-ROI”（RI）的感兴趣区域导出的样本-ROI（RS）来提供具有样本-ROI处的孔径（24）的盖板（20）的结构化单元（410,410'），由此使得能够访问样本-ROI而同时屏蔽样本的其余部分，并且能够通过所述孔径（24）从样本-ROI移除样本材料。
2.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，盖板（20）在一侧上包括黏合剂（22）。
3.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，通过切割和/或通过光刻产生孔径（24）。
4.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，通过沉积材料，连续地建立具有孔径（24）的盖板（20）。
5.根据权利要求4所述的样本分离设备（400），
其特征在于，在打印或标绘过程中，连续地建立具有孔径（24）的盖板（20）。
6.根据权利要求4所述的样本分离设备（400），
其特征在于，所沉积的材料在沉积之后物理地和/或化学地更改。
7.根据权利要求6所述的样本分离设备（400），
其特征在于，所沉积的材料在沉积之后通过加热、冷却、暴露于辐射和/或暴露于试剂而被更改。
8.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，样本（11）部署在载体上。
9.根据权利要求8所述的样本分离设备（400），
其特征在于，样本（11）部署在显微镜载玻片（10）上。
10.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，盖子（25）部署在孔径（24）上方。
11.根据权利要求1所述的样本分离设备（400），
其特征在于，提供致动器（422）以用于将能量应用给样本，所述能量包括电磁辐射、热量和/或超声。
12.一种用于将材料从生物样本（11）中被称为样本-ROI（RS）的感兴趣区域分离的方法，所述方法包括以下步骤：
a）从涉及样本的图像 (I) 中被称为“图像-ROI”（RI）的感兴趣区域导出样本-ROI（RS），
b）产生具有样本-ROI处的孔径（24）的盖板（20）；
c）在步骤b）之后将所述盖板（20）应用到样本（11），由此使得能够访问样本-ROI而同时屏蔽样本的其余部分；
d）通过盖板（20）的孔径（24）将样本材料从样本-ROI移除。
13.根据权利要求12所述的方法，
其特征在于，样本-ROI（RS）处的样本材料被加热、冷却、暴露于试剂和/或裂解。
14.根据权利要求13所述的方法，
其特征在于，所述试剂包括缓冲液。
15.根据权利要求12所述的方法，
其特征在于，从样本自身的图像中或者从与样本相同的材料所生成的附加样本的图像中的感兴趣区域导出样本-ROI（RS）。
16.根据权利要求12所述的方法，
其特征在于，在将样本材料从样本-ROI（RS）移除之前和/或之后生成样本（11）的图像。
17.根据权利要求12所述的方法，
其特征在于，利用从样本-ROI（RS）所获得的样本材料执行分子化验。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2017135125A (ru) * 2015-04-20 2019-04-05 Конинклейке Филипс Н.В. Устройство управления печатью для управления печатью покрывающего слоя на образце
US10867443B2 (en) * 2015-07-16 2020-12-15 Koninklijke Philips N.V. Information transformation in digital pathology
US10446260B2 (en) * 2015-12-07 2019-10-15 Clarapath, Inc. Spatially indexed tissue biobank with microscopic phenotype-based retrieval system
EP3473338A1 (en) 2017-10-19 2019-04-24 Koninklijke Philips N.V. A microfluidic cartridge and sample carrier
EP3534139A1 (en) * 2018-03-01 2019-09-04 Koninklijke Philips N.V. Device and method for controlling the volume of a micro chamber arrangement
EP3759213A4 (en) * 2018-03-02 2022-03-16 Quantumcyte, Inc. METHODS, COMPOSITIONS AND DEVICES FOR ISOLATION AND EXPRESSION ANALYSIS OF REGIONS OF INTEREST FROM A TISSUE
WO2019246584A1 (en) * 2018-06-21 2019-12-26 Genomic Health, Inc. Systems and methods for pre-analytical substrate processing
EP3754322A1 (en) 2019-06-18 2020-12-23 Xyall B.V. Tissue sample dissection apparatus
CN110285999B (zh) * 2019-07-08 2021-07-23 肯维捷斯（武汉）科技有限公司 一种固液混合物取样器及其取样方法
JP2022125887A (ja) 2021-02-17 2022-08-29 シスメックス株式会社 検体剥離方法および検体剥離装置
CN112985952B (zh) * 2021-02-20 2022-09-20 山东骏腾医疗科技有限公司 一种病理封片材料

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2902026C3 (de) * 1979-01-19 1981-10-29 Peters, J. Hinrich, Dr., 5064 Rösrath Biologisches Gefäß
JPS6013513U (ja) * 1983-07-07 1985-01-29 凸版印刷株式会社 プレパラ−ト
US4731335A (en) * 1985-09-13 1988-03-15 Fisher Scientific Company Method for treating thin samples on a surface employing capillary flow
JPH0772046A (ja) * 1993-09-03 1995-03-17 Aloka Co Ltd 試薬分注フィルタ
DE4409705A1 (de) * 1994-03-22 1995-09-28 Boehringer Mannheim Gmbh Vorrichtung zur Bearbeitung von Nukleinsäuren in Präparationen
US5784193A (en) * 1996-06-28 1998-07-21 Ferguson; Gary W. Microscope slide with removable layer and method
JP4068682B2 (ja) * 1997-02-03 2008-03-26 浜松ホトニクス株式会社 フォトレジストを用いた生体由来物質の分離方法
US6159681A (en) * 1997-05-28 2000-12-12 Syntrix Biochip, Inc. Light-mediated method and apparatus for the regional analysis of biologic material
JP4387588B2 (ja) * 1998-02-04 2009-12-16 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド 高スループットスクリーニングアッセイ用仮想ウェル
US20030078499A1 (en) * 1999-08-12 2003-04-24 Eppstein Jonathan A. Microporation of tissue for delivery of bioactive agents
JP2001091418A (ja) * 1999-09-21 2001-04-06 Olympus Optical Co Ltd Ｌｃｍ用標本
DE10003588C2 (de) * 2000-01-25 2002-10-02 Sl Microtest Wissenschaftliche Verfahren zum Isolieren eines Teils einer Schicht biologischen Materials
US20040053326A1 (en) * 2001-03-14 2004-03-18 Emmert-Buck Michael R. Transfer microdessection
DE10135091A1 (de) * 2001-07-15 2003-01-30 Universitaetsklinikum Charite Verfahren, Einrichtung und Objektträger zur Mikrodissektion
CN1172173C (zh) * 2001-07-26 2004-10-20 清华大学 单一细胞样本显微切割方法及其系统
US7456938B2 (en) * 2003-11-07 2008-11-25 Mds Analytical Technologies (Us) Inc. Laser microdissection on inverted polymer films
JP3820227B2 (ja) * 2002-01-23 2006-09-13 オリンパス株式会社 細胞単離方法
US7569246B2 (en) * 2002-07-26 2009-08-04 P.A.L.M. Microlaser Technologies Ag Method for preparing a biological material for examination under a microscope, and corresponding arrangement comprising a biological material prepared using said method
US7695752B2 (en) * 2003-01-24 2010-04-13 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target activated microtransfer
WO2005033668A1 (de) * 2003-10-01 2005-04-14 Norbert Leclerc Mikrodissektion
CA2563613A1 (en) * 2004-04-16 2005-12-08 Wei-Sing Chu Device for extracting biological molecules from tissue specimens
WO2008029468A1 (fr) * 2006-09-07 2008-03-13 Neat Co., Ltd. Procédé et appareil pour microéchantillonnage multipoint
DK2243711T3 (da) * 2009-04-22 2012-10-22 Hoffmann La Roche Fremstilling af båndprodukter med diagnostiske hjælpemidler
RU2553078C2 (ru) * 2009-04-28 2015-06-10 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Способ микродиссекции и система обработки информации
US8889416B2 (en) * 2010-01-21 2014-11-18 California Institute Of Technology Methods and devices for micro-isolation, extraction, and/or analysis of microscale components
EP2597161B1 (en) * 2010-07-23 2014-12-24 Bioneer Corporation Method of manufacturing micro chamber plate with built-in sample and analytic micro chamber plate, analytic micro chamber plate and apparatus set for manufacturing analytic micro chamber plate with built-in sample

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