CN105219809A - 一种移动纤维床反应器及应用于丁酸生产的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了<b>一种移动纤维床反应器及应用于丁酸生产的方法</b>。在通用发酵罐中装入内含棉纤维材料的悬浮球构建内置式移动纤维床反应器(MFBB)，并进一步将其应用于固定化发酵生产丁酸,其步骤包括：通过化学修饰棉纤维载体,加强载体与固定化细胞间的吸附力，优化了反应器中纤维床的填充条件和悬浮转速，通过以葡萄糖为底物进行重复批次和补料发酵试验，评估MFBB在发酵工业中的应用潜质。在葡萄糖浓度高达143？g/L的批次发酵中，产酸过程也没有延滞期，最终得到的丁酸浓度为64.2？g/L。本发明利用的内置式流动纤维床反应器固定化发酵生产丁酸具有操作稳定性好、工作周期长、产物收率高、易于工业放大以及成本低廉等优点。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种移动纤维床反应器及应用于丁酸生产的方法。
背景技术
丁酸是一种重要的化工原料，在工业、农业、医药等领域有着广泛的应用。丁酸可以通过化学法和生物法生产。由于化学法污染严重，且生物法（发酵法）生产的丁酸更适应食品和医药等领域的使用要求，所以，目前有许多研究者致力于发酵法生产丁酸的研究。其中，较为突出的是Yang等人发明了细胞固定化发酵的纤维床生物反应器（fibrous-bedbioreactor，简称FBB）用于生产丁酸。相比传统的丁酸游离发酵，纤维床固定化丁酸发酵可以大幅缩短生产周期、提高终产物浓度，有利于发酵液的后续分离，但外置固定床增加了工业化应用中的成本。
本发明将FBB的棉纤维织物等纤维材料作为悬浮载体的填料，在移动床生物膜反应器（movingbedbiofilmreactor，MBBR）基础上开发出的一种新型高效的内置式移动纤维床反应器movingfibrous-bedbioreactor(MFBB)。与MBBR的聚乙烯、聚丙烯及涤纶材质、聚氨酯泡沫体等填料相比，棉纤维材料具有较高的载体活性和单位体积固定的细胞数(细胞密度最高可运70g/L)，此外，棉纤维材料容易获得，价格便宜，固定化成本低。
微生物细胞与吸附载体间的吸附力主要包括长程力（如静电力）和短程力（如范德华力、路易斯酸碱作用力、疏水作用力、化学键力等）。MFBB中的棉纤维在悬浮球中的填充量与FBB相比较少，酪丁酸梭菌在载体上的吸附容易受环境流体剪切力的影响。本发明对棉纤维载体进行化学修饰，加强了载体与酪丁酸梭菌间的吸附力。本发明中的MFBB具有良好的底物、终产物耐受性、高效的糖酸转化率和生产率等优点，与传统的FBB系统相比，这个新颖的MFBB系统更为简单且易于等比例工业放大扩大。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供在移动床生物膜反应器（movingbedbiofilmreactor，MBBR）基础上开发一种新型高效的内置式移动纤维床反应器movingfibrous-bedbioreactor(MFBB)，用于替代传统的FBB系统，以减少在工业化应用中的成本问题。
为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种移动纤维床反应器，包括发酵罐、种子液罐和培养基罐，所述发酵罐和种子液罐之间、发酵罐和培养基罐之间通过输送管道连接，输送管道上设置有输送泵；所述发酵罐上还设置有用于检测发酵罐内液体pH值的pH检测装置，以及用于检测发酵罐内液体温度的温度检测装置，以及用于通入气体的进气管，以及用于排出废气的废气管，以及用于排出发酵罐内液体的排液管，所述排液管上设置有排液泵，所述发酵罐内还设置有用于搅拌发酵罐内液体的搅拌装置。
作为优选，所述搅拌装置为搅拌桨。
作为优选，所述温度检测装置为温度探头，所述的pH检测装置为pH探针。
一种丁酸生产的方法，其采用上述的移动纤维床反应器，包括以下步骤：
（1）、对填充材料进行化学修饰：用一定浓度的NaOH溶液对棉纤维进行碱化处理，碱化处理后的棉纤维用去离子水漂洗、烘干后用聚丙烯亚胺进行修饰，最后用戊二醛进行交联处理；
（2）、对悬浮球进行填充及处理：将经过步骤（1）修饰后的棉纤维填充在一定数量的悬浮球内，对填充后的悬浮球进行灭菌处理；
（3）、向发酵罐中加入一定量的液体培养基，将经过步骤（2）处理的悬浮球加入发酵罐内，通过搅拌使悬浮球处于流化状态；
（4）、内置式移动纤维床反应器的运行：对预装有培养基和悬浮球的发酵罐进行高温灭菌，灭菌后趁余热进行通氮气或惰性气体以维持厌氧条件，冷却后接入一定量含有丁酸梭菌的种子液，在30℃，PH6.0的条件下发酵，每隔4h取样监测OD值变化，待OD值下降至相对稳定值后取出液体培养基。
作为优选，在步骤（1）中，采用浓度为4mol/L的NaOH溶液浸泡棉纤维1h，在去离子水中充分漂洗、烘干后，在4℃环境中保存。
作为优选，在步骤（1）中使用聚丙烯亚胺(PEI)修饰上述煮沸烘干后的纤维，放置于0.2%(w/v)的PEI水溶液中浸泡2h，用HC1调整溶液pH至7.0，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
作为优选，使用戊二醛(GA)交联处理经PEI化学修饰的纤维，在含1%(w/v)GA的0.05mol/L磷酸钾缓冲溶液中(pH7.0)浸泡2h，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
作为优选，在步骤（2）中，将棉纤维填充于悬浮球内，于121℃预灭菌60分钟，并过夜，同样条件下再灭菌60分钟。
作为优选，在步骤（3）中
培养基的装入量为发酵罐容积的40%，悬浮球的总体积为培养基的20%。
作为优选，所述培养基以葡萄糖为底物。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：在移动床生物膜反应器（movingbedbiofilmreactor，MBBR）基础上开发的一种新型高效的内置式移动纤维床反应器movingfibrous-bedbioreactor(MFFB)。与传统的FBB系统相，该反应器中的固定化细胞发酵相当稳定，菌种没有出现退化或者污染的情况，该系统操作更为简单且易于等比例工业放大扩大。通过化学修饰棉纤维载体,加强载体与固定化细胞间的吸附力，优化了反应器中纤维床的填充条件和悬浮转速。
附图说明
图1为移动纤维床固定化生物反应器装置图。
图2为在不同载体上吸附效率的比较。
图3为悬浮球中的棉纤维填充量对细胞吸附的影响比较（转速：100rpm）。
图4为在不同转速中，悬浮球中的棉纤维载体对细胞吸附的影响比较（填充量为2cm6cm/0.42g）。
图5为MFBB上的重复批次和补料批次发酵曲线图（37℃，pH6.0，100rpm）。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式做一个详细的说明。
如图1所示的一种移动纤维床反应器，包括发酵罐1、种子液罐2和培养基罐3，所述发酵罐1和种子液罐2之间、发酵罐1和培养基罐3之间通过输送管道连接，输送管道上设置有输送泵4；所述发酵罐1上还设置有用于检测发酵罐1内液体pH值的pH探针5，以及用于检测发酵罐1内液体温度的温度探头6，以及用于通入氮气的进气管7，以及用于排出废气的废气管8，以及用于排出发酵罐1内液体的排液管9，所述排液管9上设置有排液泵10，所述发酵罐1内还设置有用于搅拌发酵罐1内液体的搅拌桨11。
一种丁酸生产的方法，其采用上述的移动纤维床反应器，包括以下步骤：
步骤（1）、填充载体的化学修饰：
1）、将小块的棉纤维置于浓度为4N的NaOH溶液中浸泡1h，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用；
2）、使用聚丙烯亚胺(PEI)修饰上述煮沸烘干后的纤维，放置于0.2%(w/v)的PEI水溶液中浸泡2h，用HC1调整溶液pH至7.0，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
3）、使用戊二酸(GA)交联处理经PEI化学修饰的纤维，在含1%(w/v)GA的0.05mol/L磷酸钾缓冲溶液中(pH7.0)浸泡2h，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
之所以，选用棉纤维作为载体是经过载体吸附实验后得出的。载体吸附实验：收集处于稳定生长时期的酪丁酸梭菌，离心（10000×g，5min，4℃），用0.1mol/L磷酸钾缓冲溶液（pH6.0）洗涤两次，再次悬浮于上述磷酸钾缓冲溶液中，初始OD600值在0.8-0.9之间。裁成小方块的纤维放入含100mL菌悬液的500mL厌氧瓶内，置于摇床中，搅拌转速控制在120rpm，温度为37℃。酪丁酸梭菌吸附8-12h，直至菌悬液中的OD值不再降低。
吸附试验中的菌悬液的OD值使用紫外/可见光分光光度计（AmershanBiosciences，美国）于600nm读取。一个单位的OD值相当于0.685g/L的酪丁酸梭菌浓度（由干重法得到）。因此，静态吸附试验中的细胞负载量计算公式为：细胞负载量=(ΔOD×0.685×V×1000)/W，其中，ΔOD为吸附前后菌悬液600nm的吸光度的变化；V为菌悬液的体积（mL）；W为棉纤维织物的质量（g）。图2为在不同载体上吸附效率的比较。其中A：棉布；B：经PEI处理的棉布；C：经PEI和GA处理的棉布；D：聚酯；E：经PEI处理的聚酯；F：经PEI和GA处理的聚酯。
本例，经过PEI和GA修饰后，棉纤维载体的吸附能力较强,其中经PEI和GA联合修饰后的棉纤维织物上的细胞负载量最大，比处理前的棉纤维载体和同样条件修饰后的涤纶纤维分别提高了45%和27%(41.56士1.82mgcells/gfibersvs.28.65士0.42和32.69±1.22mgcells/gfibers)。
步骤（2）对悬浮球进行填充及处理：将经过步骤（1）修饰后的棉纤维（2cm6cm/0.42g）填充在一定数量的悬浮球内，于121℃的温度下预灭菌60分钟，并过夜，同样条件下再灭菌60分钟。悬浮球外壳是以聚丙烯为主要原料加工而成，密度0.90-0.91g/cm3，直径为22mm，可以拆分成两个半球结构,放入棉纤维后，通过卡口卡紧后可组成一个球体。
为了了解棉纤维载的最佳吸附体量，发明人还做了以下实验：选取不同纤维量（22/0.14，23/0.21，24/0.28，25/0.35，26/0.42，27/0.49和28/0.56cmcm/g）作为悬浮球的填料载体，填充后的悬浮球置于预装50mL的100mL的厌氧摇瓶中，摇床转速和温度设定为80rpm和37℃。
纤维量（22/0.14）指的是棉纤维切成宽为2cm、长为2cm、质量为0.14g，纤维量梯度差异以此类推。
所有吸附试验的初始酪丁酸梭菌悬浮液细胞密度控制在OD6000.8-0.9。吸附试验开始后，时隔1h测定悬浮液中的细胞密度降低量，直到在培养的细胞浓度趋于稳定。
固定化细胞的量通过测量估计OD600下降值，换算为吸附细胞干重，其中一个单位的OD600换算为0.68g/L酪丁酸梭菌细胞干重的测定当量。
本例，悬浮球中的最佳的棉纤维填充量为2cm6cm/0.42g。图3为悬浮球中的棉纤维填充量对细胞吸附的影响（转速：100rpm）。
步骤（3）、将预处理过的100个悬浮球置于预装2L培养基的5L的由有机玻璃加工而成磁力搅拌发酵罐内，发酵罐容积为5L，培养基装液量为2L，100个悬浮球的填充率为装液量的20%，发酵罐设有搅拌桨，通过搅拌使悬浮球处于流化状态。
为了研究转速对吸附效率的影响，发明人还做了以下实验：根据最优填充量，将其填充于相同悬浮球内并在不同转速（80rpm，100rpm，120rpm）的摇床内震荡吸附以此来测定搅拌速率对固定化效率的影响。
本例，在发酵罐1上操作时设定的最佳搅拌桨转速为100rpm。图4为在不同转速中，悬浮球中的棉纤维载体对细胞吸附的影响（填充量为2cm6cm/0.42g）。
步骤（4）、内置式移动纤维床反应器的运行：反应器启动成功后，对预装2L培养基和100个悬浮球的发酵罐进行高压灭菌，灭菌后趁余热进行通氮气以维持厌氧条件，冷却后接入200mL种子液，在37℃、pH6.0和转速100rpm的条件下启动发酵，隔4h取样监测OD值变化，待OD值下降至相对稳定值后通氮气压出培养基。
MFBB上的重复批次和补料批次发酵：发酵培养基配方为：以葡萄糖为底物，添加40mL矿物1溶液、40mL矿物2溶液、10mL痕量金属溶液，10mL维生素溶液，加水至1L，pH调至6.0。矿物1溶液：K2HPO43H2O7.86g/L；矿物2溶液：KH2PO46g/L，MgSO47H2O2.5g/L，(NH4)2SO46g/L，CaCl22H2O0.16g/L，NaCl12g/L；痕量金属溶液：1.5g/L次氮基三乙酸，FeSO47H2O0.1g/L，MnSO42H2O0.5g/L，NaCl1.0g/L，CoCl20.1g/L，CaCl22H2O0.1g/L，ZnSO45H2O0.1g/L，CuSO45H2O0.01g/L，AlK(SO4)20.01g/L，H3BO30.01g/L，Na2MoO43H2O0.01g/L；维生素溶液：维生素B15mg/L，核黄素5mg/L，烟酸5mg/L，泛酸5mg/L，维生素B120.1mg/L，对氨基苯酸5mg/L，硫辛酸5mg/L。在构建的MFBB系统中进行了固定化发酵丁酸批次及补料试验。
本例，在MFBB的丁酸发酵过程中，重复批次试验比较稳定，八批次中的得率在0.32到0.48之间，平均得率为0.42g/g。其中最大得率接近理论得率0.49g/g。丁酸生产率从0.59到0.92g/Lh之间，平均生产率为0.75g/Lh。最后两个批次(第9、10批)中，在MFBB系统中使用了补料模式。培养基中OD600值为3.0。随着葡萄糖的消耗，悬浮球中的固定化酪丁酸梭菌并没有受到丁酸的抑制，丁酸继续生成直到其浓度迗到65.4g/L，两个批次的平均得率为0.38g/g。图5为MFBB上的重复批次和补料批次发酵曲线图（37℃，pH6.0，100rpm）。
本说明书中所描述的以上内容仅仅是对本发明所作的举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明说明书的内容或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种移动纤维床反应器，其特征在于：包括发酵罐、种子液罐和培养基罐，所述发酵罐和种子液罐之间、发酵罐和培养基罐之间通过输送管道连接，输送管道上设置有输送泵；所述发酵罐上还设置有用于检测发酵罐内液体pH值的pH检测装置，以及用于检测发酵罐内液体温度的温度检测装置，以及用于通入气体的进气管，以及用于排出废气的废气管，以及用于排出发酵罐内液体的排液管，所述排液管上设置有排液泵，所述发酵罐内还设置有用于搅拌发酵罐内液体的搅拌装置。
2.根据权利要求1所述的一种移动纤维床反应器，其特征在于：所述搅拌装置为搅拌桨。
3.根据权利要求1所述的一种移动纤维床反应器，其特征在于：所述温度检测装置为温度探头，所述的pH检测装置为pH探针。
4.一种丁酸生产的方法，其采用权利要求1或2或3所述的移动纤维床反应器，其特征在于：包括以下步骤：
（1）、对填充材料进行化学修饰：用一定浓度的NaOH溶液对棉纤维进行碱化处理，碱化处理后的棉纤维用去离子水漂洗、烘干后用聚丙烯亚胺进行修饰，最后用戊二醛进行交联处理；
（2）、对悬浮球进行填充及处理：将经过步骤（1）修饰后的棉纤维填充在一定数量的悬浮球内，对填充后的悬浮球进行灭菌处理；
（3）、向发酵罐中加入一定量的液体培养基，将经过步骤（2）处理的悬浮球加入发酵罐内，通过搅拌使悬浮球处于流化状态；
（4）、内置式移动纤维床反应器的运行：对预装有培养基和悬浮球的发酵罐进行高温灭菌，灭菌后趁余热进行通氮气或惰性气体以维持厌氧条件，冷却后接入一定量含有丁酸梭菌的种子液，在30℃，PH6.0的条件下发酵，每隔4h取样监测OD值变化，待OD值下降至相对稳定值后取出液体培养基。
5.根据权利要求4所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：在步骤（1）中，采用浓度为4mol/L的NaOH溶液浸泡棉纤维1h，在去离子水中充分漂洗、烘干后，在4℃环境中保存。
6.根据权利要求4或5所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：在步骤（1）中使用聚丙烯亚胺(PEI)修饰上述煮沸烘干后的纤维，放置于0.2%(w/v)的PEI水溶液中浸泡2h，用HC1调整溶液pH至7.0，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
7.根据权利要求6所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：使用戊二醛(GA)交联处理经PEI化学修饰的纤维，在含1%(w/v)GA的0.05mol/L磷酸钾缓冲溶液中(pH7.0)浸泡2h，在去离子水中充分漂洗，烘干，4℃保存备用。
8.根据权利要求4所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：在步骤（2）中，将棉纤维填充于悬浮球内，于121℃预灭菌60分钟，并过夜，同样条件下再灭菌60分钟。
9.根据权利要求4所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：在步骤（3）中
培养基的装入量为发酵罐容积的40%，悬浮球的总体积为培养基的20%。
10.根据权利要求4所述的一种丁酸生产的方法，其特征在于：所述培养基以葡萄糖为底物。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110117526A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-13 | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 | 一种新型发酵装置及其在固定化酵母发酵制备乙醇中的应用 |
| CN110157603A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-08-23 | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 | 一种固定化黑曲霉产柠檬酸的发酵反应器及其方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201182455Y (zh) * | 2008-04-28 | 2009-01-21 | 吴成芳 | 折叠叉子 |
| CN102952745A (zh) * | 2012-11-02 | 2013-03-06 | 华南理工大学 | 一种双菌固定化厌氧发酵生产丁醇的装置和方法 |
-
2015
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201182455Y (zh) * | 2008-04-28 | 2009-01-21 | 吴成芳 | 折叠叉子 |
| CN102952745A (zh) * | 2012-11-02 | 2013-03-06 | 华南理工大学 | 一种双菌固定化厌氧发酵生产丁醇的装置和方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHI ZM等: "Long-term production of butyric acid through immobilization of Clostridium tyrobutyricum in a moving fibrous-bed bioreactor (MFBB)", 《J CHEM TECHNOL BIOTECHNOL》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110117526A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-13 | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 | 一种新型发酵装置及其在固定化酵母发酵制备乙醇中的应用 |
| CN110157603A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-08-23 | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 | 一种固定化黑曲霉产柠檬酸的发酵反应器及其方法 |
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