CN105219738A - 重组单纯疱疹病毒及它感染和制备它的宿主细胞以及它们的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药领域，公开了一种重组单纯疱疹病毒，所述重组单纯疱疹病毒包括单纯疱疹病毒载体和目的基因，所述单纯疱疹病毒载体是通过使单纯疱疹病毒缺失了编码感染细胞多肽34.5的基因和编码感染细胞多肽4的基因、以及可选择的缺失了编码感染细胞多肽27的基因得到的，所述目的基因的插入位点包括插入在所述单纯疱疹病毒载体的潜伏相关转录编码区，并且在所述编码区的启动子下游。本发明还提供了一种制备和感染有如上所述重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，以及如上所述的重组单纯疱疹病毒、制备和感染有所述重组单纯疱疹病毒的宿主细胞在制备用于治疗慢性疼痛、神经损伤和/或戒毒的药物中的应用。

Description

重组单纯疱疹病毒及它感染和制备它的宿主细胞以及它们的应用

技术领域

本发明涉及一种重组病毒、制备该重组病毒的宿主细胞，感染有该病毒的宿主细胞，以及所述重组病毒、制备该重组病毒的宿主细胞以及感染有该病毒的宿主细胞的应用。具体地说，本发明涉及一种重组单纯疱疹病毒、制备该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，感染有该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，以及所述重组单纯疱疹病毒、制备该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞和感染有该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞的应用。

背景技术

基因治疗是现代生物医药治疗手段的一项革命，而载体技术是基因治疗成功的关键。Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体拥有广泛的宿主细胞谱，能够感染多种细胞并在细胞中长时间持续表达携带的外源基因。由于其独特的优势，目前已经发展成最有前景的病毒载体之一。

脑啡肽(ENK)，是一种具有神经递质功能的五肽，由前体脑啡肽(pro-enkphalin)分裂产生。脑啡肽广泛存在于中枢和外周神经系统，突触前膜分泌的脑啡肽能够作用于突触后膜相应的脑啡肽受体，激活的受体打开相应的钙离子通道，抑制P物质(经痛疼刺激而释放的活化痛觉传导通路的一种神经递质)的释放等。由于脑啡肽受体的活化能够抑制痛觉传导通路的活化，从而起到镇痛的作用。因此，人们研发出了一系列的模仿脑啡肽结构的镇痛药——阿片类药物。

在临床上，阿片类药物是目前治疗慢性疼痛最有效的药物之一。阿片类药物是模仿了内源存在的脑啡肽结构，能够与脑啡肽突触后膜上的受体结合，激活钙离子通道，从而起到镇痛的作用。

长期的临床实践表明，阿片类药物虽疗效好，但是有着极为恶劣的毒副作用：(1)首先是成瘾性，临床上发现，由于受到慢性疼痛的折磨需要长期间隔的对病人给药，但是连续给药一周左右，患者明显表现出对药物的依赖渴求等“吸毒”样反应，停止给药后病人会出现呕吐，失眠，流泪，焦虑等“戒毒”样症状；(2)整个身体技能的不良反应，由于除了在神经系统，在肾脏，大肠等细胞也有阿片类受体，这些受体被激活后，引起了消化系统、呼吸系统的一系列的不良反应，具体可表现为便秘，盗汗，呼吸困难等等。

正因为阿片类药物在临床应用上的局限性，基因治疗的发展为慢性疼痛的治疗提供了新的前景。而HSV作为基因治疗的重要载体，具有较大的优势。在慢性疼痛的治疗中，也有一些针对HSV-1开发的药物，且取得了十分振奋人心的实验结果。

但目前针对HSV-1为载体开发的治疗慢性疼痛的基因药物中，目的基因的表达稳定性、药物作用效果且药物持续时间还有待进一步提高。

神经生长因子(NGF)是一种具有神经元营养和促突触生长双重生物学功能的神经细胞生长调节因子，其主要功能是促进神经系统的生长发育并维持其正常生理功能，促进损伤的神经再生和修复。目前NGF在神经内外科、骨科、眼科、耳鼻喉科、儿科和内分泌科都有着显著的疗效，主要用于周围神经损伤和脊髓损伤、颅脑损伤、中枢神经系统缺血、缺氧的辅助治疗、早老性痴呆、糖尿病性周围神经病变及化疗药(紫杉醇、长春新碱、顺铂)等引起的末梢神经病变，也可以适用于感觉神经、交感神经及中枢胆碱能神经营养不良及发育不良等病症。

目前市场上销售的神经生长因子均提取自小鼠颌下腺，主要商品为恩经复、苏肽生和金路捷。鼠NGF有如下缺点：(1)鼠NGF和人NGF蛋白序列有10％的差异，疗效可能有差异，且具有免疫原性，可能诱发抗体反应；(2)鼠源病毒的交叉污染隐患；(3)生产依赖活体动物。人神经生长因子由于提取困难或者重组工艺缺陷，一直未有产品上市。

因此，开发出一种有效再生和修复损伤神经的药物也势在必行，并且该药物的稳定性、作用效果和持续时间需要有一定的保障。

发明内容

本发明的第一个目的是为了克服以上缺陷，提供一种能够稳定表达、作用效果好且持续时间长地治疗慢性疼痛或神经损伤的重组单纯疱疹病毒，所述单纯疱疹病毒载体是通过使单纯疱疹病毒缺失了编码感染细胞多肽34.5(ICP34.5)的基因和编码感染细胞多肽4(ICP4)的基因、以及可选择的缺失编码感染细胞多肽27(ICP27)的基因得到的，所述目的基因的插入位点包括插入在所述单纯疱疹病毒载体的潜伏相关转录子编码区(LAT区)，并且在LAT区的启动子下游。该重组单纯疱疹病毒携带的目的基因能够在感染所述重组单纯疱疹病毒的细胞中稳定表达，且作用效果好，持续时间长。

优选的，所述目的基因为编码脑啡肽或神经生长因子的基因。

优选的，所述单纯疱疹病毒分离自亚洲人种。

本发明的第二个目的是提供一种制备病毒的宿主细胞，其中，所述病毒为以上所述的重组单纯疱疹病毒，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

本发明的第三个目的是提供一种感染有病毒的宿主细胞，其中，所述病毒为如上所述的重组单纯疱疹病毒，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

本发明的第四个目的是提供如上所述的重组单纯疱疹病毒、如上所述的制备病毒的宿主细胞和/或如上所述的感染有病毒的宿主细胞在制备用于治疗慢性疼痛、神经损伤和/或戒毒的药物中的应用。

本发明通过缺失所述单纯疱疹病毒编码感染细胞多肽34.5的基因和编码感染细胞多肽4的基因、以及可选择的缺失编码感染细胞多肽27的基因，并在LAT区启动子的下游插入目的基因，实现了目的基因能够稳定的表达，且作用效果好，治疗持续时间长的目的。另外，本发明还具有如下的优点：(1)给药特异性，避免了全身给药引发的副作用以及药物弥散；(2)避免了手术、穿刺等对神经系统的二次机械损伤；(3)避免药物的依赖性以及相关的副作用等等。另外，在所述单纯疱疹病毒优选分离自亚洲人种的情况下，所制备的重组单纯疱疹病毒更适合亚洲人种的侵染和治疗。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

一方面，本发明提供了一种重组单纯疱疹病毒，所述重组单纯疱疹病毒包括单纯疱疹病毒载体和目的基因，其中，所述单纯疱疹病毒载体是通过使单纯疱疹病毒缺失了编码感染细胞多肽34.5的基因和编码感染细胞多肽4的基因、以及可选择的缺失编码感染细胞多肽27的基因得到的，所述目的基因的插入位点包括插入在所述单纯疱疹病毒载体的LAT区，并且在所述LAT区的启动子下游。

根据本发明，所述编码ICP34.5的基因、编码ICP27的基因和编码ICP4的基因均为本领域技术人员所公知，并且也能够通过登录相关的数据库查到，例如，可以通过登录Genebank数据库查询到相关的核苷酸序列，这些均是本领域技术人员具有的常规技术手段，本发明在此不再赘述。

根据本发明，所述单纯疱疹病毒的LAT区被认为在HSV潜伏的建立、维持和激活过程中起重要作用。其具体的基因序列也为本领域技术人员所公知，并且也能够通过登录相关的数据库或相关的公开出版物查到，例如，可以通过登录Genebank数据库查询到相关的核苷酸序列，本发明在此也不再赘述。

本发明需要说明的是，术语“单纯疱疹病毒载体的LAT区”与术语“单纯疱疹病毒的LAT区”是等同的。

根据本发明，将ICP34.5基因和ICP4基因以及可选的ICP27基因敲除，同时在单纯疱疹病毒载体的LAT区插入所述目的基因可有效实现本发明的目的，即，使目的基因稳定地表达，实现较好的作用效果以及较长的作用时间，并且本发明的发明人发现，同时删除编码ICP34.5的基因和编码ICP4的基因，能够获得更高的病毒载体目的产物的得率。

本发明的发明人发现，优选的，将所述目的基因插入到所述LAT区的启动子下游核苷酸的119499bp-122025bp处时，所述目的基因的表达效果能够得到进一步提高。其中，所述核苷酸的位置是以整个病毒的基因组5’端第1位核苷酸为起点为基准的。

在本发明中，所述目的基因的插入位点还优选包括至少一处缺失了所述编码感染细胞多肽的基因处。在这样优选的情况下，所制备的重组单纯疱疹病毒在感染宿主细胞后能够实现更好的治疗效果。

根据本发明的一种实施方式，所述目的基因可以不加启动子，而是直接利用LAT区的LAP1和LAP2启动子。

根据本发明，为了保证能够有效地对目的基因进行独立地翻译，本发明的目的基因还优选包括启动子，起始密码子和终止密码子，在这样优选的情况下，在所述重组单纯疱疹病毒感染宿主细胞并进行自身基因的表达时，能够转录出独立的且完整的目的mRNA片段，从而能够有效且独立地对目的基因进行翻译。

根据本发明，所述启动子可以为本领域常规的各种启动子。根据本发明一种优选的实施方式，所述目的基因的插入位点包括插入在所述单纯疱疹病毒载体的潜伏相关转录编码区，并且在所述编码区的启动子下游时，插入到所述启动子下游的目的基因所携带的启动子可以为本领域常规的各种启动子，优选选自CMV启动子、MMLV启动子和RSV启动子所组成的组中的强启动子。根据本发明另一种优选的实施方式，所述目的基因还插入到至少一处缺失了所述编码感染细胞多肽的基因处时，插入到至少一处缺失了所述编码感染细胞多肽的基因处的目的基因所携带的启动子优选为强启动子，例如，选自CMV启动子、MMLV启动子和RSV启动子所组成的组中的强启动子。

所述目的基因还可以包括标记基因(例如，编码β-半乳糖苷酶、绿色荧光蛋白或其它荧光蛋白的基因)。所述目的基因还可以包括通常与转录序列相关的相关转录调控序列，例如聚腺苷酸化位点和下游增强子元件。这些均为本领域技术人员所公知，本发明在此不再赘述。

根据本发明，以上编码ICP的基因的敲除可以采用本领域常规的各种方法，本发明对此并没有特别的限制，例如，通过同源重组的方式，通过定点敲除的方式。在了解了本发明的发明目的以及本发明使用的病毒载体的前提下，本领域技术人员根据其掌握的常规技术手段能够实现对所述编码ICP的基因的敲除。

另外，所述目的基因的插入也可以采用本领域常规的各种方法，所述插入的方式可以为直接在选定的插入位点插入所述目的基因，也可以通过同源重组的方式替换部分碱基序列从而插入所述目的基因，本发明优选后者。

根据本发明，所述目的基因可以在较宽的范围内进行选择，所述目的基因可以为抗肿瘤活性的基因，例如编码前体药物激活蛋白的基因、编码肿瘤抑制蛋白的基因、编码细胞凋亡因子(pro-apoptoticfactors)前体的基因和编码免疫刺激蛋白的基因中的一种或几种。所述免疫刺激蛋白可以为自身具有细胞毒性的蛋白、能够刺激/增强抗肿瘤免疫应答的蛋白。所述一种或几种目的基因还可以为编码改变对疼痛刺激应答或缓解慢性疼痛的多肽的基因，所述多肽例如神经生长因子、其它疼痛调节神经营养因子、神经营养因子样分子的蛋白，物质P以及其它神经肽。所述目的基因也可以为编码能够刺激变性性疾病中损伤神经再生长或防止神经进一步变性的多肽的基因。优选的，所述目的基因为编码改变对疼痛刺激应答或缓解慢性疼痛的多肽的基因和编码修复神经损伤的基因，更优选为编码脑啡肽和神经生长因子的基因。

优选的，本发明的编码脑啡肽的核苷酸序列如SEQIDNo：1所示，所述编码神经生长因子的核苷酸序列如SEQIDNo：2所示。此处需要说明的是，根据如上的基因序列和密码子的偏好性所获得基因序列同属于本发明的保护范围。

单纯疱疹病毒(Herpessimplexvirus，HSV)呈球形，完整的单纯疱疹病毒由核心、衣壳、被膜(Tegument)和囊膜组成。该病毒的核心含有双链DNA，缠绕成纤丝卷轴。衣壳呈二十面体对称，直径为100纳米左右，由162个壳微粒组成。衣壳外由厚薄不匀的被膜覆盖。病毒最外层为典型的脂质双层囊膜。包括囊膜的病毒直径为150-200纳米。单纯疱疹病毒包括I型单纯疱疹病毒(HerpesSimplexVirusTypeI,HSV-1)以及II型单纯疱疹病毒。本发明的单纯疱疹病毒载体优选通过对I型单纯疱疹病毒进行基因改造获得。

根据本发明，所述I型单纯疱疹病毒优选分离自亚洲人种感染的I型单纯疱疹病毒，在该优选的情况下，本发明对亚洲人群更具有针对性。

第二方面，本发明提供了一种用于制备如上所述的重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，其中，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

重组单纯疱疹病毒与正常单纯疱疹病毒一样，也需要在宿主细胞内完成其生活史，因此所述重组病毒的传代增殖需要在宿主细胞中进行。所述宿主细胞可以是各种能够培养本发明病毒载体和/或重组病毒的宿主细胞，例如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、仓鼠肾细胞(BHK细胞)、原代兔肾细胞、鸡胚细胞、羊膜细胞、人宫颈癌细胞(Hela细胞)以及人胚肺二倍体成纤维细胞(WI-38细胞)。

根据本发明，由于本发明提供的重组单纯疱疹病毒敲除掉了编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因，因此，在正常的宿主细胞中其不能够进行正常的繁殖。本发明通过将用于制备所述重组单纯疱疹病毒的细胞进行基因改造，使其宿主细胞能够表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因，从而能够为本发明的重组单纯疱疹病毒的繁殖提供必要的条件。

第三方面，本发明还提供了一种感染有病毒的宿主细胞，其中，所述病毒为本发明的重组单纯疱疹病毒，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因和可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

所述宿主细胞的具体选择可以参照如上所列举的进行。

第四方面，本发明还提供了如上所述的重组单纯疱疹病毒、如上所述的用于制备病毒的宿主细胞和/或如上所述的感染有病毒的宿主细胞在制备用于治疗慢性疼痛、神经损伤和/或戒毒的药物中的应用。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

以下实施例和对比例中：

ENK基因(编码脑啡肽的基因)如SEQIDNo：1所示。

NGF基因(编码神经生长因子的基因)如SEQIDNo：2所示。

Vero细胞，用携带ICP4和/或ICP27编码基因的质粒转染Vero细胞，采用筛选抗生素G418筛选阳性克隆，扩增得到构建的宿主细胞。

一、编码脑啡肽的基因

实施例1

本实施例用于说明本发明重组单纯疱疹病毒的构建

按照申请号2004100064921，授权公告号CN1283803C的专利申请中记载的方法将野生型临床分离HSV-1病毒的ICP34.5基因和ICP4基因敲除，并在HSV-1载体的潜伏表达区(LAT区)启动子下游核苷酸119499bp-122025bp处插入携带CMV启动子的ENK基因。在北京三博远志公司测序鉴定ENK基因正确插入到单纯疱疹病毒载体中。构建成功的病毒载体在能够表达ICP4基因的构建的Vero宿主细胞系上于37℃、5％CO₂下增殖，感染复数为0.1，收获后用0.65μm滤器去除细胞碎片，然后在13000rpm条件下高速离心纯化，得到的产品用于动物实验。

实施例2

本实施例用于说明本发明重组单纯疱疹病毒的构建

按照实施例1中的方法进行重组单纯疱疹病毒的构建，不同的是，敲除的基因为HSV-1病毒的ICP34.5、ICP27和ICP4基因。

对比例1

本实施例用于说明本发明重组单纯疱疹病毒的构建

按照实施例1中的方法进行重组单纯疱疹病毒的构建，不同的是，ENK基因插入到的是HSV-1病毒的ICP34.5基因处。

对比例2

本对比例用于说明参比的重组单纯疱疹病毒的构建

按照实施例1中的方法进行重组单纯疱疹病毒的构建，不同的是，敲除的基因为HSV-1病毒的ICP4和ICP27，并且编码ENK的基因仅插入到ICP4基因处。

测试例1

(1)构建大鼠关节炎慢性疼痛模型用于动物试验。

从北京医科大学动物房购买4周龄雄性SD大鼠，大鼠乙醚麻醉后在右后足垫皮下注射完全弗氏佐剂，诱导3周后根据诱导情况标准进行分级筛选：

1级：关节有红色斑点或轻度肿胀；2级：关节中度红肿；

3级：关节重度红肿；4级：关节严重红肿且不能负重。

根据红肿的情况筛选2级症状的大鼠30只作为实验对象。随机将大鼠分为5组，每组6只：第1组注射100μl的PBS，第2-3组分别注射100μl的实施例1-2的重组单纯疱疹病毒，第4-5组分别注射对比例1-2的重组单纯疱疹病毒。第6组注射100μl空白载体对照，另外设置第7组为阴性对照正常大鼠。以上给药方式均采取右后足垫给药。

(2)按照如下打分标准进行打分，评分结果见表1。

5分：行为正常，行动流畅，无明显行动障碍；

4分：行动较正常，偶尔出现后肢触地缩爪；

3分：明显出现坡脚，行动时偶有打晃；

2分：行动缓慢，后肢拖沓；

1分：丧失正常行动，行为严重受阻。

表1

从大鼠行为打分的情况来看，关节炎大鼠在给药后1周与注射PBS的对照组出现显著性差异。实施例1-2给药组相比对比例1-2给药组镇痛效果明显，持续时间超过10周，峰值出现在1-4周，行为评分与正常大鼠无显著性差异。

(3)行为能力评估方法为：行为观察箱底部井字线划分12个区域，大鼠放进行为观察箱，静置1分钟后，记录5分钟内大鼠在震动条件下的行动情况，大鼠每通过一次划分线即有效计1分。评分结果见表2。

表2

编号	给药类型	第1周	第2周	第4周	第7周	第10周
							第1组	PBS	25	20	22	21	20
第2组	实施例1	37	45	40	35	30
							第3组	实施例2	39	41	38	35	29
第4组	对比例1	34	37	35	31	25
							第5组	对比例2	35	36	32	30	24
第6组	空白载体	24	21	22	20	19
							第7组	正常大鼠	52	45	40	39	38

从大鼠行为能力评估来看，关节炎大鼠在给药后1周与注射PBS的对照组组出现显著性差异。实施例1-2给药组相比对比例1-2给药组镇痛效果明显，持续时间超过10周，峰值出现在1-4周，行为能力评估与正常大鼠无显著性差异。

二、编码神经生长因子的基因

实施例3-4

按照实施例1-2的方法分别构建重组单纯疱疹病毒，不同的是，导入的基因为编码NGF的基因，分别得到实施例3-4的单纯疱疹病毒。

对比例3-4

按照对比例1-2的方法分别构建重组单纯疱疹病毒，不同的是，导入的基因为编码NGF的基因，得到对比例3-4的单纯疱疹病毒。

测试例2

NGF具有促进神经元细胞生长发育的作用，而HSV-1病毒具有独特的嗜神经性，是将基因传递至神经细胞的有力工具。经过基因工程改造的HSV-1病毒载体在神经元细胞中无法复制，对细胞没有负面影响。载体携带的NGF在神经元细胞中表达，能增强细胞的生长活力。本测试例将通过培养的原代神经细胞来测试表达NGF的重组HSV-1病毒载体对细胞寿命和活性的影响。

取孕期14-16天的SD大鼠，分离胚胎小鼠的大脑皮层，在37℃用胰酶消化30分钟，吸出胰酶加入Neurobasel培养基(10888-022，invitrogen)后用移液管吹打。然后用100目细胞筛过滤，将滤液放入培养皿中置于37℃、5％CO₂培养箱中恒温培养。待细胞贴壁后更换培养基。

原代培养第7天后分别加入实施例3-4的病毒和对比例3-4的病毒，同时设置PBS对照以及空白载体对照组，产品按感染复数1.0加入细胞中，用MTT法测定细胞活力。相比PBS对照组，细胞活力增强百分比结果如表3。

表3

给药类型	给药第2天	给药第7天	给药第11天
				实施例3	17.8％	20.8％	90％
实施例4	17.0％	22.2％	78％
				对比例3	14.1％	18.3％	72.5％
对比例4	14.5％	15.9％	56.6％
				空白载体	--	1.0％	-0.8％

结果表明实施例3-4相比于对比例3-4具有更显著的增强细胞活力的作用。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种重组单纯疱疹病毒，其特征在于，所述重组单纯疱疹病毒包括单纯疱疹病毒载体和目的基因，所述单纯疱疹病毒载体是通过使单纯疱疹病毒缺失了编码感染细胞多肽34.5的基因和编码感染细胞多肽4的基因、以及可选择的缺失编码感染细胞多肽27的基因得到的，所述目的基因的插入位点包括插入在所述单纯疱疹病毒载体的潜伏相关转录编码区，并且在所述编码区的启动子下游。

2.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述目的基因的插入位点还包括至少一处缺失了所述编码感染细胞多肽的基因处。

3.根据权利要求1或2所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述目的基因包括编码脑啡肽或神经生长因子的基因。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述目的基因还包括启动子、起始密码子和终止密码子。

5.根据权利要求4所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述启动子选自CMV启动子、MMLV启动子和RSV启动子所组成的组中。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述单纯疱疹病毒分离自亚洲人种。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒，其中，所述单纯疱疹病毒为I型单纯疱疹病毒。

8.一种用于制备权利要求1-7中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

9.一种感染有病毒的宿主细胞，其特征在于，所述病毒为权利要求1-7中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒，所述细胞具有表达编码感染细胞多肽4的基因以及可选择的表达编码感染细胞多肽27的基因。

10.权利要求1-7中任意一项所述的重组单纯疱疹病毒、权利要求8所述的用于制备病毒的宿主细胞和/或权利要求9所述的感染有病毒的宿主细胞在制备用于治疗慢性疼痛、神经损伤和/或戒毒的药物中的应用。