CN105219634B - 微生物快速检测多环测试片、无菌培养基及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微生物快速检测多环测试片、测试片中包含的无菌培养基，并涉及无菌培养基的制备方法，属于微生物检验技术领域。微生物快速检测测试片，包括底板，上盖及无菌培养基；底板及上盖为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，底板的多环齿状结构中部凹陷形成培养室；相应地，上盖的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖；培养室底面与侧面的角度为30‑80°，侧面最高点垂直于底面的高度不小于0.3cm；培养室用于放置无菌培养基；无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基或静电吸附式培养基。本发明使检测工作简便快速，多环齿状结构能够有效的保持培养基水分不流失，同时提供微生物生长需要的气体成分，有利于微生物检测工作的开展。

Description

微生物快速检测多环测试片、无菌培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种微生物快速检测多环测试片、测试片中包含的无菌培养基，并涉及无菌培养基的制备方法，属于微生物检验技术领域。
背景技术
快速测试片是近年来发展起来的一种微生物快速检测方法，以滤纸为载体和以Petrifilm为载体的测试片己经得到众多检验部门的认可。以滤纸为载体的测试片由于培养基与载体溶为一体，生长于滤纸和底板之间的微生物不方便挑取菌落进行进一步的分离鉴定。以Petrifilm为载体的测试片其圆形培养区边缘及边缘以外的菌落由于存在空气中的菌在一定培养条件下带入的可能，在计数时造成菌落计数上的不准确。而Petrifilm其培养基与载体测试片的结合靠胶粘剂，对微生物的生长会有一定影响。鉴于以上缺陷，对快速测试片改进的研究也日益受到本领域的重视。
公开号CN101497914A的发明《一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应用》公开了一种快速测定微生物的测试片及其制备方法和应用，该测试片包括底板、中间镂空的胶片和塑料膜，中间镂空的胶片的底面与底板粘合，胶片中间镂空部分形成凹槽培养区，所述凹槽培养区内置有显色培养基；所述塑料膜的底面粘合有冷水可凝的凝胶剂，所述塑料膜的底面与胶片的上表面在一侧边缘粘合。本发明测试片上下层粘合后辐照灭菌包装备用。本发明所述测试片能应用于菌落总数、大肠杆菌、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌等食源性致病微生物检测，操作简单，携带方便，测试时间短、结果准确、可双面数菌。
授权公告号CN 203728842 U的实用新型《微生物检测盒》公开的微生物检测盒，其包括上模板以及下模板，所述下模板设置有一凸台，所述凸台内设置有安置槽，所述安置槽内为含有吸水凝胶的选择性显色培养基层或者从下往上依次为含有吸水凝胶的选择性显色培养基层和吸水滤纸。本实用新型通过在下模板设置安置槽，将含有吸水凝胶的选择性显色培养基层或者含有吸水凝胶的选择性显色培养基层和吸水滤纸放置在安置槽，经脱水、灭菌处理后，往安置槽内滴加1mL水样，水样迅速被安置槽内含有吸水凝胶的选择性显色培养基层或者含有吸水凝胶的选择性显色培养基层和吸水滤纸吸收，培养后即可显现出特有的菌落特征如颜色、晕环等，方便直接计数或自动计数仪计数，开展微生物学检验工作。
上述发明创造解决了一定的问题，但也存在一定缺陷，或者不利于培养基水分的保持，或者上盖下盖结合过于严密，未考虑到微生物对氧气的需求，或者虽然考虑了微生物对氧气需求的问题，但没有消除空气中浮游菌对检测结果的影响，或者含有胶粘剂的成分，一定程度影响微生物生长，或者培养基与测试片的结合不够牢固，或者有滤纸或无纺布等结构，不利于计数以及后续挑取菌落进行进一步鉴定。
同时，传统的微生物培养基多为粉末或颗粒状，也有即时可用的培养基。粉末状在使用过程中有粉尘，吸入会危害使用人员的身体健康。粉末及颗粒培养基在使用时都需要提前配制，消毒灭菌等准备工作。而即时可用的培养基分为即时可用的液体增菌液和即时可用的琼脂平板，琼脂斜面等，存在运输不便，使用成本高的问题。且现有的培养基多含有琼脂类物质，而目前测试片中多使用吸水凝胶或冷水可凝胶，也有配合吸水滤纸使用的，在使用时，如上述公开的专利所述，滴加水样，使被凝胶或吸水滤纸吸收，即用于培养，易造成培养基成分与水混合不够充分，营养不匀，因此研制一种对检测片来说更适用的培养基是本领域丞待解决的问题。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种无滤纸或无纺布、有供气通道、能够有效沉降空气中浮游菌，结构简单，使用简便，适用于多种微生物检测，可完全替代传统平板，用于微生物快速检测的一次性多环测试片。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种微生物快速检测测试片，包括底板，上盖及无菌培养基；所述底板及上盖为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板的多环齿状结构中部凹陷形成培养室，为方便叙述，将培养室分作底面和侧面；相应地，上盖的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖；培养室底面与侧面的角度为30-80°，侧面最高点垂直于底面的高度不小于0.3cm；所述培养室用于放置无菌培养基；所述无菌培养基有两种形式，一种为凝胶分离式无菌培养基，一种为靠静电吸附于培养室底面内表面的静电吸附式无菌培养基；所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，无菌高浓度液体培养基独立包装，与冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述凝胶分离式无菌培养基的两个组成部分，可以放置在培养室内也可以不放置在培养室内，而单独无菌包装；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。所述静电吸附式无菌培养基为含有冷水可凝胶的培养基干粉或颗粒，靠静电吸附于培养室底面，使用时加无菌水溶解混合。
优选的，所述底板及上盖横截面为同心的圆形或矩形；
所述多环齿状结构的横截面形状为圆形或矩形；
所述多环齿状结构的高度为0.4cm到1cm；
所述培养室面积为25-180cm2；容纳培养基的量优选0.04-0.25mL/cm2；
所述多环齿状结构不少于1环；
所述多环齿状结构优选为2环；
底板底面与侧面的角度可以保证无菌培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环测试片时从底板上脱落；
冷水可凝胶均匀涂抹于培养室的中央，或制成薄膜或其他形式置于培养室中，也可置于培养室外，单独包装；
冷水可凝胶原料包括结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至少一种；
无菌高浓度液体培养基为无凝胶及琼脂成分的无菌高浓度液体培养基或无菌高浓度液体显色培养基；
所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
培养室底面内表面优选为静电吸附膜，静电吸附膜优选为三层共挤PE静电吸附膜；
所述底板与上盖的结合方式可为一体、分体或黏合结构，例如底板及上盖的一条边可通过压敏胶粘合，形成可开合的结构；
所述多环齿状结构的纵截面可为相互配合的多个三角形，椭圆形，梯形或矩形的整体或部分，也可为以上形状整体或部分的任意组合；
所述底板及上盖厚度分别为0.1mm-0.6mm；微生物快速检测测试片长度5-15cm，宽度5-14cm。
所述凝胶分离式无菌培养基中，冷水可凝胶与复原后无菌高浓度液体培养基的质量体积比为：0.005-15g∶1L；
培养基为凝胶分离式培养基的微生物快速检测多环测试片的使用方法，包括如下步骤：
取无菌高浓度液体培养基，按照浓缩倍数复原备用；取含有冷水可凝胶的测试片，或将独立包装的冷水可凝胶先加入测试片，再加入复原后的无菌液体培养基1ml至20ml，震荡10s使之与冷水可凝胶充分接触溶解，放置3分钟待液体培养基凝固后使用。
培养基为静电吸附式培养基的微生物快速检测多环测试片的使用方法，包括如下步骤：
取含有培养基的测试片，培养基依靠静电吸附于测试片培养室底面内表面，加入无菌水1ml至20ml，震荡10s使培养基充分溶解，放置3分钟待液体培养基凝固后使用。
本发明同时提供一种凝胶分离式无菌培养基，所述凝胶分离式无菌培养基包括使用前隔绝的无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，冷水可凝胶与复原后无菌高浓度液体培养基的质量体积比为：0.005-15g∶1L；凝胶分离式无菌培养基可用于微生物检测片，也可用于快速配制平板或增菌液；
冷水可凝胶均匀涂抹于培养室的中央，或制成冷水可凝胶膜或其他形式置于培养室中，使用之前与无菌高浓度液体培养基隔绝；
优选的，冷水可凝胶由如下质量份数的原料组成：结冷胶∶瓜尔胶∶黄原胶为1∶4∶5；
所述冷水可凝胶还可以包括冷水可凝胶助溶剂：为加快冷水可凝胶的溶解及防止在与无菌高浓度液体培养基混匀过程中结块，在冷水可凝胶中可加入一定量不影响微生物生长的助溶剂；助溶剂为二氧化钛表面活性剂、二氧化硅表面活性剂、Bola表面活性剂中至少一种，加入比例以冷水可凝胶计：0.0005wt％-0.5wt％；
冷水可凝胶可由本领域公知的方法制备，优选的，冷水可凝胶由以下方法制备：
多环测试片培养室底面培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜，以培养室面积为80cm2为例，称取0.2g冷水可凝胶粉，冷水可凝胶粉的成分为瓜尔胶0.08g，黄原胶0.1g，刺槐豆胶0.019，助溶剂二氧化钛表面活性剂0.001g，加入多环测试片底板的培养室中，高频振荡使冷水可凝胶粉在静电的作用下均匀吸附于培养室底面上，盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；使用时加入20mL复原后的无菌液体培养基，震荡10s使之与冷水可凝胶膜充分接触溶解，放置3分钟待液体培养基凝固后使用；
冷水可凝胶可由本领域公知的方法制备，优选的，
冷水可凝胶由以下方法制备：培养基装量与培养室面积优选0.25mL/cm2，按照冷水可凝胶与复原后无菌液体培养基10g/L的比例称取经辐照后的冷水可凝胶粉，成分为瓜尔胶∶黄原胶∶结冷胶∶助溶剂Bola表面活性剂，质量比例为80∶100∶19∶1；加入多环测试片底板的培养室中，加入0.006ml/cm2无菌水，迅速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上，烘干后盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；
冷水可凝胶由以下方法制备：以培养室面积为80cm2为例，称取0.2g冷水可凝胶粉，冷水可凝胶粉的成分为瓜尔胶0.099g，黄原胶0.1g，助溶剂二氧化硅表面活性剂0.001g，加入多环测试片底板的培养室中，加入0.5ml无菌水，迅速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上，冷冻干燥后盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；
冷水可凝胶也可以将冷水可凝胶，通过加热融化、压制、覆膜等工艺制成胶膜，包装后通过射线灭菌制成无菌冷水可凝胶膜。
本发明同时提供该无菌高浓度液体培养基的制备方法，包括溶解，混匀，消毒灭菌，无菌灌装步骤；
所述无菌高浓度液体培养基的制备方法，包括如下步骤：
按照本领域常规的培养基配方，去掉琼脂，将各原料混合，按正常培养基体积计，加入0.001g/L的稳定剂和消泡剂，按照本领域常规加水体积的1％-10％加水溶解混匀，根据不同配方里各成分的溶解度调整加水量以保证所有成分充分溶解，在保证各成分充分溶解的前提下，采用最少量的水进行溶解，使最终液体培养基浓度为正常培养基的10-100倍；灭菌、包装；
灭菌可以采用本领域常规方法进行，优选的，灭菌采用如下方法；
121℃或115℃高温高压灭菌15分钟，制成无菌高浓度液体培养基；
对于培养基中易受温度或压力影响的成分，可不经热力灭菌，经过滤除菌后，与经热力灭菌的其它成分混合。滤膜的孔径优选为0.22微米。
无菌灌装，包装形式可为瓶装或袋装。
无菌高浓度液体培养基的制备方法，也可采用按照本领域常规的培养基配方，去掉琼脂，将各原料及0.001g/L(按正常培养基浓度计算)的稳定剂和消泡剂混合装瓶，辐照灭菌，之后按照本领域常规加水体积的1％-10％加无菌水溶解混匀，根据不同配方里各成分的水溶解度调整加水量以保证所有成分充分溶解，在保证各成分充分溶解的前提下，采用最少量的水进行溶解，使最终液体培养基浓度为正常培养基的10-100倍；无菌灌装、包装；
所述无菌高浓度液体培养基的制备方法，还包括如下步骤：
在溶解混匀步骤，可以加入稳定剂，保证液体培养基在较高浓度下成分不出现分层或沉淀而影响使用效果；稳定剂为黄原胶，果胶，柠檬酸，羧甲基纤维素钠中至少一种；稳定剂的用量为0.001-0.1g/L；在溶解混匀步骤，可以加入消泡剂，防止在使用过程中产生气泡影响使用效果；消泡剂为乳化硅油，聚二甲基硅氧烷，高碳醇脂肪酸酯中至少一种；消泡剂的用量为0.001-0.1g/L。
有益效果
本发明无需进行培养基配制、灭菌及器具消毒等大量辅助工作，既可以作为测试片进行快速检测，又可作为普通平板完美替代实验室人工制作的平板。检测成本低，保质期长，有利于微生物检测工作的开展。多环齿状结构能够有效的保持培养基水分不流失，同时提供微生物生长需要的气体成分。另外多环齿轮状结构形成的空气流通通道是高低起伏的曲线形，这个结构在提供微生物生长需要的气体成分的同时，可以有效沉降空气中的浮游菌，避免在微生物培养过程中的二次污染而造成的结果偏差。多环齿状结构的最内侧成上窄下宽的构造，使培养基在凝固后与测试片的结合更牢固。本发明没有滤纸或无纺布等结构，更易于计数以及后续挑取菌落进行进一步鉴定。本发明没有胶粘剂等成分，更利于微生物的生长鉴定。
无菌培养基形式多样，或者按照原料特性分作两部分分别制备，使用前隔绝，使用时再混合；或者采用静电吸附方式置于培养室，检测时无需进行培养基配制、灭菌及器具消毒等大量辅助工作，使用方便，液体培养基无粉尘，对含琼脂以及不含琼脂的培养基均适用。高度浓缩液可有效降低运输成本及客户使用成本。在达到即时可用培养基使用效果的同时，检测成本更低。有利于微生物检测工作的开展。
附图说明
图1-本发明底板横截面示意图；
图2-本发明上盖横截面示意图；
图3-本发明底板纵截面示意图；
图4-本发明上盖纵截面示意图；
图5、6、7-本发明底板与上盖组合纵截面示意图；
图8-本发明底板与上盖组合纵剖面示意图；
图中：1-底板，2-上盖，3-培养室，31-底面，32-侧面，4-培养室盖。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案，并结合附图，进一步叙述本发明。除非特别说明，实施方式中未描述的技术手段均可以用本领域技术人员所公知的方式实现。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的材质、尺寸、形状、培养基成分进行的各种修改、替换、改进也属于本发明的保护范围，并且本发明所限定的具体参数应有可允许的误差范围。此外，以下实施例中提到的方向用语，例如“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等，仅是参考附图的方向。因此，使用的方向用语是用来说明并非用来限制本发明。
为了更好地理解本发明，对图中涉及的主要部位或部件进行了编号。相同的编号表示相同或相似的部位或部件，具有基本相同的功能，但其在不同图或实施例中具体的尺寸、形状、结构不一定相同。
实施例1
参考图1、2、3、4、5所示，在本发明的一个示例性实施例中，一种微生物快速检测测试片，包括底板1，上盖2及无菌培养基；所述底板1及上盖2为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板1的多环齿状结构中部凹陷形成培养室3，为方便叙述，将培养室3分作底面31和侧面32；相应地，上盖2的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖4；培养室底面31与侧面32的角度为30-80°，侧面32最高点垂直于底面31的高度不小于0.3cm；所述培养室3用于放置无菌培养基；所述无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基；所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述凝胶分离式无菌培养基密封包装，可以放置在培养室内，也可以与测试片分别密封包装；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。
所述底板1及上盖2横截面为同心的圆形；
所述多环齿状结构的横截面形状为圆形；
所述多环齿状结构的高度为0.4cm到1cm；
所述培养室3面积为25-180cm2；
所述多环齿状结构为2环；
培养室3底面31与侧面的角度可以保证冷水可凝胶与无菌高浓度液体培养基混合后，在常温下形成的固体培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环测试片时从底板上脱落；
冷水可凝胶均匀涂抹于培养室的中央，或制成薄膜或其他形式置于培养室3中；
冷水可凝胶选自结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至少一种；
无菌高浓度液体培养基为无凝胶及琼脂成分的灭菌高浓度液体培养基；
所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
所述底板1与上盖2的结合方式为黏合结构，底板1及上盖2的一条边通过压敏胶粘合，形成可开合的结构；
所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的多个三角形的全部或一部分；
所述底板1及上盖2厚度分别为0.1mm-0.6mm；微生物快速检测测试片长度5-15cm，宽度5-14cm。
PCA微生物快速检测多环测试片及无菌高浓度液体培养基的制备
PCA微生物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤：
冷水可凝胶膜制备：多环测试片培养室面积为80cm2，称取0.2g经辐照后的冷水可凝胶粉(含0.005wt％助溶剂)，加入多环测试片底板的培养室中，加入0.5ml无菌水，迅速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上，烘干后盖上上盖，密封保存；
无菌高浓度液体培养基制备：
称取胰蛋白胨5g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1g，0.001g稳定剂及消泡剂混合物；所述稳定剂为羧甲基纤维素钠，消泡剂为乳化硅油，二者比例为1∶1，加水100ml溶解混匀，灌装至无菌瓶或袋中，121℃高温高压灭菌15分钟，灭菌后密封保存。
PCA微生物快速检测多环测试片与PCA常规平板比较试验：
试剂：包括无菌高浓度液体培养基的多环PCA测试片，PCA干粉培养基；
标准菌株，大肠杆菌(ATCC 10536)，鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 13311)，蜡样芽孢杆菌(ATCC11778)，金黄色葡萄球菌(ATCC6538)；
标准菌浊度：108CFU/ml；
将标准菌梯度稀释，接菌浓度：10-7CFU/ml，1ml；
多环PCA测试片的使用前准备：取无菌高浓度PCA液体培养基，按照复原倍数10倍，添加900ml无菌水复原备用。
取含有冷水可凝胶膜的测试片，加入复原后的无菌液体培养基20ml，震荡10s使之与冷水可凝胶膜充分接触溶解。放置3分钟待液体培养基凝固后使用；
PCA干粉培养基的使用前准备：按照说明书称量配制，121度高温高压灭菌15分钟，冷却后倒平板，凝固后使用；
接种标准菌梯度稀释液(接菌浓度10-7CFU/ml，1ml)，与PCA干粉培养基配制成的平板培养基同步实验，按照GB4789.2-2010标准方法，在36±1℃条件下培养48小时，观察结果，计算菌落总数(菌落数乘以稀释倍数)如表1。
表1：标准菌株实验结果
表1结果表明两种方法菌落生长无数量级差异。上述测试目的和测试结果仅用于说明多环测试片的可行性，测试过程的变化可能产生不同的结果。
实施例2
参考图1、2、6所示，在本发明的一个示例性实施例中，一种微生物快速检测测试片，包括底板1，上盖2及无菌培养基；所述底板1及上盖2为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板1的多环齿状结构中部凹陷形成培养室3；相应地，上盖2的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖4；培养室底面31与侧面32的角度为30-80°，侧面32最高点垂直于底面31的高度不小于0.3cm；所述培养室3用于放置无菌培养基，培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜；所述无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基；所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，冷水可凝胶为冷水可凝胶粉，在静电的作用下均匀吸附于培养室底面上，无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述无菌高浓度液体培养基单独密封包装，可以放置在培养室内，也可以与测试片分别密封包装；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。
所述底板及上盖横截面为同心的矩形；
所述多环齿状结构的横截面形状为矩形；
所述多环齿状结构的高度为0.4cm到1cm；
所述培养室面积为25-180cm2；
所述多环齿状结构为2环；
底板底面与侧面的角度可以保证冷水可凝胶与无菌高浓度液体培养基混合后，在常温下形成的固体培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环测试片时从底板上脱落；
冷水可凝胶静电吸附于培养室3中；
冷水可凝胶选自结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至少一种；
无菌高浓度液体培养基为无凝胶及琼脂成分的灭菌高浓度液体培养基；
所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
所述底板1与上盖2的结合方式为分体；
所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的三角形和矩形形状的结合；
所述底板及上盖厚度分别为0.1mm-0.6mm；微生物快速检测测试片长度5-15cm，宽度5-14cm；
微生物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤：
多环测试片培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜，以培养室面积为80cm2为例，称取0.2g冷水可凝胶粉，冷水可凝胶的成分为瓜尔胶0.08g，黄原胶0.1g，刺槐豆胶0.019，助溶剂二氧化钛表面活性剂0.001g，加入多环测试片底板的培养室中，高频振荡使冷水可凝胶粉在静电的作用下均匀吸附于培养室底面上，盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；
无菌高浓度液体培养基制备：
以平板计数琼脂(PCA)为例，常规方法配制1升PCA培养基，所需原料成分为胰蛋白胨5g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1g，琼脂15g，加水配制为1升。本实施例称取胰蛋白胨5g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1g，0.001g稳定剂及消泡剂混合物；所述稳定剂为羧甲基纤维素钠，消泡剂为乳化硅油，二者比例为1∶1，各成分混合后加水100ml溶解混匀，形成浓度为原培养基浓度10倍的高浓度液体PCA培养基，灌装至无菌瓶或袋中，121℃高温高压灭菌15分钟，灭菌后密封保存。复原时添加900ml无菌水，充分震荡混匀。
实施例3
参考图1、2、7所示，在本发明的一个示例性实施例中，一种微生物快速检测测试片，包括底板1，上盖2及无菌培养基；所述底板1及上盖2为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板1的多环齿状结构中部凹陷形成培养室3，为方便叙述，将培养室3分作底面31和侧面32；相应地，上盖2的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖4；培养室底面31与侧面32的角度为30-80°，侧面32最高点垂直于底面31的高度不小于0.3cm；所述培养室3用于放置无菌培养基；所述无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基；所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，冷水可凝胶为冷水可凝胶膜，设置于培养室中，无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述无菌高浓度液体培养基单独密封包装，可以放置在培养室内，也可以与测试片分别密封包装；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。
所述多环齿状结构的高度为0.4cm到1cm；
所述培养室面积为25-180cm2；
所述多环齿状结构为2环；
底板底面与侧面的角度可以保证无菌水与培养基混合后，在常温下形成的固体培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环测试片时从底板上脱落；
冷水可凝胶选自结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至少一种；
无菌高浓度液体培养基为灭菌高浓度液体培养基或无菌高浓度液体显色培养基；
所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
所述底板1与上盖2的结合方式为分体；
所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的多个椭圆形的一部分；
所述底板1及上盖2厚度分别为0.1mm-0.6mm；微生物快速检测测试片长度5-15cm，宽度5-14cm。
微生物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤：
以培养室面积为80cm2为例，称取0.2g冷水可凝胶粉，冷水可凝胶的成分为瓜尔胶0.099g，黄原胶0.1g，助溶剂二氧化硅表面活性剂0.001g，加入多环测试片底板的培养室中，加入0.5ml无菌水，迅速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上，冷冻干燥后盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；
无菌高浓度液体培养基制备：
以平板计数琼脂(PCA)为例，常规方法配制1升PCA培养基，所需原料成分为胰蛋白胨5g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1g，琼脂15g。本实施例称取胰蛋白胨5g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1g，0.001g稳定剂及消泡剂混合物；所述稳定剂为羧甲基纤维素钠，消泡剂为乳化硅油，二者比例为1∶1，各成分混合后加水100ml溶解混匀，形成浓度为原培养基浓度10倍的高浓度液体PCA培养基，灌装至无菌瓶或袋中，121℃高温高压灭菌15分钟，灭菌后密封保存。使用时按比例添加无菌水复原。
实施例4
参考图1、2、7所示，在本发明的一个示例性实施例中，一种微生物快速检测测试片，包括底板1，上盖2及无菌培养基；所述底板1及上盖2为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板1的多环齿状结构中部凹陷形成培养室3，为方便叙述，将培养室3分作底面31和侧面32；相应地，上盖2的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖4；培养室底面31与侧面32的角度为30-80°，侧面32最高点垂直于底面31的高度不小于0.3cm；所述培养室3用于放置无菌培养基，培养室3底面31内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜；所述无菌培养基为静电吸附式无菌培养基，放置在培养室内。
所述多环齿状结构的高度为0.4cm到1cm；
所述培养室面积为25-180cm2；
所述多环齿状结构为2环；
底板底面与侧面的角度可以保证无菌水与培养基混合后，在常温下形成的固体培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环测试片时从底板上脱落；
所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
所述底板1与上盖2的结合方式为分体；
所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的多个椭圆形的一部分；
所述底板1及上盖2厚度分别为0.1mm-0.6mm；微生物快速检测测试片长度5-15cm，宽度5-14cm。
微生物快速检测多环测试片的制备可以包括如下步骤：
多环测试片培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜，以培养室面积为80cm2为例，称取胰蛋白胨0.1g，酵母浸膏0.05g，葡萄糖0.02g，冷水可凝胶0.2g，加入多环测试片底板的培养室中，高频振荡使培养基粉在静电的作用下均匀吸附于培养室底面上，盖上上盖，密封后辐照灭菌，保存；
冷水可凝胶选自结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至少一种。

Claims (7)

1.一种微生物快速检测测试片，包括底板，上盖及无菌培养基；所述底板及上盖为形状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板的多环齿状结构中部凹陷形成培养室；相应地，上盖的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖；培养室底面与侧面的角度为30-80°，侧面最高点垂直于底面的高度不小于0.3cm；所述无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基，包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，冷水可凝胶与复原后无菌高浓度液体培养基的质量体积比为：0.005-15g：1L；无菌高浓度液体培养基独立包装，与冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述冷水可凝胶或无菌高浓度液体培养基放置在培养室内或培养室外；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。
2.根据权利要求1所述微生物快速检测测试片，其特征在于，所述培养室底面内表面为静电吸附膜或底面内表面覆盖静电吸附膜。
3.根据权利要求2所述微生物快速检测测试片，其特征在于，所述无菌培养基为静电吸附式无菌培养基。
4.根据权利要求1所述微生物快速检测测试片，其特征在于，所述底板及上盖横截面为同心的圆形或矩形；所述多环齿状结构的横截面形状为圆形或矩形。
5.根据权利要求1所述微生物快速检测测试片，其特征在于，冷水可凝胶由如下质量份数的原料组成：结冷胶：瓜尔胶：黄原胶为1：4：5。
6.根据权利要求5所述微生物快速检测测试片，其特征在于，所述冷水可凝胶包括冷水可凝胶助溶剂；助溶剂为二氧化钛表面活性剂、二氧化硅表面活性剂、Bola表面活性剂中至少一种，加入比例以冷水可凝胶计：0.0005wt％-0.5wt％。
7.根据权利要求1所述微生物快速检测测试片，其特征在于，所述多环齿状结构不少于1环。
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